顺铂诱导鼻咽癌 CNE-2Z细胞凋亡并降低其线粒体膜电位

鼻咽癌是我国华南地区高发的恶性肿瘤，放疗是其治疗的基本方法，由于中晚期鼻咽癌治疗后有较高的远处转移率及局部复发率，化疗具有十分重要的作用。到目前为止，国内外研究报道均认为鼻咽癌化疗方案中以含有顺铂（ cisplatin,cDDP）的联合化疗方案疗效较好 [1]。本文以人鼻咽癌低分化上皮细胞株 CNE-2Z为体外模型，经 cDDP处理后，通过荧光染色、流式细胞仪等检测手段发现， cDDP能诱导鼻咽癌细胞凋亡，同时伴有线粒体膜电位的降低。     

槲皮素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的:观察槲皮素(quercetin)体外对肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制和诱导凋亡作用,并探讨线粒体在诱导凋亡机制中的作用。方法:以10、30、60和100μmol/L槲皮素作用于体外培养的SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;Annexi-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况;吖啶橙(acridine or-ange,AO)染色法观察细胞凋亡时形态变化;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)变化。结果:槲皮素体外能抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长(P<0.01),诱导细胞发生凋亡,并呈现量效和时效关系。10、30、60和100μmol/L槲皮素作用72h引起的细胞抑制率(F=343.71,P<0.01)和凋亡率(F=234.17,P<0.01)明显高于对照组。槲皮素作用48h后,AO染色图片可见细胞膜呈泡状膨出和凋亡小体等。凋亡过程中线粒体膜电位下降。结论:槲皮素体外能抑制肝癌SMMC-7721细胞生长,诱导细胞凋亡发生,线粒体膜电位下降在细胞凋亡过程中可能起到重要作用。     

LMP1通过Survivin抑制60Co诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的　研究EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)介导凋亡抑制蛋白 (Survivin)表达对辐射效应的影响。方法　利用LMP1可调控表达鼻咽癌细胞系 (Tet on LMP1HNE2 )诱导LMP1表达 ,同时 60 Co照射 5Gy ,采用形态学观察、流式细胞术和半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase 3)活性检测等方法 ,分析LMP1表达对60 Co诱导鼻咽癌细胞凋亡的影响。用反义Survivin寡核苷酸阻断Survivin表达 ,观察Sur vivin表达阻断对60 Co辐射效应的影响。结果　LMP1表达抑制60 Co诱导鼻咽癌细胞凋亡 ,LMP1表达60 Co照射组形态学和流式细胞术检测凋亡率 (32 .7%± 2 .1% ,6 .3% )明显低于LMP1表达阴性组 (6 6 .0 %± 3.0 % ,2 9.6 % ) (P <0 .0 5 ) ;转染Survivin反义寡核酸后细胞凋亡率 (5 9.3%± 3.2 % ,3.0 % )明显高于对照组 (2 6 .0 %± 2 .6 % ,8.6 % ) (P <0 .0 5 ) ;同样转染Survivin反义寡核酸组Caspase 3活性 (3.78nmol/ 10 6)高于对照组 (2 .79nmol/ 10 6)。结论　提示LMP1通过介导Survivin表达而抑制60 Co照射诱导凋亡 ,Survivin反义核酸协同辐射诱导肿瘤细胞凋亡 ,Survivin作为增敏放射治疗靶 ,具有潜在的临床意义。     

TRAIL诱导骨肉瘤HOS-8603细胞凋亡与线粒体跨膜电位关系的研究

目的 研究TRAIL诱导HOS-8603细胞凋亡与线粒体跨膜电位（ΔΨm）关系。方法 MTT法测定TRAIL对HOS-8603细胞的抑制率; 将HOS-8603细胞分别用TRAIL、TRAIL ＋ 1.0μg/ml 环孢菌素A（CsA）处理, 然后用透射电镜观察HOS-8603细胞形态学变化；用流式细胞术分别测定亚G1期细胞百分率及PI和Rh123双染色后细胞的ΔΨm。 结果 MTT还原试验表明：作用24小时后, 2.5μg/mlTRAIL的抑制率为29%；5μg/mlTRAIL的抑制率为83%. HOS-8603细胞经TRAIL作用后, 透射电镜下观察到典型的凋亡形态特征；随着TRAIL作用时间增加, HOS-8603细胞凋亡数增加和ΔΨm 降低（F=33.831 P〈0.01） , 两者呈直线相关.CsA不仅能抑制TRAIL诱导HOS-8603细胞ΔΨm 降低。而且能减少凋亡细胞数的增加（t=7.103 ,P〈0.01）。结论 TRAIL诱导HOS-8603细胞凋亡的线粒体依赖途径是通过使线粒体膜通透性转运孔开放, ΔΨm降低来实现；CsA能部分抑制这些效应。     

亚砷酸诱导人鼻咽癌细胞凋亡及其对细胞周期的影响

细胞凋亡与肿瘤的发生和治疗的关系是近年来肿瘤学界研究的热点 ,细胞凋亡受阻将导致细胞代谢的紊乱和肿瘤的发生与发展。本研究拟探讨亚砷酸体外对人鼻咽癌细胞株CNE1的凋亡诱导作用以及对细胞周期的影响 ,以寻求鼻咽癌治疗的新途径。将浓度 5× 10 5/ml的CNE1细胞接种于 5 0ml培养瓶中 ,置于 37℃ ,5 %CO2 条件下培养 2 4h ,大部分细胞贴壁后 ,实验组加入不同浓度的亚砷酸 ,继续培养至预定的时间 ,收集悬浮及贴壁细胞 ,70 %冷酒精固定过夜 ,常规碘化丙锭(PI)染色 ,流式细胞仪检测DNA含量及细胞周期分析。细胞离心成团 ,用 1%冰醋酸…     

拓扑异构酶Ⅰ抑制剂对K562细胞的杀伤与诱导凋亡作用

背景与目的:近年发现,拓扑异构酶Ⅰ抑制剂对加速期或急变期的慢性髓细胞白血病有较好疗效.为了深入理解拓扑异构酶Ⅰ抑制剂这一新的药理作用,本研究采用具有慢性髓细胞白血病特征性异常染色体[t(9;22)]的K562细胞株为实验对象,进一步探讨拓扑异构酶Ⅰ抑制剂拓扑替康(topotecan)对靶细胞的杀伤与诱导凋亡活性.方法:采用MTT法测定拓扑替康对K562细胞的杀伤作用;通过形态学与AnnexinVFITC染色,研究拓扑替康对靶细胞的促凋亡活性;采用caspase 8特异性抑制剂IETD fmk,分析拓扑替康介导的细胞杀伤或凋亡和caspase活化的关系.结果:经0 15μmol/L拓扑替康处理至12、24、48及72h时,K562细胞的存活率与对照相比,逐渐降至(92±36)%[P>0 05vs(94±27)%]、(68±21)%[P<0 05vs(119±13)%]、(54±15)%[P<0 05vs(132±31)%]及(21±10)%[P<0 01vs(114±19)%];同时,靶细胞出现磷脂酰丝氨酸外翻、细胞固缩、染色质边集、核碎裂,最终解离为大量凋亡小体;经caspase 8抑制剂与拓扑替康联合处理至24、48h时,K562细胞的存活率依然维持在(95±29)%与(87±11)%,后者显著高于单用拓扑替康者[P<0 05vs(54±15)%],且无明确的凋亡小体形成.结论:拓扑异构酶Ⅰ抑制剂拓扑替康对K562细胞具有较强的杀伤活性与诱导凋亡作用,该过程可能依赖caspase 8的活化.     

高良姜素诱导肺癌A549细胞凋亡的研究

目的研究高良姜素诱导肺癌细胞系A549细胞凋亡效应。方法MTT法测定A549细胞生长抑制率,荧光显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞仪分析细胞周期和线粒体膜电位的变化。Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达变化。结果随高良姜素浓度增高,A549细胞生长抑制率明显上升,IC50在30.15 mg/L。细胞凋亡可在10~80mg/L 高良姜素处理后24 h出现,呈浓度依赖性。高良姜素使线粒体膜电位降低。Caspases被激活,Bcl-2、Bcl-XL表达下调,p53、Bax、Bid表达呈浓度依赖性上调。结论高良姜素可能是通过线粒体途径诱导A549细胞发生凋亡。     

拓扑异构酶I抑制剂对K562细胞的杀伤与诱导凋亡作用

背景与目的:近年发现,拓扑异构酶Ⅰ抑制剂对加速期或急变期的慢性髓细胞白血病有较好疗效。为了深入理解拓扑异构酶Ⅰ抑制剂这一新的药理作用,本研究采用具有慢性髓细胞白血病特征性异常染色体犤t(9;22)犦的K562细胞株为实验对象,进一步探讨拓扑异构酶Ⅰ抑制剂拓扑替康(topotecan)对靶细胞的杀伤与诱导凋亡活性。方法:采用MTT法测定拓扑替康对K562细胞的杀伤作用;通过形态学与AnnexinVFITC染色,研究拓扑替康对靶细胞的促凋亡活性;采用caspase-8特异性抑制剂IETD-fmk,分析拓扑替康介导的细胞杀伤或凋亡和caspase活化的关系。结果:经0.15μmol/L拓扑替康处理至12、24、48及72h时,K562细胞的存活率与对照相比,逐渐降至(92±36)%犤P>0.05vs(94±27)%犦、(68±21)%犤P<0.05vs(119±13)%犦、(54±15)%犤P<0.05vs(132±31)%犦及(21±10)%犤P<0.01vs(114±19)%犦;同时,靶细胞出现磷脂酰丝氨酸外翻、细胞固缩、染色质边集、核碎裂,最终解离为大量凋亡小体;经caspase-8抑制剂与拓扑替康联合处理至24、48h时,K562细胞的存活率依然维持在(95±29)%与(87±11)%,后者显著高于单用拓扑替康者犤P<0.05vs(54±15)%犦,且无明确的凋亡小体形成。结论:拓扑异构酶Ⅰ抑制剂拓扑替康对K562细胞具有较强的杀伤活性与诱导凋亡作用     

鼻咽癌放疗前及放疗中细胞凋亡的变化和意义

 目的　探讨鼻咽癌放疗前及放疗中细胞凋亡的变化及其意义。方法　采用TdT酶介导的生物素化dutp缺口末端标记技术(TUNEL),检测35例鼻咽癌患者放疗前及放疗中鼻咽部刷落癌细胞的细胞凋亡率(apoptosis rate,AR)。结果　鼻咽癌放疗前的AR为7.2％±2.4%;放疗量分别为10GY、30GY和60GY时的AR分别为64.3%±21.4%、57.2%±17.3%、16.2%±7.4%,明显高于放疗前(P＜0.01);放疗前的自发性细胞凋亡与放射治疗诱发的细胞凋亡呈正相关。结论　检测鼻咽癌患者刷落癌细胞的细胞凋亡率有助于判断放射敏感性。     

鼻咽癌中自发凋亡与临床放射敏感性的研究

目的探讨鼻咽癌组织中细胞自发凋亡在预测临床放射敏感性中的意义。方法对38例初治、无远处转移、放疗前鼻咽癌患者活检标本,采用TUNEL法检测细胞自发凋亡,临床观测患者放疗过程中鼻咽部肿瘤的消退情况。结果自发凋亡率与鼻咽癌瘤体的消退率呈显著正相关(放疗剂量为40Gy时,γ=0.836;放疗剂量为70Gy时,γ=0.909;P<0.01)。患者性别、年龄及分期与鼻咽癌瘤体的消退率均无相关性(P>0.05)。结论鼻咽癌中细胞自发凋亡率可以作为鼻咽癌临床放射敏感性可能的预测指标。     

Caspase-3在X线诱导的鼻咽癌细胞凋亡中的调控作用

目的探讨X线诱导后鼻咽癌CNE-2细胞凋亡存在形式以及Caspase-3酶活性、mRNA、蛋白的表达及相互之间的关系,拟阐明Caspase-3在X线诱导的鼻咽癌细胞凋亡中的调控及意义。方法用不同剂量X线照射鼻咽癌CNE-2细胞,于不同时间检测细胞形态学及早期细胞凋亡率变化,分别用比色法、Western blot 、RT-PCR检测Caspase-3酶活性、蛋白含量、mRNA,同时设立酶活性抑制剂AC-DEVD-CHO对照组,观察Caspase-3酶活性被阻抑后细胞凋亡及Caspase-3表达的变化。结果（1）X线照射后鼻咽癌CNE-2细胞呈典型的凋亡特征,且早期凋亡率与射线剂量、诱导时间成正比;（2） CNE-2凋亡细胞中Caspase-3酶活性明显增高,用AC-DEVD-CHO抑制Caspase-3活性后细胞的凋亡率减少,且凋亡形态学特征不明显。（3）凋亡细胞中Caspase-3 mRNA表达量未见明显升高,而蛋白在凋亡形成后则完全裂解为17kD的活性Caspase-3,在正常细胞为32kD的pro-Caspase-3。结论X线诱导后CNE-2细胞呈典型的凋亡改变。凋亡细胞中有明显的Caspase-3激活,其Caspase-3的活性增高并非源于其转录的提高,而可能是翻译后酶前体的活化。抑制鼻咽癌Caspase-3酶活性,凋亡的发生可被抑制或是延迟。     

血浆EB病毒DNA数量与鼻咽癌细胞凋亡的相关性分析

目的探讨血浆EBV-DNA数量与鼻咽癌细胞凋亡的关系。方法采用巢式荧光定量PCR,检测鼻咽癌患者血清EBV-DNA的拷贝数,TUNEL法检测鼻咽癌组织中癌细胞凋亡情况,分析EBV-DNA拷贝数与凋亡癌细胞的相关性。结果鼻咽癌患者血浆EBV-DNA检出率为96.4%（27/28）,中位数为1 800 copies/μl（0～22 100 copies/μl）。28例鼻咽癌活检组织中癌细胞平均凋亡指数为30.0±18.0。EBV-DNA拷贝数与鼻咽癌细胞凋亡呈正相关（γ=0.927,P〈0.05）。结论血浆EBV-DNA水平与鼻咽癌细胞凋亡呈正相关,鼻咽癌患者血浆EBV-DNA可能部分来源于凋亡的癌细胞。     

鼻咽癌组织中bcl-2及EB病毒潜伏膜蛋白表达与放射诱发细胞凋亡的关系

目的　探讨鼻咽癌 (NPC)组织bcl 2及EB病毒潜伏膜蛋白 (LMP)表达与放射诱发细胞凋亡的关系。方法　采用免疫组化S P法及TdT酶介导的生物素化dUTP缺口末端标记技术 (TUNEL法 ) ,分别检测 35例NPC组织中bcl 2及EB病毒LMP的表达 ,以及放疗总量为 10Gy时NPC组织的细胞凋亡率 (AR )。结果　NPC组织bcl 2及LMP的表达率分别为 71.4%(2 5 /35 )、45 .7% (16 /35 ) ,AR为 (6 1.3± 11.8) %。放疗后的AR与LMP表达呈正相关 ,与bcl 2的表达呈负相关。结论　LMP有促进NPC放疗后细胞凋亡的生物学作用 ,其作用与bcl 2的表达无关 ;而bcl 2表达阴性者对放射线的敏感较阳性者强。     

康莱特注射液诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的：探讨康莱特注射液诱导人肝癌细胞凋亡的作用。为康莱特注射液治疗肝癌提供理论依据。方法：采用免疫组织化学及透射电镜技术观察康莱特注射液对肝癌细胞凋亡的影响。结果：肝癌细胞经康莱特注射液培养24h后,其凋亡的百分率明显高于对照组和空白组,有显著性差异（P＜0．05）,且组织细胞凋亡在50％以上者占44．12％（15／34）,而对照组及空白组无1例凋亡超过50％;电镜相可见较为典型的细胞凋亡的形态学变化,细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,凋亡小体形成等。结论：康莱特注射液能诱导肝癌细胞发生凋亡;诱导细胞凋亡可是康莱特注射液治疗作用的重要机制。     

Induction of Apoptosis in Hepatocellular Carcinoma Cell Lines by Emodin

Previous experiments have shown that emodin is highly active in suppressing the proliferation of several tumor cell lines. However, it is not clear that emodin can induce growth inhibition of hepatoma cells. We have found that emodin induces apoptotic responses in the human hepatocellular carcinoma cell lines (HCC) Mahlavu, PLC/PRF/5 and HepG2. The addition of emodin to these three cell lines led to inhibition of growth in a time-and dose-dependent manner. Emodin generated reactive oxygen species (ROS) in these cells which brought about a reduction of the intracellular mitochondrial transmembrane potential (Δ Ψ _m), followed by the activation of caspase–9 and caspase–3, leading to DNA fragmentation and apoptosis. Our findings demonstrate that ROS and the resulting oxidative stress play a pivotal role in apoptosis. Preincubation of hepatoma cell lines with the hydrogen peroxide-scavenging enzyme, catalase (CAT) and cyclosporin A (CsA), partially inhibited apoptosis. These results demonstrate that enhancement of generation of ROS, Δ Ψ _mdisruption and caspase activation may be involved in the apoptotic pathway induced by emodin.     

分割放疗对鼻咽癌组织细胞增殖凋亡的影响

目的：探讨常规分割放疗和超分割放疗对鼻咽癌组织细胞增殖凋亡的影响。方法：采用ＴｄＴ酶介导的生物素化ｄｕｔｐ缺口末端标记技术（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学Ｓ－Ｐ法,分别检测６０例鼻咽癌患者在放疗第２周和第４周时细胞凋亡率（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅ,ＡＲ）和增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃｅｌｌ ｎｈｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ,ＰＣＮＡ）的表达。结果：常规分割放疗组放疗第４周后的ＡＲ     

节拍器化疗对鼻咽癌CNE-1细胞周期和凋亡的影响

目的探讨顺铂节拍器化疗对人鼻咽癌细胞CNE-1细胞周期和细胞凋亡的影响。方法采用MTT方法,检测顺铂对鼻咽癌细胞株CNE-1的半抑制浓度（IC50）,相当于临床中采用6 mg/m^2顺铂小剂量连续化疗的血浆浓度。以低于此浓度的0.10μg/ml作为顺铂节拍器体外化疗参考剂量,采用流式细胞术检测0.10μg/ml顺铂连续作用12 h和96 h细胞周期和细胞凋亡的变化情况。结果MTT法检测顺铂半抑制浓度IC50为0.19μg/ml,0.10μg/ml顺铂作用12 h后检测细胞周期变化,与对照组比较无显著变化;而作用96 h后与对照组相比进入G2/M期细胞比例显著增多,两者差异有统计学意义（P〈0.05）,但作用12 h和96 h后均未检测到明显细胞凋亡现象。结论采用小剂量顺铂作用足够长时间,可以诱导鼻咽癌CNE-1细胞周期发生变化,但是并不能诱导细胞凋亡。细胞周期同步化于G2/M期,为节拍器化疗与放疗的联用提供了可能。     

姜黄素对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及 凋亡的影响

 目的探讨姜黄素对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及凋亡的影响及其相关的分子机制。方法体外培养的 CNE-2Z细胞经不同剂量姜黄素处理后,用MTT法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡 率的改变,Western blot检测姜黄素处理后相关蛋白Bcl-2、Bax表达水平的变化。结果姜黄素对CNE-2Z细 胞的生长和增殖都具有一定程度的抑制作用,阻断细胞于S期和G2/M期。姜黄素处理后CNE-2Z细胞凋亡抑 制基因Bcl-2蛋白表达减少,同时促凋亡基因Bax蛋白表达增加。 结论姜黄素可抑制CNE-2Z细胞增殖并促进 其凋亡。