IL-24对CIK细胞体内杀伤肿瘤细胞活性的影响

目的 研究IL-24对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体内杀伤肿瘤细胞活性的影响。方法 (1)从健康人外周血中提取单个核细胞,第一天加入IFN-γ(1 000 IU/mL),第二天加入IL-1(100 IU/mL)、CD3mAb(50 ng/mL)、IL-2(300 IU/mL)诱导CIK细胞,另一组与IL-1、CD3mAb、IL-2同时加入IL-24(1 000 IU/mL);(2)建立HepG₂肿瘤细胞株荷瘤小鼠皮下移植瘤模型,分为五组,每三天分别测量肿瘤大小。结果 IL-24诱导CIK细胞治疗组荷瘤小鼠实体瘤体积小于其它组(P＜0.05)。结论 在CIK细胞诱导过程中加入IL-24能明显增强其体内的抗肿瘤活性,对临床上把CIK细胞用于生物治疗有一定的指导意义。     

CD3和CD28单克隆抗体联合作用对CIK细胞及其亚群增殖及功能的影响

目的:探讨CD3和CD28单克隆抗体联合作用对细胞因子诱导的杀伤(cytokine-indueed killer,CIK)细胞及其亚群增殖及功能的影响.方法:采集2014年6月至2015年6月在郑州大学第一附属医院接受生物细胞治疗的20例肿瘤患者(肾癌6例,肺癌5例,肝癌、乳腺癌和恶性黑素瘤各2例,胆囊癌、淋巴瘤和卵巢癌各1例)的外周血,每例外周血均分为4组(对照组,单用CD3单抗组,单用CD28单抗组,CD3和CD28单抗联合作用组)进行CIK细胞的诱导培养.用CFSE染色检测CIK细胞的增殖能力;ELISA检测CIK细胞分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的水平;磁珠分选CIK细胞亚群CD4+、CD8+和CD56+细胞,然后用ELISA检测对CIK细胞亚群分泌IFN-γ、TNF-α和IL-2能力的影响.结果:CD3/CD28单抗联合作用(PI =59.35)对CIK细胞的增殖能力的影响与单独使用CD3单抗(PI =64.4)相比效果并不明显,但是可以刺激CIK细胞分泌较高水平的IFN-γ和TNF-α[IFN-γ:(384.6 ±263.1)vs(201.5 ±271.5) pg/ml,P=0.0361;TNF-α:(4.795±1.251) vs(2.835±0.443) pg/ml,P=0.0265];进一步分析发现,两单抗的联合作用可增强亚群细胞CD8+分泌IFN-γ、CD56+分泌IL-2和TNF-α的活性,从而起到对淋巴细胞功能的增强作用.结论:CD3与CD28单抗联合作用不能增强CIK的增殖能力,但可以在一定程度上增强CIK细胞的功能,在肿瘤的细胞免疫治疗应用中具有一定的潜力.     

人肺癌细胞NHE—1基因片段的克隆及其反义表达载体的构建

目的:动态观察CIK(cytokine induced killer)细胞的体外增殖,体外的细胞毒活性,及通过动物实验研究其体内的抗肿瘤作用.方法:通过提取健康供血者的PBMC,第0天加入γ-IFN,第1天加入IL-2、抗-CD3单抗和IL-1培养CIK细胞;在流式细胞仪上做动态培养物的表型分析;与LAK细胞作对比,分别用MIT法测定其体外细胞毒活性及对S180荷瘤鼠的体内抗肿瘤作用.结果:CIK细胞在培养2周后获得大量增殖,表型分析表明,CIK细胞属异质性细胞群,在培养的过程中,群体的CD3~ CD56~ 细胞大量扩增达1000多倍,是CIK细胞的主要效应细胞;实验证明,CIK细胞的体外细胞毒活性及对S180荷瘤鼠的体内抗肿瘤作用均强于LAK细胞;其较强的体内抗癌活性可能与荷瘤鼠主体内T细胞活化有关.结论:CIK细胞是一种强于LAK细胞的、新型、高效、具有广谱杀瘤活力的免疫活性细胞.     

多种细胞因子诱导的杀伤细胞体外扩增及对骨肉瘤细胞杀伤活性的研究

目的探讨不同人群来源的多种细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine—induced killer cells,CIK）细胞增殖及细胞毒活性的作用,为CIK细胞在骨肉瘤中的过继免疫治疗提供实验依据。方法通过向健康人及骨肉瘤患者各10名男性的外周血单核细胞（PBMC）中加入IL-2、IFN-γ、IL-1及抗CD3McAb,诱导出CIK细胞,用光镜、倒置显微镜观察细胞形态,细胞记数板法计数细胞,四甲基偶氮哇盐（MAW）法检测收获细胞对相应骨肉瘤细胞的细胞毒作用。结果二组均能成功诱导出CIK细胞,其中健康人组体外增殖能力、细胞毒作用均优于骨肉瘤患者组,各组CIK细胞随效靶浓度比的递增其杀瘤活性相应增加（P〈0．05）,二组CIK细胞对骨肉瘤细胞48h杀伤率明显高于24h（P〈0．05）。结论CIK细胞的体外增殖力及对骨肉瘤细胞的杀伤活性与机体状态有关,CIK细胞对骨肉瘤细胞杀伤活性存在量效及时效关系。     

健康人和胃癌患者组织中CIK细胞抗肿瘤作用的观察

目的:探讨健康人和胃癌患者细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对原代癌细胞的体外抗肿瘤作用的差异,进一步了解CIK细胞的抗肿瘤作用。方法:分离健康人和胃癌患者自身的外周血单个核细胞,分别加入鼠抗人CD3 McAb、基因重组人IL-1α、IFN-γ、IL-2,经体外培养诱导为CIK细胞;手术留取的新鲜胃癌组织用机械研磨法分离成单细胞悬液;用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测2种CIK细胞对胃癌细胞的杀伤活性。结果:健康人的CIK细胞较胃癌患者自身的CIK细胞的体外增殖力强,第1天表达CD3+/CD56+的细胞健康人占(1.064±0.22)%,癌患者占(1.031±0.13)%;而经细胞因子刺激后的第7天健康人占(28.66±2.00)%,癌患者占(17.63±2.22)%;14 d后分别占(57.14±1.96)%和(48.53±2.19)%(P<0.05);其杀伤肿瘤的能力也远远高于患者自身的杀伤能力。结论:健康人和胃癌患者的CIK细胞对原代癌细胞都有细胞毒的作用,健康人的CIK细胞无论增殖能力和细胞毒的活性都远高于肿瘤患者自身的CIK细胞。     

顺铂预处理对CIK杀伤肺癌细胞的影响

目的探讨顺铂（DDP）预处理对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）杀伤活性的影响。方法采用CFSE/PI 双标法检测DDP预处理不同浓度、不同时间及预处理前后不同效靶比,CIK对肺癌细胞的杀伤活性。结果经IFN-γ,CD3单抗,IL-2诱导后20 d,获得典型的CIK细胞做为效应细胞。随着DDP预处理浓度的增加,CIK细胞的杀伤活性随之增强,随着DDP预处理时间的延长,CIK细胞的杀伤活性亦随之增强。在DDP预处理浓度25 ng/ml,预处理时间18 h的条件下,DDP对靶细胞并无明显影响,但联合CIK后,随着效靶比的增高,CIK细胞杀伤肿瘤细胞的活性明显增强。结论顺铂预处理肺癌细胞后,提高了CIK细胞的杀伤活性,对CIK细胞的临床应用具有借鉴意义。     

长期冷冻保存的外周血干细胞采集物形成CIK的能力及其生物学活性的研究

目的:观察是否能从长期深低温冷冻保存的外周血干细胞采集物(PBSC)大量诱导出具有细胞毒活性的CIK细胞。方法:10例液氮中保存3~6年的PBSC标本作为实验组,7例新鲜的PBSC标本作为对照组。PBSC标本去除红细胞后用IFN-γ、CD3单抗、IL-2联合诱导CIK细胞。14天后收获细胞,检测活力、扩增倍数。流式细胞学检测CIK细胞免疫表型,MTT法检测其细胞毒活性。结果:实验组和对照组培养后CIK细胞分别扩增了41·8倍和22·8倍,活化后CD8 T细胞比例升高(P<0·05),但两组的NKT细胞(CD3 CD16/56 T细胞)纯度活化后并没有升高。两组CIK细胞对K562细胞株的杀伤作用无显著性差异。结论:从长期冷冻保存的外周血干细胞采集物中可以诱导出具有细胞毒活性的CIK细胞。     

体外CK细胞分泌细胞因子水平动态观察

目的:探讨CIK细胞在培养诱导过程中分泌的细胞因子水平。方法:Ficoll分离人脐血获得单个核细胞,体外经IL-1、IL-2、IFN-γ、OKT3诱导分化为CIK细胞,流式细胞仪鉴定其表型及细胞增殖情况,ELISA检测其分泌的细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α水平。结果:CIK的主要效应细胞CD3 CD5 6细胞大量增殖,其相对百分率增长147倍(从0·21%到31%),绝对数增殖倍数为678·7倍,增殖高峰期在第12天。CIK细胞能分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α,从第4天开始稳定分泌,分泌IL-2的高峰期在第12天,而IFN-γ、TNF-α分泌高峰在第17天。结论:CIK细胞能分泌多种细胞因子,发挥免疫调节作用。     

体外CIK细胞分泌细胞因子水平动态观察

目的：探讨CIK细胞在培养诱导过程中分泌的细胞因子水平。方法：Ficoll分离人脐血获得单个核细胞,体外经IL-1、IL-2、IFN-γ、OKT3诱导分化为CIK细胞,流式细胞仪鉴定其表型及细胞增殖情况,ELISA检测其分泌的细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF—α水平。结果：CIK的主要效应细胞CD;CD56细胞大量增殖,其相对百分率增长147倍（从0．21％到31％）,绝对数增殖倍数为678．7倍,增殖高峰期在第12天。CIK细胞能分泌IL-2、IFN-γ、TNF—α,从第4天开始稳定分泌,分泌IL-2的高峰期在第12天,而IFN-γ、TNF—α分泌高峰在第17天。结论：CIK细胞能分泌多种细胞因子,发挥免疫调节作用。     

脐血CIK细胞的体外增生及其抗肿瘤效应

 【摘要】　目的　研究脐血CIK细胞体外增生活性及对肿瘤细胞的杀伤活性，为CIK细胞在肿瘤过继免疫治疗中的应用提供实验依据。方法　脐血经密度梯度离心获得单个核细胞，以CD3单抗、重组人白细胞介素-2（rhIL-2）、重组人白细胞介素-1（rhIL-1）和重组人干扰素-γ（rhIFN-γ）为诱导剂制备多种细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）。并设只加IL-2诱导成的LAK细胞和未加细胞因子的脐血单个核细胞（CBMNC）作为对照。培养前后分别用显微镜观察细胞形态，流式细胞术测定细胞表型的改变，锥虫蓝拒染法测定细胞增生水平，四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定对肺癌细胞的杀伤活性。结果　实验发现，通过细胞因子的联合，可大量诱导出高活性的CIK细胞，CIK细胞在培养的第5天开始增生，第14天达到高峰，增生的细胞表型以CD+3 CD+56细胞为主。而LAK细胞的增生高峰出现在第7天，随后增生不明显；CBMNC表型无明显变化，增生不明显。CIK细胞针对肿瘤细胞的体外杀伤活性高于LAK细胞和CBMNC。结论　在体外细胞因子的联合作用下脐血能成功地诱导出大量的CIK细胞。脐血CIK细胞体外扩增快，杀伤活性强，对肿瘤细胞的作用优于传统的LAK细胞，为肿瘤的过继性免疫治疗提供了一个新的方向。     

In vitro activation of cyclophosphamide for an in vitro chemosensitivity assay

The problem of activation of cyclophosphamide (CY) for an in vitro chemosensitivity assay was studied using the B16 melanoma. The efficacy of the S9 hepatic microsomal fraction in vitro was compared with activation by passage of drug in vivo. The effect of CY was assayed by inhibition of tritiated thymidine (³HdThd) uptake by B16 tumor cells in vitro, and by its effect in single dose in vivo on the life span of syngeneic C57BL/6 mice injected with B16 tumor cells. In vivo activation of CY that was achieved by injecting 20 mg of CY intraperitoneally (i.p.) into mice and obtaining plasma 20 minutes later was more rapid and more reproducible, while in vitro activation provided a more potent preparation and a better quantitative correlation with the in vivo effect of CY. The activation activity of different preparations of S9 microsomal fractions was found to be directly related to the activity of aminopyrine demethylase, a mixed function oxidase enzyme, in the S9 fraction, rather than to total protein concentration. The S9-activated drug required 2 1/2 to 3 hours to achieve maximum inhibition of subsequent tumor cell tritiated thymidine (³HdThd) incorporation compared with 20 minutes to achieve maximum inhibition by in vivo activated drug. We conclude that rapid qualitative screening for effectiveness of CY may best be done with in vivo activated drug, whereas quantitative prediction of effective concentration appears to be best achieved with drug activated in vitro by the hepatic S9 fraction.     

In vitro susceptibility-testing in Aspergillus species

Aspergillus species are the most common causes of invasive mould infections in immunocompromised patients. The introduction of new antifungal agents and recent reports of resistance emerging during treatment of Aspergillus infections have highlighted the need for in vitro susceptibility-testing. Various testing procedures have been proposed, including macrodilution and microdilution, agar diffusion, disc diffusion and Etest. At present, one of the most widely used assays is the M38-A reference method for filamentous fungi, published by the Clinical Laboratory Standard Institute and the Etest. Recently, the European Committee on Antimicrobial Susceptibility-testing (EUCAST) has charged its Antifungal Susceptibility-testing Subcommittee (AFST-EUCAST) with the preparation of new guidelines for in vitro susceptibility-testing of antifungals against Aspergillus spp. (EUCAST-AFST-ASPERGILLUS) defining breakpoints. This paper reviews the available methods for antifungal susceptibility-testing in Aspergillus spp. as well as the scant data regarding the clinical implications of in vitro testing.     

外源性TGFBI抑制乳腺癌细胞生长的体内外实验

目的 研究转化生长因子β诱导基因 (transforming growth factor-β induced gene, TGFBI) 是否能抑制人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)的体内外增生。方法 将外源性TGFBI稳定转染到人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)中,测定细胞增殖率、细胞周期、软琼脂克隆形成率及P21、P53蛋白表达变化,检测乳腺癌细胞的致瘤性。结果 外源性TGFBI在人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)中能够稳定地高表达;外源性TGFBI可以明显地抑制乳腺癌细胞因血清生长因子刺激的增生;与转染空质粒的对照组细胞V23101比较,外源性TGFBI相对软琼脂克隆形成数减少了90.89%; TGFBI可以使人乳腺癌细胞阻滞在G1期,延缓其进入S期的时间。外源性TGFBI可以延长裸鼠肿瘤发生的潜伏期,并降低肿瘤发生率。结论 TGFBI能够抑制人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)的体内外增生。     

肿瘤体外3D 模型的研究进展

肿瘤模型是肿瘤研究和抗癌治疗药物筛选所必需的方法。破译肿瘤发生发展过程的机制需要精确的模型才能满足其复杂性。随着科学技术的发展，肿瘤体外3D 模型的构建取得了突破，使我们能更好地研究肿瘤。本文就3D 模型在肿瘤研究中的优越性、构建方法及最新的研究进展做一综述。     

蛇床子素的提取及其体外抗肿瘤活性的研究进展

蛇床子素是天然的香豆素类化合物,可以从多种中药中提取分离.近年来,国内外研究发现蛇床子素对多种肿瘤细胞具有显著的抑制作用.本文综述蛇床子素提取工艺及其体外抗肿瘤活性的研究进展,为进一步进行蛇床子素体内抗肿瘤活性研究及其应用于临床提供参考.     

体内外侵袭模型系统在癌细胞侵袭机制研究中的应用

本文总结我组近10年中建立了两个癌细胞侵袭模型系统,即体内和体外共13个侵袭模型。我组已应用到癌细胞侵袭过程形态特征,定量研究,侵袭和转移之间关系的研究及不同恶性瘤细胞和相同癌细胞不同部位移植其侵袭能力的比较研究。实验证明这些侵袭模型可运用到不同侵袭研究目的。为今后癌细胞侵袭和转移的研究提供了有用的工具及方法。     

恶性畸胎瘤细胞体外诱导分化的研究进展

恶性畸胎瘤是一种常见的恶性实体瘤，多见于小儿，目前多种疗法均难以彻底治愈肿瘤。近年研究表明，采用诱导分化治疗可抑制恶性畸胎瘤的生长并促进其恶性程度的转化，该法有可能成为提高恶性畸胎瘤疗效的一种辅助治疗手段，具有良好的临床应用前景。本文就恶性畸胎瘤的来源、分化的细胞类型及诱导分化的机理进行了综述。     

选择性环氧化酶-2抑制剂对卵巢癌细胞抑制作用的体内体外研究

目的:研究选择性环氧化酶-2抑制剂美洛昔康在体内体外对卵巢癌生长侵袭的抑制作用。方法:使用2种卵巢癌细胞株,研究不同浓度的美洛昔康对于卵巢癌细胞增殖的抑制作用。利用移植卵巢癌细胞株小鼠模型,研究美洛昔康对小鼠背部皮下移植瘤生长以及肿瘤中VEGF表达、微血管密度以及细胞凋亡的影响,并将之与顺铂的作用相比较。结果:在体外实验中,美洛昔康对2种卵巢癌细胞的增殖均有抑制作用,且呈剂量依赖性。体内实验证明美洛昔康明显抑制小鼠皮下移植瘤的生长,其抑制率为30.79%（P＜ 0.0001）。各组肿瘤组织中VEGF的表达经半定量测定分别为:每高倍视野对照组5.17±0.52、、顺铂组4.32±0.73及美洛昔康组4.81±0.58。与对照组相比,美洛昔康饲养的小鼠肿瘤中VEGF的表达受到明显抑制（P＜0.0001）并伴随微血管密度的明显减低。TUNEL法对肿瘤组织中凋亡细胞计数,结果分别为:对照组12.8±1.3、顺铂组11.5±1.8及美洛昔康组23.3±2.7。与对照组比较,美洛昔康饲养的小鼠肿瘤中,细胞凋亡的数量明显增多（P＜0.001）。美洛昔康的抗肿瘤效果在某些方面优于顺铂。结论:美洛昔康在体内体外实验中表现出抗卵巢肿瘤生长和侵袭的作用。选择性环氧化酶-2抑制剂或许可以作为潜在的新型抗卵巢癌药物应用于临床。     

细胞因子对造血干/祖细胞在体外扩增作用的研究进展

造血干／祖细胞为一类具有自我更新和潜在的重建造血细胞第能力的细胞。ＣＤ３４＾＋造血祖细胞具有良好的体外扩无反应,来自于骨髓（ＢＭ）,动员外周血及脐带血的ＣＤ３４＾＋细胞在干细胞因子（ＳＣＦ）、白细胞介素（ＩＬ）－２、３、４、６、７、９、１０、粒单集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、粒系集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、促红细胞生成素（ＥＰＯ）、ＰＩＸ３２１等细胞因子的没组合刺激下,经８－１４ｄ即可扩增细胞总数     

一种稳定的人卵母细胞体外培养成熟技术

背景与目的：建立一种稳定的人卵母细胞体外培养成熟技术。材料与方法：取术后部分卵巢组织,穿刺卵泡获得未成熟卵母细胞,在含激素的培养基中培养24～36 h。结果：经培养的人卵母细胞合符成熟的判断标准：①含有第一极体;②胞浆匀称,色浅,颗粒均匀。结论：该方法稳定,提示未成熟人卵母细胞经体外培养成熟在人类辅助生殖领域具有广泛的应用前景。