肺腺癌A549细胞株细胞活力变化及GDNF表达

目的探讨GDNF在肺腺癌A549细胞株的表达及细胞活力变化.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取第1代培养后1 d,5 d两个时间点分别计数细胞;MTT检测两时间点细胞活力变化;用免疫组化检测两时间点GDNF免疫阳性细胞数量变化.并进行统计学分析.结果培养5 d组肺腺癌A549细胞株的细胞数量与1 d组相比,明显增加（P〈0.05）;5 d组的细胞活力较1d组明显下降（P〈0.05）;GDNF的表达百分数比较显示;5 d组亦较1 d组明显下降（P〈0.05）.结论体外培养肺腺癌A549细胞株随细胞增殖过程,活力逐渐下降,同时GDNF表达明显下调,提示细胞增殖和细胞活力不一定完全一致,GDNF减少可能与活力减少有关.     

肺腺癌A549细胞株的体外生长特性及Brdu的表达研究

目的探讨肺腺癌A549细胞株的体外生长特性.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及Brdu表达;取第1代培养后1 d、11 d、13 d 3个时间点分别计数细胞;MTT检测3个时间点细胞活力变化,并进行统计学分析.结果 4个肺癌标记物免疫组化染色,其中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性;Brdu在肺腺癌细胞中部分表达;肺腺癌A549细胞株培养18d,13 d组的细胞数量与1 d组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;11 d组与1 d组的细胞活力无明显差异,13 d组的细胞活力较1 d组和11 d差异有统计学意义（P〈0.05）.结论肺腺癌A549细胞株在体外早期处于增殖状态,而20 d时细胞活力明显上升.     

APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株的表达

目的探讨APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化;取第1代培养后1 d、5 d的细胞,用免疫组化检测APC和NeuN在肺腺癌细胞株A549的表达及计处阳性染色细胞的变化.结果 APC和NeuN在体外传代培养的肺腺癌A549细胞株中有表达,且随着细胞的生长,APC的表达减少,NeuN的表达增多.结论 APC可能在其早期形成中就发挥一定的作用;A549、NeuN的表达增A549肺腺癌细胞可能存在向神经细胞分化的潜力.在肺腺癌A549细胞表达减少.     

联合应用全反式维甲酸和化疗药物对肺腺癌细胞株A549细胞的作用

目的观察以不同方式联合应用分化诱导剂全反式维甲酸和化疗药物对肺腺癌细胞株A549细胞的作用,为临床诱导分化治疗肺癌提供实验基础。方法以1×10-6mol/L的全反式维甲酸作用于培养的肺腺癌细胞株A549细胞,1、2、3、5d后检测几种常用化疗药物对细胞的杀伤作用。同时观察同时加入1×10-6mol/L的全反式维甲酸和化疗药物对肺腺癌细胞株A549细胞的杀伤作用。结果同时应用全反式维甲酸和化疗药物时,对肺腺癌细胞株A549细胞的杀伤作用与单用化疗药物时差异无统计学意义。全反式维甲酸作用2d和3d时,化疗药物对肺腺癌细胞株A549细胞的杀伤作用强于全反式维甲酸作用前;全反式维甲酸作用5d时,化疗药物对肺腺癌细胞株A549细胞的作用较全反式维甲酸作用前强,但比3d时下降。结论先用全反式维甲酸作用后可增强肺腺癌细胞株A549细胞对化疗药物的敏感性,此作用与全反式维甲酸作用时间有关。不同联合用药方法的效果不同。     

肺腺癌A549细胞株GDNF、BDNF、NT3和NT4的表达

目的探讨神经营养因子在肺腺癌细胞株A549中的表达及临床意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取代培养后3 d的A549细胞,用免疫组化检测神经营养因子GDNF、BD-NF、NT3和NT4在肺腺癌细胞株A549的表达.结果神经营养因子GDNF、BDNF、NT3和NT4在部分肺腺癌细胞株A549中表达.结论神经营养因子GDNF、BDNF、NT3和NT4可能在肺癌的增殖中发挥作用.     

云南宣威肺腺癌原代细胞和肺腺癌细胞株XWLC-05体外形态学比较

目的比较宣威肺腺癌原代细胞和已建立的宣威肺腺癌细胞株XWLC-05的形态学变化.方法用含10%胎牛血清的RPMI Medium1640培养基培养宣威肺腺癌细胞和XWLC-05,观察两者的形态学变化,比较不同时间点肺癌细胞数量变化,探讨其生长特性.结果培养的肺癌原代细胞为贴壁成团片状生长,为多边形或类圆形,异型性明显;而XWLC-05细胞成翼状,多边形,增殖速度比本实验室培养肺癌原代细胞快.结论肺癌原代细胞形态学上不同于XWLC-05,有其自身生长特性.     

低氧条件下RNA干扰阻断Notch3通路对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的 观察低氧条件下RNA干扰阻断Notch3对人肺腺癌A549细胞增殖的影响.方法 低氧条件下(1％O2)培养人肺腺癌A549细胞,以Notch3 siRNA转染A549细胞(Notch3 siRNA组),RT-PCR和Western blotting法分别检测A549细胞内Notch3及其信号通路下游基因HES1 mRNA和蛋白表达,MTT法检测转染24、48、72 h A549细胞的细胞活力;另设阴性对照组和空白对照组.结果 Notch3 siRNA转染A549细胞后,Notch3、HES1 mRNA和蛋白表达均显著降低(P＜0.05);Notch3 siRNA转染后时间依赖性抑制A549细胞生长,Notch3 siRNA组转染48、72 h细胞活力与阴性对照组和空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 低氧条件下Notch3 siRNA转染人肺腺癌A549细胞可有效抑制Notch3及其下游靶基因HES1的表达,并抑制A549细胞生长.     

hTERT启动子特异性调控炭疽毒素致死因子表达以杀伤人肺腺癌A549细胞的研究

目的观察人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)靶向调控炭疽毒素致死因子(LF)表达对人肺腺癌A549细胞活力及凋亡/坏死的影响。方法构建含hTERTp或CMV启动子(CMVp)且表达LF的真核质粒表达载体(phTERTp-LF或pCMV-LF),分别转染人肺腺癌A549细胞株和正常人胚肺成纤维MRC-5细胞株。针对A549、A549hTERTp-LF、A549CMVp-LF、MRC-5、MRC-5hTERTp-LF、MRC-5CMVp-LF六组细胞,分别采用RT-PCR和Western blot检测LF mRNA和蛋白表达,用MTT分析检测细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡/坏死。结果与A549组比较,A549hTERTp-LF组、A549CMVp-LF组均出现明显的LF mRNA和蛋白表达,以及细胞活力降低和凋亡/坏死率上升;与A549hTERTp-LF组相比,A549CMVp-LF组LF mRNA和蛋白表达更高,细胞活力降低和凋亡/坏死率上升更明显。与MRC-5组比较,MRC-5hTERTp-LF组也不能测出LF mRNA和蛋白表达,细胞活力和凋亡/坏死率亦无明显变化,但MRC-5CMVp-LF组的LF mRNA和蛋白表达上升,细胞活力降低和凋亡/坏死率增加。结论 hTERTp能特异性地驱动LF表达并杀伤人肺腺癌A549细胞,但避免了对MRC-5细胞的毒性,可望提供一种针对肺腺癌细胞且不良反应小的靶向治疗策略。     

肺腺癌A549细胞中Nestin的表达

目的探讨nestin在肺腺癌A549细胞中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及nestin表达.结果四个肺癌标记物中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性,nestin在肺腺癌A549细胞中部分细胞表达.结论肺癌细胞中存在部分神经干细胞的标记物nestin.     

FGF-2对人肺腺癌细胞株A549增殖的影响

目的:观察不同浓度成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)对体外培养的人肺腺癌细胞株A549增殖的影响.方法:以体外培养的人肺腺癌细胞株A549为研究对象,采用MTT比色法测定不同浓度(0,12.5,25,50,75,100 ng/mL)的FGF-2对A549细胞增殖活性的影响.结果:与对照组相比,不同浓度的FGF-2处理组细胞的OD值、增殖比均明显增加,差异具有统计学意义(P＜0.01).FGF-2浓度为75 ng/mL时细胞增殖比最高,为对照组的183％.结论:FGF-2促进A549细胞增殖,FGF-2对肺腺癌的发生发展具有重要作用.     

塞来昔布对3种肿瘤细胞株放射增敏效应的研究

目的观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对3种不同肿瘤细胞株（肺腺癌细胞株A549、宫颈癌细胞株HeLa、鼻咽癌细胞株CNE）的放射增敏作用。方法选择适当浓度的塞来昔布进行放射增敏实验,设置对照组（C）、药物组（D）、单纯照射组（R）和照射＋药物组（R＋D）,采用集落形成法分别检测塞来昔布对肺腺癌细胞株A549、宫颈癌细胞株HeLa、鼻咽癌细胞株CNE的放射增敏效应,并绘制细胞存活曲线。结果塞来昔布对3种肿瘤细胞株均显示出放射增敏效应,R＋D组与R组相比较,反映放射敏感性指标的SF2、D0.01、D0、Dq出现不同程度的下调。30μmol/L塞来昔布作用A549细胞、HeLa细胞、CNE细胞的放射增敏比SERD0和SERDq分别为1.26和1.34、1.25和1.33、1.24和1.32;当塞来昔布浓度增加到50μmol/L时,放射增敏比SERD0和SERDq分别增至1.74和1.84、1.36和1.47、1.33和1.61。结论塞来昔布在体外实验中可提高3种肿瘤细胞株的放射敏感性,呈浓度依赖性。塞来昔布有望作为放射增敏剂在临床广泛应用。     

干扰CD151基因表达对裸鼠肺腺癌A549细胞肺转移的实验

目的 探讨RNA干扰抑制CD151基因表达对肺腺癌A549细胞肺转移的影响.方法 将构建的RNA干扰抑制CD151基因表达的稳转细胞A549-sh RNA、A549-sh NC、A549-Blank 3组细胞通过尾静脉注射入裸鼠BALB/c-nu, 30 d后解剖, 通过肉眼和HE染色后观察肺转移情况.结果 A549-sh RNA、A549-sh NC、A549-Blank各组裸鼠肺转移率及肺组织上的转移病灶数依次为:62.5% (5/8) 与 (4.7±1.5) , 100% (7/7) 与 (9.3±0.8) , 75% (6/8) 与 (8.2±1.5) .转移病灶数, A549-sh RNA与A549-sh NC (P=0.000) , A549-sh RNA与A549-Blank (P=0.006) 比较, 差异有统计学意义.结论 RNA干扰抑制CD151基因表达能减少A549细胞裸鼠的肺转移.CD151可能成为抑制NSCLC侵袭和转移的潜在的治疗靶点之一.     

雷帕霉素对人肺癌细胞株增殖抑制的研究

目的：探讨雷帕霉素对人肺癌细胞株的生长影响及磷酸化核糖体蛋白S6激酶（P-S6K1）的表达在雷帕霉素抑制肺癌细胞增长中的意义。方法：用不同浓度（0、0.1、1.0、10.0、100.0 nmol/L）的雷帕霉素处理人肺癌细胞株,药物敏感试验判断雷帕霉素的敏感株和不敏感株,MTT法检测其对人肺癌细胞增殖的影响。Western blotting观察人肺癌细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路上下游蛋白分子及其磷酸化蛋白的表达,比较P-S6K1在用药前后的表达。结果：4个浓度（0.1、1.0、10.0、100.0 nmol/L）的雷帕霉素持续作用72 h,除H1299细胞株外,对HLAMP、A549和PAa细胞株的抑制率相应增加（P〈0.05）,100.0 nmol/L时的抑制率达到最大（P〈0.05）,A值的变化与抑制率一致。位于mTOR上下游的AKT、S6K1、4E-BP1、eIF4E蛋白在所有细胞株中均有表达,P-S6K1在敏感株中呈高表达,在不敏感株中未检测到。在HLAMP和A549中P-S6K1用药后6、12、18和24 h较用药前有所降低。结论：雷帕霉素能抑制人肺癌细胞生长,P-S6K1在一定程度上可代表肺癌细胞株对雷帕霉素的敏感性。     

人参皂苷白蛋白纳米微球对人肺腺癌A549细胞生长抑制作用研究

目的探讨载20（s）-人参皂苷白蛋白纳米微球（SPG-Rg3-HAS-NP）对人肺腺癌A549细胞体外增殖抑制作用。方法以人肺腺癌A549细胞为研究对象,分为A、B、C、D 4个给药组。A组为生理盐水对照组,B组为空白白蛋白纳米微球组,C组为20（s）-人参皂苷Rg3（SPG-Rg3）组,D组为载SPG-Rg3-HAS-NP组。采用MTT法观察给予不同浓度药物后24 h、48 h、72 h和96 h 4个时间点人肺腺癌A549细胞生长抑制率。结果 A组与B组对人肺腺癌A549细胞无细胞毒作用。C组与D组对人肺腺癌A549细胞均具有显著的细胞生长抑制作用,且给药浓度和时间呈一定的浓度依赖性和时间依赖性。C组在80μg/mL浓度以后进入平台期的趋势,而D组的细胞生长曲线仍继续呈上升的趋势,72 h后于20μg/mL浓度处抑制率已超过C组（P〈0.05）。结论 SPG-Rg3-HAS-NP具有的缓释作用,对人肺腺癌细胞增殖具有显著的体外细胞生长抑制作用,呈浓度依赖性和时间依赖性。     

长链非编码RNA MUC5B-AS1在人肺腺癌细胞系中的功能研究

目的 研究lncRNA MUC5B-AS1基因在肺腺癌中的表达情况及对肺腺癌细胞系生物学行为的影响.方法 利用RT-PCR、qRT-PCR检测肺腺癌细胞系中MUC5B-AS1基因的表达情况;构建MUC5B-AS1过表达载体,通过转染构建MUC5B-ASI过表达细胞系;采用CCK-8检测肺腺癌细胞的增殖情况;应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭的影响.结果 检测了MUC5B-AS1在4株肺腺癌细胞系(A549、SPCA1、H1975和H1299)和1株肺正常上皮细胞系(HBE)中的表达情况,发现MUC5 B-AS1在H1299细胞系中表达最低,同时A549细胞系表达最高;通过转染构建MUC5B-AS1过表达H1299、A549细胞系,利用qRT-PCR检测细胞系中MUC5B-AS1基因的表达,与对照组比较,MUC5B-AS1基因在H1299、A549细胞系均升高,且有统计学差异(P ＜0.05);CCK-8检测细胞增殖,与对照组比较过表达MUC5B-AS1对H1299、A549细胞生长并无影响(P＞0.05);应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭,过表达MUC5B-AS1促进H1299、A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MUC5B-AS1可能在肺癌的迁移和侵袭发挥重要作用,但对肺腺癌细胞的增殖能力没有显著影响.