肺腺癌A549细胞中Nestin的表达

目的探讨nestin在肺腺癌A549细胞中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及nestin表达.结果四个肺癌标记物中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性,nestin在肺腺癌A549细胞中部分细胞表达.结论肺癌细胞中存在部分神经干细胞的标记物nestin.     

APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株的表达

目的探讨APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化;取第1代培养后1 d、5 d的细胞,用免疫组化检测APC和NeuN在肺腺癌细胞株A549的表达及计处阳性染色细胞的变化.结果 APC和NeuN在体外传代培养的肺腺癌A549细胞株中有表达,且随着细胞的生长,APC的表达减少,NeuN的表达增多.结论 APC可能在其早期形成中就发挥一定的作用;A549、NeuN的表达增A549肺腺癌细胞可能存在向神经细胞分化的潜力.在肺腺癌A549细胞表达减少.     

肺腺癌A549细胞株GDNF、BDNF、NT3和NT4的表达

目的探讨神经营养因子在肺腺癌细胞株A549中的表达及临床意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取代培养后3 d的A549细胞,用免疫组化检测神经营养因子GDNF、BD-NF、NT3和NT4在肺腺癌细胞株A549的表达.结果神经营养因子GDNF、BDNF、NT3和NT4在部分肺腺癌细胞株A549中表达.结论神经营养因子GDNF、BDNF、NT3和NT4可能在肺癌的增殖中发挥作用.     

Pokemon基因在非小细胞肺癌细胞系中的表达

目的 探讨pokemon基因在非小细胞肺癌细胞系中的表达情况.方法 采用RT-PCR、Western blot检测pokemon基因在5种人非小细胞肺癌细胞系中的表达.结果 pokemon基因在肺腺癌细胞系A549和AGZY83-a、肺鳞癌细胞系HE-99、肺巨细胞癌细胞系95D中呈高表达,在肺腺癌细胞系PAa中未见表达.结论 非小细胞肺癌细胞系中存在pokemon的表达.     

肺腺癌A549细胞株的体外生长特性及Brdu的表达研究

目的探讨肺腺癌A549细胞株的体外生长特性.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及Brdu表达;取第1代培养后1 d、11 d、13 d 3个时间点分别计数细胞;MTT检测3个时间点细胞活力变化,并进行统计学分析.结果 4个肺癌标记物免疫组化染色,其中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性;Brdu在肺腺癌细胞中部分表达;肺腺癌A549细胞株培养18d,13 d组的细胞数量与1 d组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;11 d组与1 d组的细胞活力无明显差异,13 d组的细胞活力较1 d组和11 d差异有统计学意义（P〈0.05）.结论肺腺癌A549细胞株在体外早期处于增殖状态,而20 d时细胞活力明显上升.     

流式细胞术检测EGFL7在肺癌不同细胞株中的表达差异

目的 探讨不同类型肺癌细胞株中EGFL7（类表皮生长因子域7）蛋白的表达差异,为进一步研究EGFL7在肺癌发病机制中的作用奠定基础.方法 选取三种常用的细胞株A549（肺癌腺）、H446（小细胞肺癌）和H69（小细胞肺癌）,采用流式细胞仪检测它们的EGFL7的表达,并比较三者之间的差异是否具有统计学意义.结果 流式细胞仪检测结果显示,EGFL7在肺腺癌细胞株A549细胞内的表达（18.17%）明显低于小细胞肺癌细胞株H446（31.20%）和H69（34.33%）细胞内的表达（P＜0.01）,两种小细胞肺癌细胞株H446和H69细胞内的表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 EGFL7可能在小细胞肺癌的发病机制中发挥重要作用.     

瘦素通过激活STAT3信号通路刺激人肺腺癌细胞增殖

目的从蛋白水平研究瘦素及其功能性受体OB-Rb在肺腺癌组织和癌旁正常肺组织中的表达情况,并分析二者与肺腺癌的临床分期、肿瘤细胞分化程度和淋巴结转移等临床病理资料的相关性,初步探讨瘦素和OB-Rb在肺腺癌发生发展过程中的意义;并选用肺腺癌A549细胞系研究瘦素是否通过激活JAK2-STAT3信号通路发挥其促细胞增殖作用。方法免疫组织化学法检测35例人肺腺癌和癌旁正常组织中瘦素及OB-Rb的表达情况,同时将蛋白表达水平情况与肺腺癌的临床病理参数进行相关性分析;免疫印记法检测A549细胞上是否存在OB-Rb的表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法和免疫印迹法检测A549细胞系中,瘦素的促细胞增殖作用及瘦素是否通过激活JAK-STAT3通路刺激A549细胞的增殖。结果人肺腺癌组织中瘦素及OB-Bb阳性表达率分别为68.6%,48.6%,明显高于癌旁组织25.7%,22.9%,P<0.05,A549细胞中存在OB-Rb的表达,瘦素能明显促进A549细胞的增殖,100ng/ml瘦素作用于A549细胞24h后,增殖效应最明显,而应用JAK酶抑制剂AG490阻断STAT3的激活后,瘦素的促A549增殖作用明显减弱。同时发现A...     

STAT3在肺腺癌细胞中的活化与肺腺癌发生机制的研究

目的：探讨STAT3,CyclinDl,CyclinB1,Bcl-2蛋白在肺癌发病中的作用。方法：采用Western-blot检测人肺腺癌细胞A549和正常人胚肺细胞HELF中STAT3,CyclinD1,CyclinB1,Bcl-2蛋白的表达。结果：①STAT3,CyclinDl,CyclinB1,Bcl-2蛋白在人肺腺癌细胞A549和正常人胚肺细胞HELF中均呈阳性表达,且二者表达均有统计学意义（P〈0．05）;②在人肺腺癌细胞A549中,STAT3蛋白的表达与CyclinD1,Bcl-2蛋白的表达成线性相关,而与CyclinB1蛋白的表达则无明显相关性。结论：STAT3信号转导通路可能通过对下游靶基因CyclinD1,Bcl-2蛋白的调控在肺癌的发生中起着重要的作用,但其具体机制还有待进一步深入研究。     

hnRNP K 在肺腺癌中表达及其作用的研究

目的 研究核内不均一核糖核蛋白K(hnRNP K) 在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞生长及凋亡的影响.方法 采用SP免疫组织化学方法对经手术切除病理确诊为肺腺癌的70例肺癌组织标本进行hnRNP K蛋白表达的检测,根据不同肿瘤的直径,计算阳性表达率;构建hnRNP K siRNA表达载体,采用Lipofectamine 2000瞬时转染A549细胞24 h后,RT-PCR、Western blot检测A549细胞hnRNP K mRNA及其蛋白表达量;以流式细胞仪检测重组质粒hnRNP K siRNA及siRNAn转染A549细胞后细胞周期及凋亡的变化.结果 肺腺癌组织中肿瘤直径≤3 cm、3～5 cm、≥5 cm的hnRNP K的阳性表达率分别为38.5%、95.2%、91.7%;hnRNP K siRNA转染24 h后的A549细胞hnRNPK mRNA及蛋白表达明显被抑制(P<0.01);hnRNP K siRNA能显著抑制A549的生长及细胞周期的分布,G0/G1的细胞数从37.21%增加到85.60%,S和G2/M的细胞数分别从47.71%、13.00%减少到13.50%和0.32%,差异均有统计学意义(P<0.01).hnRNP K siRNA能促进A549的凋亡,其凋亡率达到4.79%(P<0.01).结论 hnRNP K能促进肺腺癌细胞的生长;hnRNP K siRNA可抑制肺腺癌细胞的生长,促进其凋亡.     

siRNA靶向沉默HIF-1α基因对肺癌A549细胞转移和侵袭的影响

目的:探讨质粒介导RNA干扰抑制HIF-1α基因对肺癌A549细胞转移和侵袭能力的影响。方法:利用基因工程方法构建HIF-1α的干扰表达载体,并将其转染至肺腺癌A549细胞;分别用RT-PCR方法、Western blot方法检测细胞转染前后HIF-1α以及MMP-2的mRNA及蛋白表达的变化。细胞划痕试验和Transwell实验检测转染前后肺腺癌A549细胞迁移及侵袭能力的改变。结果:转染后肺腺癌A549细胞中HIF-1α和MMP-2的mRNA表达分别下降86%和64%(P<0.05)。转染后细胞蛋白表达明显下降。转染前后穿膜细胞数分别为(135.2±13.2)、(63.7±10.5),差异具有统计学意义(P<0.05)。转染前后划痕宽度分别为(0.48±0.14)、(1.04±0.15)mm,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:RNAi可有效抑制HIF-1α的表达,同时可结合MMP-2启动子下调MMP-2基因和蛋白的表达,降低肺癌A549细胞的转移和侵袭能力。     

叉头蛋白3对肺腺癌细胞增殖和化疗药物顺铂敏感性的影响

目的：观察叉头蛋白3（FOXP3）在人肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖和顺铂敏感性的影响，阐明肺腺癌细胞对顺铂耐药的相关机制。方法：收集肺腺癌患者术后石蜡标本50例和正常肺组织10例。免疫组织化学染色方法检测肺腺癌组织和正常肺组织中FOXP3和Ki-67的表达，分析肺腺癌组织和正常肺组织中FOXP3阳性表达率的差异，Pearson相关分析法分析FOXP3和Ki-67表达的相关性。选取对数生长期的人肺腺癌A549细胞进行siRNA转染，将A549细胞分为Mock组（转染脂质体）、Control-siRNA组（转染Control-siRNA）和FOXP3-siRNA组（转染FOXP3-siRNA）。RT-qPCR法检测各组A549细胞中FOXP3 mRNA表达水平，Western blotting法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平，CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性及不同浓度（0、0.63、1.25、2.50和5.00mg·L^-1）顺铂作用后各组A549细胞生长抑制率，RT-qPCR和Western blotting法检测顺铂作用后各组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平。结果：FOXP3在肺腺癌和正常肺组织的阳性表达率分别为62.0%和13.3%，组间比较差异有统计学意义（P<0.05）；FOXP3和Ki-67在肺腺癌组织中表达呈正相关关系（r=0.370，P<0.01）；FOXP3-siRNA组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均明显低于Mock组和Control-siRNA组（P<0.01）；顺铂作用48和72 h后，FOXP3-siRNA组A549细胞增殖活性明显低于Mock组和Control-siRNA组（P<0.05）；1.25、2.50和5.00 mg·L^-1顺铂作用后，FOXP3-siRNA组A549细胞生长抑制率均高于Mock组和Control-siRNA组（P<0.05）；1.25和2.50 mg·L^-1顺铂组A549细胞中FOXP3 mRNA和蛋白表达水平均明显高于0 mg·L^-1顺铂组（P<0.05）。结论：沉默FOXP3可抑制肺腺癌细胞的增殖，增加肺腺癌细胞对顺铂的敏感性。     

CC10在苦参碱诱导的肺腺癌细胞凋亡中的表达

目的 探讨Clara细胞分泌蛋白10-kDa（CC10）在苦参碱诱导的肺腺癌细胞凋亡中的表达。方法 肺腺癌A549细胞进行传代培养72h后，分别加入30、60、120、240、480mg/L的苦参碱，MTT法检测其对A549细胞生长的抑制作用．流式细胞仪检测细胞凋亡．Westcrn blot及RT-PCR检测CC10蛋白及mRNA的表达。结果 不同浓度的苦参碱对肺腺癌细胞生长均有抑制作用．并呈浓度依赖性。实验组细胞凋亡率和CC10基因表达率高于对照组，也呈浓度依赖性。结论 CC10基因表达增高可能在苦参碱诱导肺腺癌A319细胞凋亡中起重要作用。     

CUGBP1在人肺腺癌组织和细胞中的表达

目的比较分析CUGBP1基因在人肺腺癌组织和细胞内表达的特点,及其CUGBP1表达水平与癌细胞增殖活性的关系。方法以人肺腺癌组织标本和人肺腺癌细胞株A549为研究对象,应用免疫组化、WesternBlot、RT—PCR方法检测人肺腺癌组织、细胞内CUGBP1蛋白和基因的表达,并分析其特点。结果CUGBP1基因主要在人肺腺癌组织的细胞核呈强阳性表达,在所有类型腺癌组织中80％以上的癌巢细胞CUGBPl基因呈阳性表达,阳性表达率明显高于正常对照组,差异有显著性（t=100．01,P＜0．001）。95％以上的A549细胞CUGBP1表达呈阳性,且CUGBP1表达量明显低于LPS组,差异有显著性（t=407．53,P＜0．001）。结论CUGBPl基因在人肺腺癌癌巢细胞和A549细胞的胞核内高表达;炎性刺激可增强人肺腺癌细胞株A549的增殖和CUGBPl基因表达;CUGBP1基因可能成为人肺腺癌的早期诊断和增殖状态判断的新指标。     

无血清培养联合多柔比星诱导A549细胞耐药

目的： 探索快速建立肺癌耐药细胞模型的新方法,并探讨肺癌耐药和干细胞的相关性。方法： 应用无血清培养联合药物筛选法建立肺腺癌细胞耐药株A549/ADM;MTT法检测其对多种常用化疗药物的耐药程度;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡、ABCB1和ABCG2的表达水平及细胞内多柔比星的浓度;细胞免疫荧光及流式细胞仪通过特异性表面抗原标记法（CD133）检测肿瘤干细胞含量。裸鼠皮下种植瘤试验评估A549/ADM的致瘤性。结果： A549细胞经无血清培养可见细胞球形成;A549/ADM细胞对多柔比星、长春新碱、紫杉醇均产生了耐药,其耐药指数分别为A549的13.167,12.86,3.4倍;与亲代A549相比, 耐药株A549/ADM S期细胞比例由(45.76±1.41)% 降低至(23.33±1.32)%,细胞凋亡百分率由(58.23±0.82)% 减少至(16.49±0.77)%;耐药株A549/ADM中ABCB1和ABCG2的表达水平明显增高(P<0.05),且细胞内多柔比星浓度明显低于A549细胞; CD133细胞在A549/ADM和A549中的比例分别为(6.2±0.7)％和(1.9±0.2)％(P<0.05),免疫荧光检测A549/ADM细胞CD133表达水平较A549细胞高;A549/ADM具有高致瘤性。结论： 无血清培养联合多柔比星诱导能高效富集肺癌干细胞,成功建立了人肺腺癌A549/ADM多药耐药细胞模型。     

肺腺癌A549细胞株细胞活力变化及GDNF表达

目的探讨GDNF在肺腺癌A549细胞株的表达及细胞活力变化.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取第1代培养后1 d,5 d两个时间点分别计数细胞;MTT检测两时间点细胞活力变化;用免疫组化检测两时间点GDNF免疫阳性细胞数量变化.并进行统计学分析.结果培养5 d组肺腺癌A549细胞株的细胞数量与1 d组相比,明显增加（P〈0.05）;5 d组的细胞活力较1d组明显下降（P〈0.05）;GDNF的表达百分数比较显示;5 d组亦较1 d组明显下降（P〈0.05）.结论体外培养肺腺癌A549细胞株随细胞增殖过程,活力逐渐下降,同时GDNF表达明显下调,提示细胞增殖和细胞活力不一定完全一致,GDNF减少可能与活力减少有关.     

新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡

目的研究新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝法检测LGN抑制人肺腺癌细胞株A549增殖的情况,利用Giemsa染色、Hoechst染色、流式细胞仪、DNA ladder检测LGN诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的情况,利用反转录-聚合酶链反应检测凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、原癌基因bcl-2、促凋亡基因bax、p53等。结果 LGN对A549细胞有良好的抑制活性,半数抑制率明显优于阳性对照药依托泊苷,差异有统计学意义(P<0.05)。LGN可诱导A549细胞产生显著凋亡,并可增加A549细胞中p53、caspase-3及bax的mRNA表达,同时降低bcl-2的mRNA表达,并有良好的量效关系。结论鬼臼毒素新衍生物LGN可以诱导A549细胞发生凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因表达有关。     

GPC5过表达对人肺腺癌A549肿瘤起始细胞生物学功能的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5(glypican 5,GPC5)基因对人肺腺癌A549肿瘤起始细胞(cancer-initiating cells,CICs)生物学功能的影响?方法:采用前期构建的过表达GPC5慢病毒载体稳定转染的细胞株GPC5-A549,无血清培养方法富集A549细胞中的CICs微球,通过定量分析检测微球大小,流式细胞术检测CD133阳性细胞比率,Matrigel和Tanswell小室检测细胞侵袭迁移能力,Western blot检测上皮细胞间质化相关蛋白表达?结果:与对照组相比,过表达GPC5后A549细胞中CICs微球形成数目明显减少,体积变小,CD133阳性率明显下降(P < 0.05);细胞侵袭?迁移能力显著降低(P < 0.05);E-cadherin的蛋白表达明显上调,Vimentin?N-cadherin的表达显著被抑制(P < 0.05)?结论:GPC5过表达能够抑制肺腺癌细胞株A549中CICs的发生?侵袭和迁移,调控上皮细胞间质化相关蛋白表达?     

人金属硫蛋白1H基因对肺腺癌细胞A549耐药性的影响

目的：探讨金属硫蛋白1H（metallothionein 1H,MT1H）基因对人肺腺癌A549细胞耐药性的影响．方法：构建真核表达载体pcDNA3．1（-）-MT1H,利用脂质体介导将其转染肺腺癌A549细胞,G418筛选阳性克隆．分别以RT—PCR和Western方法检测MTIH mRNA和蛋白表达情况,MTT法检测细胞对顺铂的药物敏感性;流式细胞仪（FCM）检测顺铂诱导细胞凋亡率．结果：转染pcDNA3．1（-）-MT1H的细胞,其MT1H mRNA和蛋白表达水平显著高于亲本细胞及转染空载体细胞,细胞对顺铂药物敏感性明显下降,顺铂诱导的凋亡率明显降低．结论：MT1H能促进A549细胞耐药,可能和降低顺铂诱导细胞凋亡有关．