RhoC与胃癌的相关性研究进展

Rho是具有GTP酶活性的小G蛋白超家族成员,在细胞的信号转导通路中起重要作用,RhoC对肿瘤转移的作用尤为突出,被称为肿瘤侵袭转移的分子开关。胃癌侵袭转移是多基因协调作用的结果,本文就近年来RhoC在胃癌组织中侵袭转移的相关性研究作一综述。     

直肠癌RhoC基因表达与临床病理特点的关系

探讨RhoC基因在直肠癌的发生发展和侵袭转移中的作用 ,笔者观测了 64例直肠癌癌组织的RhoC基因表达水平与直肠癌组织临床病理特点的关系。结果显示 ,浸润超出浆膜层、有淋巴结转移和 /或肝肺转移灶的直肠癌 ,RhoC基因表达均较对照组明显升高 ,差异均有非常显著性(均 P <0 .0 0 1)。提示RhoC基因的高表达与直肠癌浸润转移有关 ,可作为判定直肠癌转移及预后的参考指标。     

RhoC-siRNA表达载体的构建及其对肝癌细胞体外侵袭能力的影响

目的构建RhoC-siRNA表达载体，研究其对肝癌细胞体外侵袭潜能的影响。方法以脂质体转染法稳定转染人SK-Hepl肝癌细胞株，Western印迹鉴定转染细胞中RhoC蛋白表达的抑制情况，观察转染前后细胞黏附、运动及体外侵袭能力的改变。结果酶切及测序证实RhoC—siRNA真核表达载体构建成功。通过Western印迹检测证实，转染RhoC—siRNA表达载体的肝癌细胞中RhoC蛋白表达抑制达60％，其黏附、移动及体外侵袭能力均降低。结论RhoC—siRNA表达载体能有效抑制RhoC在肝癌细胞株SK—Hepl中的表达，同时抑制细胞的侵袭转移潜能，为肝癌的生物学治疗提供新的方法。     

RhoC基因在原发性肝癌中的表达及其意义

目的：探讨原发性肝癌组织及癌旁肝组织中RhoC mRNA的表达及其意义。方法：采用RT－PCR技术分析30例原发性肝癌病人的肝癌组织及癌旁肝组织中RhoC mRNA的表达。结果：肝癌组织中RhoC mRNA光密度相对值明显高于癌旁肝组织（P＜0．01）；有肝内转移灶者其癌组织中RhoC mRNA光密度相对值明显高于无肝内转移灶者（P＜0．05）。结论：RhoC mRNA的表达与原发性肝癌的转移程度可能有关，可望作为估计原发性肝癌转移的参考指标。     

人RhoC基因正、反义真核表达载体的构建及对肿瘤增殖的影响

目的构建人RhoC基因正、反义真核表达载体，研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株增殖的影响。方法应用分子克隆技术，用KpnⅠ和BamHⅠ双限制性内切酶从RhoC基因切下所需目的片段，然后将该片段正、反向定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1／Hyg（＋）上，构建正、反义RhoC cDNA真核表达载体，以脂质体转染人胆管癌QBC939细胞，检测细胞生长曲线。结果经测序鉴定，将正、反义目的片段成功的连接到pcDNA3.1／Hyg（＋）载体上。结果序列测定证实RhoC基因正、反义.真核表达载体成功构建，反义RhoC基因抑制QBC939细胞增殖，正义RhoC基因促进QBC939细胞增殖。结论成功地将RhoC目的片段正、反向插入到pcDNA3．1／Hyg（＋）中，构建了人RhoC正、反义表达真核载体，RhoC基因调控QBC939细胞增殖。     

Ras同源蛋白C和细胞间黏附分子-1在肝细胞癌侵袭转移中的相关作用

高复发转移发生率是影响肝癌预后的主要因素。Ras同源蛋白C(RhoC)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)被认为是与肿瘤转移有关的两个重要分子。我们利用免疫组织化学的方法研究RhoC与ICAM-1在HCC组织中的表达与临床病理特征方面的差异,分析在HCC中的相关程度和意义。     

RhoC基因对肝癌细胞促血管生长因子表达的影响

目的:观察RhoC基因对肝癌HepG2细胞表达促血管生长因子（VEGF，bFGF）的影响。 方法:将pcDNA3.1-RhoC重组质粒和空载体pcDNA3.1转染HepG2细胞，用RT-PCR及免疫组化检测HepG2细胞的RhoC mRNA及RhoC蛋白表达情况;RT-PCR及免疫组化检测HepG2细胞VEGF和bFGFmRNA及蛋白的表达。将转染pcDNA3.1-RhoC重组质粒和空载体pcDNA3.1的HepG2细胞接种裸鼠，观察肿瘤的成瘤率。结果:与转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞相比，转染pcDNA3.1-RhoC重组质粒的细胞表达RhoC mRNA及RhoC 蛋白增强，其表达VEGF和bFGFmRNA及蛋白明显增强（P＜0.01）;重组质粒转染组成瘤率高于空载体组。结论:RhoC表达可促进HepG2细胞表达血管内皮生成因子。RhoC可促进肝癌细胞分泌促血管生长因子，可能是促进肝癌侵袭、转移的机制之一。     

RhoC及MMP-9在原发性肝细胞癌中的表达水平与术后复发关系的研究

目的：探讨RhoC及基质金属蛋白酶-9（metrix metalloproteinjses．MMP-9）蛋白在原发性肝细胞肝癌（以下称肝癌）发生、发展、转移及术后复发过程中的作用。方法：采用免疫组织化学染色检测43例肝癌患者术后癌灶和癌周标本及25例肝硬化、23例正常肝脏标本中两种蛋白的表达情况，分析两种蛋白的表达与肝癌病理特点的关系及两者表达的相关性，采用COX比例风险模型进行肝癌术后复发风险多因素分析。结果：RhoC在肝癌组与癌旁组、肝硬化组、正常肝组及癌旁组与正常肝组表达程度差异有统计学意义（P〈0．05）；MMP-9在肝癌组与癌旁组、肝硬化组、正常肝组表达程度差异有统计学意义（P〈0．05）。RhoC与MMP-9在肝癌癌灶中表达存在相关性，且为正相关（rs’=0．495，P〈0．01）。RhoC阴性组的中位生存时间46个月，阳性组中位生存时间为20个月；MMP-9阴性组的中位生存时间49个月，阳性组的中位生存时间25个月；RhoC及MMP-9都为阴性，中位生存时间56个月；RhoC或MMP-9为阴性，中位生存时间39个月；RhoC及MMP-9都为阳性，中位生存时间19个月。COX比例风险分析模型分析认为：肿瘤侵及门静脉（包括微转移灶）、淋巴结转移、RhoC及MMP-9阳性表达分别为肿瘤术后复发的独立危险因素。结论：RhoC蛋白在肝癌的早期开始起作用，且RhoC蛋白及MMP-9蛋白的异常高表达提示肿瘤恶性程度高，术后复发率高，指导临床术后预防性化学治疗有一定指导意义。     

RhoC基因在肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨RhoC基因与肝细胞癌 (HCC)的发生发展和侵袭转移的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)在半定量水平检测 2 5例HCC及其相对应的癌旁肝组织和 4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中RhoCmRNA的表达 ;同时采用PCR产物单链构象多态性 (PCR SS CP)银染法检测RhoC基因的突变情况。结果本组 2 5例HCC中RhoCmRNA的表达较癌旁肝组织高 ,其光密度比值分别为 1 8± 1 1和 1 0± 0 7,P <0 0 1,差异有显著意义 ;4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中的RhoCmRNA的表达较相对应的肝内肝癌病灶高 ,其光密度比值分别为 3 3± 0 5和 2 0± 0 7,P <0 0 1,差异有显著意义 ;将 2 5例HCC分为RhoC基因过表达组和高表达组后发现 ,过表达组中肝癌细胞分化较差 ,静脉受侵严重 ,且以结节性肝癌居多 (P <0 0 5 ) ;而 2 5例HCC经PCR SSCP银染法分析未发现异常泳动条带。结论RhoC基因与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关 ,且可能是通过表达升高而非突变发挥作用。     

胃癌中RhoC和CD44v6及ICAM-1的表达及其相关性的初步研究

目的探讨RhoC、CD44v6和ICAM-1在胃癌中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学SABC法检测RhoC、CD44v6和ICAM-1在40例胃癌组织的表达情况,结合其临床病理学资料,分析它们之间的相关性。结果RhoC、CD44v6和ICAM-1的表达与肿瘤细胞分化、浸润深度无关(P>0.05),但与淋巴结转移、PTNM分期具有相关性(P<0.05)。RhoC与CD44v6和ICAM-1的表达存在相关性(分别为r=0.355,P=0.006;r=0.354,P=0.003)。当RhoC为阳性,CD44v6和ICAM-1两者之一为阳性时,对预测胃癌淋巴结转移的灵敏性和特异性分别为93.8%和62.5%。结论RhoC、CD44v6和ICAM-1的阳性表达预示胃癌具有较强的侵袭转移能力,可作为预测胃癌转移潜能的生物学指标。联合检验以上3种指标有望成为预测胃癌淋巴结转移的又一种有价值的手段。     

RhoC蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨乳腺癌组织中RhoC蛋白的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测112例乳腺癌、20例癌旁正常组织、15例正常乳腺组织中RhoC蛋白的表达,并对其与临床病理特征的关系进行分析,同时检测乳腺癌组织中CD34的表达,计算微血管密度(MVD),并分析其与RhoC蛋白的相关性.结果 RhoC蛋白在乳腺癌组织...     

RhoC基因真核表达载体的构建及其表达

目的 为探讨RhoC基因的功能以及其对肝癌的侵袭转移的影响提供实验模型。方法 用限制性内切酶酶切RhoC基因，定向克隆到pcDNA3.1上，利用脂质体将重组载体（pcDNA3.1-RhoC)空载体（pcDNA3.1)转染入HEPG2细胞，潮霉素选择培养，RT－PCR及免疫组化鉴定其稳定表达。结果 构建的真核表达载体pcDNA3.1-RhoC在HEPG2细胞中有稳定表达。结论 本实验为深入研究RhoC基因的功能以及其对肝癌的侵袭转移的影响提供了理想的体外实验模型。     

RhoC、KAI1在原发性乳腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨Ras homologous C(RhoC)、KAI1在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化方法,应用HPLAS-1000型彩色图像分析系统,检测45例乳腺良性疾病组织和75例乳腺癌组织中RhoC和KAI1的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系.结果 RhoC蛋白在乳腺良性疾病组织和乳腺癌组织中表达的灰度值分别为(0.07±0.01)、(0.35±0.12),二者之间差异有统计学意义(P＜0.05).RhoC表达与乳腺癌淋巴结转移、TNM分期呈正相关(P＜0.05).KAI1蛋白在乳腺良性疾病组织和乳腺癌组织中表达的灰度值分别为(0.72±0.25)、(0.27±0.13),二者之间差异有统计学意义(P＜0.05).KAI1表达与乳腺癌淋巴结转移、TNM分期呈负相关(P＜0.05).RhoC、KAI1蛋白表达与患者年龄无相关性(P＞0.05).结论 RhoC、KAI1在乳腺癌发生、发展中发挥重要作用,RhoC和KAI1异常表达可能成为判断乳腺癌生物学行为的重要指标.     

RhoC基因高表达对胃癌细胞血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的 探讨RhoC基因对胃癌细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及其意义。方法 常规脂质体转染法将RhoC基因重组质粒转染人胃癌细胞系SGC7901；应用免疫细胞化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(SP)法检测胃癌细胞转染RhoC基因重组质粒前后VEGF、bFGF蛋白表达的变化。结果 转染RhoC基因重组质粒在SGC7901细胞中有稳定表达。转染RhoC基因重组质粒SGC7901表达VEGF、bFGF明显强于对照组。结论 体外条件下RhoC基因可促进胃癌细胞VEGF、bFGF的表达。这可能是RhoC基因促进胃癌细胞侵袭、转移的分子基础。RhoC基因的表达可望作为估计胃癌转移的参考指标。     

RhoA、RhoC基因在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的 检测RhoA和RhoC mRNA在结直肠癌组织中的表达,并探讨其表达在结直肠癌发生、发展和侵袭转移中的意义.方法 TaqMan探针法进行实时荧光定量聚合酶链反应,检测RhoA和RhoC mRNA在正常黏膜组织、癌旁组织及结直肠癌组织中的相对表达,探讨与临床病理学指标的关系.结果 38例结直肠癌组织中RhoA和RhoC mRNA平均相对表达水平为正常黏膜组织的4.516和3.832倍,差异有统计学意义(P<0.05).RhoA、RhoC mRNA的表达均与有无淋巴结转移、有无肝转移有关(P<0.05).FdaoA mRNA的表达与组织学类型有关,Rhoc mRNA的表达与肠壁浸润深度有关(P<0.05).结论 RhoA和RhoC mRNA的表达在结直肠腺癌组织中明显增高,RhoA和Rhoc与结直肠癌发生、发展和侵袭转移密切相关.     

RhoC-siRNA 对裸鼠结肠癌移植瘤的生长抑制作用

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)载体介导抑制RhoC表达对人结肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 将人结肠癌细胞HT-29接种于裸鼠背部皮下,成功建立裸鼠移植瘤模型;成瘤后将RhoC-siRNA注射入裸鼠移植瘤瘤体,观察RhoC-siRNA对裸鼠移植瘤生长的影响,Western blot检测瘤体中RhoC、基质金属蛋白(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达.结果 RhoC-siRNA对结肠癌裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用,瘤体体积重量明显减轻; RhoC-siRNA治疗后瘤体内VEGF和MMP-2蛋白表达明显下降.结论 通过抑制裸鼠结肠癌移植瘤中RhoC的表达,可以抑制肿瘤的生长并下调VEGF和MMP-2的表达水平.     

microRNA-10b表达变化对人胰腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨microRNA-10b(miR-10b)的表达变化对人胰腺癌细胞ASPC-1生物学行为的影响。方法:胰腺癌细胞ASPC-1细胞株分别以脂质体法转染正义、反义miR-10b真核表达载体和空载体,用荧光显微镜观察转染效率。以未转染的ASPC-1细胞为空白对照,检测各转染组miR-10b和RhoC蛋白表达,并检测各组细胞生长、凋亡及侵袭能力。结果:各组转染48 h后,转染效率达50%~70%;与空白对照组比较,正义miR-10b转染组细胞miR-10b表达和RhoC蛋白表达量明显增加,凋亡率明显降低,生长活性和侵袭能力明显增强(均P<0.05);而反义miR-10b转染组细胞以上检测结果与正义miR-10b转染组细胞呈相反改变(均P<0.05);空载体转染组所有指标与空白对照组间无明显差异(均P>0.05)。结论:上调miR-10b的表达,能促进胰腺癌细胞ASPC-1的生长、侵袭并抑制凋亡,该作用可能与其调控RhoC表达有关。     

RhoC基因转染对人胆管癌QBC 939细胞增殖和侵袭性的影响

目的研究RhoC（ras homolog gene family，member C）基因对胆管癌QBC939细胞株增殖和侵袭能力的影响。方法以脂质体将RhoC cDNA真核表达载体转染人胆管癌QBC939细胞。应用克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化，流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化，Boyden小室侵袭实验检测侵袭能力的变化。结果RhoC基因能促进胆管癌QBC939细胞增殖，流式细胞仪分析结果显示转染后细胞出现G1期细胞减少，侵袭实验显示转染后细胞侵袭能力较转染前有显著加强。结论RhoC基因能够促进胆管癌QBC939细胞株的体外增殖和侵袭能力。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞株RhoC、CD44v6及Ezrin基因表达的影响

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对肝癌HepG2细胞中RhoC、CD44v6和Ezrin表达的影响,探讨As2O3抑制肝癌细胞侵袭、转移的机制.方法 采用RT-PCR法检测As2O3作用后RhoC、CD44v6及Ezrin mRNA表达水平的变化.以Western blot方法检测RhoC基因蛋白表达.结果 0.25mg/L As2O3作用4、6、8d后HepG2细胞RhoC mRNA及蛋白、CD44v6 mRNA表达水平较药物作用前均有不同程度降低(P<0.05),Ezrin mRNA表达水平均无明显变化(P＞0.05).结论 As2O3并非通过单一靶点发挥抗肝癌侵袭转移作用,可能与下调RhoC及CD44v6基因的表达有关.     

乙肝病毒X基因对肝癌细胞表达RhoC的影响

目的：探讨X基因对肝癌细胞表达RhoC基因的影响。方法：用定向克隆的方法构建X基因的真核表达载体pcDNA3.1-X，脂质体转染HEPG2细胞;潮霉素选择培养稳定表达X基因的HEPG2-X细胞;免疫组化鉴定HEPG2-X细胞RhoC蛋白表达。结果：构建的真核表达载体pcDNA3.1-X在HEPG2细胞中有稳定表达，HEPG2-X细胞表达RhoC蛋白增强。结论：体外条件下，X基因可促进肝癌HEPG2细胞RhoC表达增强。这可能与肝癌的侵袭、转移有关。