内源性干细胞修复脑损伤的研究进展

神经干细胞对机体的自我修复起着重要的作用。脑损伤可以促发脑内神经干细胞增殖产生新生的神经元,神经生长类因子可以促进这种新生。并且,脑组织的损伤能够刺激新生神经元向损伤区迁移,迁移到损伤区的这些新生细胞有可能存活并分化为成熟细胞甚至整合进入局部的神经网络,从而帮助修复损伤的脑组织。由于这种反应尚不足以有效修复缺损的神经元,进一步明确脑损伤对内源性神经干细胞的影响将有助于找到合适的治疗措施刺激其增殖、迁移和分化从而有效促进神经功能的恢复。     

神经生长因子和脑源性神经营养因子对神经干细胞迁移的影响

目的:探讨神经生长因子(nervegrowth factor,NGF)与脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)体外实验对神经干细胞迁移的影响.方法:体外应用半固体培养法连续14d观察不同浓度的NGF、BDNF及NGF +BDNF组合诱导神经干细胞迁移的情况.结果:体外条件下不同浓度的神经营养因子的组间和组内比较显示,100μg/L BDNF诱导神经干细胞迁移作用最明显.BDNF+NGF联合组在诱导神经干细胞迁移方面未见协同效应.结论:NGF、BDNF二者皆有诱导神经干细胞迁移的作用,100μ g/L BDNF组诱导迁移作用最明显.     

全反式视黄酸促进胚胎神经干细胞诱导分化的研究

目的本研究观察全反式视黄酸（atRA）对于体外分离培养的胚胎神经干细胞（ENSCs）生长增殖和诱导分化的作用及其可能的分子机制。方法分离培养孕15dSD大鼠（E15 d SD Rattus）海马回ENSCs,采用不同组合成分的神经干细胞培养基培养ENSCs,利用MTF法检测其对于ENSCs存活和增殖的影响;采用不同组合成分的神经细胞诱导分化培养基培养ENSCs,利用细胞免疫荧光染色法鉴定ENSCs及atRA对于其诱导分化的影响。结果MTT实验结果表明,atRA^＋组、atRA^-组和DMSO组均出现ENSCs的增殖效果,而对照组则没有明显的增殖现象,其中atRA^-组最明显,DMSO组次之,atRA^＋组最弱。AtRA^＋组与atRA^-的ENSCs经过诱导分化后产生的神经细胞类型有较明显差异,并且atRA组处理产生的神经元是对照组的3倍左右。结论atRA能够抑制ENSCs的增殖,并且抵消神经生长因子对于ENSCs的促进有丝分裂作用,atRA还可以促进ENSCs定向诱导分化为神经元。     

褪黑素对SD大鼠胚胎中脑神经干细胞增殖和分化的影响

目的：脑内神经发生受多种病理生理因素调节，既往的研究表明褪黑素（Melatonin，MT）具有广泛的神经营养和神经保护作用，本研究观察MT对SD大鼠胚胎中脑神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响。方法：分离培养孕13-14天SD大鼠胚胎的中脑NSCs，用MTS方法测定MT对NSCs增殖的影响；通过RT-PCR、Western blot和免疫荧光方法检测MT对NSCs分化方向的调节作用；RT-PCR和Western blot方法检测NSCs上MT受体及脑源神经营养因子（BDNF）和胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的表达。结果：MT（0．05、0．1和1nM）均可促进NSCs的增殖，与对照组相比具有显著性差异（P〈0．05或P〈O．01）；而且，MT明显促进中脑NSCs分化时多巴胺能神经元标志蛋白酪氨酸羟化酶（TH）表达（P〈O．05），抑制胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达；此外，MT可使NSCs内BDNF和GDNF的表达水平显著提高（P〈0．01）；同时我们还发现MT受体的两个亚型MTl和MT2在中脑NSCs均有表达，提示可能参与了对NSCs的调节作用。结论：本研究发现，MT不仅可以促进中脑NSCs的增殖，还显著提高NSCs向多巴胺能神经元方向的分化，而抑制其向星形胶质细胞的分化，这可能与MT上调BDNF和GDNF的表达有关。以上结果可为MT临床治疗某些老年性神经疾患并改善部分临床症状的作用机理提供线索。     

神经干细胞-神经系统疾病治疗的希望

近年的研究证实成体哺乳动物脑内存在具有增殖能力、自我更新能力和多分化潜能的神经干细胞。神经干细胞移植后能够根据宿主脑内的微环境分化为组织特异性神经细胞；经过基因操作后，神经干细胞还可以表达目的基因产物。为此，本文将近年来神经干细胞在神经系统疾病中的应用现状作一综述。     

首发抑郁症患者血清NGF及NT-3水平的研究

抑郁症是一种常见的危害人类情感及健康的精神疾病,其发病率呈逐年增高的趋势［1］。目前为止,抑郁症的病因及发病机制尚不明确。脑源性神经营养因子、神经生长因子、神经营养素3等都属于神经营养素的蛋白质生长因子家族。神经生长因子（NGF）与神经营养因子3（NT‐3）是由星型胶质细胞合成和分泌的具有维持神经元的存活、损伤修复等生物学作用。     

锂对中枢神经和血液系统的作用（二）

许多学者报道抑郁使得脑内脑源性神经营养因子（BDNF）减少，锂通过增加脑内的BDNF而发挥作用。锂和丙戊酸盐选择性地激活神经元内脑源性神经营养因子促进因子Ⅳ，提高海马内BDNF的水平。锂和匹鲁卡品诱导的癫痫持续状态与大鼠脑BDNF广泛增高有关。锂也能增加大鼠海马内的神经生长因子（NGF），但丙戊酸和安非他命都不改变脑内的NGF。     

Feridex标记胎盘来源的间充质干细胞分化为神经干细胞的实验研究

目的分离胎盘组织来源的间充质干细胞并诱导分化为神经干细胞,以期找到能成功标记神经干细胞的方法。方法将胎盘组织剪碎后消化、培养,加入神经干细胞诱导因子10ng/mL表皮生长因子（EGF）＋10ng/mL重组人碱性成纤维生长因子（bFGF）＋DMEM/F12,并分别添加相应浓度的血清,预诱导3d后加入DMEM/F12＋0.1μmol/L全反式维甲酸（RA）,10ng/mL胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF）＋10ng/mL脑源性神经营养因子（BDNF）进行正式诱导7d。结果诱导10d后用Feridex标记诱导后的细胞,普鲁士蓝染色显示90%以上的干细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒,Nestin染色显示阳性。结论胎盘来源的间充质干细胞能成功诱导为神经干细胞,且Feridex可成功标记诱导后的细胞。     

BMSCs靶向移植联合EPO法对脊髓损伤组织多因子表达水平的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)靶向移植联合促红细胞素(EPO)的综合治疗方法对脊髓损伤的修复效果.方法 采用Western blot法检测对照组、模型组、BMSCs治疗组、EPO治疗组和BMSCs联合EPO治疗组大鼠的神经生长因子(NGF)、神经营养因子(NT-3)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经胶质细胞源性神经营养因子(GD-NF)和睫状神经营养因子(CNTF)的表达情况.结果 BMSCs联合EPO综合治疗较BMSCs、EPO单纯治疗更能提高NGF、BDNF、GDNF和CNTF的表达水平.结论 BMSCs联合EPO综合治疗有利于脊髓损伤的修复,具有良好的应用前景.     

脑源性神经营养因子的研究进展

近年来,科学研究发现神经营养因子是参与调控神经系统多种生理功能的一种蛋白质。其中,脑源性神经营养因子是一种在脑内合成的小分子二聚体蛋白质,对中枢系统神经元的生长、发育、分化、再生和修复具有重要作用。本文对脑源性神经营养因子的结构、功能、疾病相关性及临床应用前景进行了综述。     

bFGF和BDNF对MCAO大鼠海马区神经干细胞原位增殖的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、脑源性神经生长因子（BDNF）对大鼠脑缺血损伤后海马区（SGZ）神经干细胞原住增殖的影响。方法：将Wistar大鼠84只随机分为空白对照组（12只）、bFGF组（24只）、BDNF组（24只）、bFGF＋BD—NF组（24只）。采用线辁法制作局灶性大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。分别于缺血再灌注后3d、7d、14d、28d处死大鼠。免疫组织化学方法动态检测SGZ区BrdU、Nestin的表达。结果：各组SGZ区的BrdU和Nestin阳性细胞均在脑缺血3d后开始增加,7d达到高峰,14d后开始下降,28d降至最低水平;与空白对照组相比,均有统计学意义（P〈0．05）;其中bFGF＋BDNF组Brdu和Nestin阳性细胞数增加更明显。结论：侧脑室注射bFGF、BDNF可促进脑缺血大鼠SGZ区内源性神经干细胞原位增殖;bFGF和EGF联合应用对脑缺血大鼠神经干细胞原位增殖效应有协同作用。     

人源性干细胞分化的神经细胞在药物神经毒性评价中的应用

人源性干细胞可自我更新,且具有多向分化潜能.人多能干细胞可分化为神经元、胶质细胞和类脑器官等,为寻求药物早期筛选和神经毒性临床前评价的新模型提供了可能.目前基于人源性干细胞分化的神经细胞的体外模型已用于药物筛选、有效性和安全性评价以及阐明未知的疾病发生机制,为开展临床试验奠定了良好的基础,并且有助于减少药物临床应用中不...     

抗体封闭膜受体方法在神经干细胞研究中的应用

目的:探讨用抗体封闭神经干细胞膜受体的效果,以建立一种研究神经生长因子或神经营养因子对神经干细胞作用的实验方法。方法:用抗表皮生长因子受体多抗和二抗封闭神经干细胞的表皮生长因子受体。结果:神经干细胞表皮生长因子受体被封闭,并且因失去表皮生长因子刺激而死亡。结论:抗体封闭膜受体的方法在研究神经生长因子或神经营养因子对神经干细胞作用的体外实验中有一定价值。     

人胚神经干细胞分离培养与鉴定方法

目的:建立神经干细胞(NSCs)实验室分离、培养方法,为NSCs移植提供细胞源.方法:取4月龄(±15 天)正常孕妇水囊引产胎儿大脑纹状体区组织分离神经干细胞,培养于含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和B27的无血清培养基;同时利用单细胞克隆技术进行连续传代培养;利用形态学观察和免疫荧光技术检测神经上皮干细胞蛋白Nestin抗原的表达来鉴定神经干细胞.结果:体外培养的干细胞在bFGF和B27培养基中可不断增殖形成细胞球,并出现少量细胞分化.单细胞培养4天即开始分裂,同时伴有个别细胞分化;出现大量神经球一般为15天;分化的细胞在30天开始分解,50天左右基本消失.细胞培养3个月(每月补液1次)仍具有分裂增殖能力.单细胞克隆可连续传代10次,仍具增殖分化能力.液氮冻存6个月的细胞复苏后仍具增殖分化能力.单细胞克隆传代增殖的细胞球经Nestin免疫荧光鉴定,呈阳性结果,证实其胚胎源性.结论:采用bFGF和B27的无血清培养基能促进神经干细胞连续稳定增殖,并有少量分化,细胞体外培养3个月、克隆连续传代10次情况下的细胞仍具有神经干细胞特性.     

人胚神经干细胞分离培养与鉴定方法

目的 :建立神经干细胞 (NSCs)实验室分离、培养方法 ,为NSCs移植提供细胞源。方法 :取 4月龄 (± 15天 )正常孕妇水囊引产胎儿大脑纹状体区组织分离神经干细胞 ,培养于含碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和B2 7的无血清培养基 ;同时利用单细胞克隆技术进行连续传代培养 ;利用形态学观察和免疫荧光技术检测神经上皮干细胞蛋白Nestin抗原的表达来鉴定神经干细胞。结果 :体外培养的干细胞在bFGF和B2 7培养基中可不断增殖形成细胞球 ,并出现少量细胞分化。单细胞培养 4天即开始分裂 ,同时伴有个别细胞分化 ;出现大量神经球一般为 15天 ;分化的细胞在 3 0天开始分解 ,5 0天左右基本消失。细胞培养 3个月 (每月补液 1次 )仍具有分裂增殖能力。单细胞克隆可连续传代 10次 ,仍具增殖分化能力。液氮冻存 6个月的细胞复苏后仍具增殖分化能力。单细胞克隆传代增殖的细胞球经Nestin免疫荧光鉴定 ,呈阳性结果 ,证实其胚胎源性。结论 :采用bFGF和B2 7的无血清培养基能促进神经干细胞连续稳定增殖 ,并有少量分化 ,细胞体外培养 3个月、克隆连续传代 10次情况下的细胞仍具有神经干细胞特性     

知母皂苷及其苷元在中枢神经系统的药理作用

知母为百合科植物知母的干燥根茎,知母皂苷及其苷元在治疗中枢神经系统疾病中发挥重要作用. 知母皂苷及其苷元通过促进脑M受体生成,对神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）的影响,对脑内自由基代谢的影响,对学习记忆的影响等发挥抗衰老作用;同时,知母皂苷及其苷元具有明显抗抑郁作用和抗脑缺血-再灌注损伤的作用.     

针刺治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤机制研究进展

通过查阅、整理国内外有关针刺治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤临床及实验研究的文献资料,发现针刺可通过保护神经细胞组织形态、改善脑血流量、升高中枢单胺类神经递质、调节信号传导通路、抑制细胞凋亡、促进神经营养因子及其受体表达、刺激神经干细胞的增殖和分化,从而发挥神经保护的作用,并指出目前研究中存在的一些问题。     

神经营养因子介导人胚胎干细胞存活

作为多能性群体的人胚胎干细胞（hES），其生长要求在存活、增殖和自我更新信号之间保持平衡。本研究论证了hES细胞能表达介导抗凋亡信号的原肌凝蛋白相关性激酶（TRK）家族的受体。发现3种TRK配体——脑源性神经营养因子、神经营养因子3和4是hES细胞的存活因子。向hES细胞培养物中加入神经营养因子，可使其克隆的存活提高36倍。在含有神经营养因子的培养基中，hES细胞仍然为二倍体并保留了完整的发育潜力。在存在神经营养因子的条件下，hES细胞中的TRK受体被磷酸化；抑制TRK受体将导致hES细胞凋亡。hES细胞中神经营养因子的残留活性受磷脂酰肌醇-3-激酶途径而非分裂索激活的蛋白激酶途径介导。神经营养因子能提高hES细胞的存活能力并且可能有助于对它们的操控，据此可开发高通量筛选模型以鉴别负责hES细胞分化的因子。     

依达拉奉对急性脑梗死患者血清BDNF水平影响及疗效的多中心研究

目的通过多中心研究,探究依达拉奉对急性脑梗死患者血清脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)水平的影响及其治疗效果。方法选取2012年1月~2014年1月,河北工程大学附属医院、邯郸市第一医院、邯郸市中心医院神经内科收治的急性脑梗死患者229例,采用双盲法,将其分为2组。对照组115例,予右旋糖酐常规治疗;实验组114例,予依达拉奉注射液静脉滴注,每天1次,以上治疗均2周为1个疗程。1个疗程结束后,对2组患者血清脑源性神经营养因子(BDNF)水平、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)水平以及神经功能缺损评分(NIHSS)进行比较分析。结果脑源性神经营养因子(BDNF)水平比较:治疗前,2组BDNF比较无统计学差异;治疗后,与对照组BDNF水平比较,实验组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);神经生长因子(NGF)水平比较:治疗前,2组患者NGF比较无统计学意义;治疗后,与对照组比较,实验组NGF水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);神经功能缺损(NIHSS)评分比较:治疗前2组患者NIHSS评分比较无显著性差异;治疗后,与对照组比较,实验组NIHSS评分显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论依达拉奉可有效提高急性脑梗死患者脑源性神经营养因子(BDNF)水平、神经生长因子(NGF)水平,有效改善患者神经功能缺损评分、减轻患者由于脑梗死所导致的各项身体机能障碍,是治疗急性脑梗死的临床有效药物。     

人胚胎神经干细胞体外培养及其增殖与分化的研究

目的 建立神经干细胞分离、培养及分化的鉴定技术，观察神经干细胞增殖、分化的特点。方法 从人胚胎海马区分离神经干细胞，采用无血清培养基，进行体外扩增培养、传代。采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞和分化的神经细胞；利用流式细胞仪和细胞生长曲线检测神经干细胞的增殖能力。结果 从人胚胎脑海马区分离的细胞具有增殖和多向分化潜能，可进行传代培养，获得的细胞团中大部分为nestin表达阳性细胞。贴壁分化后可以出现NSE、GFAP表达阳性的细胞。结论 用上述方法分离培养的细胞能表达nestin蛋白，具有自我更新和增殖能力，并具有向神经元、星形胶质细胞分化的潜能，具备神经干细胞的特征，可用于细胞移植等相关研究。