胶质瘤中膜型基质金属蛋白酶1mRNA水平表达

目的 探讨胶质瘤恶性程度和膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)mRNA表达水平的关系,为胶质瘤的诊断、治疗及预后等提供参考.方法 分别采用实时荧光定量逆转录PCR法(RT-PCR)和半定量RT-PCR法检测34例胶质瘤和7例正常脑组织中MT1-MMPmRNA的表达水平.结果 实时荧光定量RT-PCR法检测正常脑组织和Ⅱ级(低级别)、Ⅲ级、Ⅳ级、高级别(Ⅲ、Ⅳ级)胶质瘤的△△Ct值分别为0.834±0.517,4.063±2.309,6.376±4.023,7.653±4.196和7.072±4.072.半定量RT-PCR法测定结果显示,正常脑组织和Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级、高级别胶质瘤的相对灰度值分别为0.799±0.156,1.142±0.158,1.538±0.482,1.652±0.376和1.600±0.421.正常脑组织和Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤之间,Ⅱ、Ⅳ级胶质瘤之间,正常脑组织和低、高级别胶质瘤之间,低、高级别胶质瘤之间MT1-MMP基因mRNA表达水平均有显著性差异.结论 胶质瘤中存在MT1-MMP基因mRNA高水平的表达,随着肿瘤恶性程度的增加,MT1-MMP基因mRNA的表达水平增高.     

硅橡胶中空纤维膜的应用

1.前言:硅橡胶是聚甲基聚硅氧烷和一定比例的二氧化硅配置成的橡胶材料,二氧化硅的配比用以调节产品的强度。,与聚硅氧烷的结合比较通常的C-C和C-O结合更稳定,而且具有优良的耐热性,耐水性,耐药性,耐气候变化,绝     

环氧合酶-2在星形细胞肿瘤组织中的表达及临床意义

目的探讨COX-2的表达与星形细胞肿瘤发生、发展的关系。方法应用免疫组化技术和RT-PCR技术检测各级别星形细胞肿瘤组织及非肿瘤组织中COX-2蛋白和mRNA的表达水平。结果COX-2蛋白在各组中的表达强度(IODA值)分别为:非肿瘤组织(2.19±0.88),肿瘤组织(6.38±3.68);COX-2mRNA在各组中的表达阳性率分别为:非肿瘤组织(33.3%),肿瘤组织(83.3%);COX-2mRNA的相对含量分别为:非肿瘤组织(43.49±19.73),肿瘤组织(119.67±46.56);COX-2在肿瘤组织中的表达显著高于其在非肿瘤组织中的表达(P<0.05)。结论COX-2的过表达与星形细胞肿瘤的发生、发展关系密切,是引起肿瘤细胞恶性表型的相关基因之一;毛细胞型星形细胞瘤与弥漫性浸润性星形细胞肿瘤的遗传基础不同,是一种在生物学和形态学上所发生的基因改变不同于其它胶质瘤的星形细胞肿瘤;COX-2除参与肿瘤形成、炎症的发生等病理过程外,在人体器官发育及正常生理功能的维持过程中也起到比预期更为复杂的作用。     

兔椎间盘纤维环细胞单层和立体培养条件下细胞表型的比较

目的 观察单层培养和藻酸盐立体培养对兔椎间盘纤维环细胞基因表达的影响.方法 10只新西兰大白兔腰椎椎间盘纤维环细胞经体外单层培养扩增后取第一代细胞分别同时行单层培养和藻酸盐立体培养1周,通过实时RT-PCR检测细胞Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因不同的表达情况.结果 在相差显微镜下,单层培养的椎间盘纤维环细胞呈贴壁生长的梭形或多角形细胞,其Ⅰ型胶原基因表达最高,Ⅱ型胶原基因表达其次,蛋白聚糖基因表达最低,符合成纤维细胞的细胞表型.而在藻酸盐凝胶珠内,同样的纤维环细胞呈圆形,被一层藻酸盐凝胶膜囿于凝胶珠内,其Ⅰ型胶原,Ⅱ型胶原基因表达明显下降,而蛋白聚糖基因明显升高,成为该培养条件下纤维环细胞表达最高的基因.结论 藻酸盐立体培养对兔椎间盘纤维环细胞维持软骨样细胞基因表型具有一定作用.     

MMP-9mRNA在食管鳞状细胞癌中的表达

目的探讨MMP-9mRNA在食管鳞状细胞癌及癌旁正常组织中的表达是否存在差异。方法应用RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应法)检测MMP-9mRNA在100例食管鳞状细胞癌组织及癌旁组织中的表达。结果 MMP-9mRNA在癌组织中的表达率为48.0%(48/100),MMP-9mRNA在癌旁组织中的表达率为16.0%(16/100),统计学分析差异有统计学意义(χ2=23.529,P=0.000);MMP-9mRNA的表达与肿瘤浸润深度有关(χ2=4.488,P=0.034),与肿瘤淋巴结转移无关(χ2=0.617,P=0.432),与患者性别无关(χ2=2.519,P=0.113),与患者年龄无关(χ2=3.107,P=0.078),与肿瘤分化程度无关(χ2=2.091,P=0.148)。结论 MMP-9可能在食管鳞状细胞癌的肿瘤产生及肿瘤进展方面起了促进作用,但在食管鳞状细胞癌淋巴结转移转移方面可能不发挥关键作用。     

聚砜膜空心纤维透析器细胞毒性研究

目的应用聚砜膜空心纤维透析器浸提液配制的细胞培养液培养小鼠成纤维细胞L929(4×104/ml),观察其对L929细胞生长的影响。方法细胞计数法和WST-1法。结果和对照组相比,两种试验方法实验组的细胞均生长良好,细胞增殖度均大于75%,为1级反应。结论根据国家标准进行评价,该聚砜膜空心纤维透析器对L929细胞形态、生长和增殖没有影响,无细胞毒性作用,具有良好的生物相容性,符合生物材料应用要求。     

药物干预对糖尿病大鼠血管环氧合酶-2表达的影响

目的 观察阿司匹林、泼尼松及培哚普利(商品名为雅施达)对糖尿病(DM)大鼠模型血管环氧合酶(COX)-2 mRNA表达的影响.方法 25只Sprague-Dawley大鼠,随机分为为正常对照组、DM组、阿司匹林组、泼尼松组和培哚普利组,用药组的用药量均为1 mg·kg-1·d-1.10周后,采用逆转录-聚合酶链反应(PCR)及实时-PCR方法比较各组大鼠血管COX-2 mRNA表达的变化情况.结果 逆转录-PCR扩增COX-2mRNA的拷贝,在期待的228 bp位置,各组均出现COX-2 DNA条带,DM组的表达最强,随后依次是培哚普利组、阿司匹林组和泼尼松组.正常对照组的表达最弱.实时-PCR结果显示,正常对照组的COX-2 mRNA相对表达量为0.29±0.02,显著低于DM大鼠各组(P值分别<0.01和0.05).DM大鼠各组中,DM组的COX-2mRNA相对表达量为0.83±0.02,显著高于培哚普利组的0.59±0.02、阿司匹林组的0.56±0.13和泼尼松组的0.38±0.06(P值均<0.01),培哚普利组和阿司匹林组又显著高于泼尼松组(P值均<0.05).结论 COX-2mRNA的活性变化可作为观测DM血管炎症反应程度的新指标,抑制COX-2成为抑制血管炎症反应的新途径.泼尼松、阿司匹林和培哚普利均能减轻DM血管炎症,且泼尼松作用最强.     

家兔腰椎纤维环细胞的培养与鉴定

目的:建立家兔腰椎纤维环细胞体外培养模型并对其进行鉴定,为进一步研究椎间盘退变提供理论依据。方法:用酶消化法得到家兔原代纤维环细胞,再用差速贴壁法及自然消化法得到传代后纯化的细胞,观察纤维环细胞的细胞学特征,MTT法绘制细胞生长曲线,用间接免疫荧光法联合Hoechst核染法、免疫组织化学法分别检测纤维环细胞特征性表达产物Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白,进行细胞鉴定。结果:初贴壁的细胞呈类圆形,很快伸展为短梭形,传代后细胞逐渐伸展为长梭形或多角形,第四代后细胞开始老化;纤维环细胞表达Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白。结论:成功在体外培养出家兔腰椎纤维环细胞,为研究椎间盘退变的发生发展机制提供基础。     

Role of calcium signaling in down-regulation of aggrecan induced by cyclic tensile strain in annulus fibrosus cells

Objective： To study the role of intracellular calcium signal pathway in the down-regulation of aggrecan induced by cyclic tensile strain in the annulus fibrosus cells. Methods： The expression of aggrecan mRNA and core protein were respectively detected with RT-PCR and western blot after the channels transmitting calcium ions were blocked with EGTA, gadolinium and verapamil. Results： EGTA, gadolinium and verapamil partially prevented the effects of cyclic tensile strain on the expression of aggrecan in annulus fibrosus cells. Conclusion： The calcium signaling is involved in the down-regulation of proteoglycan resulting from cyclic tensile strain in the annulus fibrosus cells.     

淫羊藿苷对兔椎间盘纤维环细胞生物学特性的影响

目的:研究淫羊藿苷(ICA)持续给药延缓兔椎间盘纤维环细胞退变的可能性。方法:分离培养兔椎间盘纤维环细胞并传至第1代,调整细胞密度后部分细胞作为P0组铺板后待测;剩余细胞分为空白组(15%FBS培养液培养)与ICA组(含ICA的15%FBS培养液培养,ICA浓度10-5M),该部分细胞持续培养至第3代时检测。通过MTT法检测细胞增殖、荧光定量PCR检测蛋白多糖表达、流式细胞仪检测细胞周期来评价淫羊藿苷对纤维环细胞生物学特性的影响。结果:与空白组比较,其余两组的细胞增殖、蛋白多糖表达、S期细胞比例均明显增高(P0.05)。结论:第3代纤维环细胞已发生退变,淫羊藿苷持续给药可以延缓椎间盘纤维环细胞退变。     

干细胞因子mRNA在原代白血病细胞的表达

目的　观察白血病原代细胞中干细胞因子（ＳＣＦ）ｍＲＮＡ的表达情况并探讨其与预后的关系。方法　以巢式逆转录 多聚酶链反应检测了４９例（两种类型）白血病患者骨髓原代白血病细胞中ＳＣＦ ｍＲＮＡ的表达情况。结果　在１９例急性 淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）中,ＳＣＦ ｍＲＮＡ ５例阳性、１４例阴性;３０例急性髓性白血病（ＡＭＬ）中,２４例Ｍ１～Ｍ４亚型者表达 ＳＣＦ ｍＲＮＡ,４例Ｍ５及２例Ｍ６为阴性。两组间有显著差异（Ｐ<0.05）。在２９例ＳＣＦ阳性者中,８例（２７．６％）属难治性白 血病;在２０例ＳＣＦ阴性者中,１２例（６０．０％）为难治性白血病（Ｐ<０．０５）。结论 ＡＭＬ组的ＳＣＦ表达率显著高于ＡＬＬ;ＳＣＦ 阴性提示患者预后较差,其确切机制有待进一步研究。     

人纤维环细胞与骨髓间充质干细胞Transwell共培养研究

目的探讨人的纤维环（AF）细胞与骨髓间充质干细胞（BMSCs）在Transwell共培养后,对AF细胞的细胞增殖和细胞外基质合成的影响,以及BMSCs是否具有向AF细胞分化的能力。方法分别对5例年龄在40岁以下脊柱手术患者的纤维环组织和骨髓标本进行分离、培养AF细胞和BMSCS,分别吸取第三代的AF细胞和BMSCs,按1 1的细胞比例分别植于Transwell共培养系统中,下室植入BMSCs,上室植入AF细胞。并且建立3个细胞培养组,即BMSCs与AF细胞共培养组（实验组）,BMSCs单独培养组和AF细胞单独培养组作为对照组。培养3周后,运用倒置相差显微镜观察细胞的形态变化;分别用HE染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色和流式细胞仪对两种细胞鉴定;运用荧光定量PCR法检测各细胞培养组蛋白聚糖Aggrecan、Ⅰ型胶原蛋白mRNA及Sox9的表达变化。结果两种细胞在分离培养后经过鉴定确定为AF细胞和BMSCs。在倒置相差显微镜观察下,共培养组中AF细胞和BMSCs在细胞增殖数量和速度上均高于各自的单独培养组;共培养组中AF细胞和BMSCs的蛋白聚糖Aggrecan、Ⅰ型胶原蛋白mRNA及Sox9的表达均较各自的单独培养组高（P〈0.05）。结论通过BMSCs与AF细胞Transwell共培养,BMSCs可以促进AF细胞增值和细胞外基质的合成;同时通过共培养,BMSCs具有向AF细胞分化的可能。     

体外诱导大鼠骨髓间质细胞转化为神经细胞

目的 体外培养骨髓间质细胞，探索大鼠骨髓间质细胞体外诱导及向神经细胞方向分化。方法分离大鼠骨髓间质细胞培养、扩增，检查细胞活力。应用脑神经营养因子（BDNF）、β-巯基乙醇（β-ME）对细胞诱导分化，行大体观察，6h后免疫组织化鉴定神经丝蛋白（NF-200）、神经烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP），并用RT-PCR鉴定NF-200、NSE和GFAP的mRNA表达情况。结果 用BDNF、β-ME单独或者共同诱导3h，骨髓间质细胞形态类似神经细胞，6h后神经细胞标记蛋白和mRNA表达阳性，而且BDNF＋β-ME组诱导率最高。结论 BDNF和β-ME能协同刺激大鼠骨髓间质细胞转化并分化为神经细胞。     

冠心病患者外周血单个核细胞Toll样受体4表达的测定及临床意义

目的:观察Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)在冠心病患者外周血单个核细胞(PBMCs)的表达水平,并探讨其与冠状动脉粥样硬化发生发展的关系.方法:流式细胞术检测50例冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者及40例健康对照者PBMCs TLR4的表达;生化常规测定所有入选者血脂水平;应用TaqMan荧光探针技术建立实时荧光定量RT-PCR方法,在GeneAmp 5700型检测仪上测定了入选对象PBMCs中TLR4 mRNA的含量.结果:PBMCs的阳性率为(29.5±7.9)%,显著高于健康对照组的阳性率[(23.4±7.7)%,P<0.01];冠心病组TLR4 mRNA的平均拷贝数显著高于健康对照组[(5.3±3.8)×106 vs (1.8±1.4)×106, P<0.01];而冠心病血脂正常组和血脂异常组的TLR4阳性率和mRNA平均拷贝数均无明显差异.结论:TLR4主要表达于外周血单个核细胞,在CAD患者中其阳性率升高;CAD患者TLR4 mRNA的含量显著高于健康对照组;TLR4的阳性率和mRNA含量高低与血脂无关;TLR4及其介导的天然免疫应答与动脉粥样硬化的发生发展存在一定的相关性.     

骨桥蛋白mRNA在口腔鳞癌与正常黏膜中的表达及临床意义

目的 探讨骨桥蛋白(OPN)mRNA在口腔鳞状细胞癌(OSCC)及配对正常口腔黏膜组织中的表达及临床意义.方法 用SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法检测30例OSCC患者肿瘤组织及其配对的正常口腔粘膜中OPN mRNA的表达.结果 Real time RT-PCR检测结果表明,OPN mRNA在OSCC和配对正常粘膜的表达水平分别为4.17±0.51和0.97±0.12,上调4.3倍(P<0.001).在30例OSCC标本中,OPN mRNA在高分化鳞癌中的表达为2.16±0.17,中/低分化鳞状细胞癌中的表达为6.80±0.72,下调3.1倍,P<0.05;在颈淋巴结阳性组表达为6.38±0.56,颈淋巴结阴性组为2.89±0.32,上调2.2倍,P<0.05;在临床早期表达为2.34±0.17,临床晚期表达为4.73±0.35,下调2.0倍,P<0.05.结论 在OSCC的癌变过程中OPN基因的表达水平显著上凋,可能是OSCC诊断、治疗及预后判断的一个靶点基因;OPN在OSCC分类诊断中有应用价值.