国产Goldeneye 20A试剂盒在精斑DNA检测中应用

目的探讨国产Goldeneye 20A试剂盒在精斑DNA检测中的效果。方法利用202份强奸案件中的精斑检材测试其效果。结果国产Goldeneye 20A试剂盒在精斑DNA检验中的效果明显优于美国AB公司IdentifilerTM试剂盒。结论在强奸案件精斑DNA的检验中,国产Goldeneye 20A试剂盒可以取代美国AB公司IdentifilerTM试剂盒。     

接触性生物检材提取DNA方法的比较

目的 建立提取接触性生物检材DNA的新方法.方法 用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒提取各类接触性生物检材DNA并STR分型;将检验成功并可以重复的检材各取5份,用Chelex-100法、M48磁珠法和Chelex-100+纯化法3种方法提取接触性检材DNA,洗脱体积为50 μL,用Identifiler Plus复合扩增,并对检验结果分析比较.结果 对于接触性生物检材,采用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒STR分型的成功率最高,并将该方法加以实际应用.结论 PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒是提取接触性生物检材DNA的一种新方法,可应用于法医实际案件检验.     

Goldeneye~(TM) DNA ID System 20A试剂盒确证实验

目的:测试GoldeneyeTMDNA ID System20A试剂盒的技术性能指标,评估其法医学应用价值。方法:参照美国DNA分析方法专家组(TWGDAM)制定的确证指南,利用9947A、007标准品,100个拐卖儿童建库血样,日常案件各类检材制定测试方案,从方法学验证、灵敏度测试、混合样本测试、批量样本测试、DNA提取方法适应性测试、各类常见检材的测试、稳定性测试等7个方面进行测试。结果:Gold-eneyeTMDNA ID System 20A试剂盒灵敏度较高,对各类案件检材和DNA提取方法具有较好的适应性,具有直接扩增能力和检测混合DNA样本检测能力。结论:GoldeneyeTMDNAID System 20A试剂盒可用于法庭科学的检案与建库。     

国产试剂盒GoldenEye~(TM)16BT的确证试验

目的测试国产GoldenEyeTM 16BT试剂盒的技术性能指标,评估其法医学应用能力。方法制定测试方案,从方法学验证、准确性、峰值均衡性、灵敏度、批次间试剂及稳定性测试、耐受性、不同检材的适应性与一致性、种属特异性、混合样本等9个方面进行测试。结果 GoldenEyeTM 16BT试剂盒阳性DNA样本分型正确,内标和等位基因分型标准物符合要求;等位基因间的均衡性≥73%,同一荧光标志基因座间的均衡性≥57%,不同标志物间的均衡性≥81%;对阳性0.125 0 ng的DNA样本能检出全部短串联重复序列(STR)基因座分型和ABO血型基因型,不同批次间和反复冻融后试剂盒测试可以获得正确分型,对降解检材和混有抑制剂的样本等具有一定的耐受性,可对案件中多种检材进行分型且分型结果一致,具有一定的种属特异性和混合DNA样本检测的能力。结论国产试剂盒GoldenEyeTM 16BT可用于法庭科学的实际检案与建库。     

直接扩增技术在接触性检材 DNA检验中的应用

目的：将DNA直接扩增技术引入案件现场不同的接触性检材的检验中,构建有效的接触性DNA的生物检材的检验方法。方法采用剪取、擦拭等方法对手套、烟蒂、衣服、饮料瓶、吸管及残缺指纹等检材进行取样,采用DNA直接扩增技术获得短串联康复序列（short tandem repeat ,STR）分型。结果 DNA直接扩增技术在5种不同检材中检出的基因型均为单一个体来源,其对手套、烟蒂、衣服、饮料瓶和吸管、残缺指纹检材的成功率分别为90％、100％、70％、90％和60％,平均成功率在70％以上。分别对5种检材多处取点样品进行平行扩增,手套、烟蒂检材3个点位成功率均在90％以上;饮料瓶、吸管3个点位的成功率达80％～90％;衣服3个点位的成功率在60％～70％;残缺指纹3个点位的成功率在50％～60％。结论 DNA直接扩增技术对接触性DNA检材检验具有较高的有效应,其结果可靠,重复性强。     

线粒体单核苷酸多态性复合扩增体系在疑难检材中的法医学应用研究

目的应用线粒体单核苷酸多态性(SNPs)的复合PCR扩增体系应用于法医检验案件中的陈旧血痕、脱落细胞检材、腐败降解检材及骨组织等疑难检材,为解决法医学检验疑难检材的难题提供一种新的方法。方法用IdentifilerTM试剂盒进行目前使用的STR分型及已建立的18个线粒体SNPs(16个位于编码区和2个控制区)位点复合扩增毛细管电泳荧光检测体系,并行对照检验案件中的陈旧血痕、脱落细胞、腐败肌肉、软骨以及牙齿、骨等各种疑难检材。结果对于上述检材,STR与线粒体SNPs的检验成功率均达到80%以上,线粒体SNPs高于STR。对于高度腐败的肌肉及软骨、骨骼检材,线粒体SNPs的检验成功率明显高于STR。结论所建立的线粒体SNPs复合PCR扩增体系在疑难检材检验中具有良好的应用前景。     

用Chelex-100快速提取微量血痕中的DNA

目的 观察用Chelex-100从微量血痕中提取DNA的效果。方法 40份血痕纱布,取血痕3 mm×3mm置于1.5 mL离心管中,采用5％Chelex-100加煮沸法,提取血痕纱布中的DNA。提取液经过紫外分光光法测定,测其A260/280的比值,计算提取液DNA的纯度和浓度;DNA提取液经微型琼脂糖凝胶电泳,检测其DNA电泳带。结果 Chelex-100能快速在1 h之内提取微量血痕中的DNA,其提取液DNA纯度:27.5％样品纯度A260/280比值大于1.6,72.5％样品纯度比值在1.08～1.54之间;提取液DNA浓度:80％样品小于100μg/mL,20％样品在100～166μg/mL之间。微型琼脂糖凝胶电泳未观察到DNA条带。结论 用Chelex-100法有助于快速提取微量血痕中的DNA。     

口腔粘膜脱落细胞DNA多态性分型检测在法医学应用的初步研究

目的研究各类口腔粘膜脱落细胞的微量生物性捡材中DNA提取和检验的方法,初步论证牙刷等载体作为法医物证检材的可能性。方法分别采用Chelex-100法、有机萃取法、联合抽提法三种方法提取口腔粘膜脱落细胞载体的样本DNA,进行CTTv四个STR位点单步复合扩增和两步级联扩增两种STR-PCR方式的扩增及各位点的等位基因检测。结果实验样本中,除了1例牙刷和2例牙签未能STR位点的正确分型外,其余各无关个体口腔粘膜脱落细胞载体均可以得到与标准血痕阳性相同的STR基因型。结论根据检材的PCR相对模板DNA量,选择适宜的DNA多态性检测分型方法,各类常见的含有口腔粘膜脱落细胞检材可以进行DNA检测分型,这类检材在法医检案中具有应用价值。     

现场DNA物证证据的提取、保存及检验应用进展

目的为了给刑事案件诉讼提供准确可靠的证据,在办理凶杀、强奸等多种刑事案件时,经常需要对各种来源于人体的生物检材进行个人同一认定检验。方法利用法医DNA技术对现场提取的血液(斑)、精液(斑)、唾液(斑)、人体组织、骨骼等检材进行检验,为案件侦破提供科学依据或线索;利用DNA数据库技术更大的发挥法医DNA技术在许多案件侦破中的应用,还可以利用法医DNA技术对灾难性事件(案件)中确定死亡人数、对受害者的身源进行鉴别。结果结论利用DNA物证可以为案件侦查和诉讼提供更多证据     

无毛囊发干遗传分析新标记的应用

 目的 解决法医检验工作中自然脱落的毛发、严重降解的骨骼及牙齿这类检材检验难度大且检出完整DNA分型的成功率低的问题。方法 应用一类特殊的DNA序列——逆转座子(retrotransponson,RE)进行检验鉴定,用作遗传分析的RE DNA片段长度多在60～125 bp,利用21个基因座组合的RE个体识别系统计算似然比(likelihood,LR),并计算亲缘关系鉴定中的累计非父排除率(combined paternity index,CPI)。 结果 本系统对无毛囊的发干、严重降解的生物检材有较高的检出成功率,LR值多在108～1012,完全能够达到同一认定的水平。计算CPI值后发现难以得出支持假设的结论,多个案例计算的CPI数值小于10 000。结论 21个基因座的RE系统可以用于个体识别鉴定,亲缘关系的鉴定仍需增加基因座。     

新生儿颞浅静脉与股静脉采血穿刺效果的比较

目的：探讨新生儿颞浅静脉与股静脉采血穿刺的临床效果。方法：将100例新生儿随机分为观察组和对照组,每组各50例。观察组采用颞浅静脉采血,对照组采用股静脉采血。分别记录1次穿刺的成功率及其并发症。结果：观察组采血成功率为94％,对照组为80％;穿刺部位瘀斑发生率观察组为6％,对照组为20％;血肿发生率观察组为2％,对照组为18％。两组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论：新生儿经颞浅静脉采血比股静脉一次穿刺成功率高,并发症少,值得临床推广应用。     

机器人辅助腹腔镜上尿路修复手术:单一术者108例经验总结

目的: 总结分析单一术者机器人辅助腹腔镜上尿路修复手术的技术经验及治疗效果。方法: 回顾性分析2018年11月至2020年1月由单一术者完成的108例机器人辅助腹腔镜上尿路修复手术的临床资料,包括改良后离断肾盂成形术53例、肾盂瓣成形术11例、输尿管狭窄段切除再吻合术11例、输尿管狭窄切开自体舌黏膜修补术5例、输尿管狭窄切开阑尾补片修复术4例、输尿管膀胱再植术11例、术中精确测量法膀胱悬吊翻瓣术6例和改良回肠代输尿管术7例。手术成功定义为主观症状缓解且泌尿系超声提示肾积水缓解。结果: 108例手术均成功完成,无中转普通腹腔镜及开放手术。改良后离断肾盂成形术,中位手术时间141 min(74~368 min),中位出血量20 mL(10~350 mL),中位术后住院时间4 d(3~19 d),手术成功率为94.3%。肾盂瓣成形术,中位手术时间159 min(110~222 min),中位出血量50 mL(20~150 mL),中位术后住院时间5 d(3~8 d),手术成功率为100%。输尿管狭窄段切除再吻合术,中位手术时间126 min(76~160 min),中位术中出血量20 mL(10~50 mL),中位术后住院时间5 d(4~9 d),手术成功率为100%。输尿管狭窄切开自体舌黏膜补片修补术,中位手术时间204 min(154~250 min),中位出血量30 mL(10~100 mL),中位术后住院时间6 d(4~7 d),手术成功率为100%。输尿管狭窄切开阑尾补片修复术,中位手术时间164 min(135~211 min),中位手术出血量75 mL(50~200 mL),中位术后住院日8.5 d(6~12 d),手术成功率为100%。输尿管膀胱再植术,中位手术时间149 min(100~218 min),中位术中出血量20 mL(10~50 mL),中位术后住院日7 d(5~10 d),手术成功率为90.9%。术中精确测量法膀胱悬吊翻瓣术,中位手术时间166 min(137~205 min),中位手术出血45 mL(20~100 mL),中位术后住院时间5 d(4~41 d),手术成功率为83.3%。改良回肠代输尿管手术,中位手术时间270 min(227~335 min),中位术中出血量100 mL(10~100 mL),中位术后住院时间7 d(5~26 d),手术成功率为85.7%。结论: 本研究中单一术者应用机器人辅助腹腔镜开展并改良了多种复杂上尿路修复手术术式,对进一步形成标准化、程序化上尿路修复手术方式提供了参考。     

机器人辅助腹腔镜上尿路修复手术:单一术者108例经验总结

目的: 总结分析单一术者机器人辅助腹腔镜上尿路修复手术的技术经验及治疗效果。方法: 回顾性分析2018年11月至2020年1月由单一术者完成的108例机器人辅助腹腔镜上尿路修复手术的临床资料,包括改良后离断肾盂成形术53例、肾盂瓣成形术11例、输尿管狭窄段切除再吻合术11例、输尿管狭窄切开自体舌黏膜修补术5例、输尿管狭窄切开阑尾补片修复术4例、输尿管膀胱再植术11例、术中精确测量法膀胱悬吊翻瓣术6例和改良回肠代输尿管术7例。手术成功定义为主观症状缓解且泌尿系超声提示肾积水缓解。结果: 108例手术均成功完成,无中转普通腹腔镜及开放手术。改良后离断肾盂成形术,中位手术时间141 min(74~368 min),中位出血量20 mL(10~350 mL),中位术后住院时间4 d(3~19 d),手术成功率为94.3%。肾盂瓣成形术,中位手术时间159 min(110~222 min),中位出血量50 mL(20~150 mL),中位术后住院时间5 d(3~8 d),手术成功率为100%。输尿管狭窄段切除再吻合术,中位手术时间126 min(76~160 min),中位术中出血量20 mL(10~50 mL),中位术后住院时间5 d(4~9 d),手术成功率为100%。输尿管狭窄切开自体舌黏膜补片修补术,中位手术时间204 min(154~250 min),中位出血量30 mL(10~100 mL),中位术后住院时间6 d(4~7 d),手术成功率为100%。输尿管狭窄切开阑尾补片修复术,中位手术时间164 min(135~211 min),中位手术出血量75 mL(50~200 mL),中位术后住院日8.5 d(6~12 d),手术成功率为100%。输尿管膀胱再植术,中位手术时间149 min(100~218 min),中位术中出血量20 mL(10~50 mL),中位术后住院日7 d(5~10 d),手术成功率为90.9%。术中精确测量法膀胱悬吊翻瓣术,中位手术时间166 min(137~205 min),中位手术出血45 mL(20~100 mL),中位术后住院时间5 d(4~41 d),手术成功率为83.3%。改良回肠代输尿管手术,中位手术时间270 min(227~335 min),中位术中出血量100 mL(10~100 mL),中位术后住院时间7 d(5~26 d),手术成功率为85.7%。结论: 本研究中单一术者应用机器人辅助腹腔镜开展并改良了多种复杂上尿路修复手术术式,对进一步形成标准化、程序化上尿路修复手术方式提供了参考。     

光照不均匀性对糖尿病大鼠模型成模率及稳定性的影响

[目的]探讨光照的不均匀性对糖尿病大鼠模型复制的成功率及模型的稳定性的影响。[方法]将SD大鼠按体重随机分为2组,分别为A、B层,顶端照明,其中A层大鼠离光源近,B层大鼠离光源远,并收集尿液,测定大鼠排尿量;给予大鼠高热量饲料4周后,禁食不禁水16h,尾静脉注射STZ20mg/kg,并继续饲喂高热量饲料。注射STZ1周后测定血糖、尿蛋白及尿量,筛选以连续两次血糖16.6mmol/L,且尿蛋白排泄≥30mg/24h,尿量原尿量150%者为糖尿病成模大鼠,计算A、B层大鼠成模率,2周后再次测定血糖、尿蛋白及尿量,观察模型的稳定性。[结果]A层、D层大鼠糖尿病成模率分别为33.3%和66.7%,2周后A、B层增加模型大鼠各1只,且无自发性缓解情况。[结论]光照的不均匀性对糖尿病大鼠成模率有一定的影响,但对其成模后模型的稳定性无影响。     

斜角穿刺法在婴儿股静脉采血中的运用

目的:探讨提高婴儿股静脉采血一次成功率的方法。方法:对200例婴儿随机分成2组,采用2种不同的方法进行采血,试验组采用斜角穿刺法采血,对照组采用传统的垂直穿刺法采血。结果:斜角穿刺法一次采血成功率显著高于垂直穿刺法(χ2=4.0,P<0.05)。斜角穿刺法的平均采血时间较垂直穿刺法短。(t=6.95,P<0.01)。结论:斜角穿刺法婴儿股静脉采血时,一次成功率明显高于传统的垂直穿刺法。     

参照链介导的构象分析策略在人类白细胞抗原-A基因位点分型中的临床应用

目的 建立并稳定人类白细胞抗原(HLA)分型新策略-参照链介导的构象分析(RSCA)系统;以HLA—A位点为靶标,鉴定RSCA分型策略的优劣。方法 采用国际RSCA协作组提供的20例标准分型DNA首先确定RSCA系统的稳定性、准确性及可复性。然后分别提取84例拟进行造血干细胞移植病人及家系成员的外周血DNA,采用RSCA和序列特异性引物体外基因扩增(PCR—SSP)法平行对照对HLA-A基因位点进行分型。结果 对20例标准分型：DNA的分型结果显示,所获分型结果与国际RSCA协作组的完全一致,准确性及重复率均为100％。在全部84例移植病人及家系成员标本中,有82／84例(97．6％)标本可明确判定结果,其中有33／84例(39％)可直接指定等位基因型别;此外,还有2／84例(2．4％)标本因PCR扩增结果太弱,致使RSCA法未能获得分型结果。随机选择20例移植标本进行RSCA重复性实验表明,前后结果完全一致,然而在PCR-SSP分型中,约有10％的标本需要重复1—3次方能判定结果。结论 RSCA与PCR—SSP分型结果相比,具有灵敏、特异、分辨率高、重复性好、可发现变异基因及新的等位基因、高通量和低成本的优点,非常适合于对拟进行非血缘异基因造血干细胞移植供-受体进行HLA分型。缺点则是对于单个分型标本而言所花时间较长,对DNA标本纯度要求较高,数据库尚需进一步完善。     

移液枪在小鼠内眦取血中的应用

目的介绍移液枪用于小鼠内眦取血的方法。方法 20只C57BL/6J雄性小鼠,分为移液枪组和毛细管组,分别用移液枪和毛细管进行小鼠内眦定量取血3次,记录两组采血完成时间和采血成功率。结果两组采血成功率为100%,但移液枪组采血完成时间快于毛细血管组,且差异有显著性(P0.05)。结论直接应用移液枪为小鼠内眦取血提供了一种简便易行且相对安全的方法。     

压脉带应用时间对静脉采血成功率的影响

目的探讨压脉带应用的时间对静脉穿刺成功率的影响。方法将200例采血对象分为观察组（112例）和对照组（88例）,两组的年龄、性别构成差异无统计学意义,观察组压脉带压迫时间40-100s,对照组压脉带压迫时间100—200s,然后静脉穿刺,计算两组穿刺成功率,并进行比较分析。结果观察组的静脉穿刺成功率（98％）高于对照组（91％）,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论压脉带的应用时间对静脉穿刺成功率有影响,临床应用压脉带时,应减少其应用时间,以提高静脉穿刺成功率。     

提高手术患儿留置针穿刺成功率新方法探讨

目的：探讨两种留置针穿刺方法的优缺点,提高穿刺成功率。方法：将120名手术患儿（小于3岁）随机分为实验组和对照组,实验组采用新方法穿刺置管,对照组采用传统方法穿刺置管,比较两组穿刺一次成功率。结果：实验组一次成功49人,一次成功率82%,对照组一次成功35人,一次成功率58%,通过统计学处理,χ2=6.9259,P〈0.05,具有统计学意义。结论：新方法一次穿刺成功率高于传统方法。     

2062例环卫工人阴道分泌物检查结果分析

目的：通过对2062例环卫工人阴道分泌物的检测,了解其病原菌检出率并研究阴道清洁度、年龄与病原菌检出的关系。方法对2062例女环卫工人阴道分泌物进行直接涂片和革兰氏染色法检查。结果2062例环卫工人共检出阴道炎患者538例,占26.09%：其中线索细胞检出率最高,占15.13%,其次为霉菌感染,占7.61%,滴虫感染最低,占3.34%;在2062例中阴道清洁度为Ⅲ°～Ⅳ°者占65.57%;31～40岁组线索细胞检出率较其它年龄组高,差异有统计学意义(P<0.05);50～60岁组霉菌感染较其它年龄组高,差异有统计学意义(P<0.05);各年龄组中,阴道毛滴虫检出率比较一致,差异无统计学意义。结论环卫工人女性阴道炎患者防治形势不容乐观,在白带常规检查中,即使清洁度正常时也要注意查找病原菌,线索细胞在不同清洁度、不同年龄中均有较高的检出率,应加强该项目的检测。