嗅鞘细胞移植促神经元轴突生长的机制

嗅觉系统的嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)能够促进嗅神经的功能恢复,因此OECs移植可能具有促进神经元轴突再生的功能.OECs可通过分泌多种黏附分子和营养因子,对再生轴突发挥趋化引导作用;调节脑信号蛋白3A、神经纤毛蛋白-1等神经生长抑制相关因子及受体的表达等多种机制,为轴突的再生提供了良好的环境.     

嗅鞘细胞移植在眼科领域应用的研究进展

嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)是目前唯一一种在成熟阶段还具有生长能力的特殊类型的胶质细胞,是继神经干细胞和雪旺细胞之后能促进神经纤维再生的一种新型细胞。它的生物学性能广泛,不但对神经元具有支持、营养、引导及促进存活的作用,而且能够改善受损轴突生长的环境,使其避免接触周围环境中不利于再生的因素,起到一定的隔离作用。OECs是目前神经外科和眼科用于细胞移植的种子细胞之一。现就近年来OECs在眼科领域的研究作一综述。     

嗅鞘细胞移植对面神经干缺损的修复研究

目的探讨嗅鞘细胞(OECs)移植对面神经干缺损治疗的疗效。方法健康SD大鼠40只,雌雄不限,随机分为4组,每组10只。分为正常对照组、模型组、治疗组1和治疗组2。正常对照组,未予特殊处理。模型组均建立一侧(左侧)面神经颞外段总干缺损10mm的动物模型。治疗组1和治疗组2均建成模型后用自制神经导管套接吻合神经缺损。治疗组1:在神经导管里注入等量无菌生理盐水。治疗组2:在神经导管内移植0.1mL以调整好浓度的OECs;各组分别于8周和12周检测面神经诱发电位,利用潜伏期和波幅做组间t检验。结果 8周和12周后移植OECs组的面神经诱发电位的潜伏期与波幅均有所恢复,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论移植的OECs辅以神经导管对面神经干缺损的治疗有一定的效果,可以作为面神经干缺损治疗的进一步研究。     

嗅鞘细胞在视网膜神经节细胞再生方面的研究进展

嗅鞘细胞起源于嗅基板,是包裹嗅神经的神经胶质细胞,能终身保持再生.大量实验研究显示嗅鞘细胞移植能够促进中枢神经轴突再生,为此本文复习了大量关于嗅鞘细胞的细胞来源、生物学特性以及与其他胶质细胞区别的文献,并对其在中枢神经系统损伤以及视网膜神经节细胞再生方面的研究现状进行综述.     

嗅鞘细胞在冻融的周围神经移植物中的存活及分布

目的:观察嗅鞘细胞在成年大鼠视神经眶内断端移植的冻融周围神经中存活、生长与分布随存活时间的变化及对视神经再生的影响。方法:取成年大鼠坐骨神经反复冻融后,自两端注入10μL嗅鞘细胞悬液(105/μL),再移植于同种异体动物经眶内切断的视神经眶内断端上,分别于术后2d;1,2,3及4wk取移植物,切片观察嗅鞘细胞在其中的存活、生长及分布,并计数术后3,4wk动物视网膜内经移植物远端以50g/L荧光金逆行标记的再生视网膜节细胞。结果:嗅鞘细胞自注射部位增殖并迁移至周围神经全段,2wk时数量达到高峰,3,4wk时仅见神经周边部位残存极少量嗅鞘细胞,且视网膜内未见任何轴突再生的视网膜节细胞。结论:嗅鞘细胞可在冻融周围神经移植物中存活2￣3wk,神经周边部位较实质内更有利于嗅鞘细胞生长,这种移植物不能发挥促进视神经再生的作用。     

视网膜Müller神经胶质细胞的神经再生潜能

神经胶质细胞具有神经干细胞特性,是近年来发育神经生物学的重大发现之一.M üller细胞是视网膜组织中的主要神经胶质细胞,不仅对神经元起到营养支持作用,在视网膜受到损伤时还会发生增殖、去分化,呈现出神经干细胞特性.而深入了解M üller神经胶质细胞的生物学特性,将有利于开展基于Müller细胞的对视网膜疾病的的未来治疗策略的探索.为此,文中对视网膜Müller神经胶质细胞的增殖及其调节机制和M üller神经胶质细胞的干细胞特性的研究现状作简要的概述.     

人,狗,兔视网膜神经胶质细胞的原代培养

目的 了解同一方法能否培养不同哺乳动物的视网膜神经胶质细胞（ＲＧＣ）。方法 用酶消化法培养人,狗,兔的ＲＧＣ;根据细胞生长特点,电镜和免疫组织化学对照细胞进行鉴定。结果 培养细胞贴壁生长,形态不规则,生长周期较长（４周）电镜下可见细胞内均含有特征性中间丝（直径８～１０ｎｍ）免疫组化显示细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）和波纹蛋白阳性,证实为ＲＧＣ,结论酶消化法是一种获取ＲＧＣ的可靠方法,用同一     

P75神经营养受体与视网膜细胞凋亡

P75神经营养受体是最早发现的神经营养因子受体，既往认为其主要作为高亲和力受体的辅助受体间接发挥作用。近年来研究表明，P75神经营养受体在神经系统的发育中有诱导细胞凋亡作用。现阐述其在视网膜神经细胞生长，分化以及逆向运输神经营养因子等方面的作用。     

CD81在正常大鼠神经视网膜上的表达

目的 观察CD81在正常大鼠神经视网膜上的表达.方法 用抗CD81抗体对正常大鼠视网膜组织进行免疫组织化学染色,并对神经视网膜进行Western blot分析,同时用细胞免疫组织化学染色法检测体外培养视网膜神经胶质细胞的CD81表达.结果 大鼠视网膜神经节细胞层、内丛状层和外丛状层呈阳性网状致密染色;Western blot分析神经视网膜层出现CD81阳性条带;体外培养的大鼠视网膜神经胶质细胞也呈CD81阳性表达.结论 正常大鼠的神经视网膜表达CD81,视网膜神经胶质细胞是表达CD81的一种细胞类型.     

游离移植后长期存活的兔颌下腺细胞的生物学特性

目的探讨游离移植后长期存活的兔颌下腺细胞的生物学特性。设计实验性研究。研究对象兔颌下腺细胞。方法将移植成功后存活8个月的兔取出移植的颌下腺,进行细胞培养,观察其细胞生长特性,进行流式细胞仪分析及甲基噻唑基四唑(MTT)检测,并与培养的正常颌下腺细胞进行对比。主要指标细胞生长特性、流式细胞仪分析、细胞生长曲线。结果移植颌下腺细胞组与正常颌下腺细胞组具有相似的细胞形态和生长特性,移植颌下腺细胞组细胞周期的G1期、S期及G2期各时相细胞增值百分比分别是(82.7±2.10)%、(6.2±0.98)%、(11.2±1.24)%,正常颌下腺细胞组各时相分别是(82.0±2.06)%、(6.3±1.12)%、(11.7±1.35)%,两组相比较无明显差异(P均>0.05),同时两组具有相似的细胞生长曲线。结论游离移植后长期成活的兔颌下腺细胞与非移植的正常颌下腺细胞具有相近的细胞生长特性,去除神经支配后游离移植的颌下腺细胞的生物学特性未发生明显改变。     

HA/CD44在神经胶质细胞和视交叉神经中的表达及意义

透明质酸(hyaluronic acid, HA)是细胞外间质(extracellular matrix,ECM)的主要成分之一。参与组织重建、扩增细胞间隙、炎症反应和肿瘤发生等许多细胞生理、病理过程。粘附分子CD44是HA的细胞表面受体, 是一类分布极为广泛的细胞表面糖蛋白,它参与细胞-细胞之间以及细胞-基质之间的特异性粘连。CD44是细胞表面最重要的透明质酸受体, 是与HA 结合的主要部位。本文就HA与CD44结合及其分子基础; HA/CD44在神经胶质细胞(包括Müller细胞)中的表达及意义以及 HA/CD44在视交叉神经中的表达及意义三个方面进行阐述,总结HA/CD44在神经胶质细胞和视交叉神经中的表达及意义。     

胶质细胞培养液对视网膜色素上皮细胞生长的影响

目的 观察体外培养的视网膜色素上皮细胞条件培养液对视网膜神经胶质细胞生长的影响。方法 用不同稀释度的视网膜条件培养液培养视网膜神经胶质细胞，细胞计数法观察细胞数量的变化；MTT法测定对细胞增生活性（吸光度A值）的影响；流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果 随着视网膜条件培养液浓度的增加，视网膜胶质细胞的数量明显增加，吸光度A值升高，进入S期的细胞明显增加，显示体外培养视网膜色素上皮细胞促进视网膜神经胶质细胞增生。结论 视网膜色素上皮细胞和视网膜神经胶质细胞细胞间的相互作用对于PVR等的产生和发展是非常重要的。     

虹膜色素上皮细胞移植的研究进展

虹膜色素上皮(IPE)细胞是一种胚胎发育与视网膜色素上皮(RPE)细胞同源的生长细胞,不仅在结构上与RPE细胞有着惊人的相似之处,而且在吞噬视杆细胞外节段和分泌细胞因子等功能方面也有显著一致性.利用基因转染等方法 将IPE细胞移植到视网膜下腔不仅可以应用于遗传性视网膜变性,老年性相关变性等眼科疾病的治疗,同时还可以应用于神经退行性疾病的治疗.关注IPE细胞的功能特性及其移植方法 的研究现状和应用前景具有重要的临床意义.现就IPE细胞的功能特性及研究进展作一综述.     

EGFR反义寡核苷酸对人视网膜神经胶质细胞增生的影响

目的 观察表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR)反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN)对人视网膜神经胶质（retinal glial,RG)细胞增生的影响。方法 人视网膜神经胶质细胞的原代培养，用脂质体（Lipofectin)作为载体将修饰型EGFR ASODN转染RG细胞后，MTT法测细胞增生活性（吸光度A值）的变化。流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果 EGFRASODN转染RG细胞后，细胞的增生活性降低，对RG细胞生长增生的抑制率约为46.5%，进入S期的细胞减少。结论 EGFRA-SODN能够抑制人RG细胞增生。     

虹膜色素上皮细胞移植的研究进展

虹膜色素上皮(IPE)细胞是一种胚胎发育与视网膜色素上皮(RPE)细胞同源的生长细胞,不仅在结构上与RPE细胞有着惊人的相似之处,而且在吞噬视杆细胞外节段和分泌细胞因子等功能方面也有显著一致性.利用基因转染等方法 将IPE细胞移植到视网膜下腔不仅可以应用于遗传性视网膜变性,老年性相关变性等眼科疾病的治疗,同时还可以应用于神经退行性疾病的治疗.关注IPE细胞的功能特性及其移植方法 的研究现状和应用前景具有重要的临床意义.现就IPE细胞的功能特性及研究进展作一综述.     

在人羊膜上培养牛视网膜神经胶质细胞的初步探讨

目的　研究在具有完整基底膜的人羊膜上培养牛视网膜神经胶质 (RG)细胞的可能性。方法　用常规培养液进行原代及传代牛RG细胞的培养 ,并以GFAP及S 10 0染色进行免疫组化鉴定。取第 3代或第 4代牛RG细胞 ,以 1 0× 10 5/mL密度接种于羊膜基底膜面进行培养 ,并进行上述同样的鉴定。结果　 ( 1)原代RG细胞GFAP及S 10 0染色阳性细胞分别为 86 2 %和 83 5 % ,传代RG至第 3代时GFAP及S 10 0染色阳性细胞百分数明显增加 ,分别为 92 8% ,90 3 %。 ( 2 )培养的牛RG细胞的羊膜基底膜面大部分细胞阳性着色 ,其GFAP和S 10 0染色阳性细胞分别为 91 4%和90 1%。结论　牛RG细胞可以在人羊膜基底膜面生长。     

猫角膜内皮细胞的快速体外培养及其鉴定

角膜内皮细胞是维持角膜正常生理功能的关键细胞，角膜内皮细胞体外培养的纯度是进一步研究该细胞生物学功能的关键。本研究组织块法体外培养猫角膜内皮细胞，通过细胞形态学观察、神经特异性烯醇化酶（neuron—specific enolase，NSE）的特异染色及透射电镜观察来鉴定细胞的类型、纯度及生理特性。     

大鼠视网膜干细胞与神经干细胞体外增殖、分化特点比较

目的 通过对大鼠视网膜干细胞和神经干细胞体外增殖、分化特点进行比较,进一步明确视网膜于细胞自我更新及向神经细胞方向分化的能力.方法 实验研究.分离出生10 d大鼠睫状体区组织及新生大鼠脑组织,分别应用酶消化法将两种组织制成单细胞悬液,放入含有20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子、20μg/L表皮生长因子及1×B27添加剂的无血清DMEM/F12培养液中培养,观察并比较视网膜干细胞及神经干细胞体外增殖的特点.分别取第2代细胞,应用免疫细胞化学染色法检测干细胞特异性抗原神经巢蛋白（nestin）及细胞分裂增殖标志物5-溴脱氧尿核苷（BrdU）的表达.同时,应用含50 ml/L的胎牛血清及1×N2添加剂的培养基促进其分化,观察两种细胞向神经细胞方向分化的特点：分别应用免疫细胞化学染色法对分化后的细胞nestin、神经无标志物神经元特异性烯醇酶（NSE）、神经胶质细胞标志物神经胶质酸性蛋白（GFAP）进行检测,并应用卡方检验对两种干细胞分化后的NSE及GFAP阳性细胞数比例进行比较.结果 两种细胞原代培养48 h后均可见小的球状细胞团悬浮生长,折光性强.原代培养约7 d后传代,传代后细胞能重新形成球状细胞团,应用免疫细胞化学染色方法均可检测到细胞内nestin及BrdU的阳性表达,视网膜干细胞体外增殖的能力较神经干细胞弱.两种细胞均可在血清诱导条件下转变为贴壁生长,并分化出具有神经细胞形态的细胞.诱导第7天进行免疫细胞化学染色,检测出两种干细胞表达nestin阳性细胞数比例分别为（9.5±3.5）%及（9.1±0.7）%.视网膜干细胞分化后NSE及GFAP的阳性细胞数比例分别为（11.2±2.8）%及（18.9＋2.1）%,低于神经干细胞分化后两种标志物阳性细胞数比例[（34.1±63）%及（41.9±3.3）%],NSE、GFAP在两组表达的差异均有统计学意义（x2=103.23,P＜0.05;x2=74.36,P＜0.05）.结论 来源于睫状体区的大鼠视网膜干细胞形态、体外增殖及可分化特性与神经干细胞相似,但其增殖及分化为神经细胞的能力较神经干细胞弱.     

嗅鞘细胞移植联合应用GDNF对大鼠视神经不全损伤后功能恢复的作用

目的:探讨嗅鞘细胞(OEC)移植和人重组胶质细胞源性神经营养因子(recombinant human glial cell line-derived neurotrophic factor,rhGDNF)对大鼠视神经不全损伤后功能恢复的作用.方法:采用无创血管夹在成年大鼠制作视神经不全损伤模型,分为玻璃体腔注射rhGDNF、视神经损伤处注射OEC、rhGDNF OEC联合治疗组和对照组.在损伤前、损伤后即刻及伤后1,2,4,8和12wk检测伤眼闪光视觉诱发电位.结果:视神经损伤后即刻闪光视觉诱发电位波形呈熄灭状.伤后1wk各治疗组和对照组潜伏期基本恢复至损伤前水平.振幅恢复缓慢,伤后1～2 wk治疗组与对照组比较无显著差异(P＞0.05);4wk以后rhGDNF组和OEC组与对照相比间差异显著(P＜0.05),GDNF OEC组与对照组相比差异非常显著(P＜0.01).8wk时对照组恢复至损伤前的43.1%,GDNF治疗组恢复至损伤前的51.5%,OEC治疗组恢复至损伤前的57.4%,而GDNF OEC联合治疗组恢复至损伤前的68.7%,12wk后达75%.结论:嗅鞘细胞(OEC)移植和rhGDNF对大鼠视神经不全损伤后视神经功能的恢复有明显的促进作用,二者联合治疗效果更显著.     

视网膜发育中的神经于细胞

视网膜作为脑组织的延伸，存在大量神经干细胞，在内外源性因子机制及各基因调节机制作用下，增殖分化为视网膜各型神经元及神经胶质细胞。应用无血清培养及单细胞克隆技术可分离培养出特异性表达nestin的视网膜干细胞。由于视网膜干细胞具备自我更新能力及多分化潜能，有望用于退行性神经疾病如：视网膜色素变性、老年黄斑变性、晚期青光眼等的细胞替代治疗或药物、基因治疗的载体。