三七提取物抗谷氨酸损伤PC12细胞的活性筛选及成分分析

目的 研究三七提取物抗谷氨酸损伤PC12细胞的活性筛选,并分析活性部位的化学成分.方法 以谷氨酸损伤PC12细胞为模型,实验分为对照组、模型组、石油醚提取物和超临界CO2萃取物组(6.25、12.50、25、50、100、200 μg/mL).采用MTT比色法对三七石油醚提取和超临界CO2萃取部位进行活性筛选,并利用气质联用技术(GC-MS)对三七石油醚提取物和超临界CO2萃取物进行化学成分鉴定分析.结果 与对照组比较,25 mmol/L谷氨酸作用PC12细胞24 h,细胞生长抑制率接近50%.不同浓度石油醚提取物组与模型组的细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05),25、50、100 μg/mL石油醚提取物组间的细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05).不同浓度超临界CO2萃取物组与模型组的细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05),25、50、100 μg/mL超临界CO2萃取物组间的细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05).50、100 μg/mL超临界CO2萃取物组与石油醚提取物组的细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05).经GC-MS技术分析得出,超临界CO2萃取物中主要的脂溶性成分人参炔醇含量(13.09%)高于石油醚提取物(4.10%).结论 石油醚提取物与超临CO2萃取物对PC12细胞均有保护作用,但超临界CO2萃取物具有较好的细胞保护作用.     

李氏膈食散体外抗肿瘤实验研 究简

目的 研究李氏膈食散体外抗肿瘤作用.方法 采用水提和醇提的方法提取李氏膈食散的复方中的水溶和醇溶性成分.MTT法测定水提物和醇提物对肝癌细胞（HpeG-2）、胃癌细胞（MKN-45）、食道癌细胞（EC-109）的抑制作用.结果 两种提取物对三种肿瘤细胞株均有体外抗肿瘤作用,且以乙醇提取物效果更好.乙醇提取物对HpeG-2、MKN-45、EC-109三种肿瘤细胞株的半数抑制浓度分别为：622.89、173.41和210.17 μg/mL,最大抑制率在90％左右.结论 李氏膈食散提取物在体外具有抑制HpeG-2、MKN-45、EC-109生长的作用.     

华蟾素对人胃癌MKN-28细胞增殖、凋亡的影响研究

目的：探究华蟾素对人胃癌细胞MKN-28细胞株的增殖、凋亡、细胞周期的影响,揭示华蟾素的抗癌机制。方法：选用人胃癌细胞MKN-28细胞株作为研究对象,采用不同浓度华蟾素处理细胞后,通过Cell Counting Kit-8实验(CCK8法)计算半抑制浓度(IC50),再以IC50值作为最佳药物使用浓度处理MKN-28细胞,同时以DMSO作为对照,比较两组细胞在增殖、凋亡、细胞周期等方面的差异。采用Western Blot检测两组细胞Bcl-2、BAX、Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达情况。结果：CCK8实验结果显示,随华蟾素处理浓度的增加,胃癌细胞增殖能力逐渐下降。华蟾素对MKN-28细胞作用的IC50值为0.16μg/mL。在0.16μg/mL华蟾素作用下,对照组胃癌细胞凋亡比例为(7.87±0.50)%,而实验组凋亡比例为(16.62±1.21)%,差异具有统计学意义(P=0.002)。实验组G0/G1期细胞所占比例显著增加,而G2/M期细胞所占比例显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。经过华蟾素处理后,MKN-28细胞中,Bcl-2蛋白表达量显著上升(P=0....     

测定中草药有效成分和抗氧化作用

目的：为了研究中草药中含有的有效成分,同时筛选出中草药中具有排除自由基功能的自由基清除剂,以便维护人体正常功能。方法选取2012年7月-2013年7月在该院使用中草药进行住院治疗的病患164例,这些病患来自该院各个诊疗科室,回顾分析这些病患的临床资料。联合使用高效液相色谱与串联质谱（HPLC-MS/MS）定量检测分析法鉴定当归、五味子、三七等中药的有效成分,分析提取物中氧自由基的清除功能,并研究保护身体DNA不受损伤的作用。同时对阿魏酸、五味子提取物、三七提取物、等中草药排除自由基,保护人体机能的作用。结果联合使用HPLC-MS/MS定量检测分析法能够快速鉴定人参中的提取物含量,包括：咖啡酸、阿魏酸等物质的含量。阿魏酸、苯酚、三七总皂苷等中草药提取物排除羟基自由基半抑制浓度分别为：2.95μg/mL,3.1μg/mL,58.7μg/mL,对比其浓度,差异有统计学意义（P〈0.05）;排除超氧阴离子自由基半抑制浓度分别为：0.45μg/mL,0.042μg/mL,167μg/mL,对比其浓度,差异有统计学意义（P〈0.05）。阿魏酸与苯酚能有效排除羟基自由基与超氧自由基的能力最强,三七总皂苷能力最弱。结论当归、五味子等中草药提取物都具有抗氧化作用,其中白术在保护DNA方面效果最佳。     

槐耳醇提物抑制人胃癌细胞MKN-45增殖的实验研究

目的观察槐耳不同提取部位对人胃癌MKN-45细胞增殖的影响,并筛选其有效部位。方法用系统溶剂法将槐耳提取为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、水五个部位后,用CCK-8显色法,检测不同部位不同浓度的槐耳醇提取物对MKN-45增殖的作用。结果槐耳石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇部位为抗肿瘤有效部位,其中以正丁醇部位效果最佳,其对MKN-45细胞半数抑制率(IC50)为56.142μg·m L-1。结论槐耳醇提物能抑制人胃癌MKN-45细胞增殖,其最有效部位为槐耳正丁醇部位。     

芭蕉花活性成分提取及其体外生物活性研究

目的 研究芭蕉花的活性成分及其体外生物活性.方法 通过硅胶柱色谱、大孔树脂、TLC分离等对芭蕉花提取物进行分离,并用高效液相色谱,结合质谱分析等方法,进行成分鉴定;采用体外MTT法进行芭蕉花活性组分对抑制肝癌BEL-7402细胞增殖作用的筛选,对抑制AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖作用进行活性筛选.结果 通过液-质分析,从芭蕉花乙酸乙酯提取物和石油醚提取物中发现其中有一种化合物可能为豆甾醇.MTT筛选发现芭蕉花石油醚提取物的4种萃取物组分中,乙酸乙酯相和石油醚相对肝癌BEL-7402细胞具有显著的增殖抑制作用(P<0.01),且呈一定的剂量和时间依赖性;芭蕉花的3种提取物组分中,乙酸乙酯相和石油醚相对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖具有显著的抑制作用(P<0.01),且其抑制作用呈一定的剂量和时间依赖性.结论 芭蕉花石油醚提取物的石油醚萃取部位和乙酸乙酯萃取部位对肝癌BEL-7402细胞具有显著的增殖抑制作用,72 h的IC50分别为67.4μg/mL和34.5μg/mL,且石油醚提取物和乙酸乙酯提取物对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖有抑制作用,72 h的IC50为55.5μg/mL.从芭蕉花提取物中分离出单体豆甾醇,为芭蕉花活性成分的深入研究提供了参考.     

鼠妇抗肿瘤活性物质初步探究

目的:通过体外抗肿瘤实验选择鼠妇抗肿瘤活性物质的提取方法和敏感细胞株,为筛选抗肿瘤活性物质做准备。方法:采用水回流提取、水浸渍提取、95%乙醇回流提取、乙醇浸渍提取、仿生酶解提取的方法对鼠妇粉末进行处理,并将其提取物对人肺腺癌细胞(A549)、肝癌细胞(BEL-7402)、乳腺癌细胞(MCF-7)和喉癌细胞(Hep-2)5种癌细胞进行体外抗肿瘤实验,同时采用MTT细胞增殖检测的方法对其抗肿瘤效果进行追踪,确定最佳提取方法和敏感细胞株后,对该方法的提取物用氯仿、正丁醇进一步萃取,再将各萃取部位用敏感细胞株分别进行体外抗肿瘤实验,筛选出最佳抗肿瘤活性部位。结果:与其余4种方法的提取物相比,乙醇回流提取物对A549、BEL-7402、MCF-7、Hep-2 4种癌细胞的抑制作用最好,IC50分别为185.99、119.80、52.94、193.08μg/m L,该提取物的氯仿萃取物对MCF-7的抑制作用明显高于正丁醇萃取物,IC50分别为58.13、190.47μg/m L。结论:乙醇回流提取物对多种癌细胞均有抑制作用,其抗肿瘤活性物质集中在氯仿萃取物中。     

买麻藤乙醇提取物抗氧化和抑制肿瘤作用的研究

目的 研究买麻藤50%和95%乙醇提取物对小鼠体内抗氧化作用及其对人肝癌BEL-7402细胞、人白血病HL-60细胞的体外抑制活性.方法 D-半乳糖造成实验性衰老小鼠模型,通过定试血清、肝、脑等组织内的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和ATP活性来观察买麻藤乙醇提取物对小鼠抗氧化能力的影响;MTT和SRB法测定买麻藤乙醇提取物对两种癌细胞的体外抑制作用.结果 买麻藤乙醇提取物对衰老小鼠各组织中的SOD、CAT、ATP活性都有明显升高;买麻藤乙醇提取物在质量浓度为1 mg/mL时,对BEL-7402细胞株的抑制活性最高为89.6%;在质量浓度为0.063 mg/mL时,对HL-60细胞株的抑制活性最高为87.0%.结论 买麻藤50%和95%乙醇提取物具有较好的小鼠体内抗氧化作用和体外抑制HL-60和BEL-7402肿瘤细胞生长的作用.     

丹参酮ⅡA对人胃癌MKN-45细胞增殖及基质金属蛋白酶-2表达的影响

[目的]通过观察丹参酮ⅡA对人胃癌MKN-45细胞的抑制作用及对转移相关基因MMP-2表达的影响,探讨其抗肿瘤的机制.[方法]MTT法检测不同浓度丹参酮ⅡA作用下,体外培养的MKN-45细胞的增殖情况; RT-PCR法、酶谱分析法检测MKN-45细胞MMP-2 mRNA及蛋白的表达.[结果]丹参酮ⅡA各浓度组对肿瘤细胞增殖的抑制率与阴性对照组相比,有显著差异(P<0.05),相关回归分析表明24h、48h、72h的半数抑制浓度分别为42.5μg /ml、19.4μg /ml和7.4μg /ml.PCR半定量分析发现:丹参酮ⅡA各组的MMP-2 mRNA表达均受到抑制,抑制程度随着药物浓度的增加而增加,酶谱分析法显示:丹参酮ⅡA能降低胃癌MKN-45细胞的MMP-2蛋白表达,其作用呈剂量-效应正相关,与阴性对照组相比,差异有显著性(P<0.05).[结论]丹参酮ⅡA能有效抑制胃癌MKN-45细胞的生长,并具有明显的时间和剂量依赖性.丹参酮ⅡA可能通过抑制胃癌MKN-45细胞MMP-2 mRNA的转录下调MMP-2蛋白的表达,进而抑制肿瘤增殖.     

瑶药小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞增殖的影响

目的探讨瑶药小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞增殖的影响,评价其体外抗肿瘤活性。方法制备不同终浓度(200μg/mL、150μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL)小钻80%乙醇提取物及顺铂。取对数生长期人乳腺癌细胞MCF-7、人结直肠癌细胞LOVO、人肝癌细胞HepG2、小鼠黑色素瘤细胞B16,采用四甲基噻唑蓝法检测不同浓度小钻乙醇提取物及顺铂作用48 h后4种肿瘤细胞的增殖情况,计算增殖抑制率及半数抑制浓度(IC₅₀)。结果各浓度小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞增殖均有一定抑制作用,抑制率随浓度的增加而升高(均P<0.05),但终浓度最高为200μg/mL时抑制率<80%。小钻乙醇提取物对4种细胞的IC₅₀值均>20μg/mL,而顺铂的IC₅₀值均<10μg/mL,小钻乙醇提取物对4种细胞的抑制作用均低于顺铂(均P<0.05)。结论小钻乙醇提取物对4种肿瘤细胞的体外增殖有一定的抑制作用,但其致死作用不明显,活性低于顺铂。     

三七中人参炔醇的提取、分离和鉴定

目的:提取、分离和鉴定三七中人参炔醇.方法:采用超临界CO2萃取三七脂溶性成分,硅胶柱层析、制备薄层分离,并通过波谱技术(UV、IR、MS、1HNMR、13CNMR)分析鉴定人参炔醇化学结构.结果:从三七中分离并鉴定了人参炔醇成分,得率为0.077%.结论:应用超临界CO2萃取三七中脂溶性成分并分离其中的人参炔醇,得率较高.     

三七止血与抗血栓作用的实验研究

目的研究中药三七的止血与抗血栓作用。方法将小鼠随机分为5组(对照组、云南白药组、三七低、中、高剂量组),每组12只。给药组以三七0.46、0.91、1.82g/kg剂量灌胃,应用毛细管法、剪尾法测定小鼠的凝血时间、出血时间,观察三七对小鼠的止血作用;将Wistar大鼠随机分为5组(对照组、阿司匹林组、三七低、中、高剂量组),每组8只。给药组以三七0.32、0.63、1.26g/kg剂量灌胃,应用动、静脉旁路丝线血栓形成法,以血栓湿重、血栓抑制率为指标,观察三七对大鼠体内血栓形成的影响。结果与正常对照组相比,三七低剂量组可缩短凝血时间、出血时间(P<0.05);与正常对照组相比,三七中、高剂量组血栓湿重明显降低,血栓抑制率明显上升(P<0.05)。结论三七低剂量具有一定的止血作用,中、高剂量具有抗血栓形成作用,其机制可能为抑制血小板聚集。     

三七及三七花总皂苷对斑马鱼模型促血管新生作用的研究

目的：观察三七及三七花总皂苷对斑马鱼模型促血管新生作用的影响。方法：选择正常健康转基因斑马鱼及内皮细胞生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（VRI）诱导血管损伤转基因斑马鱼两种模型,分别予25、50、100μg/ml的三七（根）总皂苷（PNS）和三七花总皂苷（SanqiF）干预处理,观察两者在不同浓度下对斑马鱼肠下静脉血管（SIVs）和节问血管（ISVs）生长的影响。结果：在正常健康转基因斑马鱼模型上,SanqiF比PNS拥有更为优势的促血管新生的效果,前者出现了明显的SIVs区域出芽现象,并呈浓度依赖性;在VRI损伤模型中,三七花总皂苷也展示了更为有效的保护和恢复ISVs和SIVs血管的效果。结论：在斑马鱼模型上,三七花总皂苷和三七（根）总皂苷均有促血管新生和保护血管的效果,三七花总皂苷效果更为明显。     

肝细胞亲和-HPLC法体外筛选三七总皂苷(PNS)抗肝细胞脂肪变性的活性成分

目的 通过肝细胞亲和-HPLC法体外筛选三七总皂苷(PNS)中降脂活性成分.方法 采用HepG2细胞系与PNS体外共孵育,联合HPLC法检测孵育后的细胞解离液,色谱柱为Aglient-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水,梯度洗脱(0~35 min,乙腈的体积百分比为29%;70~100 min,乙腈的体积百分比为29%→40%),流速为1.0 mL/min,检测波长为203 nm;采用体外肝细胞脂肪变性模型对PNS中亲和成分的降脂活性进行评价.结果 从PNS中筛选出2个肝细胞特异性亲和成分,分别为人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1;与正常组相比,建立的体外肝细胞脂肪变性模型组细胞内三酰甘油(TG)含量显著升高(P<0.05),不同浓度的PNS、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1作用后给药组细胞内TG含量显著降低(P<0.05),呈剂量效应关系.结论 建立肝细胞亲和-HPLC法,筛选出PNS亲和成分为人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1,经体外模型验证亲和成分具有显著降脂活性.     

三七不同部位提取物体外抗氧化功效研究

目的:研究三七不同部位提取物的抗氧化功效,为三七化妆品原料的开发提供实验依据.方法:采用超氧阴离子自由基清除活性实验及羟自由基清除活性实验检测三七根、茎、叶、花提取物对超氧阴离子自由基及羟自由基的清除活性,依据自由基清除率计算半抑制浓度(inhibitory concentration 50,IC50).采用H2O2诱...     

三七总皂甙对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Bcl-2/Bax的影响

[目的]探讨三七总皂甙对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。[方法]复制在体大鼠原位单肺缺血再灌注模型,随机分:假手术对照组(C组)、肺缺血再灌注组(IR组)与三七总皂甙干预组(PNS组),每组10只。实验结束时取左肺组织观察细胞凋亡指数(AI)、Bcl-2和Bax的蛋白表达、肺组织湿干重比(W/D)、肺泡损伤率(IAR)及肺组织超微结构的改变。[结果]IR组肺组织Bcl-2和Bax的蛋白表达、AI、W/D及IAR均显著高于C组(均P0.01),超微结构呈明显损伤性变化。PNS组与IR组相比,肺组织Bax的蛋白表达显著下降(P0.01),Bcl-2的蛋白表达及Bcl-2/Bax的比值显著上调(均P0.01),AI、W/D及IAR也显著降低(均P0.01),超微结构损伤较轻。[结论]三七总皂甙可能通过提高Bcl-2/Bax的比值而减轻肺组织细胞凋亡,对缺血再灌注肺发挥积极的保护作用。     

具有活血化瘀作用的几种中药提取物对牛肺动脉交感神经刺激反应的影响

观察５种具有活血化瘀作用的中药提取物对离体牛肺动脉交感神经刺激（Ｓｙｍｐａｔｈａｔｉｃｎｅｒｖｅｓｔｉｍ－ｕｌａｔｉｏｎ，ＳＮＳ）反应的影响，其中导紫董定对ＳＮＳ有显著抑制作用，６５４－２和三七皂甙的抑制作用较弱，而灯盏素和珠子参皂甙无明显影响．异紫董定的作用与其直接抑制血管平滑肌收缩性有关，其它药物的作用机理则有待进一步研究．     

超滤法纯化三七总皂苷的工艺研究

目的探究超滤分离技术纯化三七总皂苷.方法三七经大孔树脂纯化,氧化铝、活性碳精制,在浓缩干燥前增加超滤工艺,并对超滤液的可见异物、有效成分含量、截流率、膜通量测定.结果选用卷式截留相对分子量100KD的聚醚砜膜作为中试超滤膜较适合.结论所选择的膜分离技术纯化三七总皂苷,可减少超滤液中的可见异物数量,提高澄明度.     

超高效液相色谱法测定三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量

目的建立超高效液相色谱（UPLC）法测定三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量。方法采用ACQUITY BEH C18（2.1 mm×50 mm,1.7μm）色谱柱;流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速为0.4 mL·min^-1;检测波长为203 nm;柱温为35℃;进样体积为2μL。结果三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1分别在0.116 8～1.168μg、0.123 6～1.236μg、0.030 0～0.300μg范围内与相应峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率分别为100.1%、99.3%、99.9%,RSD值分别为0.4%、0.6%、1.0%（n=6）。结论较之HPLC法,UPLC法在不影响分离效果的情况下可大大提高三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的分析速度,改善分析效果;同时可减少溶剂的消耗。UPLC法可作为替代传统HPLC法的一种更为方便、快捷、可靠的方法。     

中药三七辨析

明代医家张四维1576年在<医门秘旨>中首载三七;随后,李时珍在<本草纲目>中记载了五加科的三七和另一种具有活血化瘀作用的类似三七的植物;清代赵学敏在<本草纲目拾遗>中将三七和人参联系在一起,归于昭参条下;清代吴其浚在<植物名实图考>中进一步描述了三七的功效,并指出<本草纲目>中记载的类似三七的植物是土三七,即菊叶三七.