肺腺癌A549细胞中Nestin的表达

目的探讨nestin在肺腺癌A549细胞中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及nestin表达.结果四个肺癌标记物中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性,nestin在肺腺癌A549细胞中部分细胞表达.结论肺癌细胞中存在部分神经干细胞的标记物nestin.     

宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株体外培养细胞活力的比较研究

目的比较宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株体外培养细胞活力.方法体外培养宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取传代培养后1 d、3 d、5 d 3个时间点分别计数细胞,MTT检测3时间点细胞活力变化,并进行统计学分析比较.结果宣威肺腺癌xwlc-05细胞株和肺腺癌A549细胞株各时间点比较,培养1 d、3 d、5 d组的细胞数量逐渐增加,差异有统计学意义（P〈0.05）;同时,宣威肺腺癌xwlc-05细胞株和肺腺癌A549细胞株3 d组细胞活力较1 d组增加,而5 d组的细胞活力较3 d组下降,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论不同肺腺癌细胞株体外增殖和细胞活力不完全一致.     

肺腺癌A549细胞株细胞活力变化及GDNF表达

目的探讨GDNF在肺腺癌A549细胞株的表达及细胞活力变化.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取第1代培养后1 d,5 d两个时间点分别计数细胞;MTT检测两时间点细胞活力变化;用免疫组化检测两时间点GDNF免疫阳性细胞数量变化.并进行统计学分析.结果培养5 d组肺腺癌A549细胞株的细胞数量与1 d组相比,明显增加（P〈0.05）;5 d组的细胞活力较1d组明显下降（P〈0.05）;GDNF的表达百分数比较显示;5 d组亦较1 d组明显下降（P〈0.05）.结论体外培养肺腺癌A549细胞株随细胞增殖过程,活力逐渐下降,同时GDNF表达明显下调,提示细胞增殖和细胞活力不一定完全一致,GDNF减少可能与活力减少有关.     

APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株的表达

目的探讨APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化;取第1代培养后1 d、5 d的细胞,用免疫组化检测APC和NeuN在肺腺癌细胞株A549的表达及计处阳性染色细胞的变化.结果 APC和NeuN在体外传代培养的肺腺癌A549细胞株中有表达,且随着细胞的生长,APC的表达减少,NeuN的表达增多.结论 APC可能在其早期形成中就发挥一定的作用;A549、NeuN的表达增A549肺腺癌细胞可能存在向神经细胞分化的潜力.在肺腺癌A549细胞表达减少.     

肺腺癌A549细胞株GDNF、BDNF、NT3和NT4的表达

目的探讨神经营养因子在肺腺癌细胞株A549中的表达及临床意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取代培养后3 d的A549细胞,用免疫组化检测神经营养因子GDNF、BD-NF、NT3和NT4在肺腺癌细胞株A549的表达.结果神经营养因子GDNF、BDNF、NT3和NT4在部分肺腺癌细胞株A549中表达.结论神经营养因子GDNF、BDNF、NT3和NT4可能在肺癌的增殖中发挥作用.     

联合应用全反式维甲酸和化疗药物对肺腺癌细胞株A549细胞的作用

目的观察以不同方式联合应用分化诱导剂全反式维甲酸和化疗药物对肺腺癌细胞株A549细胞的作用,为临床诱导分化治疗肺癌提供实验基础。方法以1×10-6mol/L的全反式维甲酸作用于培养的肺腺癌细胞株A549细胞,1、2、3、5d后检测几种常用化疗药物对细胞的杀伤作用。同时观察同时加入1×10-6mol/L的全反式维甲酸和化疗药物对肺腺癌细胞株A549细胞的杀伤作用。结果同时应用全反式维甲酸和化疗药物时,对肺腺癌细胞株A549细胞的杀伤作用与单用化疗药物时差异无统计学意义。全反式维甲酸作用2d和3d时,化疗药物对肺腺癌细胞株A549细胞的杀伤作用强于全反式维甲酸作用前;全反式维甲酸作用5d时,化疗药物对肺腺癌细胞株A549细胞的作用较全反式维甲酸作用前强,但比3d时下降。结论先用全反式维甲酸作用后可增强肺腺癌细胞株A549细胞对化疗药物的敏感性,此作用与全反式维甲酸作用时间有关。不同联合用药方法的效果不同。     

蒿甲醚对人肺腺癌A549细胞体外生长的影响

目的:研究抗疟疾药物蒿甲醚(Artemether)对人肺腺癌A549细胞株体外生长的影响,为蒿甲醚治疗肺癌提供实验依据。方法:采用单四唑(MTT)比色法检测蒿甲醚对体外培养的人肺腺癌A549细胞的生长抑制作用;用细胞计数法绘制细胞生长曲线,计算对数生长期群体倍增时间;用流式细胞术研究蒿甲醚对细胞周期的影响;采用苏木精-伊红(H-E)染色在光镜下观察凋亡细胞的形态学特征。结果:蒿甲醚对A549细胞株的半数抑制浓度(IC50)为1.34 mg/L。A549肺腺癌细胞对数生长期群体倍增时间在蒿甲醚作用后(20.7±0.5)h,对照组为(32.2±0.3)h,两组比较有显著性差异(P<0.01)。A549细胞经蒿甲醚作用后G1期细胞百分比增加(P<0.01),G2或S期细胞减少(P<0.01),凋亡率明显增加(P<0.01)。结论:蒿甲醚对人肺腺癌A549细胞株生长具有显著抑制作用;蒿甲醚的细胞毒作用与其诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

三氧化二砷联合紫杉醇对A549增殖的影响及机制研究

目的研究三氧化二砷联合紫杉醇对体外培养的肺腺癌A549细胞株的增殖抑制作用及其机制。方法MTT法、克隆实验检测不同干预方式对A549细胞增殖能力的影响;ELISA法检测不同干预方式细胞上清液中COX-2、VEGF含量。结果三氧化二砷和紫杉醇两药联合干预A549时,能抑制A549细胞的增殖并下调COX-2、VEGF表达,与三氧化二砷或紫杉醇单独用药组相比抑制A549细胞增殖差异有统计学意义(P<0.01),并且具有时间依赖性。结论三氧化二砷联合紫杉醇能有效抑制体外培养的人肺腺癌A549细胞株,其机制与下调COX-2和VEGF表达有关。     

CIK细胞对肺腺癌细胞株A549体内外杀瘤活性的实验研究

目的探讨正常人细胞因子激活的杀伤(cytokine induced-killer,CIK)细胞的表型变化、增殖活性及对人肺腺癌细胞株A549细胞的体内外杀伤作用。方法取健康人外周血单个核细胞(PBMC),经IFNγ-、IL-2、抗CD3单抗联合诱导CIK细胞,观察CIK细胞增殖活性,流式细胞仪测其细胞表型变化及四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定其体外的细胞毒活性,用肺腺癌细胞株A549建立裸鼠肺癌模型观察其体内的抗肿瘤效果。结果培养21 d内,CIK细胞增殖(19.7±4.2)倍;CD3+CD56+表达水平明显上调,第14天时达(26.3±3.6)%;体外实验表明CIK细胞对A549细胞有明显细胞毒活性,效靶比为20:1时杀伤率为(55.4±6.2)%。体内实验表明,CIK细胞可有效抑制裸鼠皮下肺癌移植瘤的生长(P<0.01)。结论CIK细胞是一种高效的免疫效应细胞,能够显著抑制体内外肺腺癌细胞株A549的生长,为肺癌免疫治疗提供了一种新的治疗手段。     

利用GFP/A549建立人NSCLC裸鼠原位种植转移模型

目的：利用人肺腺癌细胞株GFP/A549建立非小细胞肺癌(non small cell lung cancer, NSCLC)转移模型。方法：将表达GFP的质粒pRNAT U6.1/Neo转染人肺腺癌细胞A549，G418筛选获得稳定表达GFP细胞，对比转染前后细胞的生长活性和成瘤性。将转染后细胞原位种植裸鼠预定标准处死。HE染色和免疫组化检测转移灶的位置和数目。利用KODAK IS2000MM系统检测肿瘤播散情况。结果:获得了稳定表达GFP的转染后细胞；细胞的体外和体内生长未受转染的影响。裸鼠原位种植GFP/A549，利用KODAK IS2000MM确认4只有肝转移，9只有脑转移。HE染色、免疫组化确认4只有肝转移，11只有脑转移，与KODAK IS2000MM检测结果对比差异无统计学意义(P＞0.05)。结论:GFP标记人肺腺癌细胞A549原位种植法能更简便的建立NSCLC转移模型；KODAK IS2000MM能够非侵入性和无创性检测肿瘤转移。     

血管内皮生长因子促进肺转移相关受体通路的研究

目的 探讨肺癌细胞分泌的血管内皮生长因子(VEGF)促进肺转移的受体相关机制。方法 应用噻唑蓝(MTT)与酶联免疫吸附(ELISA)方法测定9种肺癌细胞系的增殖状况和培养上清液中VEGF水平,筛选出差异表达VEGF且增殖无明显差异的两株细胞系。将两株细胞分别接种于SCID小鼠背部观察肿瘤生长,肺癌细胞经尾静脉注射建立肺转移模型,采用HE染色和免疫荧光实验检测肺转移瘤及血管密度。应用两种VEGFR中和抗体(MF-1和DC101)腹腔注射治疗肺转移小鼠,观察肺转移瘤数改变。结果 9种肺癌细胞系分泌VEGF水平不同,其中最高的是A549(182.7ng/mL),最低的是SPCA1(13.39ng/mL),A549细胞和SPCA1细胞的增殖差异无统计学意义(P>0.05)。A549细胞在小鼠背部形成的肿瘤体积明显大于SPCA1细胞,肿瘤组织内新生血管明显增多。A549细胞形成肺转移瘤数为SPCA1细胞的2.3倍。抗VEGFR-1治疗使肺转移瘤数明显减少,而抗VEGFR-2治疗后差异无统计学意义(P>0.05)。结论 肺癌细胞分泌的VEGF促进肿瘤生长、转移和肿瘤血管生成,VEGF通过VEGFR1通路促进肺转移。     

抗人IgM抗体对鼻咽癌HNE-1细胞生物学特性的影响

目的 研究抗人免疫球蛋白M(IgM)抗体对鼻咽癌HNE-1细胞增殖、凋亡、细胞周期和成瘤的影响.方法 经抗人IgM抗体处理后,采用细胞增殖抑制实验观察HNE-1细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及周期,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡;构建裸鼠动物模型,腹腔注射抗人IgM抗体,观察移植瘤的生长,免疫组织化学SP法检测移植瘤中IgM和糖蛋白96(gp96)的蛋白表达.结果 抗人IgM抗体可呈浓度和时间依赖性抑制HNE-1细胞的增殖(P＜0.05);流式细胞术检测表明抗人IgM抗体可促进HNE-1细胞G1期细胞百分比明显降低,S期细胞百分比明显增加,细胞凋亡率明显增高(P＜0.05);TUNEL检测提示抗人IgM抗体可促进HNE-1细胞凋亡(P＜0.01);移植瘤实验显示抗人IgM抗体可明显抑制移植瘤的体积和质量(P＜0.05);移植瘤免疫组织化学显示裸鼠腹腔注射抗人IgM抗体后,移植瘤内IgM和gp96蛋白的表达水平明显低于对照组(P＜0.05).结论 抗人IgM抗体可有效抑制HNE-1细胞的增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期,并且能抑制裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抑制IgM和gp96蛋白表达有关.     

Effect of lumiracoxib on proliferation and apoptosis of human nonsmall cell lung cancer cells in vitro

Background Lumiracoxib is a highly selective cyclooxygenase-2 （COX-2） inhibitor with antiinflammatory, analgesic and antipyretic activities comparable with class specific drugs, but with much improved gastrointestinal safety. No studies have examined lumiracoxib for antitumorigenic activity on human nonsmall cell lung cancer cell lines in vitro or its possible molecular mechanisms. Methods The antiproliferative effect of lumiracoxib alone or combined with docetaxol on A549 and NCI-H460 lines was assessed by 3-（4, 5-dimethylthiazol-2-yl）-2, 5-diphenyltetrazolium bromide （MTT） assay. Drug-drug interactions were analyzed using the coefficient of drug interaction （CDI） to characterize the interactions as synergism, additivity or antagonism. Morphological changes were observed by acridine orange fluorescent staining. Extent of apoptosis was determined by flow cytometry. Results Lumiracoxib （15-240 pmol/L） has an inhibitory effect on the proliferation of A549 and NCI-H460 cell lines in concentration- and time-dependent manners with the ICso values of 2597 pmol/L and 833 pmol/L, respectively. The synergistic effect was prominent when lumiracoxib （15-240 pmoVL） was combined with docetaxol （0.2-2 pmol/L） （CDI 〈1）. Fluorescent staining showed that lumiracoxib could induce apoptosis in A549 and NCI-H460 cells. Lumiracoxib treatment also caused an increase of the sub-G1 fraction in each cell line and resulted in an increase of G0/Gl-phase cells and a decrease of S-phase cells. Conclusions Lumiracoxib had antiproliferative effect on the human nonsmall cell lung cancer cell lines A549 and NCI-H460 and had a significant synergy with docetaxol, which may be related to apoptotic induction and cell cycle arrest.     

人胎盘绒毛膜滋养层细胞的培养

目的 建立纯度较高的适于试验研究的人绒毛膜滋养层细胞。方法 胰蛋白酶-DNase联合消化法培养人绒毛膜滋养层细胞，间接免疫染色进行细胞鉴定。透射电镜观察细胞内部结构。结果 倒置显微镜下，可见细胞呈不规则多角形，核大卵圆形，胞质透明，呈片状铺展生长，角蛋白染色阳性率超过95%，未检测到波形蛋白阳性细胞，表明不含污染细胞。透射电镜观察示所获细胞有典型滋养层细胞结构。结论 该法简便易行，可获得合乎试验要求的人绒毛膜滋养层细胞。     

rmhTNF-αCombined with Cisplatin Inhibits Proliferation of A549 Cell Line In Vitro

Objective To explore the inhibitory effect of recombinant mutant human tumor necrosis factor-α （rmhTNF-α in combination with cisplatin on human lung adenocarcinoma cell line A549. Methods Human lung adenocarcinoma cell line A549 was treated with varying concentrations of rmhTNF- （0.38, 0.75, 1.50, 6.00 and 12.00 IU/ml） or cisplatin （3.91, 7.81, 15.63, 31.25 and 62.50 μg/ml） for 24 hours. Viable cell number was analyzed by using crystal violet staining. The inhibitory rates of A549 cells growth by the two drugs were calculated. For analyzing whether there was a synergistic effect of rmhTNF-α with cisplatin, A549 cells were treated with 0.75 IU/ml rmhTNF-α and increased concentrations of cisplatin. Results rmhTNF-α or cisplatin inhibited the growth of A549 cell lines in a dose-dependent manner. The inhibitory effect of rmhTNF-α combined with cisplatin was significantly greater than cisplatin alone at the same concentration （all P〈0.01）. Conclusion rmhTNF-α combined with cisplatin might have synergistic inhibitory effect on human lung adenocarcinoma cell line A549.     

紫苏醇对肺癌细胞的体外药效作用及毒理学评价

目的研究紫苏醇对肺癌细胞的体外药效作用,及其对小鼠的毒理学评价。方法以质量浓度为0.637-6.829 mg.L-1的紫苏醇对肺鳞癌细胞NCI-H1299和肺腺癌细胞A549作用24 h后,用噻唑蓝（MTT）比色法、Hoechst 33258荧光染色法检测凋亡率和细胞毒性。取随机分组的小鼠,将紫苏醇以灌胃方式给药,剂量范围为5.736-1.912 g.kg-1,观察小鼠中毒症状,按照改良寇氏法计算紫苏醇的半数致死量（LD50）以及95%平均可信限。结果紫苏醇呈浓度依赖性抑制NCI-H1299和A549细胞生长,质量浓度为1.707 mg.L-1时,对NCI-H1299和A549细胞的抑制率分别为93.97%和95.45%,Hoechst33258荧光染色观察到两株细胞均出现细胞核浓缩变亮,呈分叶状、数量显著减少等凋亡特征变化。小鼠给药后出现中毒症状,其程度与紫苏醇呈剂量依赖性,测得紫苏醇LD50和95%可信限为（3.696±0.504）g.kg-1.结论紫苏醇体外对NCI-H1299和A549细胞的生长有显著抑制作用,口服紫苏醇有相对高的LD50和治疗指数。