肺腺癌A549细胞株细胞活力变化及GDNF表达

目的探讨GDNF在肺腺癌A549细胞株的表达及细胞活力变化.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取第1代培养后1 d,5 d两个时间点分别计数细胞;MTT检测两时间点细胞活力变化;用免疫组化检测两时间点GDNF免疫阳性细胞数量变化.并进行统计学分析.结果培养5 d组肺腺癌A549细胞株的细胞数量与1 d组相比,明显增加（P〈0.05）;5 d组的细胞活力较1d组明显下降（P〈0.05）;GDNF的表达百分数比较显示;5 d组亦较1 d组明显下降（P〈0.05）.结论体外培养肺腺癌A549细胞株随细胞增殖过程,活力逐渐下降,同时GDNF表达明显下调,提示细胞增殖和细胞活力不一定完全一致,GDNF减少可能与活力减少有关.     

肺腺癌A549细胞株GDNF、BDNF、NT3和NT4的表达

目的探讨神经营养因子在肺腺癌细胞株A549中的表达及临床意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取代培养后3 d的A549细胞,用免疫组化检测神经营养因子GDNF、BD-NF、NT3和NT4在肺腺癌细胞株A549的表达.结果神经营养因子GDNF、BDNF、NT3和NT4在部分肺腺癌细胞株A549中表达.结论神经营养因子GDNF、BDNF、NT3和NT4可能在肺癌的增殖中发挥作用.     

肺腺癌A549细胞株的体外生长特性及Brdu的表达研究

目的探讨肺腺癌A549细胞株的体外生长特性.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及Brdu表达;取第1代培养后1 d、11 d、13 d 3个时间点分别计数细胞;MTT检测3个时间点细胞活力变化,并进行统计学分析.结果 4个肺癌标记物免疫组化染色,其中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性;Brdu在肺腺癌细胞中部分表达;肺腺癌A549细胞株培养18d,13 d组的细胞数量与1 d组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;11 d组与1 d组的细胞活力无明显差异,13 d组的细胞活力较1 d组和11 d差异有统计学意义（P〈0.05）.结论肺腺癌A549细胞株在体外早期处于增殖状态,而20 d时细胞活力明显上升.     

宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株体外培养细胞活力的比较研究

目的比较宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株体外培养细胞活力.方法体外培养宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取传代培养后1 d、3 d、5 d 3个时间点分别计数细胞,MTT检测3时间点细胞活力变化,并进行统计学分析比较.结果宣威肺腺癌xwlc-05细胞株和肺腺癌A549细胞株各时间点比较,培养1 d、3 d、5 d组的细胞数量逐渐增加,差异有统计学意义（P〈0.05）;同时,宣威肺腺癌xwlc-05细胞株和肺腺癌A549细胞株3 d组细胞活力较1 d组增加,而5 d组的细胞活力较3 d组下降,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论不同肺腺癌细胞株体外增殖和细胞活力不完全一致.     

曲古抑菌素A对人肺腺癌细胞A549的生长抑制作用

目的 评价组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对肺腺癌细胞株A549的生长抑制作用.方法 分别以体外药物敏感实验、流式细胞术观察TSA处理肺腺癌细胞株A549后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化,Western blot检测p21及细胞外信号调节激酶(ERK)表达水平的变化.结果 TSA对肺腺癌细胞株A549具有生长抑制作用,其细胞毒性呈时间依赖性和浓度依赖性;TSA作用48及96h后,A549细胞凋亡、G0/G1期及G2/M期细胞显著增加(P<0.05);S期细胞显著下降(P<0.05).p21蛋白表达显著增强,磷酸化ERK蛋白表达显著下降.结论 HDAC抑制剂TSA对肺腺癌细胞株A549具有生长抑制作用,其机制可能是上调p21蛋白的表达,阻断ERK通路的活化,从而引起细胞周期的阻滞和细胞凋亡.     

肺腺癌A549细胞中Nestin的表达

目的探讨nestin在肺腺癌A549细胞中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及nestin表达.结果四个肺癌标记物中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性,nestin在肺腺癌A549细胞中部分细胞表达.结论肺癌细胞中存在部分神经干细胞的标记物nestin.     

巨噬细胞集落刺激因子对肺癌细胞株A549在体外的抑制作用

目的 观察巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor, M-CSF)对肺腺癌细胞株A549的作用.方法 观察肺腺癌A549细胞形态的变化.M-CSF对体外培养肺腺癌A549细胞的生长抑制作用采用MTT 检测法, 用流式细胞仪检测细胞DNA含量, 分析M-CSF对细胞周期的影响.采用RT-PCR检测M-CSF受体mRNA表达的变化.结果 M-CSF能显著抑制肺腺癌A549细胞的生长,并且呈浓度、时间依赖关系,在M-CSF浓度为10 ng/ml时有最大抑制效应.流式细胞仪检测分析显示M-CSF作用后G0/G1期细胞增加.RT-PCR显示经M-CSF作用后M-CSF受体的mRNA表达水平有所下降.结论 M-CSF对肺癌细胞株A549在体外有抑制作用.     

阿霉素对不同C-erbB-2表达水平肺腺癌细胞株生长的影响

目的:研究阿霉素对体外培养不同C-erbB-2表达水平肺腺癌细胞增殖能力和细胞周期的影响。方法:采用集落形成实验检测阿霉素对人肺腺癌细胞体外增殖能力的影响,采用SABC法检测阿霉素对体外培养人肺腺癌细胞系C-erbB-2表达水平的影响,采用流式细胞术检测阿霉素对体外培养肺腺癌细胞生长周期的影响。结果:阿霉素可显著抑制3株人肺腺癌细胞的生长,并可使SPC-A-1和LTEP-a-2肺腺癌细胞系C-erbB-2的表达下降,在SPC-A-1和LTEP-a-2肺腺癌细胞系,G2-M期百分率明显升高,而在A549肺腺癌细胞系则可见明显的凋亡峰。结论:阿霉素抑制肺腺癌细胞株SPC-A-1和LTEP-a-2的生长机制可能与降低C-erbB-2表达引起肺腺癌细胞G2阻滞有关,其抑制肺腺癌细胞株A549生长则可能与诱导细胞凋亡有关。     

电离辐射对人肺腺癌细胞株A549体外表达VEGF的影响

目的探讨电离辐射对人肺腺癌细胞体外表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法人肺腺癌细胞株A549，置RPMI 1640培养液培养，分别接受1、2、4、8Gy电离辐射，继续培养细胞，24、48h后收集细胞上清液，双抗体夹心ELISA法测定VEGF。表达水平。结果与阴性处理细胞比较，人肺腺癌细胞株A549体外接受不同剂量辐照后，VEGF表达明显增高，且具有剂量依赖性和时程依赖性。结论电离辐射能诱导肺腺癌细胞VEGF高表达，这可能是临床肿瘤抗辐射的机制之一。     

褪黑素对人肺腺癌A549细胞的影响及作用机制的研究

目的探讨褪黑素(MLT)对体外培养的人肺腺癌A549细胞迁移和侵袭能力的影响及作用机制。方法体外培养人肺腺癌A549细胞,通过不同浓度的褪黑素(0、0.1、0.5、1.0mmol/L)干预24、48、72h,通过划痕实验测定细胞迁移能力变化,Transwell侵袭小室测定实验检测MLT对A549细胞侵袭能力的影响,RT-PCR法检测MLT对细胞中NF-κBp65 mRNA表达的影响。结果褪黑素能够抑制人肺腺癌A549细胞迁移和侵袭能力,同时细胞内NF-κBp65mRNA量明显减少。结论褪黑素能够呈剂量依赖性抑制人肺腺癌A549细胞的迁移及侵袭,抑制核因子κBp65基因的转录是可能作用路径之一。     

长链非编码RNA MUC5B-AS1在人肺腺癌细胞系中的功能研究

目的 研究lncRNA MUC5B-AS1基因在肺腺癌中的表达情况及对肺腺癌细胞系生物学行为的影响.方法 利用RT-PCR、qRT-PCR检测肺腺癌细胞系中MUC5B-AS1基因的表达情况;构建MUC5B-AS1过表达载体,通过转染构建MUC5B-ASI过表达细胞系;采用CCK-8检测肺腺癌细胞的增殖情况;应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭的影响.结果 检测了MUC5B-AS1在4株肺腺癌细胞系(A549、SPCA1、H1975和H1299)和1株肺正常上皮细胞系(HBE)中的表达情况,发现MUC5 B-AS1在H1299细胞系中表达最低,同时A549细胞系表达最高;通过转染构建MUC5B-AS1过表达H1299、A549细胞系,利用qRT-PCR检测细胞系中MUC5B-AS1基因的表达,与对照组比较,MUC5B-AS1基因在H1299、A549细胞系均升高,且有统计学差异(P ＜0.05);CCK-8检测细胞增殖,与对照组比较过表达MUC5B-AS1对H1299、A549细胞生长并无影响(P＞0.05);应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭,过表达MUC5B-AS1促进H1299、A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MUC5B-AS1可能在肺癌的迁移和侵袭发挥重要作用,但对肺腺癌细胞的增殖能力没有显著影响.     

人耐药肺腺癌A549/DDP细胞株的差异蛋白质组学

目的：建立A549与A549/DDP两组细胞株的双向凝胶电泳图谱,识别并鉴定其差异表达的蛋白质,筛选肺腺癌耐药相关蛋白质。方法：收集A549与A549/DDP两组细胞株的总蛋白质,应用二维凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）进行分离应用,图像分析识别差异表达的蛋白质点,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质点。使用Western免疫印迹对其中4个蛋白质进行验证。结果：建立了A549与A549/DDP细胞蛋白质的2-DE图谱,识别了40个差异表达的蛋白质点,鉴定了23个差异表达蛋白质。Western免疫印迹证实了差异蛋白质热休克蛋白β1,膜联蛋白A4,丝切蛋白l和波形蛋白在A549与A549/DDP细胞中的差异表达水平。结论：23个差异表达蛋白质为研究肺腺癌耐药机制提供了实验依据。     

热休克蛋白在肺腺癌细胞及组织中的表达

目的:探讨热休克蛋白(heat shock proteins, HSPs)在肺腺癌A549细胞及组织中的表达情况.方法:分别以正常人支气管上皮(human bronchial epithelium,HBE)细胞和正常肺组织为对照,采用免疫印迹及RT-PCR的方法,从细胞水平和组织水平观察HSP86,HSP70及aB晶状体蛋白在肺腺癌A549细胞及组织中的表达情况.结果:与HBE细胞及正常肺组织比较,A549细胞及癌组织中HSP86,HSP70及aB晶状体蛋白的mRNA与蛋白质表达均显著增加(P＜0.05),其中以HSP70的增加最为显著(P＜0.01).结论:肺腺癌细胞及组织中HSPs的表达量高于HBE细胞及正常肺组织,其中以HSP70的增加最为显著.     

CA916798基因通过PI3K/AKT/mTOR通路参与顺铂耐药的机制分析

摘要：目的观察阻断PI3K/AKT/mTOR通路对人肺腺癌细胞A549 及多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP内CA916798 基因
mRNA表达的影响。方法以雷帕霉素、LY294002分别作用于人肺腺癌细胞A549和多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP,检测
顺铂作用后细胞生长及增殖情况,RT-PCR 检测CA916798 基因mRNA表达水平。结果以雷帕霉素和LY294002 分别阻断
A549、A549/CDDP细胞的PI3K/AKT/mTOR通路后,细胞对于顺铂的耐药性均显著下降（P<0.05）,CA916798基因的表达均显
著下调（P<0.05）。结论CA916798基因位于PI3K/AKT/mTOR通路下游,可能是CA916798诱导肺癌顺铂耐药的机制之一。
     

不同放射敏感性肺腺癌细胞株中DNA-PKcs蛋白的表达情况比较

目的 通过检测DNA-PKcs在肺腺癌细胞中的表达情况,探讨其与放射敏感性的关系.方法 成克隆实验分别测定肺腺癌细胞株A549、H1299照射后的剂量.存活曲线,Western blotting及DNA-PK活性分析法检测两株细胞中DNA-Pkcs的含量与活性.分析放射敏感性与DNA-PKcs的关系.结果 成克隆实验结果显示:肺腺癌细胞H1299较A549放射更敏感,SF2分别为A549:0.7412,H1299:0.2473.Western-blot显示A549和H1299积分光密度比值分别为:3.29±0.44、0.50±0.17,A549中DNA-PKcs的表达更高(t=10.37,P<0.001).DNA-PKcs活性检测结果为A549:8.29±1.37.H1299:2.47±1.09(t=5.76,P=0.005).结论 放射敏感性不同的肺腺癌细胞株中DNA-Pkcs的表达不同.提示DNA-PKcs可能是影响肺腺癌细胞放射敏感性的重要因素.

Abstract：

Objective To investigate DNA-dependent protein kinase catalytic subunit (DNA-PKcs) content and activity in lung adenocarcinoma cell lines and its correlation with radiosensitivity. Methods The content and activity of DNA-PKcs were analyzed in two lung adenocarcinoma cell lines A549 and H1299 by Western blotting and the Signa TECT DNA-PK assay kit. The dose-survival relationship for two cell lines was analyzed using clonogenic formation assay. Results A549 was more radiosensitive than H1299. The survival fractions at 2 Gy (SF2) were 0.7412 in A549 cell line and 0.2473 in H1299 cell line. The content of DNA-PKcs was significantly higher in A549 cells than in H1299 cells (t=10.37, P<0.001). The integrated optical densities were 3.29±0.44 in A549 cells and 0.50±0.17 in H1299 cells. DNA-PKcs activities in A549 and H1299 cells were 8.29±1.37 and 2.47±1.09, respectively, showing a significant difference between them (t=5.76, P=0.005). Conclusion DNA-PKcs is an important factor to affect the radiosensitivity of lung adenocarcinoma cell lines.     

三氧化二砷对人肺腺癌A-549细胞株增殖及c-Myc基因表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌A549细胞株的生长增殖、细胞周期、凋亡等方面的影响,并初步探讨其机制。方法选用不同浓度As2O3处理人肺腺癌A549细胞株,以MTT比色法检测细胞生长增殖的抑制情况;用流式细胞术测定细胞周期、凋亡率;以免疫组织化学法分析不同浓度As2O3对c-Myc基因表达的影响。结果 As2O3以时间和浓度依赖的方式抑制人肺腺癌A-549细胞的增殖,并能诱导细胞凋亡。不同浓度As2O3处理组可调控细胞周期分别发生G2/M期阻滞和S期阻滞,并下调c-Myc基因表达。结论三氧化二砷对人肺腺癌细胞株A-549的生长、增殖有明显抑制作用,其机制可能与细胞周期阻滞和抑制c-Myc基因的表达和诱导细胞凋亡有关。     

CTR1和ATP7B在人肺腺癌细胞A549的表达及其与顺铂耐药的关系

目的  探讨人肺腺癌细胞株A549和肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP对顺铂的耐药机制。方法  利用噻唑蓝法检测顺铂对A549/DDP及其亲代细胞株的细胞毒作用和生长曲线的影响,探讨A549/DDP细胞株凋亡敏感性的变化规律。采用Western blot检测该细胞株铜离子转运蛋白1（CTR1）、铜离子转运磷酸化ATP酶（ATP7B）及聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）剪切蛋白表达,分析A549细胞对顺铂耐药与CTR1、ATP7B及PARP剪切蛋白表达量的相关性。结果  A549/DDP较其亲代细胞株对顺铂引起的细胞毒性和凋亡敏感性下降;较其亲代细胞株A549/DDP中ATP7B表达增加,CTR1表达降低。结论  人肺腺癌细胞株A549对顺铂耐药的产生与细胞凋亡敏感性降低有关,且细胞内ATP7B表达增加,CTR1表达降低,或可作为细胞对顺铂的增敏靶点。

     

抑制survivin基因表达对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究survivin基因与肺腺癌的关系,探讨survivin对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法合成抑制survivin基因的siRNA,通过脂质体转染到肺腺癌A549细胞中,荧光倒置显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测各组细胞增殖和凋亡指数,Western blot检测survivin编码表达的蛋白,RT-PCR检测survivin mRNA的表达。结果抑制survivin在肺腺癌A549细胞中的表达后,能够抑制A549细胞增殖,诱导细胞的凋亡,survivin基因编码表达的蛋白明显减少。结论应用RNAi抑制survivin基因,可以抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡。survivin能作为治疗肺腺癌的一个潜在的基因靶点。