降钙素基因相关肽对血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的观察降钙素基因相关肽(calcitonin-gene-relatedpeptide;CGRP)对高浓度葡萄糖(高糖)诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用。方法用MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果当CGRP浓度为10-8mol/L时,高糖对细胞的损伤已明显得到保护。高糖组细胞活力为60%,而CGRP处理组细胞活力为80%。流式细胞术检测结果显示,CGRP处理组细胞凋亡率明显下降。结论CGRP可对高糖诱导的内皮细胞凋亡起到保护作用。     

氢气饱和生理盐水对高糖所致内皮细胞内活性氧生成和凋亡的影响

目的探讨氢气(H2)饱和生理盐水对高糖所致内皮细胞内活性氧(ROS)生成和凋亡的影响。方法细胞分为对照组、高糖组、高糖+H2饱和生理盐水组(H2组)3组,流式细胞仪检测细胞内ROS,Realtime PCP检测氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)mRNA,细胞凋亡ELISA试剂盒检测细胞凋亡。结果 H2组内皮细胞内ROS较高糖组明显减少(2.75±0.37vs 6.35±1.29,P<0.01),而SOD和GSH-Px mRNA水平明显增高(SOD:0.74±0.06vs 0.26±0.03,P<0.01;GSH-Px:0.68±0.05vs 0.31±0.04,P<0.01),细胞凋亡水平明显降低(0.38±0.02vs 0.89±0.05,P<0.01)。结论 H2饱和生理盐水可减少高糖诱导的内皮细胞内ROS增多和抗氧化酶的消耗,并减少高糖诱导的细胞凋亡。     

Drak2在高糖诱导胰岛β细胞凋亡中的作用

目的 探讨Drak2在高糖诱导的胰岛β细胞凋亡中的作用。方法 不同浓度葡萄糖诱导刺激,模拟体外胰岛细胞糖毒性损伤后的细胞凋亡模型,通过CCK8检测葡萄糖作用后细胞的存活率;Western印迹法检测不同糖浓度时Drak2的表达情况,完成糖浓度的筛选。构建Drak2-pcDNA3.0质粒,应用基因转染技术构建Drak2过表达可诱导细胞系,Western印迹法分析糖诱导前后胰岛β细胞Drak2的表达。Real-Time PCR测定Drak2、Bax、Bcl-2的mRNA水平,流式细胞法测定诱导前后的凋亡情况。结果CCK8结果显示,随着培养液中糖浓度上升,Rinm 5mf凋亡逐渐增加,随着时间的增加(24、48、72h)凋亡也逐渐增加,呈一定的量效关系。Western印迹法显示在糖浓度22.2mmol/L培养72h时,Drak2的表达量最多。构建Drak2过表达,在转染6h后开始葡萄糖诱导,在高糖诱导72h时过表达组Drak2蛋白是正常组的6倍。Real-Time PCR显示,过表达组Drak 2 mRNA在葡萄糖诱导前开始增加,在高糖诱导72h时增高明显(P<0.05),凋亡相关基因BAX、Bcl-2表达均有增加(P<0.05)。流式细胞仪检测显示高糖诱导后,过表达组凋亡率明显高于正常组(P<0.05)。结论 Drak 2过表达促进高糖诱导的胰岛β细胞凋亡。     

泛素在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的表达

目的检测高浓度葡萄糖对血管内皮细胞凋亡的影响和泛素表达的变化.方法ECV-304细胞在高糖(25 mmol/L)和正常糖浓度(5.5 mmol/L)DMEM培养液中分别培养24、48、72 h,用MTT法检测细胞活力,用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡特异性的DNA片段,并用Northern blot检测泛素mRNA的变化.结果高糖24、48、72 h组细胞OD值比正常浓度组均显著下降(P＜0.05);1.8%琼脂糖凝胶电泳在高糖48、72 h组检测到细胞凋亡特异性DNA片段;泛素mRNA在高糖24、48、72 h组分别增加25.37%、53.47%和63.93%(P＜0.05).结论高浓度葡萄糖可增加血管内皮细胞凋亡,泛素mRNA在高糖诱导的内皮细胞凋亡中表达上调,且发生在凋亡形态学改变之前,泛素参与调节高血糖诱导的细胞凋亡.     

泛素在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的表达

目的检测高浓度葡萄糖对血管内皮细胞凋亡的影响和泛素表达的变化.方法ECV-304细胞在高糖(25 mmol/L)和正常糖浓度(5.5 mmol/L)DMEM培养液中分别培养24、48、72 h,用MTT法检测细胞活力,用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡特异性的DNA片段,并用Northern blot检测泛素mRNA的变化.结果高糖24、48、72 h组细胞OD值比正常浓度组均显著下降(P＜0.05);1.8%琼脂糖凝胶电泳在高糖48、72 h组检测到细胞凋亡特异性DNA片段;泛素mRNA在高糖24、48、72 h组分别增加25.37%、53.47%和63.93%(P＜0.05).结论高浓度葡萄糖可增加血管内皮细胞凋亡,泛素mRNA在高糖诱导的内皮细胞凋亡中表达上调,且发生在凋亡形态学改变之前,泛素参与调节高血糖诱导的细胞凋亡.     

高糖状态下甲状旁腺素受体1对乳腺癌的作用机制研究

目的 阐明高糖状态下甲状旁腺受体1(PTH1R)对乳腺癌细胞株SHZ-88的作用机制.方法 应用实时(real time) PCR分别检测0(对照组)、5、15、25 mmol/L葡萄糖浓度下PTH1R mRNA水平;构建出PTH1R基因沉默(siPTH1R)的细胞模型后,分别应用MTT法、TUNEL-FITC/Hoechst33258及Western blot法检测对照组、25 mmol/L葡萄糖处理组(高糖组)、25 mmol/L葡萄糖处理的阴性PTH1R基因序列组(高糖siPTH1R NC组)及高糖阳性PTH1R基因序列组(高糖siPTH1R组)细胞活力、细胞凋亡情况及Bax、Bcb2蛋白的表达.结果 随着葡萄糖浓度升高,PTH1R mRNA水平增高,其中25 mmol/L葡萄糖处理后PTH1R mRNA水平最高(均P＜0.01);高糖siPTH1R组细胞活力(P＜0.05,P＜0.01及P＜0.01)及Bcl-2表达(均P＜0.01)低于对照组、高糖组及高糖siPTH1R-NC组;高糖siPTH1R组中细胞凋亡水平及Bax表达高于对照组、高糖组及高糖siPTH1R-NC组(均P＜0.01);与对照组比较,高糖组细胞活力(P＜0.01)及Bcl-2表达(P＜0.01)增高,而Bax表达(P＜0.01)降低.结论 高糖状态下PTH1R表达水平与SHZ-88细胞增殖能力有关,抑制PTH1R表达可能为糖尿病合并乳腺癌治疗有效靶点之一.     

二氢杨梅素激活磷酸腺苷活化蛋白激酶抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 探讨二氢杨梅素对高糖诱导血管内皮细胞凋亡的影响及其与磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的关系.方法 体外培养原代人脐带静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分为正常对照组(5.56 mmoL/L葡萄糖)、高糖处理组(33.36 mmol/L葡萄糖)、甘露醇高渗对照组(5.56 mmol/L葡萄糖+27.8 mmol/L甘露醇)、AMPK激动剂5-氨基咪唑4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核糖苷(5-Aminoimidazole-4-carboxamide-1-β-D-ribofuranoside,AICAR)(10 nmol/L)+高糖处理组、二氢杨梅素(1μmol/L)+高糖处理组、AMPK抑制剂compound C(5 mmol/L) +AICAR+高糖处理组和AMPK抑制剂compound C(5 mmol/L)+二氢杨梅素+高糖处理组.处理36 h后,CCK-8法检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测AMPK、p-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACC)和p-ACC蛋白水平.结果 与正常对照组比较,高糖处理组细胞活力明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),p-AMPK、p-ACC水平显著降低(P＜0.05);二氢杨梅素或AICAR预处理均明显抑制高糖诱导的HUVECs细胞活力下降、细胞凋亡增加和p-AMPK、p-ACC水平降低(P＜0.05);Compound C预处理明显抑制AICAR和二氢杨梅素对高糖诱导HUVECs细胞凋亡的保护作用(P＜0.05).结论 二氢杨梅素通过促进AMPK活化抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡.     

硫化氢抑制高糖诱导的内皮细胞损伤的研究

目的观察高糖环境下细胞内硫化氢的生成及硫化氢对高糖诱导的内皮细胞损伤的影响并探讨其机制。方法将人脐静脉内皮细胞分为4组:A组为正常糖浓度组(5.5 mmol/L),B组为高糖组(25 mmol/L),C组为高糖(25 mmol/L)+硫氢化钠(50μmol/L)组,D组为正常糖浓度(5.5 mmol/L)+硫氢化钠(50μmol/L)组,处理48 h后,测定细胞内硫化氢的含量,M TT检测细胞存活率,Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cleaved caspase-3的表达。结果①与A组相比,B组硫化氢生成量明显减少(P<0.05),与B组相比,C组硫化氢生成量明显增多(P<0.05);②与A组相比,B组的细胞存活率明显减少(P<0.05),而C组的细胞存活率较B组显著升高(P<0.05);③与A组相比,B组Bax表达显著升高(P<0.05),Bcl-2的表达显著降低(P<0.05),而Caspase-3活性明显增强(P<0.05);与B组相比,C组Bax水平显著降低(P<0.05),Bcl-2水平显著升高(P<0.05),Caspase-3活性显著下降(P<0.05)。与A组相比,D组各指标表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论高糖对内皮细胞硫化氢的生成具有抑制作用;外源性硫化氢可保护高糖诱导的内皮细胞损伤,其机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

迷迭香酸对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞迁移、凋亡的作用

目的探讨迷迭香酸对高糖诱导下人视网膜血管内皮细胞迁移、凋亡的作用。方法将人视网膜血管内皮细胞按培养方案分为对照组、迷迭香酸组、高糖组、联合组。Transwell法观察各组细胞迁移能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,ELISA检测各组白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。Western blotting法与qRT-PCR技术检测各组细胞中血管内皮生长因子(VEGF)与凋亡相关蛋白Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(BAX)的表达水平。结果迷迭香酸组与对照组各项指标差异均无显著性(P＞0.05)。与对照组比较,高糖组人视网膜血管内皮细胞迁移能力及细胞凋亡水平显著增加,炎症指标IL-6、IL-8与TNF-α的含量增加,VEGF、Caspase-3、BAX蛋白及mRNA水平增加,Bcl-2蛋白及mRNA水平降低(P＜0.05)。与高糖组比较,联合组迁移细胞数量、细胞凋亡水平、IL-6、IL-8与TNF-α的含量、VEGF、Caspase-3与BAX的蛋白及mRNA水平降低,Bcl-2蛋白及mRNA水平增加(P＜0.05)。结论迷迭香酸可抑制高糖环境下人视网膜血管内皮细胞的迁移及凋亡状态,其机制可能与调控VEGF有关。     

高糖诱导人脐静脉内皮细胞fractalkine表达及其凋亡的研究

目的探讨高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)fractalkine(FKN)表达与细胞凋亡的可能机制。方法对数生长期的HUVECs,分为正常组(N)、高糖组(HG)、氯化锂(lithium chloride,LiCl)组(LiCl)、高糖+LiCl组(HG+LiCl)。5.5 mmol/L的低糖DMEM培养的HUVECs种板10 h后按以上分组加入10 mmol/L的LiCl预处理2 h,再用33.3 mmol/L的高糖干预48 h后,用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化SABC法检测β-catenin及p-GSK-3β(Ser9),免疫荧光FITC法检测FKN蛋白水平变化,RT-PCR检测GSK-3β和FKN mRNA水平变化。结果①与正常组比较,高糖诱导的HUVECs凋亡率明显增加(P<0.05)。与高糖组比较,LiCl可明显降低高糖环境下HUVECs的凋亡率(P<0.05),但仍高于正常组(P<0.05)。②与正常组比较,高糖组HUVECsβ-catenin及p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达降低(P<0.05);GSK-3βmRNA水平及FKN蛋白和mRNA水平升高(P<0.05)。③与高糖组比较,LiCl+高糖组HUVECsβ-catenin及p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达升高(P<0.05),GSK-3βmRNA水平(P<0.05)及FKN蛋白和mRNA(P<0.05)水平降低。结论高糖诱导的HUVECs凋亡可能与Wnt信号通路抑制和抑制FKN表达上调有关。     

氯沙坦对高糖状态下内皮细胞的保护作用及其机制探讨

目的：探讨高糖环境下氯沙坦对内皮细胞的保护作用及其机制。方珐：比色法测定内皮细胞条件培养上清中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性和丙二醛（MDA）水平，RT—PCR方法分析细胞yEGFmRNA的表达水平，ELISA方法检测细胞分泌的VEGF蛋白。结果：在高糖处理的细胞条件培养上清中SOD和CAT活性降低，而MDA含量升高（P〈0．05），同时细胞yEGF mRNA和蛋白质表达增加（P〈0．05）；而氯沙坦可削弱上述变化，降低内皮细胞MDA含量、增强SOD与CAT活性，以及下调VEGF mRNA和蛋白质表达（P〈0．05）。结论：高糖可诱导内皮细胞活性氧产生增多，抗氧化酶活性下降，导致细胞氧化平衡失调，使yEGF mRNA表达与蛋白分泌增加，促进高糖时内皮细胞病变的进展，提示氯沙坦对高糖状态下的内皮细胞的保护作用可能与调节内皮细胞氧化平衡和抑制内皮细胞的活化有关。     

胰高血糖素样肽-1对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及相关机制

目的：探讨胰高血糖素样肽-1（glucagon—like peptide-1,GLP—1）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞huma numbilica lvein endothelial cells,HUVECs）凋亡的影响及相关机制。方法：HUVECs加入不同处理因素后分组,分别培养48h后,MTT检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞早期凋亡率;Westernl印迹测定细胞P-Akt,p-eNOS水平;NO试剂盒检测NO浓度。结果：高糖（33mmol／L）培养48h后HUVECs细胞活力下降p〈0．05）,细胞凋亡率增加（p〈0．01）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均下降（P〈0．05）;高糖条件下加人GLP．1（3nmol／L）培养48h,与高糖组相比较,HUVECs细胞活力增加（P〈0．01）,细胞凋亡率减少（p〈O．05）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均增／JH（V〈0．05）;P13K抑制剂wortmannine（100nmol／L）可以阻断GLP-1的抗凋亡作用及其对P—Akt蛋白、p-eNOS蛋白及NO水平的影响;eNOS抑制剂L—NAME（100umol／L）仅能阻断GLP-1的抗凋亡作用及对NO水平的影响,不影响p-Akt蛋白的表达。结论：GLP．1可改善高糖诱导的HUVECs凋亡,该抗凋亡作用可能与P13K／Akt／eNOS通路的上调相关。     

阿托伐他汀钙抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞内皮微粒释放及细胞凋亡

目的：探讨阿托伐他汀钙对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）内皮微粒释放和细胞凋亡的影响.方法：取生长良好的HUVEC进行实验.将细胞分为3组：对照组（5.5mmol/L葡萄糖）、高糖组（33.3mmol/L葡萄糖）和阿托伐他汀干预组.干预组首先用不同浓度的阿托伐他汀钙（0.01～10μmol/L）分别作用lh,而后加入33.3mmol/L葡萄糖共同孵育24,48,72h.应用MTT比色法检测细胞的生存率.采用流式细胞仪分别检测HUVEC内皮微粒释放以及细胞凋亡率.应用Griess还原法检测培养细胞上清液中一氧化氮（NO）浓度.结果：阿托伐他汀钙减轻高糖对HUVEC的损伤,阿托伐他汀组细胞形态基本完好.阿托伐他汀钙降低高糖诱导的HUVEC内皮微粒释放和细胞凋亡率,且均具有浓度和时间依赖性（P均〈0.05）.阿托伐他汀钙升高高糖诱导的NO含量,使其趋于正常.此作用在0.1～10μmol/L阿托伐他汀钙浓度区间作用24～48h时效果最明显（P均〈0.05）.结论：阿托伐他汀钙抑制高糖诱导的HUVEC内皮微粒释放及细胞凋亡,并通过调节内皮微粒和NO平衡起到保护HUVEC作用.     

大剂量葡萄糖诱导人视网膜内皮细胞凋亡

目的 检验大剂量葡萄糖水平对培养的原代人视网膜毛细血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells，HRCEC)的直接影响。方法 HRCEC细胞从捐赠人眼中分离得到。细胞在含有5mmol／L或25mmol／L葡萄糖的培养基中培养6d。应用锥虫蓝染色测定细胞活力、流式细胞计数分析细胞周期、TUNEL分析细胞凋亡。结果 HRCEC细胞在25mmol／L葡萄糖中培养6d，细胞活力显著下降。通过流式细胞计数和TUNEL测定，凋亡细胞的数目在大剂量葡萄糖培养基中显著升高。结论 大剂量葡萄糖可诱导人视网膜毛细血管内皮细胞凋亡，这有可能是促进糖尿病性视网膜病发展的原因。     

大剂量葡萄糖诱导人视网膜内皮细胞凋亡的实验研究

目的检验大剂量葡萄糖水平对培养的原代人视网膜毛细血管内皮细胞(humanretinalcapillaryendothelialcells,HRCEC)的直接影响。方法HRCEC细胞从捐赠人眼中分离得到。细胞在含有5mmol/L或25mmol/L葡萄糖的培养基中培养6d。应用锥虫蓝染色测定细胞活力、流式细胞计数分析细胞周期、TUNEL分析细胞凋亡。结果HRCEC细胞在25mmol/L葡萄糖中培养6d,细胞活力显著下降。通过流式细胞计数和TUNEL测定,凋亡细胞的数目在大剂量葡萄糖培养基中显著升高。结论大剂量葡萄糖可诱导人视网膜毛细血管内皮细胞凋亡,这有可能是促进糖尿病性视网膜病发展的原因。     

芦荟苷通过调控MAPKs信号通路诱导胃癌细胞凋亡

目的探讨芦荟苷对人胃癌MKN-28和HGC-27细胞凋亡的诱导作用及可能的分子机制。方法胃癌MKN-28和HGC-27 细胞用含10%胎牛血清和NEAA（HGC-27细胞）的1640完全培养基常规培养,不同浓度的芦荟苷处理胃癌MKN-28和HGC-27 细胞特定的时间,CCK-8 实验检测芦荟苷对MKN-28 和HGC-27 细胞活力的影响;DAPI染色观察凋亡细胞核的形态改变; AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Western blotting检测凋亡相关蛋白PARP和procaspase-3的表达及MAPKs信号通 路p38,ERK及JNK的磷酸化水平;p38,ERK及JNK的特异性抑制剂处理细胞,WB检测抑制剂的对p38,ERK及JNK激活的抑 制效果,DAPI染色观察抑制剂对胃癌细胞凋亡的影响。结果芦荟苷浓度依赖性地抑制胃癌MKN-28和HGC-27细胞的活力, 诱导胃癌细胞凋亡;芦荟苷处理胃癌细胞后,胞内JNK和p38的磷酸化水平明显增加,而ERK的磷酸化水平下降。特异性抑制 剂阻断ERK活化,能够增强芦荟苷诱导的细胞凋亡,阻断p38和JNK的激活,能够部分逆转芦荟苷诱发的胃癌细胞凋亡。结论 芦荟苷通过激活JNK和p38信号途径,抑制ERK信号途径诱导胃癌细胞凋亡。     

PTEN基因表达对甲状腺癌BCPAP和FTC133细胞凋亡以及ERK和AKT表达的影响

  目的  探讨PTEN基因表达对甲状腺癌BCPAP细胞和FTC133细胞凋亡以及信号通路蛋白ERK和AKT表达的影响。  方法  BCPAP细胞和FTC133细胞经PTEN-pCMV6转染和si-PTEN RNA干扰后，光镜下观察细胞形态变化，MTT检测细胞活力，Annexin V-FITC和PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blot检测Caspase 8、9、12、3、Bax、Bcl-2、ERK和AKT的表达水平，分析PTEN基因的不同表达与甲状腺癌BCPAP和FTC133细胞凋亡以及信号通路蛋白表达的关系。  结果  与对照组相比较，甲状腺癌BCPAP和FTC133细胞在PTEN基因过表达时，光镜下均出现细胞变形、体积缩小、核固缩等凋亡改变，细胞活力降低（P < 0.01），细胞凋亡率增加（P < 0.01），凋亡蛋白Caspase 8、9、12、3以及促凋亡蛋白Bax表达量增加（P < 0.01），抗凋亡蛋白Bcl-2表达量减低（P < 0.01），ERK和AKT表达量均较对照组减低（P < 0.05），ERK的相对表达量在FTC133细胞的减低程度显著高于BCPAP细胞（P < 0.01），AKT的相对表达量减低程度在BCPAP和FTC133，差异无统计学意义（P > 0.05）；PTEN基因干扰表达减低时，光镜下BCPAP和FTC133细胞数目、细胞形态、体积及细胞核形态变化、细胞活力和细胞凋亡率变化，差异无统计学意义（P > 0.05）；凋亡蛋白Caspase 8、9、12、3以及促凋亡蛋白Bax表达量减低（P < 0.01），抗凋亡蛋白Bcl-2表达量增加（P < 0.01），FTC133细胞ERK和AKT表达量分别较空白对照组均为增高（P < 0.01），BCPAP细胞ERK表达量较对照组增高（P < 0.01）。而AKT表达量与对照组比较，差异无统计学意义（P > 0.05），ERK的相对表达量增高程度在BCPAP和FTC133，差异无统计学意义（P > 0.05），AKT的相对表达量在FTC133细胞的增高程度显著高于BCPAP细胞（P < 0.05）。  结论  PTEN基因可促进BCPAP和FTC133细胞凋亡，线粒体途径、死亡受体途径和内质网激活通路均参与BCPAP和FTC133细胞凋亡的过程，ERK在PTEN基因调控BCPAP细胞凋亡发挥重要作用，而AKT和ERK均参与PTEN基因促进FTC133凋亡的过程。