4-1BBL基因转染对小鼠体内胃癌细胞生长的影响

目的观察共刺激分子4-1BBL基因导入小鼠胃癌MFC细胞后在小鼠体内诱导的抗肿瘤效应以及对小鼠免疫状况的影响。方法用脂质体法把pMKITneo/4-1BBL和pMKITneo质粒导入615小鼠胃癌细胞MFC内,再用MFC、MFC/pMKITneo和MFC/4-1BBL细胞分别接种615小鼠,观察其成瘤情况,并测定肿瘤细胞的凋亡率及外周血的CD4~+、CD8~+T细胞和NK细胞的含量。结果4-1BBL基因转染后的胃癌MFC细胞在615小鼠体内成瘤所需的时间长、瘤体的重量轻；且MFC/4-IBBL组的癌细胞凋亡率(22．45±4．11)%明显高于MFC组(18．47±3．34)%及MFC/pMKITneo组(17．87±4．04)%(P＜0．05)；MFC、MFC/pMKITneo组小鼠外周血CD8~+T、NK细胞数明显低于正常对照组和MFC/4-1BBL组(P＜0．05),且MFC、MFC/pMKITneo两组间差异无统计学意义(P＞0．05)。结论4-1BBL基因导入胃癌MFC细胞后能够提高荷瘤机体的免疫能力、延缓肿瘤的发生、抑制肿瘤的发展、促进肿瘤细胞的凋亡。     

转染肝癌总RNA的树突状细胞疫苗对肝癌的抑制作用及其机制

目的探讨转染肝癌细胞总RNA转染的树突状细胞(DC)疫苗抑制肝癌作用及其机制。方法采用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4联合培养6 d成小鼠骨髓来源不成熟DC(iDC),质脂体转染肝癌细胞系Hepa1-6 RNA入iDC,用LPS刺激后成为Hepal-6 RNA/DC疫苗,对照组为iDC组、LPS/DC组Saline组,以每只2×10~6个细胞腹腔注射免疫小鼠每周1次共3次,然后接种5×10~5 Hepal-6细胞,观察肿瘤生长情况、特异性CTL活性的测定以及抗体阻断实验。结果实验组Hepal-6 RNA/DC组肿瘤在第8周为(8．5±3．6)mm,而iDC组、LPS/ DC组、Saline对照组分别为(36．6±3．6)、(31．3±4．7)、(32．2±4．0)mm,与实验组比较差异均有统计学意义(P＜0．05)。实验组脾细胞对Hepal-6细胞有特异性杀伤效应,而对肺癌LLC细胞无杀伤活性。所诱导的抗肿瘤效应细胞包括CD~(8+)、CD~(4+)T淋巴细胞。结论肝癌细胞的总RNA转染的DC肿瘤疫苗能诱导CD~(8+)、CD~(4+)T细胞免疫,是较有临床应用前景的肝癌免疫治疗方法。     

树突状细胞疫苗免疫治疗策略

中枢神经系统并非“免疫特赦器官”，免疫治疗已被视为继手术、放疗、化疗之后的第4种肿瘤治疗模式。基于我院3年来对树突状细胞(DC)疫苗的基础研究，本实验旨在探讨以DC为基础的不同疫苗对脑胶质瘤的作用。     

树突状细胞与胃癌细胞融合的肿瘤疫苗研究

目的以肿瘤细胞与树突状细胞(dendriticcells,DCs)相融合使融合细胞能将肿瘤抗原递呈给T细胞,并提供T细胞激活所必需的第二信号,借此激活机体的抗肿瘤免疫。方法通过PEG法将鼠源性胃癌细胞MFC与小鼠DC进行融合(T/DC),融合后经50Gy电子线照射,以1×106肿瘤疫苗于小鼠皮下注射免疫2次,间隔1周后接种,后一次免疫后1周于小鼠皮下接种5×105MFC胃癌细胞。肿瘤细胞接种3周后处死实验动物,测量肿瘤大小、外周血NK活性和脾细胞CTL活性。结果肿瘤接种后一周对照组小鼠皮下均有肿瘤生长,而T/DC免疫组均无皮下可触及的肿瘤(10/10),10天后T/DC免疫组才有4/10只鼠皮下出现可触及的肿瘤,3周后对照组肿瘤体积明显大于T/DC免疫组。经T/DC免疫后小鼠生存期明显较对照组延长,对照组于肿瘤接种后2周开始有小鼠衰竭死亡,至肿瘤接种后3周对照组仅有3只存活,T/DC免疫组有8只鼠存活,并仍有3只无肿瘤生长。经T/DC免疫后,小鼠NK活性和肿瘤特异性CTL活性均明显提高,T/DC免疫组和对照组MFC特异性CTL活性分别为30.09%和7.12%。结论肿瘤细胞鄄DC融合的肿瘤疫苗可通过加强抗原递呈激活肿瘤特异性CTL而具明显的抗肿瘤活性。     

树突状细胞肿瘤疫苗研究进展

人类肿瘤疫苗治疗的目标是诱导肿瘤特异性和长期的免疫应答,以清除体内肿瘤。树突状细胞(dendriticcells,DC)是一类专职的抗原提呈细胞,在诱导、调节、维持机体抗肿瘤免疫中起核心作用[1]。本文就DC的肿瘤疫苗研究进展作一综述。树突状细胞概述1.DC生物学特性人DC发育经历4个阶段:①骨髓干细胞;②在血液、淋巴液和淋巴样组织中循环的DC前体;③定居于组织中的未成熟DC;④次级淋巴样器官中的成熟DC。CD34+造血干细胞经粒鄄巨噬细胞集落刺激因子(GM鄄CSF)和肿瘤坏死因子(TNF)诱导可产生髓样DC、表皮朗格罕细胞和间质DC。表皮朗格罕…     

SGC7901胃癌细胞-树突状细胞融合疫苗生物学特性的研究

目的为基于树突状细胞(dendriticcell,DC)的融合疫苗研究及应用提供实验依据。方法利用聚乙二醇诱导SGC7901胃癌细胞和DC融合,对融合细胞进行筛选培养,获取高纯度融合疫苗,对其生长曲线、克隆形成能力、T淋巴细胞增殖刺激能力、免疫缺陷动物成瘤活性进行观察。结果SGC7901胃癌细胞DC融合后,分裂增殖能力显著弱于亲代SGC7901胃癌细胞,不能形成细胞克隆,不能在免疫缺陷动物体内形成种植瘤,但其刺激T淋巴细胞增殖能力显著增强,融合细胞刺激效应T淋巴细胞增殖能力在1∶1、1∶10、1∶50、1∶100比例时,CPM值分别为15083±231、9608±83、4214±135和3020±28,与混合培养DC刺激效应T淋巴细胞的能力相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论SGC7901胃癌细胞DC融合细胞疫苗具备强烈刺激T淋巴细胞增殖的能力及体内外不成瘤特性,可以用于抗肿瘤生物治疗的进一步研究。     

趋化因子在树突状细胞肿瘤疫苗研究中的进展

趋化因子是一类调节免疫细胞定向迁移的细胞因子,其与表达于细胞表面的趋化因子受体结合而发挥生物学功能.树突状细胞(DC)是重要的专职抗原递呈细胞,其主要的应用是制备成各种肿瘤疫苗,树突状细胞功能的行使与趋化因子及其受体介导的细胞迁移密切相关,趋化因子在树突状细胞游走与迁徙过程中始终发挥着调节、促进或抑制的作用,从而促使树突状细胞递呈抗原、激活初始T细胞,引起机体免疫反应,杀伤、消灭肿瘤细胞和炎性分子.     

增强抗原呈递功能的树突状细胞疫苗

树突状细胞（DC）疫苗的研究已成为当前肿瘤免疫治疗的一大热点。随着对DC的不断认识,其强大的功能可塑性为发展增强其抗原呈递功能的DC疫苗提供了新思路,现就DC疫苗增强其抗原呈递功能的种种途径进行综述。     

超声刀气雾对胃癌肿瘤细胞播散种植的影响

目的探讨超声刀对胃癌组织标本切割时产生的烟雾对胃癌细胞的播散种植的影响。方法用超声刀和电刀分别对胃癌组织标本中周围正常组织和胃癌组织进行不同时间（5、10、15、20s）、不同功率（超声刀的3档和5档,电刀的电切40W和电凝80W）的切割,收集气雾悬浮液进行涂片和细胞学观察。结果超声刀和电刀对胃癌组织标本周围正常组织进行切割产生的气雾悬浮液涂片观察均未见肿瘤细胞。在电刀切割胃癌组织电切功率为40W/20s时,电凝80W/15s、20s时,5次收集的气雾中发现有1次、2次和3次收集气雾中发现有胃癌肿瘤细胞。超声刀切割胃癌组织在3档功率/20s时,5档功率/15s、20s时,5次收集的气雾中发现有2次,1次和4次收集气雾中发现胃癌肿瘤细胞。结论和电刀相比,超声刀切割正常胃组织和胃癌组织,均无增加胃癌肿瘤细胞的播散种植。为超声刀在胃癌手术中的安全使用提供初步的理论依据。     

Role of tumor-infiltrating CD11b antigen-presenting cells in the progression of gastric cancer

Background

Tumor-infiltrating antigen-presenting cells (APCs), involving tumor-associated macrophages and tumor-infiltrating dendritic cells, play an important role in tumor immunity and immune escape. The aim of this study was to determine whether tumor infiltrating CD11b⁺ APCs may affect tumor progression and clinical outcome.

Methods

The immunohistochemical analysis was used to evaluate the expression of CD11b, FOXP3, and CD8 in 214 gastric cancer tissues. Concentrations of immunosuppressive cytokines in medium conditioned by gastric cancer cells were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Effects of addition of tumor-conditioned media on CD11c⁺ cells were examined by flow cytometry.

Results

Almost all tumor-infiltrating CD11b⁺ cell expressed CD11c and was considered to be APCs. High CD11b⁺ cell infiltration was significantly correlated with huge tumor, positive venous invasion, lymph node metastasis, and tumor, node, metastasis stage. Patients with high CD11b⁺ cell infiltration had a poorer surgical outcome than those with low CD11b infiltration. Multivariate analysis revealed that CD11b⁺ cell infiltration was one of the independent prognostic factors. Tumor-conditioned medium obtained from several gastric cancer cell lines contained immunosuppressive cytokines, transforming growth factor-beta, interleukin-10, and vascular endothelial growth factor. The addition of tumor-conditioned medium decreased the expression of major histocompatibility complex-II and increased the expression of CD11b and programmed death ligand 2 on CD11c⁺ APCs. Infiltration of CD11b⁺ cells significantly correlate with the degree of FOXP3⁺ cell infiltration but not with CD8⁺ cell infiltration.

Conclusions

Tumor-infiltrating CD11b⁺ APCs affected local tumor cell-immune cell interactions and correlated to the poor prognosis of the patients with gastric cancer.     

胃癌干细胞及其治疗的研究进展

胃癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一,其病死率居高不下.目前关于胃癌发病机制的研究仍有大量疑问和争议.近年来,随着对肿瘤干细胞研究的不断深入,胃癌干细胞的研究也日益受到重视.现就肿瘤干细胞的概念、胃癌干细胞研究现状以及针对肿瘤干细胞的治疗研究进展进行综述.     

4-1 BBL在不同分化胃癌细胞株上的表达

目的 观察共刺激分子4-1 BBL在人胃高分化腺癌细胞株MKN-28、人胃中分化腺癌细胞株SGC-7901、人胃低分化腺癌细胞株BGC-823、人胃黏液腺癌细胞株MGC-803上的表达.方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学法检测以上4种胃癌细胞株4-1 BBL mRNA和蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测人淋巴细胞对不同胃癌细胞的体外杀伤活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测人淋巴细胞与不同胃癌细胞共培养上清液中自细胞介素(IL)-2、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量.结果 RT-PCR结果示4-1 BBL mRNA表达从高到低依次为MKN-28(46.63%)、SGC-7901(37.13%)、BGC.823(20.43%)、MGC-803(14.14%).免疫细胞化学结果示4-1 BBL着色程度由深到浅依次为MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803.MTT结果示不同时段不同效靶比下人淋巴细胞对胃癌细胞的体外杀伤活性由高到低为MKN-28、SGC-7901、BGC-23、MGC-803.ELISA结果示不同效靶比下人淋巴细胞与胃癌细胞共培养48 h上清液中IL-2、TNF-α的含量由高到低为MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803.而IL-10的含量由高到低为MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-28.结论 人胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803中4-1 BBL基因在蛋白和mRNA水平均有表达,且胃癌细胞株的分化程度越高4-1BBL表达水平越高.淋巴细胞对高表达4-1 BBL胃癌细胞株的杀伤力较高,而且4-1 BBL可能通过促进细胞因子TNF-α、IL-2和细胞抑制因子IL-10的产生调节肿瘤免疫.     

Dendritic cells pulsed with pancreatic cancer total tumor RNA generate specific antipancreatic cancer T cells

RNA-based dendritic cell immunotherapy with the use of total tumor RNA provides the potential to generate a polyclonal immune response to multiple known and unknown tumor antigens without HLA restriction. Our study evaluated this approach as potential immunotherapy for patients with pancreatic cancer. Dendritic cells were generated using adherent monocytes isolated from peripheral blood of patients with pancreatic cancer and evaluated phenotypically by flow cytometry to determine whether dendritic cells could be generated from the blood of patients with pancreatic cancer. Immature dendritic cells were transfected with mRNA encoding full-length carcinoembryonic antigen (CEA) or pancreatic cancer total tumor messenger RNA, and then matured. Matured dendritic cell phenotypes were also analyzed by flow cytometry. Transfected, matured dendritic cells were used to stimulate autologous T cells, and the resultant antigen-specific effector T cells were analyzed by interferon-γ Elispot assay. Immature dendritic cells with characteristic phenotypic markers CD40, CD80, and CD86 were successfully isolated from the blood of patients with pancreatic cancer. Incubation with maturation agents increased expression of CD80 and CD83, demonstrating the induction of a mature antigen-presenting phenotype. Dendritic cells transfected with a pancreatic cancer-associated antigen (CEA) generated antigen-specific T cells (P < 0.05). Dendritic cells transfected with autologous total tumor pancreatic cancer RNA generated T cells that specifically recognized HLA-matched pancreatic cancer cell lines (P < 0.05 compared to control cell lines). Dendritic cells from patients with pancreatic cancer maintain the ability to translate and process transfected RNA and serve as mature antigen-presenting cells. These RNA-transfected dendritic cells from pancreatic cancer patients successfully generate specific T cells against the pancreatic cancer-associated antigen CEA as well as T cells that specifically recognize pancreatic cancer cells. These data suggest that total tumor RNA-pulsed dendritic cells may have potential as an adjuvant immunotherapy for patients with pancreatic cancer. Presented at the Forty-Fourth Annual Meeting of The Society for Surgery of the Alimentary Tract, Orlando, Florida, May 19–22, 2003 (oral presentation). Supported by a National Research Service Award (M.F.K.) and by a grant from the Lustgarten Foundation (D.S.T.).     

胃癌微环境中树突状细胞浸润的临床意义

目的 探讨胃癌微环境中肿瘤浸润性树突状细胞(TIDC)与癌细胞浸润程度、淋巴结转移及患者术后存活时间的关系。方法 采用免疫组织化学方法,运用抗S-100检测100例胃癌组织中的TIDC,并分析其与临床病理参数及生存率的关系。结果 TIDC在胃癌组织中的阳性率为41.0％(41/100),其与癌细胞浸润程度无相关性(P>0.05)。56例有淋巴结转移的患者中,TIDC阳性者淋巴结转移率为56.1％,阴性者为43.9％,两者比较差异无显著性意义(P>0.05);第2站以上淋巴结转移率,TIDC阳性者为29.7％,而阴性者为70.3％,两者比较,差异有显著性意义(P<0.05)。TIDC阳性和阴性患者5年生存率分别为59.0％和37.7％,两者比较.差异有显著性意义(P<0.05)。结论 TIDC阳性与癌细胞浸润程度无相关性,但与第2站以上淋巴结转移和患者术后生存率密切相关。     

4-1BBL基因修饰前列腺癌细胞的体内抗肿瘤作用

目的 观察转染4-1BBL的小鼠前列腺癌细胞株RM-1体内抗肿瘤效应及对免疫功能的影响.方法 用脂质体法将重组质粒pcDNA3和pcDNA3-4-1BBL分别导入小鼠前列腺癌细胞RM-1中,经G418筛选,建立高表达的细胞株.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和间接免疫荧光法检测4-1BBL的表达.将转染前后的肿瘤细胞,分别接种于C57BL/6小鼠的左肋腹侧皮下观察其致瘤性.CCK-8检测其细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性.结果 成功建立高表达4-1BBL的RM-1/4-1BBL细胞株.25 d后,RM-1/4-1BBL组小鼠致瘤体积为(730.0±23.6)mm3较RM-1/pcDNA3组(1490.0±36.4)mm3和RM-1组(1510.0±26.8)mm3均小(P＜0.05).接种RM-1/4-1BBL细胞小鼠的CTL细胞杀伤活性为(35.4±1.6)%,较RM-1/pcDNA3组(12.8土2.0)%和RM-1组(13.7±3.6)%均增强(P＜0.05).结论 4-1BBL基因修饰的小鼠前列腺癌细胞能显著增强小鼠的免疫功能,抑制肿瘤的发展.     

转4-1BBL基因小鼠肝癌细胞瘤苗体外诱导抗肿瘤免疫应答的研究

目的　研究转 4 1BBL基因小鼠肝癌细胞疫苗体外诱导淋巴细胞特异性杀伤活性及刺激同系小鼠脾细胞产生细胞因子 (IL 2、TNF α和GM CSF)的能力。方法　采用脂质体介导法将真核表达质粒 pCDNA3 1( ) m4 1BBL导入小鼠肝癌细胞Hepa1 6 ,经G4 18筛选后获得稳定高表达克隆 ,以丝裂霉素C(MMC)处理后 ,制成肿瘤细胞疫苗 (TCV) ,经体外与同系小鼠脾淋巴细胞共同培养后 ,测定淋巴细胞特异性杀伤活性及对脾细胞产生细胞因子 (IL 2、TNF α和GM CSF)的影响。结果转染 4 1BBL的Hepa1 6细胞能够高表达 4 1BBL蛋白 ,并且经MMC处理后制成的瘤苗在培养 4 8h仍能表达m4 1BBL。与野生型的Hepa1 6细胞相比 ,上述瘤苗能诱导淋巴细胞产生针对亲本的小鼠肝癌细胞Hepa1 6的特异性杀伤作用 (P <0 0 5 ) ,但是对于小鼠肝癌细胞H2 2及成纤维细胞NIH3T3无效 ;此瘤苗在体外能显著增强脾细胞分泌细胞因子IL 2、TNF α和GM CSF的能力。结论　转 4 1BBL基因小鼠肝癌细胞疫苗能诱导有效的抗肝癌免疫反应。