补骨脂乙素对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用和凋亡诱导作用及其机制

目的：观察补骨脂乙素（IBC）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：将体外培养的Tca8113细胞分为对照组（0 μmol·L^-1）和不同浓度IBC组（10、20、40及80 μmol·L^-1）。通过MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中Akt、p-Akt、Erk、p-Erk、Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平。结果：MTT法检测,随着IBC浓度的增加和作用时间的延长,Tca8113细胞的增殖抑制率逐渐增加,12、24和48h半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（285.13±8.97）、（132.40±7.76）和（58.56±5.93） μmol·L^-1,不同时间点IC₅₀比较差异有统计学意义（P < 0.05）。流式细胞术检测,与对照组（1.69%±0.65%）比较,作用48h后20和40 μmol·L^-1 IBC组细胞凋亡率（分别为8.21%±2.32%和22.45%±1.18%）明显升高（P < 0.05）。Western blotting法检测,与对照组比较,作用48h后20和40 μmol·L^-1 IBC组细胞中Bcl-2、p-Akt和p-Erk表达水平明显降低（P < 0.05）,Bax表达水平明显升高（P < 0.05）;Akt和Erk蛋白表达水平无明显变化（P > 0.05）;与对照组比较,作用48h后40 μmol·L^-1 IBC组Tca8113细胞中Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P < 0.05）。结论：IBC可抑制Tca8113细胞的增殖并诱导细胞凋亡,Akt和Erk通路可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径。     

ERK信号转导通路与PDGF-B对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨血小板源性生长因子(PDGF)和ERK受体阻断剂在PDGF诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖中的作用。方法健康SD大鼠90只,随机分为5组(正常对照组、单纯损伤组、AG组、PD组、AG+PD组),建立大鼠主动脉球囊损伤模型,利用相应的受体阻断剂Tyrphosin-AG1295和PD98059分别或联合阻断PDGF和ERK受体,于术后7、14及21 d 3个时相点取主动脉进行HE染色,观察PDGF和ERK受体阻滞剂对新生内膜增生的影响;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测PDGF-B mRNA和ERK1 mRNA在血管中的表达变化;免疫组化技术检测血管平滑肌细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;观察各组中PDGF和ERK受体对PCNA表达的影响。结果单纯损伤组及各干预组PDGF-B mRNA在各时相点的表达差异无统计学意义(P>0.05);单纯损伤组血管平滑肌细胞PCNA的表达明显增强,各干预组与单纯损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但各干预组间PCNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PDGF和ERK受体阻断剂能降低大鼠动脉平滑肌细胞增殖,ERK信号转导通路可能参与了PDGF诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖。     

ET-1对高血压大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察内皮素-1(ET-1)对高血压大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖的作用。方法将高血压大鼠和正常血压大鼠按加入ET-1浓度的不同各分为6组:10%胎牛血清(对照组);10%胎牛血清+20μmol·L-1 ET-1(20μmol·L-1组);10%胎牛血清+40μmol·L-1 ET-1(40μmol·L-1组);10%胎牛血清+60μmol·L-1 ET-1(60μmol·L-1组);10%胎牛血清+80μmol·L-1 ET-1(80μmol·L-1组)及10%胎牛血清+100μmol·L-1 ET-1(100μmol·L-1组)。使用细胞计数试剂盒计数各组细胞个数;采用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷([3 H]-TdR)掺入法测定各组血管平滑肌细胞的DNA的合成量作为细胞增殖的指标。结果 ET-1刺激高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞增生。高血压大鼠20、40、60、80及100μmol·L-1各组脑血管平滑肌细胞数量及DNA合成量较对照组均增加,以80mol·L-1组细胞数量及DNA合成量增加最为明显(均P<0.05)。正常血压鼠各组脑血管平滑肌细胞数量变化及DNA合成量增加不明显(P>0.05)。结论 ET-1可明显促进高血压大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖,提示ET-1可能促进高血压诱发的脑血管重构。更多     

吲哚美辛联合X线照射对人急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用

目的：观察吲哚美辛联合X线照射对人急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用,为抗肿瘤研究提供依据。方法：将HL-60细胞培养于含吲哚美辛的培养基中,终浓度分别为0、20、40、60、80和100 μmol·L^-1。同时给予3　Gy X线照射,继续培养24　h;MTT法检测细胞增殖抑制率;台盼蓝染色法检测细胞活力;实时荧光定量PCR检测细胞增殖和凋亡相关基因PCNA和Caspase-3 mRNA表达变化。结果：与对照组比较,不同浓度吲哚美辛联合照射组HL-60细胞增殖抑制率明显增加,80 μmol·L^-1吲哚美辛联合照射组HL-60细胞增殖抑制率最高（P<0.01）。与对照组、吲哚美辛（80 μmol·L^-1）组和照射组比较,80 μmol·L^-1吲哚美辛联合照射组HL-60细胞活力抑制程度最高（P<0.05或P<0.01）。与对照组、吲哚美辛（80 μmol·L^-1）组和照射组比较,80 μmol·L^-1吲哚美辛联合照射组PCNA mRNA表达水平明显降低（P<0.01）,Caspase-3 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。结论：吲哚美辛可显著增强照射对HL-60细胞的增殖抑制作用。
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重组质粒pEGFP-N2/XPD转染条件及Pifithrin-α孵育条件的探索

目的探讨重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染条件和Pifithrin-α(P53抑制剂)的孵育条件。方法利用脂质体将质粒pEGFP-N2/XPD在不同质粒浓度时转染细胞以及转染后分别孵育不同时间,然后进行RT-PCR和Western blot检测着色性干皮病基因D(XPD)的表达。将Pifithrin-α在不同浓度时孵育细胞以及分别孵育细胞不同时间,然后进行MTT检测。结果 XPD的表达在质粒浓度为0~4μg·孔-1范围内呈剂量依赖性升高(P<0.01),而质粒浓度达到4μg·孔-1以后XPD的表达不再随浓度的增加而继续升高;转染后细胞孵育时间为48h时XPD mRNA的表达为最高(P<0.05),转染后细胞孵育时间为72h时XPD蛋白的表达为最高(P<0.01)。细胞增殖活力在Pifithrin-α浓度为0~20μmol·L-1范围内呈剂量依赖性升高(P<0.05),而Pifithrin-α浓度达到20μmol·L-1以后细胞增殖活力不再随浓度的增加而继续升高;细胞增殖活力在Pifithrin-α孵育时间为0~24h范围内呈时间依赖性升高(P<0.01),而Pifithrin-α孵育时间达到24h以后细胞增殖活力不再随孵育时间的增加而继续升高。结论在后续的研究中,将以浓度为4μg·孔-1的pEGFP-N2/XPD质粒转染HepG2.2.15细胞,转染后的第2天以浓度为20μmol·L-1的Pifithrin-α孵育细胞24h,转染后共孵育细胞48h。     

甘草总黄酮对阿司匹林损伤人胃黏膜上皮细胞的保护作用及机制研究

目的　探讨甘草总黄酮对阿司匹林损伤人胃黏膜上皮细胞（GES-1）的保护作用及可能机制。方法　2017年3—11月,选取GES-1细胞株,分为6组,对照组：加DMEM培养基;阿司匹林组：阿司匹林18.5 mmol/L与GES-1共同培养24 h;甘草总黄酮低组、甘草总黄酮中组、甘草总黄酮高组：GES-1分别以甘草总黄酮（3、6、12 mg/L）预处理2 h后再加阿司匹林18.5 mmol/L共同培养24 h;PD98059组：GES-1以甘草总黄酮12 mg/L预处理2 h后,加PD98059 10 μmol/L处理1 h,再加阿司匹林18.5 mmol/L共同培养24 h。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,检测乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量,采用Western blotting法检测细胞磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK1/2）、B淋巴细胞癌2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达。结果　与对照组比较,阿司匹林组、甘草总黄酮低组、甘草总黄酮中组、甘草总黄酮高组、PD98059组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、LDH活性、MDA含量、p-ERK1/2、Bax表达升高,SOD活性、Bcl-2表达降低（P<0.05）;与阿司匹林组比较,甘草总黄酮中组、甘草总黄酮高组、PD98059组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、LDH活性、MDA含量、p-ERK1/2、Bax表达降低,SOD活性、Bcl-2表达升高（P<0.05）;与甘草总黄酮低组、甘草总黄酮中组、甘草总黄酮高组比较,PD98059组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、LDH活性、MDA含量、p-ERK1/2、Bax表达降低,SOD活性、Bcl-2表达升高（P<0.05）。结论　甘草总黄酮可通过促增殖、抗凋亡、抗氧化应激等途径减轻阿司匹林诱导的GES-1损伤,其机制可能与抑制ERK1/2信号通路有关。     

红景天苷对TNF-α诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的抑制作用及其意义

目的：探讨红景天苷对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（HFLS-RA）增殖的抑制作用,阐明其控制类风湿关节炎（RA）的分子机制。方法：体外培养HFLS-RA,采用TNF-α及不同浓度红景天苷处理细胞,分为正常对照组（0.0μg·L^-1TNF-α）、模型对照组（10.0μg·L^-1TNF-α）及12.5、25.0、50.0、100.0μmol·L^-1红景天苷组（10.0μg·L^-1TNF-α＋相应浓度红景天苷）。MTT法检测HFLS-RA的增殖活力,ELISA法检测细胞上清液中β-catenin、基质金属蛋白酶7（MMP-7）和Cyclin-D1表达水平,Western blotting法检测细胞中β-catenin蛋白表达水平。结果：与正常对照组比较,模型对照组HFLS-RA增殖活力明显升高（P<0.05）。与模型对照组比较,12.5和25.0μmol·L^-1红景天苷组HFLS-RA增殖活力虽降低,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;50.0和100.0μmol·L^-1红景天苷组HFLS-RA增殖活力降低（P<0.05）。与正常对照组比较,模型对照组细胞上清液中β-catenin、MMP-7和Cyclin-D1表达水平明显升高（P<0.05）。与模型对照组比较,12.5和25.0μmol·L^-1红景天苷组细胞上清液中β-catenin、MMP-7和Cyclin-D1表达水平虽降低,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;50和100μmol·L^-1红景天苷组细胞上清液中β-catenin、MMP-7和Cyclin-D1表达水平明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测,模型对照组细胞中β-catenin蛋白表达水平明显高于正常对照组（P<0.01）;12.5和25.0μmol·L^-1红景天苷组细胞中β-catenin蛋白表达水平虽低于模型对照组,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;50.0和100.0μmol·L^-1红景天苷组细胞中β-catenin蛋白表达水平低于模型对照组（P<0.05）。结论：红景天苷可抑制HFLS-RA的增殖,其控制RA的机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关联。     

脑心清片对脂多糖诱导的BV-2 细胞的抗炎及抗凋亡作用

目的：通过研究脑心清片（NXQ）对脂多糖（LPS）诱导的小胶质细胞（BV-2）的炎症因子及凋亡细胞的表达作用,探讨脑心清片对脑卒中的抗炎及抗细胞凋亡的作用。方法：采用LPS 诱导的BV-2 细胞作为体外神经炎症模型,用脑心清片进行干预,用ELISA 检测促炎因子IL-6、IL-1β和TNF-α的含量水平;采用Western Blot 法检测IL-6、IL-1β和TNF-α、p-Akt、p-Erk、Bax、Bcl-2 的蛋白表达水平。结果：LPS 刺激BV-2 细胞24 h 之后,IL-6、IL-1β和TNF-α炎症因子表达水平明显升高（P<0.01）,NXQ 预处理后,IL-1β含量在10、20 μmol·L-1 时相对于LPS 处理组均有显著性的差异（P<0.05,P<0.05）,IL-6、TNF-α含量在20 μmol·L-1 时相对于LPS 处理组均有统计学意义（P<0.05）;LPS 刺激BV-2 细胞24 h 之后,IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,NXQ 预处理后,能呈现浓度依赖性的降低这些蛋白的表达水平,并且在10、20 μmol·L-1 时相对于LPS 处理组均有显著性的差异（P<0.05,P<0.01）;LPS 刺激BV-2 细胞24 h 之后,p-Akt、p-Erk 蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,NXQ 预处理后,能呈现浓度依赖性的升高这些蛋白的表达水平,并且在10、20 μmol·L-1 时相对于LPS 处理组均有显著性的差异（P<0.01,P<0.01）;LPS 刺激BV-2 细胞24 h 之后,促凋亡蛋白Bax 表达水平明显升高（P<0.01）,NXQ 预处理后,Bax 蛋白表达水平下降,
并且在20 μmol·L-1 时相对于LPS 处理组有统计学意义（P<0.05）。LPS 刺激BV-2 细胞24 h 之后,抗凋亡蛋白Bcl-2 表达水平明显降低（P<0.01）,NXQ 预处理后,Bcl-2 蛋白表达水平呈现浓度依赖性的升高,并且在10、20 μmol·L-1 时相对于LPS 处理组均有统计学意义（P<0.05,P<0.05）。结论：脑心清片对脂多糖诱导的小胶质细胞产生的炎症和毒性具有一定的调节作用,通过调节炎症因子的表达和激活Akt/Erk 通路,具有抗炎和抗细胞凋亡作用,进一步阐明了脑心清片抗脑卒中的作用机理。     

磷脂酰肌醇3激酶和细胞外调节蛋白激酶信号通路对支气管哮喘大鼠气管平滑肌细胞增殖的协同调控作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路对支气管哮喘（简称哮喘）大鼠气管平滑肌细胞（ASMC）增殖的协同调控作用。方法 6～8周龄SPF级雄性SD 大鼠,复制大鼠慢性哮喘模型,离体培养大鼠气管ASMC,将细胞分为正常组、哮喘组、转化生长因子β1（TGF-β1）组、TGF-β1+PD98059组、TGF-β1+渥曼青霉素（wortmannin）组、TGF-β1+PD98059+wortmannin组。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况及Western blotting法检测磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）表达情况。结果 CCK-8法检测各组大鼠ASMC OD 值,TGF-β1组高于正常组和哮喘组,TGF-β1+ PD98059组、TGF-β1+wortmannin组和TGF-β1+PD98059+wortmannin组低于TGF-β1组,TGF-β1+ PD98059+wortmannin组低于TGF-β1+ PD98059组和TGF-β1+wortmannin组（P＜0.01）。Western blotting法检测ASMC中p-Akt的表达,哮喘组高于正常组,TGF-β1组高于哮喘组,TGF-β1+wortmannin组低于TGF-β1组（P＜0.01）。Western blotting法检测ASMC中p-ERK1/2的表达,哮喘组高于正常组,TGF-β1组高于哮喘组,TGF-β1+ PD98059组低于TGF-β1组（P＜0.01）。结论 PI3K和ERK信号通路协同调控了TGF-β1刺激哮喘大鼠ASMC增殖过程。     

溶血磷脂酸促卵巢癌细胞增殖机制的研究

目的 探讨溶血磷脂酸(LPA)促进卵巢癌细胞增殖的机制。方法 体外培养人卵巢上皮癌细胞株SKOV3,选用促分裂素原活化蛋白激酶（MAPK）信号传导通路特异性阻断剂PD98059,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定LPA和PD98059对SKOV3细胞增殖活性的影响;应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定LPA单独或合用PD98059对SKOV3细胞表达环氧化酶-2(COX-2)的影响;应用流式细胞仪（FCM）测定细胞的凋亡及细胞周期的变化。结果 LPA(浓度＞10μmol／L)以剂量依赖方式促进SKOV3细胞增殖,PD98059抑制LPA促增殖作用（P＜0.05）。RT-PCR结果显示,LPA能促进COX-2的表达（P＜0.05）,而合用PD98059后COX 2的表达降低（P＜0.05）。FCM结果显示,LPA能促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,增加S期比率,而合用PD98059后LPA促增殖作用消失,且G0/G1期比率升高,S期比率降低。结论 LPA通过MAPK信号传导通路促进卵巢癌细胞增殖,且与COX-2表达有关。     

二氢杨梅素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤的影响

目的 ：研究二氢杨梅素（DMY）对过氧化氢（H2O2）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响并探讨其作用机制。方法：用不同浓度DMY（5μg·mL-1,20μg·mL-1,80μg·mL-1）预处理保护HUVECs 12 h,再用0.5 mmol·L-1 H2O2干预12 h,用MTT法检测细胞活力;用Hoechst33258进行细胞核染色;并取上清液检测超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量;用流式细胞仪分别测活性氧（ROS）和细胞内钙离子含量。结果：DMY能明显提高H2O2（0.5 mmol·L-1）损伤后HUVECs存活率（P＜0.05）,增加上清液SOD活性,降低MDA含量,减少细胞内ROS表达,下调细胞内钙离子浓度,其中DMY 5μg·mL-1时效果最明显。结论：DMY对H2O2诱导内皮细胞损伤具有保护作用,其机制与清除细胞内ROS,抑制细胞内钙离子介导的细胞凋亡相关,浓度以DMY 5μg·mL-1时效果最明显。     

左西孟旦治疗老年顽固性心力衰竭的临床观察

评价左西孟旦(levosimendan)治疗老年性顽固性充血性心力衰竭(心衰)的临床疗效。方法选取年龄大于65岁的老年充血性心衰患者267例,其纽约心功能分级(NYHA)在Ⅲ级或Ⅳ级或介于二者之间、超声心动图证实左室射血分数(LvEF)≤40%、血NTpro-BNP≥1 000μg.L-1,经规范给予洋地黄和(或)米力农、多巴酚丁胺强心,呋塞米、氢氯噻嗪利尿,螺内酯拮抗醛固酮,ACE-Ⅰ类改善预后以及充分抗感染、限盐等纠正诱发因素等治疗2周(第一阶段治疗),症状不能好转,重新评估NYHA心功能分级仍在Ⅲ级或Ⅳ级或介于二者之间、复查心脏彩超证实LvEF仍≤40%、血NTpro-BNP≥1 000μg.L-1、血肌酐≤110μmol.L-1(干式生化法)的患者41例,按随机数字表法分成试验组和对照组。试验组20例,给予左西孟旦治疗;对照组21例,继续原规范纠正心衰治疗。观察2组用药72h后NYHA心功能分级、LvEF、血NTpro-BNP的变化。结果试验组在改善心功能、提高射血分数、降低NTpro-BNP等指标方面与对照组比较有显著优势(P<0.01)。结论左西孟旦对常规治疗方法纠正心衰治疗无效的老年患者,可显著改善心功能、提高射血分数、降低NTpro-BNP。     

瞬时受体电位M7通道与血小板源性生长因子和5-HT促进大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖相关性的研究

目的：探讨瞬时受体电位M7通道（transient receptor potential melastatin 7, TRPM7）在血小板源性生长因子（platelet derived growth factor, PDGF）和5-羟色胺（5-hydroxytryptamine, 5-HT）诱导的肺动脉平滑肌细胞（pulmonary artery smooth muscle cells, PASMCs）异常增殖中的作用。方法：利用贴块法和酶解法分离大鼠PASMCs。采用RT-PCR、Western blot和全细胞膜片钳技术观察TRPM7在PASMCs中的功能性表达。利用TRPM7阻断剂2-APB,采用MTT的方法检测TRPM7对PDGF和5-HT诱导的PASMCs异常增殖的作用。结果：RT-PCR、Western blot结果显示,TRPM7在大鼠PASMCs中有mRNA和蛋白表达。利用膜片钳技术检测到TRPM7电流,且PDGF可上调TRPM7内、外向电流。100 μmol•L^-1 2-APB可抑制PDGF和5-HT引起的大鼠PASMCs异常增殖。结论：TRPM7可能参与PDGF和5-HT诱导的大鼠PASMCs的增殖,有可能成为肺动脉高压临床治疗新的靶点。     

Fasudil inhibits platelet-derived growth factor-induced human pulmonary artery smooth muscle cell proliferation by up-regulation of p27kip1 via the ERK signal pathway

Background  RhoA/ Rho kinase (ROCK) pathway is involved in pulmonary arterial hypertension (PAH) and pulmonary artery smooth muscle cell (PASMC) proliferation. Inhibition of ROCK has been proposed as a treatment for PAH. But the mechanism of RhoA/ROCK pathway and its downstream signaling in proliferation of human PASMCs is unclear. We investigated the effect of fasudil, a selective ROCK inhibitor, on platelet-derived growth factor (PDGF) induced human PASMC proliferation, and the possible association between RhoA/ROCK and extracellular signal-regulated kinase (ERK), p27^Kip1.

Methods  Human PASMCs were cultured with the stimulation of 10 ng/ml PDGF, and different concentrations of fasudil were added before the addition of mitogen. Cell viability and cell cycle were determined with MTT and flow cytometry respectively. ROCK activity, ERK activity and protein expression of proliferating cell nuclear angigen (PCNA) and p27^Kip1 were measured by immunoblotting.

Results  By MTT assay, PDGF significantly increased the OD value that represented human PASMC proliferation, and pretreatment with fasudil significantly reversed this effect in a dose-dependent manner. After PDGF stimulation, the percentage of cells in S phase increased dramatically from 15.6% to 24.3%, while the percentage in G₀/G₁ phase was reduced from 80.6% to 59%. And pretreatment with fasudil reversed the cell cycle effect of PDGF significantly in a dose-dependent manner. PDGF markedly induced ROCK activity and ERK activity with a peak at 15 minutes, which were significantly inhibited by fasudil. In addition, fasudil significantly inhibited PDGF-induced PCNA expression and fasudil also upregulated p27^Kip1 expression in human PASMCs, which decreased after PDGF stimulation.

Conclusion  RhoA/ROCK is vital for PDFG-induced human PASMC proliferation, and fasudil effectively inhibited PDGF-induced human PASMC proliferation by up-regulation of p27^Kip1, which may be associated with inhibition of ERK activity.

     

牛蒡苷元及牛蒡苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究牛蒡苷元及牛蒡苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用。方法：体外培养人多巴胺神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,加入不同浓度的牛蒡苷元及牛蒡苷预保护细胞SH-SY5Y 24 h后,加入H2O2继续共同培养24 h,采用MTT法检测细胞存活率。结果：与模型组相比,5 μmol·L-1和10 μmol·L-1的牛蒡苷元和20 μmol·L-1的牛蒡苷可提高细胞的存活率。结论：牛蒡苷及其苷元均能保护H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤,且牛蒡苷元对SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用强于牛蒡苷。     

赖氨藤黄酸对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的: 研究赖氨藤黄酸(GAL)对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响并探讨其作用机制,为GAL 抗乳腺癌的临床研究和应用提供理论依据。方法: 选取处于对数生长期的MCF-7细胞,并随机分为空白对照组、不同剂量 (0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00 μmol·L^-1)GAL组和不同剂量(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00μmol·L^-1)藤黄酸组,采用MTT法检测各组MCF-7细胞48 h增殖活性。选取对数生长期的MCF-7细胞,2 μmol·L^-1 GAL作用MCF-7细胞不同时间(0、6、12、24、36、48和60 h),采用MTT法检测作用不同时间后各组MCF-7细胞增殖活性。流式细胞术和Hoechst 33258染色检测各组MCF-7细胞24 h时凋亡情况,采用Western blotting 法检测各组MCF-7细胞24 h时凋亡相关蛋白的表达水平。结果: 细胞培养24 h 后,不同剂量GAL组MCF-7细胞存活率低于空白对照组(P<0.05),随剂量增加和作用时间延长细胞存活率下降(P<0.05)。流式细胞术和Hoechst 33258染色,与空白对照组比较,不同剂量GAL组MCF-7细胞凋亡率明显升高(P<0.05),且呈剂量依赖性。Western blotting检测,与空白对照组比较,不同剂量GAL组细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达水平明显降低 (P<0.05),而caspase-3切割片段蛋白的表达水平明显高于对照组 (P<0.05)。结论: GAL 通过抑制SIRT1蛋白表达水平和上调caspase-3切割片段蛋白的表达水平诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

五味子脂A联合卡铂对人卵巢癌Skov3细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及其机制

目的：探讨五味子脂A （GA）与卡铂（CBP）联用对人卵巢癌Skov3细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用及其机制,阐明GA的协同抑瘤作用。方法：采用不同浓度GA与CBP单独或联合对卵巢癌Skov3细胞株进行干预,MTT法检测细胞增殖抑制率,根据其结果选择GA和CBP合适浓度。实验分为对照组、GA （0.04 μmol· L^-1）组、CBP （16mg· L^-1）组、GA （0.04 μmol·L^-1）联合CBP （16mg·L^-1）组（GA+CBP组）,药物处理48h后,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力,RT-PCR法检测各组细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9） mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中MMP-2、MMP-9、AKT1和pAKT1蛋白表达水平。结果：与GA组和CBP组比较,GA＋CBP组细胞增殖抑制率明显升高（P<0.01）,且GA和CBP浓度分别为0.04 μmol·L^-1、16 mg·L^-1时量效比最佳。克隆形成实验,与对照组比较,CBP组和GA+CBP组Skov3细胞克隆形成率均降低（P<0.05或P<0.01）;GA+CBP组Skov3细胞形成率明显低于GA组和CBP组（P<0.01）。细胞划痕实验,与对照组比较,GA组和CBP组Skov3细胞迁移的数量减少;GA+CBP组细胞迁移的数量明显低于GA组和CBP组。Transwell实验,与对照组比较,GA组和CBP组Skov3细胞穿过细胞外基质（ECM）的能力降低;与GA组和CBP组比较,GA+CBP组Skov3细胞穿过ECM的能力降低。RT-PCR法,与GA组和CBP组比较,GA+CBP组Skov3细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）;Western blotting法,与GA组和CBP组比较,GA+CBP组Skov3细胞中MMP-2、MMP-9、AKT1和pAKT1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论：GA可增强CBP抑制人卵巢癌Skov3细胞增殖、侵袭和转移的能力,从而发挥化疗的减毒增效作用。     

姜黄素对肺癌相关LncRNA表达及厄洛替尼敏感性的影响

目的：探究姜黄素对肺癌相关长链非编码RNA（LncRNA）的表达及厄洛替尼敏感性的影响。方法：以20 μmol·L-1姜黄素处理非小细胞肺癌（NSCLC）PC9亲本细胞株作为实验组,以0.9%氯化钠溶液处理的厄洛替尼抵抗PC9细胞株为抵抗组,20 μmol·L-1姜黄素处理的厄洛替尼抵抗PC9细胞株为处理组,0.9%氯化钠溶液处理的PC9亲本细胞株为对照组。实时荧光定量PCR（qPCR）检测各组细胞中LncRNA MALAT1、LSINCT5、UCA1、HOTAIR、GAS5及H19表达差异,CCK-8实验检测各组细胞厄洛替尼半数抑制浓度（IC50）的差异。结果：相比对照组,实验组细胞MALAT1、HOTAIR、LSINCT5及H19表达均显著降低（P ＜0.05）,UCA1及GAS5表达差异无统计学意义（P ＞0.05）,厄洛替尼IC50 差异无统计学意义（P ＞0.05）;相比对照组,抵抗组及处理组各LncRNA及厄洛替尼IC50均显著增高（P ＜0.05）;相比抵抗组,处理组LncRNA MALAT1、LSINCT5、HOTAIR、GAS5及H19表达均显著降低,且厄洛替尼IC50下降（P ＜0.05）。结论：姜黄素可调控EGFR-TKI抵抗肺癌细胞中多种相关LncRNA的表达,促进抵抗细胞对厄洛替尼的敏感性。     

异钩藤碱抑制PDGF-BB诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的实验研究

目的 探讨异钩藤碱对血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及其机制。方法 建立PDGF-BB诱导的PASMCs增殖模型,通过MTT比色法和台盼蓝拒染法检测异钩藤碱对PASMCs增殖的影响及细胞毒性,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting检测细胞周期相关蛋白的表达及血小板源性生长因子受体β(PDGF-Rβ)信号通路蛋白表达及磷酸化的影响。结果 与正常对照相比,加入PDGF-BB(20 ng/mL)培养24 h,可促进PASMCs增殖约2.5倍;异钩藤碱剂量依赖性地抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖;异钩藤碱(25 μmol/L)明显抑制PDGF-BB诱导的S期细胞比例升高;Western blotting结果显示,异钩藤碱可抑制PDGF-BB诱导的cyclin D1、CDK6的表达和p27^kip1的降解,下调PDGF-Rβ及其下游信号分子AKT、糖原合成激酶(GSK)3β的磷酸化。结论 异钩藤碱通过将细胞周期阻滞于G₀/G₁期来抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖,其机制可能为通过抑制PDGF-Rβ及其下游信号通路的磷酸化、进而调节细胞周期相关蛋白的合成和降解来实现。