SALL4基因沉默对MCF-7/A细胞增殖和化疗敏感性的影响

[目的]探讨沉默SALL4基因对乳腺癌耐药细胞MCF-7/A的增殖及化疗敏感性的影响.[方法] qRT-PCR和Western Blot实验检测MCF-7、MCF-7/A细胞内SALL4表达水平,运用慢病毒包装shRNA方法沉默MCF-7/A细胞的SALL4基因;实验组(Lv-shSALL4)、阴性对照组(Lv-shNC)和空白对照组(CON).CCK8法、克隆形成实验检测SALL4沉默对细胞增殖能力的影响;CCK8法检测表柔比星处理细胞24h和48h的半数抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测细胞凋亡.[结果] SALL4在MCF-7/A细胞中的表达水平显著高于MCF-7 (P＜0.05).MCF-7/A细胞中SALL4基因被成功沉默,病毒感染MCF-7/A细胞72h后,细胞感染效率约95％,沉默SALI4基因后MCF-7/A细胞内SALL4 mRNA及蛋白表达均明显降低(P＜0.05).沉默MCF-7/A细胞的SALL4基因,显著抑制了细胞的增殖能力(P＜0.05),增强了细胞对表柔比星的敏感性;表柔比星24h和48h的IC50均明显降低(P＜0.05),并且表柔比星诱导的细胞凋亡增加(P＜0.05).[结论]沉默SALL4基因能够抑制乳腺癌耐药细胞MCF-7/A的增殖,增强耐药细胞对表柔比星的敏感性.SALL4基因沉默可能是乳腺癌治疗的新靶点.     

Bcl-2在乳腺癌中的表达及其与肿瘤多药耐药关系的研究

目的研究Bcl-2在乳腺癌细胞中的表达及与乳腺癌多药耐药的关系。方法用不同浓度的丝裂霉素（mitomycin,MMC）处理乳腺癌细胞株MCF-7 24、48、72小时,检测细胞抑制率。根据预实验结果,用0.5、1、2 mg/L浓度的MMC分别作用于乳腺癌细胞24小时,待细胞再次生长至初接种浓度时再次用药,每2次的时间间隔为1个周期,共7个化疗周期。MTT法检测细胞毒作用,流式细胞术定量分析Bcl-2的表达。结果MMC抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖,其作用随着MMC浓度增加和时间延长而增加。取小剂量的MMC 0.5、1、2 mg/L作用细胞株7个化疗周期,化疗周期逐渐缩短,Bcl-2表达逐渐升高,差异有统计学意义。结论Bcl-2与乳腺癌细胞多药耐药的发生、发展密切相关,Bcl-2表达的升高能降低乳腺癌细胞的的化疗敏感性。     

PTPRZ1通过调控PI3K/Akt通路促进乳腺癌细胞增殖和多西他赛耐药

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶受体Z1型(protein tyrosine phosphatase receptor type Z1,PTPRZ1)对人乳腺癌MCF-7细胞多西他赛耐药性的影响及其作用机制。方法:将MCF-7细胞暴露于逐渐增强浓度的多西他赛中建立对多西他赛耐药的乳腺癌细胞（MCF-7/Doc）。采用CCK-8法分别检测MCF-7和MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性。qRT-PCR和Western blot检测细胞中PTPRZ1 mRNA及蛋白表达水平。克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式实验检测细胞凋亡情况。最后采用Western blot检测PTPRZ1调控乳腺癌化疗敏感性的作用机制。结果:CCK-8实验表明成功构建了乳腺癌多西他赛耐药细胞株MCF-7/Doc,克隆形成实验表明MCF-7/Doc细胞增殖能力显著高于亲本MCF-7细胞（P＜0.05）;MCF-7/Doc细胞中,PTPRZ1 mRNA及蛋白水平均显著上调（P＜0.05）。过表达PTPRZ1能显著增强MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性和增殖能力,显著抑制细胞凋亡（P＜0.05）;敲减PTPRZ1能显著降低MCF-7/Doc细胞对多西他赛的耐药性,并能显著诱导细胞凋亡（P＜0.05）。Western blot结果显示,PTPRZ1能够激活PI3K/Akt信号通路。结论:PTPRZ1通过介导PI3K/Akt信号通路促进乳腺癌对多西他赛的耐药性。     

Med19基因敲减增加乳腺癌细胞化疗敏感性及其可能的机制

目的:研究中介体(mediator,Med) 19对乳腺癌化疗敏感性的影响并分析其分子机制.方法:选用多柔比星(adriamycin,ADM)耐药的人乳腺癌细胞MCF-7/ADM和亲本细胞MCF-7(NC组),采用慢病毒载体介导RNA干扰方法构建Med9稳定低表达的MCF-7/ADM与MCF-7细胞株(KD组),并用Real-time PCR和Western blotting方法验证干扰效果.CCK-8法检测慢病毒介导的Med19敲减前后两种细胞对ADM、顺铂(cisplatin,DDP)和紫杉醇(taxinol,TAX)药物敏感性的变化.Real-time PCR和Western blotting检测Med19敲减对多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1)和细胞凋亡基因Bcl2、Bax及Caspase-3、active Caspase-3的表达的影响.流式细胞术检测敲减Med19及ADM处理对细胞凋亡的影响.结果:与MCF-7相比,MCF-7/ADM细胞对ADM、DDP和TAX均具有耐药性.成功构建Med19稳定低表达的MCF-7/ADM与MCF-7细胞株,并且其对ADM、DDP、TAX的敏感性增加,药物作用IC50显著降低(均P＜0.05).MCF-7/ADM细胞Med19 mRNA和蛋白表达显著高于MCF-7细胞,Med19的敲减可降低MCF-7/ADM细胞中MDR1 mRNA与蛋白表达水平(均P＜0.05)并可增加MCF-7/ADM及MCF-7细胞中凋亡相关active Caspase-3、Bax的蛋白表达,降低Bc12的蛋白表达(均P＜0.05).此外,与NC及NC+ ADM组相比,KD组及KD+ ADM组凋亡水平显著增加(均P＜0.05).结论:Med19高表达参与乳腺癌化疗耐药,其机制可能与Med19调节MDR1的表达并影响细胞凋亡有关.     

miR-15a诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的作用机制

目的 探讨miR-15a在诱导乳腺癌细胞凋亡中的作用及机制.方法 采用定量聚合酶链反应检测人乳腺上皮细胞株MCF-10A和乳腺癌细胞株MCF-7中miR-15a的表达水平.采用软件预测miR-15a的靶点,并通过荧光素酶报告基因系统验证.将miR-15a经脂质体法转染MCF-7细胞,采用Western blot法检测Bcl-2蛋白的表达,并采用流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡率.结果 miR-15a在乳腺癌细胞株MCF-7中的表达明显低于乳腺上皮细胞株MCF-10A (0.253∶1,P＜0.0001).miR-15a可显著抑制抗凋亡基因Bcl-2 3′-UTR荧光素酶报告基因的表达(P＜0.05).与未转染组(对照组)相比,miR-15a转染组MCF-7细胞中Bcl-2的表达水平显著下降,凋亡明显增加(P＜0.05).结论 miR-15a 作为一个潜在的抑癌基因,可通过靶向于Bcl-2诱导乳腺癌细胞MCF-7发生凋亡,其可为乳腺癌的临床治疗提供新的靶点和理论依据.     

细胞周期蛋白E小干扰RNA靶向调控乳腺癌细胞的生长

目的 研究乳腺癌细胞中细胞周期蛋白E(cyelin E)对乳腺癌细胞肿瘤生物学特征的影响.方法 用带有cyclin E小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体pEGFP/CCNE2转染乳腺痛细胞系MCF-7.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别在RNA水平和蛋白水平检测siRNA对细胞内cyclin E表达水平的影响,CCK-8方法检测转染后细胞株生长增殖能力以及对化疗药物的敏感性,流式细胞仪检测细胞周期的变化,裸鼠移植瘤成瘤实验检测转染后细胞成瘤能力的变化.结果 pEGFP/CCNE2转染后,MCF-7细胞内cyclin E的表达受到抑制,cyclin E mRNA相对表达水平为0.23±0.05,蛋白相对表达水平为0.24±0.05;细胞的生长增殖能力下降,抑制率为68.56%±0.08%,对化疗药物的敏感性增加;细胞被大量阻滞在G1期,G1期细胞占77.38%.细胞的成瘤能力降低,移植瘤体积缩小.结论 抑制乳腺癌细胞中cyclin E的表达能够抑制乳腺癌细胞的生长、分化和增殖,提高肿瘤对化疗药物的敏感性.     

乳腺癌多药耐药DEDD作用及机制研究

目的 死亡效应结构域DNA结合蛋白(death effector domain DNA-binging protein,DEDD)可抑制乳腺癌的生长和转移,但在乳腺癌多药耐药中的作用尚不明确.本研究将探讨DEDD在人乳腺癌多药耐药中的作用及机制.方法 通过转染DEDD-shRNA建立稳定敲低DEDD表达的MCF-7人乳腺癌细胞株,MTS实验检测多柔比星、紫杉醇对MCF-7 WT(Wild type,野生型)、MCF-7 control shRNA和MCF-7 DEDD-shRNA细胞活力的影响,Annexin-V和碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染后流式细胞仪检测细胞凋亡.蛋白质印迹法检测乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)在药物干预后的蛋白表达水平.结果 多柔比星干预后,半数抑制浓度IC50的多因素方差分析结果显示,不同处理(F=89.49,P＜0.001)、不同时间(F=50.81,P＜0.001)组间比较差异有统计学意义.多柔比星干预24或48 h后,MCF-7 DEDD-shRNA的半数抑制浓度IC50分别为(0.97±0.15)和(0.62±0.09) μmol/L,明显高于MCF-7 WT(0.46±0.05)和(0.26±0.03) μmol/L和MCF-7 control shRNA细胞(0.39±0.05)和(0.25±0.03)μmol/L,P＜0.001.紫杉醇干预后,半数抑制浓度IC50的多因素方差分析结果显示,不同处理(F=15.94,P＜0.001)、不同时间组间(F=129.70,P＜0.001)比较差异有统计学意义.紫杉醇干预24或48 h后,MCF-7 DEDD-shRNA的半数抑制浓度IC50为(16.74±2.26)和(9.88±1.47) μmol/L,明显高于MCF-7 WT(13.39±1.44)和(7.69±0.92) μmol/L(P=0.001)和MCF-7 control shRNA细胞(12.58±1.15)和(7.17±1.12) μmol/L(P＜0.001).多柔比星干预后24 h后流式细胞凋亡结果显示,不同处理(F=131.46,P＜0.001)、不同浓度组间(F=160.95,P＜0.001)比较差异有统计学意义.正常培养状态下,MCF-7 control shRNA细胞和MCF-7 DEDD-shRNA细胞的凋亡率分别为(14.32±1.47)％和(11.58±1.63)％,而给予0.5μmol/L和1 μmol/L多柔比星作用24 h后,M[CF-7DEDD-shRNA细胞的凋亡率分别为(21.62±1.97)％和(24.39±2.36)％,明显低于MCF-7 control shRNA细的(36.26±1.87)％和(38.23±1.46)％,P＜0.001.同样,紫杉醇干预后24 h,不同处理(F=124.81,P＜0.001)、不同浓度组问(F=172.56,P＜0.001)细胞凋亡率比较差异有统计学意义.给予9.37和18.74 μmol/L紫杉醇作用24 h后,MCF-7DEDD-shRNA细胞的凋亡率分别为(30.26±1.63)％和(32.18±2.16)％,明显低于MCF-7 control shRNA组的(53.84±2.17)％和(58.27±2.16)％,P＜0.001.多柔比星作用后不同时间BCRP蛋白质印迹检测统计分析结果显示,不同处理(F=14.67,P＜0.001)、不同时间(F=6.39,P=0.006)组间BCRP蛋白表达比较差异有统计学意义.给予0.5 μmol/L多柔比星作用24 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为0.87±0.04、1.06±0.02和5.25±0.18.MCF-7 DEDD-shRNA细胞组BCRP蛋白的表达水平显著高于MCF-7 WT和MCF-7 control shRNA细胞组,P＜0.001.多柔比星作用48 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为1.06±0.01、0.97±0.04和2.98±0.13.MCF-7 DEDD-shRNA细胞组BCRP蛋白的表达水平出现回落,但仍显著高于MCF-7 WT和MCF-7 control shRNA细胞组,P＜0.001.同样,紫杉醇作用后不同时间BCRP蛋白质印迹检测统计分析结果显示,不同处理(F=7.26,P=0.004)、不同时间(F=8.32,P=0.002)组间BCRP蛋白表达比较差异有统计学意义.给予9.37 μmol/L紫杉醇作用24 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为0.81±0.05、2.25±0.10和1.78±0.14.其中MCF-7 control shRNA组细胞BCRP表达水平高于MCF-7 WT (P＜0.001)和MCF-7 DEDD-shRNA (P=0.002)组.而紫杉醇作用48 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为0.73±0.04、1.73±0.05和3.12±0.12,MCF-7 DEDD-shRNA细胞组BCRP蛋白的表达水平继续增高,且显著高于MCF-7 WT和MCF-7 control shRNA细胞组,P＜0.001.结论 敲低DEDD表达可增强乳腺癌细胞的抗肿瘤药耐药性,BCRP的表达增加可能是低表达DEDD乳腺癌细胞多药耐药的机制之一.     

米非司酮逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR耐多柔比星机制的探讨

目的 探讨米非司酮对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR的逆转耐药作用.方法 以亲本乳腺癌细胞MCF-7和耐多柔比星(阿霉素)乳腺癌细胞MCF-7/ADR为研究对象,分别应用MIF进行干预后,流式细胞仪检测MIF作用前后瘤细胞P-gp的表达、细胞内阿霉素蓄积量的变化以及细胞周期的分布.结果 (1)10 μmol/L MIF作用72小时后,MCF-7/ADR细胞P-gp表达率[(23.21±1.80)％]明显高于MCF-7细胞[(19.37±2.37)％,P＜0.05].(2)5 μmol/L ADR处理后,MCF-7/ADR细胞内ADR蓄积量为(47.13±4.11)％,低于MCF-7细胞[(60.24±2.61)％,P＜0.05].(3) 10 μmol/L MIF联合5 μmol/L ADR处理细胞,MCF-7/ADR和MCF-7细胞内ADR的蓄积量分别为(82.72±2.42)％及(88.63±2.75)％ (P ＞0.05);但均较单用ADR时升高(均P＜0.01).(4) MIF作用前,MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例[(77.21±3.10)％]高于MCF-7细胞G0/G1期比例[(59.05±2.16)％,P＜0.05];MCF-7/ADR细胞S期比例明显低于MCF-7细胞(P＜0.05).经10 μmol/L MIF作用后,MCF-7细胞G0/G1期比例(75.28±2.53)％较MIF作用前明显升高(P＜0.05);S期比例则较MIF作用前显著降低(P＜0.05);MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例和S期比例分别为(80.13±2.72)％及(13.52±1.03)％,与MIF作用前比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);两种瘤细胞的G2/M期比例与MIF作用无关(P＞0.05).结论 (1)MIF可以逆转MCF-7/ADR的耐药性,其作用机制与降低细胞P-gp含量、增加细胞内ADR蓄积量有关.(2) 10 μmol/L浓度的MIF对MCF-7/ADR细胞周期分布影响不大.     

5,4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮体外抗人类乳腺癌细胞作用

目的 探讨金雀异黄素(Gen)衍生物5,4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮(DOdFMG)体外抗人类乳腺癌细胞的作用.方法 平皿克隆形成法检测DOdFMG对人类乳腺癌MCF-7细胞抑制生长和增生作用,琼脂糖凝胶电泳法观测DOdFMG诱导MCF-7细胞凋亡作用,Western blotting 法测定DOdFMG对MCF-7细胞PTEN、pAkt、caspase-3蛋白的表达及活性.结果 DOdFMG抑制MCF-7细胞生长,呈剂量依赖性,比Gen具有更强的抗肿瘤活性,DOdFMG能诱导MCF-7细胞凋亡,DOdFMG处理的MCF-7细胞PTEN蛋白及caspase-3蛋白表达上调,pAkt蛋白表达下调,呈时间剂量依赖性.结论 DOdFMG具有抗人类乳腺癌MCF-7细胞的作用,其机制可能与抑制PKB/Akt通路的信号传导、激活PTEN及caspase-3有关,是一种新型治疗乳腺癌的候选药物.     

他莫昔芬对转染ERβ1基因的MCF-7细胞生长特性的影响

目的研究在不同处理因子作用下,外源基因ERβ1的表达对MCF-7乳腺癌细胞系生长特性的影响。方法利用脂质体转染方法将ERβ1真核表达载体pcDNA3.1-EGFPERβ1导入MCF-7乳腺癌细胞系。采用Western blot方法检测转染细胞中ERβ1的蛋白表达水平,筛选阳性克隆。以亲本细胞MCF-7为对照,分别在雌激素和雌激素受体拮抗剂他莫昔芬作用下观察细胞的生长特点。结果在转染ERβ1基因的MCF-7细胞系中,Western blot检测证实ERβ1的蛋白表达水平显著增高。在无处理因子的情况下,外源基因ERβ1在MCF-7细胞系中的表达能抑制细胞生长。与亲本细胞MCF-7细胞相比,转染ERβ1的MCF-7细胞对雌激素的敏感性下降,但对他莫昔芬的敏感性无明显变化。结论外源性ERβ1基因在MCF-7乳腺癌细胞中的稳定表达不增加对他莫昔芬的耐药性,但使之对雌激素的敏感性下降。     

survivin—siRNA联合化疗药物对乳腺癌MCF-7细胞凋亡及逆转耐药的研究

目的观察靶向survivin的siRNA联合紫杉醇和表柔比星对乳腺癌MCF-7细胞凋亡及逆转耐药的影响。方法构建靶向survivin的siRNA表达质粒,转染乳腺癌MCF。7细胞,荧光定量聚合酶链反应（PCR）,Westernblot技术检测转染前后survivin基因表达的变化,CCK．8法检测靶向survivin的siRNA联合紫杉醇、表柔比星对MCF-7细胞药物敏感性的影响,利用流式细胞术检测细胞凋亡作用。结果survivin—siRNA-2能有效抑制survivinmRNA（0．30±0．03）和蛋白的表达（0．37±0．09）（P〈0．05）;紫杉醇[24、48h抑制率分别为（38．5±4．0）％、（41．7±6．3）％]、表柔比星[24、48h抑制率分别为（37．0±8．6）％、（40．6±12．1）％1均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导部分细胞凋亡;当与survivin—siRNA联合时上述作用显著加强f紫杉醇24、48h抑制率分别为（76．0±2．9）％、（85．1±4．0）％;表柔比星24、48h抑制率分别为（74．6±5．6）％、（82．5±4．8）％1（P〈0．05）,并且细胞抑制率呈现时间、剂量依赖性。结论利用RNA干扰阻断survivin基因表达同时联合相应化疗药物可以显著增强MCF-7细胞对药物敏感性并促进其凋亡,该方法在乳腺癌治疗中具有潜在的临床应用价值。     

抑制MTAl对雌二醇调控ER阳性乳腺癌细胞MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的：观察转移相关蛋白1（ Metastasis associated protein 1,MTA1）在雌激素调控雌激素受体（Estrogen Recepto,ER）阳性乳腺癌细胞基质金属蛋白酶－9（Matrix metalloproteinase －9,MMP－9）、基质金属蛋白酶组织抑制因子（ Tissue inhibitor of metalprotease －1,TIMP－1）中的可能作用。方法采用慢病毒转染MTA1－shRNA的方法建立特异性抑制MTA1表达的MCF－7模式细胞株。采用10 nM雌二醇（17β－estradiol,E2）处理细胞48 h,Real－time PCR、Western blot分别检测MMP－9、TIMP－1 mRNA与蛋白表达。结果 MTA1－shRNA最大抑制效率为84．9％,提示成功建立了抑制MTA1表达的MCF－7模式细胞株（MCF－7MTA1－shRNA）。 MCF－7野生株（MCF－7WT）在E2处理后MMP－9 mRNA和蛋白表达水平分别上升了46％（P＜0．05）和37％（P＜0．05）,TIMP－1 mRNA和蛋白表达水平分别降低了32．3％（P＜0．05）和18．2％（P＜0．05）;相对MCF－7WT,MCF－7MTA1－shRNA MMP－9 mRNA和蛋白表达水平分别降低了42．9％（P＜0．05）和36．7％（P＜0．05）,TIMP－1 mRNA和蛋白表达水平未见显著变化;采用E2处理MCF－7MTA1－shRNA后,MMP－9 mRNA和蛋白表达水平未见明显变化,TIMP－1 mRNA和蛋白表达水平分别降低了25．4％（P＜0．05）和32．2％（P＜0．05）。结论 MTA1在雌激素上调ER阳性乳腺癌细胞MMP－9表达的信号转导通路中可能发挥重要作用,但未参与雌激素调控ER阳性乳腺癌细胞TIMP－1表达的信号转导通路。     

新藤黄酸抑制人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的实验研究

目的 探讨新藤黄酸对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖抑制情况及其作用机制。方法 0.5～20μg／ml新藤黄酸处理MCF-7细胞72h,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测MCF 7细胞增殖抑制率;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡率;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测线粒体跨膜电位变化;Western blotting检测Fas、FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果 0.5～20μg／ml新藤黄酸均能够抑制MCF-7细胞增殖,且增殖抑制作用呈浓度依赖,半数抑制浓度（IC₅₀）为1763 μg／ml。0.5～3.0μg／ml新藤黄酸即可诱导MCF-7细胞凋亡,凋亡作用呈时间和浓度依赖。0.5μg／ml新藤黄酸处理MCF 7细胞48h后早期凋亡率为3.7％,总凋亡率为7.2％,72h早期凋亡率为6.7％,总凋亡率为13.7％;3μg／ml新藤黄酸48h后早期凋亡率为69.5％,总凋亡率为71.7％,72h早期凋亡率为76.9％,总凋亡率为81.5％。0.5、1.0、1.5 μg／ml新藤黄酸导致线粒体跨膜电位下降的细胞比例升高,促凋亡相关蛋白 FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平呈浓度依赖性上升,Fas和Bax蛋白表达水平变化不大,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平则呈浓度依赖性下降。结论 新藤黄酸通过诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡,抑制细胞增殖,其诱导凋亡的分子机制与死亡受体及线粒体凋亡途径密切相关。     

miR-155对乳腺癌细胞增殖、凋亡及耐药蛋白表达的调控作用研究

目的 探讨microRNA-155（miR-155）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及乳腺癌耐药相关蛋白表达的调控作用。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测MCF-7细胞和人乳腺正常上皮细胞中miR-155的表达水平。将MCF-7细胞分为4组：对照组、空转染组、抑制（转染miR-155 inhibitor）组和过表达（转染miR-155 mimics）组,采用qRT-PCR检测转染24、48、72及96 h后各组的转染效果,噻唑蓝（MTT）法检测各组转染24、48、72及96 h的增殖能力,采用流式细胞仪PI／Annexin V双染色法检测各组转染24、48 h后的凋亡率,Western blotting法检测各组转染48 h后乳腺癌耐药蛋白（BCRP）、P-糖蛋白（P-gp）及多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达水平。结果 乳腺癌MCF-7细胞中的miR 155水平高于人乳腺正常上皮细胞（P＜0.05）,且转染miR-155 inhibitor或mimics可呈时间依赖的方式降低或升高MCF-7细胞的miR-155水平（P＜0.05）。与对照组相比,抑制组转染后的细胞增殖率及BCRP、P-gp和MRP1的表达水平均降低,凋亡率升高（P＜0.05）;而过表达组的细胞增殖率及BCRP、P gp和MRP1的表达水平均升高,凋亡率降低（P＜0.05）。结论 MCF-7细胞中miR-155呈高表达,下调miR-155表达可抑制其增殖及耐药相关蛋白的表达,同时诱导凋亡。     

MicroRNA-21靶向PDCD4对胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨MicroRNA-21对胃癌细胞中PDCD4表达、细胞增殖与凋亡的影响。方法将MGC-803人胃癌细胞分为5组,分别为空白对照组(不转染)、阴性对照组(转染不相关siRNA)、mir 21组(转染miRNA-21质粒)、mir 21 Inhibitor组(转染miRNA-21抑制物)、PDCD4 siRNA组(转染PDCD4 siRNA)。分别于转染后36、48、72小时收集细胞,采用实时定量PCR及细胞爬片免疫组织化学检测细胞中PDCD4基因及蛋白水平,运用MTS法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与空白、阴性对照组比较,mir 21组PDCD4表达量下降,细胞增殖能力增强(均P<0.05);mir 21 Inhibitor组PDCD4表达量增多(P<0.05),细胞增殖受到抑制(P<0.01),细胞总凋亡比例增高(P<0.05);PDCD4 siRNA组PDCD4表达几乎完全被抑制,细胞增殖能力增强(均P<0.01),36小时时细胞总凋亡比例减少(P<0.05)。而阴性和空白对照组比较,细胞PDCD4表达量、细胞增殖与凋亡都无明显差异(P>0.05)。结论 MicroRNA-21能靶向调控PDCD4,抑制胃癌细胞MicroRNA-21的表达后可上调PDCD4表达,发挥抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡的作用。     

丁酸钠对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖及p27^kip1蛋白表达影响的研究

目的：通过观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histon—deacetylase inhibitors，HDACIs）丁酸钠（sodium butyrate，NaB）对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的增殖影响以及p27^kip1蛋白表达改变，探讨NaB调控乳腺癌细胞增殖的分子机制。方法：乳腺癌MCF-7细胞经不同浓度NaB作用后，相差显微镜观察细胞形态变化和细胞增殖情况，流式细胞仪分析细胞周期分布，免疫组化检测p27^kip1蛋白表达。结果：NaB对MCF-7细胞有显著的增殖抑制作用，呈时间剂量依赖性，处理后的MCF-7细胞出现凋亡形态变化；细胞周期阻滞于（G0／G1期，NaB2 mmol／L组G0／G1，期达（62．2±2．2）％，4mmol／L组G0/G1，期达（78．1±3．8）％，空白组G0／C0期达（53．1±2．4）％，P〈0．05；p27蛋白表达水平上调。结论：NaB可抑制乳腺癌细胞的生长，该作用可能与p27蛋白表达增加有关。     

甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的：研究甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：采用MTT法检测甲异靛对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制;流式细胞仪测定细胞凋亡率;光学显微镜观察细胞形态的变化;westernblot法测定caspase-3、PARP及bcl-2表达。结果：甲异靛能明显抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖。甲异靛诱导MCF-7细胞凋亡,呈现典型细胞凋亡的形态变化,并呈时间和剂量依赖性,凋亡率最高可达（68.40±4.87）%,在细胞凋亡过程中出现PARP分子断裂和bcl-2下调,未检测到caspase-3。结论：甲异靛能诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡抑制细胞增殖,其发生机制可能与下调bcl-2有关。     

iRNA沉默Chk1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及其作用机制的探讨

目的 探讨siRNA沉默检测点激酶1（Chk1）基因对乳腺癌细胞MCF 7增殖和周期的影响及其作用机制。方法 采用RNAi技术将乳腺癌细胞MCF 7中Chk1基因沉默,用Western blotting检测转染前后MCF 7细胞中Chk1蛋白表达情况;采用MTT比色法和流式细胞术分析Chk1基因沉默对乳腺癌细胞MCF 7增殖和周期的影响。结果 Chk1 siRNA转染后,MCF-7细胞中Chk1蛋白表达下降约82％,明显低于未转染组和脂质体转染组（P＜0.05）。Chk1 siRNA转染组转染48h的MCF-7细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为44.7％,明显高于脂质体转染组的5.26% （P＜0.05）。流式细胞仪检测显示,Chk1 siRNA转染组G2／M期比例为（11.3±0.7）％,明显低于未转染组（44.2±1.9）％和脂质体转染组（45.3±2.1）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论 siRNA沉默Chk1基因可明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖,并且其抑制增殖作用与减弱G2／M期阻滞有关。     

miR-490-3p逆转MCF-7／ADM细胞对阿霉素耐药性的影响

【摘 要】目的 探讨miR-490-3p在阿霉素（ADM）耐药乳腺癌细胞系MCF-7／ADM中的表达情况及其对MCF-7／ADM细胞增殖、凋亡和ADM耐药的影响。方法 以野生型人乳腺癌细胞系MCF-7及其耐药型细胞系MCF-7／ADM为研究对象,用实时荧光定量PCR（qPCR）比较两种细胞中miR-490-3p的表达水平,将miR-490-3p的过表达载体pcDNA1（+）miR-490-3p瞬时转染至MCF-7／ADM细胞（过表达组）后采用qPCR检测转染效果,同时设pcDNA3.1（-）空载体对照组和空白对照组;采用MTT法测定转染pcDNA3.1（+）miR-490-3p对各组MCF-7/ADM细胞增殖能力的影响,测定ADM对MCF-7／ADM细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度（IC50）及逆转倍数以评价对ADM敏感性的变化;分别于瞬时转染48 h后用Annexin V／FITC流式细胞术检测各组MCF-7/ADM细胞的凋亡率,Western blotting检测耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）,乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达,荧光分光光度计检测胞内ADM药物浓度,流式细胞仪检测P-gp活性。结果 MCF-7／ADM细胞中miR-490-3p的表达水平为0.24±0.07,显著低于野生型MCF-7细胞的1.02±0.03（P＜0.05）;过表达组瞬时转染24～96 h的miR-490-3p水平持续升高,均高于空载体对照组和空白对照组（P＜0.05）;过表达组的增殖抑制率随转染时间的延长而增加,转染24、48、72和96 h的增殖抑制率依次为（17.52±1.87）％、（31.67±2.79）％、（45.09±1.88）％和（61.82±2.52）％,高于空载体对照组（P＜0.05）;ADM对过表达组的IC50值为（11.27±2.34）μg／ml,低于空白对照组的和空载体对照组（P＜0.05）,且过表达组相对于空白对照组和空载体对照组的逆转倍数分别为3.35倍和3.39倍;与其余两组相比,过表达组的MCF-7/ADM细胞早、晚期凋亡率和细胞内药物浓度均升高,P-gp、BCRP和MRP1表达及P-gp活性均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 上调miR-490-3p可逆转MCF-7／ADM细胞对ADM的耐药性,可能通过降低耐药蛋白表达及抑制P-gp活性有关,且升高其水平可抑制细胞增殖并诱导凋亡。     

塞来昔布逆转MCF-7/Adr细胞多药耐药及其机制探讨

目的观察环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对肿瘤多药耐药（MDR）的逆转作用,并探讨其初步作用机制。方法在乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adr中,应用MTT方法检测塞来昔布对多柔比星（阿霉素,DOX）的耐药逆转倍数;RT-PCR及Western blot方法检测基因及蛋白的变化;流式细胞术（FCM）检测细胞膜P-gp的表达、功能、细胞周期和凋亡。结果塞来昔布作用24小时后,MCF-7/Adr细胞对DOX的敏感性明显增加,浓度为10μmol/L及20μmol/L时,耐药逆转倍数分别为1.82和3.80,呈现剂量依赖性。COX-2、mdr1、c-Jun、YB-1、survivin等在基因和蛋白水平明显下调（P〈0.01）,NF-κB无明显差异（P〉0.05）;20μmol/L作用24小时,P-gp的功能受抑制;G0＋G1期细胞增多,S期细胞减少（P〈0.05）,凋亡率明显增高（P〈0.05）。结论选择性环氧合酶-2抑制剂塞来昔布可有效逆转MCF-7/Adr细胞多药耐药,在一定的浓度范围内呈现剂量依赖性,初步机制可能涉及干预转录因子的表达而下调mdr1,阻滞细胞周期及增加细胞凋亡。