大白鼠海马神经毯内神经胶质突起与神经无突起间关系的超微结构研究

用电镜技术观察了大白鼠海马神经毯内的神经胶质突起与神经元突起的超微结构。本文论述了星状胶质细胞突起与神经元的树突、树突侧棘和轴突膜间联系的超微形态特点，发现星状胶质细胞突起广泛分布于神经毯内，与神经元突起间形成膜的紧密并列关系，但不形成突触，也未见二膜间并列处有膜的增厚和突触小泡聚集的现象。星状胶质细胞突起上的棘状突起的超微结构特征不同于树突的侧棘，无棘器的构造。首次发现有的神经胶质棘状突起上有小棘结构。有些棘状突起借粘着斑与树突形成细胞间连接。     

大鼠海马神经元PKCε特异性shRNA对神经元突起生长的影响

目的 构建shRNA特异性干扰海马神经元内PKCε,研究PKCε干扰后海马神经元突起长度的变化.方法 设计并构建PKCε的小分子干扰shRNA载体.分别在293T细胞中共转染PKCε和各干扰片段,Western blot验证干扰效果.将有干扰作用的载体转染海马神经元,用细胞免疫荧光法验证干扰内源PKCε的效果.激光共聚...     

体外培养过程中神经胶质细胞与神经元的相互作用

目的：运用体外培养神经元与腔质细胞相互作用的形态学指标为神经损伤性疾病的研究提供理论基础及相关的神经移植方法。方法：采用原代分离培养的方法，首先将胚胎小鼠的脊髓胶质细胞进行传代培养；然后，小鼠的脊髓神经细胞接种在胶质细胞表面进行培养，最后进行形态学观察不同时间神经元的生长状况。站果：神经元在腔质细胞表面生长活跃，突起仅局限于腔质细胞生长．并且神经突起沿着胶质细胞生长旺盛的部位生长，相反，裸区几乎没有神经元的贴壁生长和突起的延伸，培养10天后，胶质细胞表面的神经元大部分退化死亡。结论：胚胎神经元早期可能刺激腔质细胞产生生物括性物质，这些括性物质能够促进神经元的贴壁和突起的生长，当神经元分化成熟时，这种功能丧失。     

GDNF促进大鼠背根神经元的存活和突起生长

探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对正常胚胎大鼠背根神经节(DRGn)的存活及突起生长的作用。本实验采用神经组织原代分离培养的方法建立体外胚胎大鼠背根神经节单细胞培养体系，从细胞形态学及应用MTT。法观察1μg／L、10μg／L、50μg／L和100μg／L GDNF对体外培养的正常感觉神经元生长的影响。结果表明：GDNF能明显促进体外培养的正常大鼠背根神经节感觉神经元的存活及突起生长。提示GDNF对正常大鼠胚胎发育期感觉神经元具有神经营养作用。     

RNA干扰CRMP 5抑制大鼠海马神经元突起生长

目的探讨CRMP5对大鼠海马神经元突起生长的影响。方法将带FAM标记的CRMP5的特异性干扰片段及阴性对照转染培养成熟的海马神经元,用免疫荧光的方法验证干扰片段对神经元内源性CRMP5的干扰效果,并利用共聚焦显微镜观察神经元突起以及侧枝的形成。结果携带FAM的si RNA可以成功的进入细胞,分布于神经元的胞体以及树突;免疫荧光证实CRMP5 si RNA可以有效的沉默CRMP5蛋白的表达;沉默CRMP5基因表达后的海马神经元突起短小,而且缺少分支,而对照细胞突起长,分支多;定量分析显示,导入CRMP5 si RNA的细胞突起的长度较对照细胞缩短,差异显著(P0.05);突起的数目比较,一级突起数目无显著差异,而二级及其以上突起的数目明显减少,差异显著(P0.05)。结论沉默CRMP5可抑制海马神经元突起的生长和侧枝形成。     

Neuroplastin在培养的神经元的表达及对小脑颗粒细胞神经突起生长与神经元存活的影响

研究neuroplastin在培养神经元的表达及对大鼠原代培养小脑颗粒细胞分化与存活的影响。培养大鼠小脑颗粒细胞、中脑多巴胺能神经元、海马神经元、PC12-E2、新生鼠前脑组织,用RT-PCR检测neuroplastin65 mRNA和neuroplastin55 mRNA的表达;加入neuroplastin合成肽,观察小脑颗粒细胞神经突起生长及在低钾的神经毒性条件下神经元的存活。结果表明:在培养0、7d的海马神经元、中脑多巴胺能神经元、小脑颗粒细胞以及新生鼠前脑组织、PC12-E2细胞均表达np65 mRNA、np55 mRNA,且np55 mRNA的表达高于np65 mRNA;来自neuroplastin Ig1的合成肽是1ab-s,1cd-s,1dd,1ef,1fg;来自neuroplastinIg2的合成肽是2cd和2fg。1fg,1cd-s,2cd,2fg强烈刺激神经突起的生长,1dd,1ab-s中等程度刺激神经突起的生长,1ef,1bc则无效。1cd-s,1bc,1dd,1ef,2cd,2fg能促进低钾神经毒性环境下神经元的存活,1fg,1ab-s无效。以上结果提示,neuroplastin通过亲同性结合或亲异性结合后,诱导神经突起生长和促进神经元存活。     

关于海马内突触小球超微结构的辨认

用电镜技术对大白鼠海马ＣＡｌ区的突触小球超微结构作了观察，发现有二种形态的突触小球。一种是小球的突触神经成分均封闭在球内，另一种是小球内的苔状纤维终末与球外神经毯内的树突于形成轴－树突触。小球的中央轴突终末即是苔状纤维终末，它不仅与树突侧棘形成轴－棘突触，而且与树突形成轴－树突触。树－树突触在小球内亦可见到。本文就突触小球的结构成分和突触小球的概念等问题进行了讨论。     

TNFα刺激的星形胶质细胞条件培养液对海马神经元的兴奋作用

目的:探讨肿瘤坏死因子-α刺激的星形胶质细胞对神经元的作用。材料和方法:体外纯化培养大鼠海马星形胶质细胞,采用反相高效液相法测定TNFα刺激后细胞培养液内谷氨酸的含量;将TNFα刺激后的星形胶质细胞条件培养液（Astrocytic Conditioned Medium,ACM）作用于培养的海马神经元,运用免疫细胞化学方法和图像分析技术研究神经元NF-κBp65和谷氨酸的表达。结果:（1）TNFα可明显促进星形胶质细胞释放谷氨酸;（2）ACM作用15min即可诱导神经元NF-κBp65的核表达,30min达高峰,180min恢复至对照水平;（3）ACM作用60min可使谷氨酸免疫反应阳性神经元平均光密度明显升高,持续至240min。结论:TNFα刺激的星形胶质细胞可通过释放谷氨酸等可溶性物质使神经元快速激活、兴奋性升高。     

激活的星形胶质细胞分泌聚集素蛋白及其对海马神经干细胞向神经元分化的促进作用

目的 探讨切割穹隆海马伞的侧海马提取液“激活”的星形胶质细胞分泌聚集素蛋白（CLU）及体外CLU诱导海马神经干细胞分化为神经元的情况。
方法 分别用切割穹隆海马伞的海马提取液、正常海马提取液、DMEM/F12 培养基培养星形胶质细胞,制备切割12h、24h、48h组,正常组和对照组条件培养基;ELISA检测比较不同条件培养基中CLU蛋白的浓度;体外细胞培养采用CLU诱导海马神经干细胞分化,设诱导组和空白对照组,7d后通过微管相关蛋白2（MAP-2）免疫荧光及Hoechst标记观察海马神经干细胞向神经元的分化情况。 结果 正常组和对照组条件培养基中CLU浓度较低,约为（0.1037±0.0119）ng/L和（0.1170±0.0078）ng/L;切割组12h、24h、48h条件培养基中其浓度明显增高,分别为（0.1940±0.0364）ng/L、（0.4250±0.0724）ng/L和（0.2903±0.0472）ng/L,以24h组最高,约为正常组和对照组的4倍。CLU诱导组中MAP-2阳性细胞数明显高于空白对照组（P<0.05）,其占总细胞数的百分比分别为(11.67±2.57)%和（4.52±1.54）%,且诱导组中MAP-2阳性细胞突起更长、更丰富。 结论 切割穹隆海马伞侧海马提取液“激活”的星形胶质细胞可分泌更多的CLU,体外细胞培养中CLU可促进海马神经干细胞向成熟的神经元分化。     

切割穹隆海马伞海马提取液促进放射状胶质细胞增殖和向神经元分化

Objective To investigate the proliferation and differentiation effect of hippocampal niche on the radial glia cells EM>in vitro/EM> . Methods Successfully prepared normal hippocampal extracts and transected extracts after hippocampal fimbria-fornix transection. On the proliferation and differentiation stages, the normal and transected extracts were used to investigate their effects on the radial glia cells respectively. Results On the proliferation stage, the proportion of BrdU-positive cells in the transected group was obviously higher than that of the normal group and control group（EM>P/EM>0.05）; on the differentiation stage, the number of Tuj1-positive cells in the transected group was much more than that of the normal and control group（EM>P/EM>0.05）. Conclusion The fimbria-fornix transected hippocampal extracts can promote the proliferation and neurons differentiation of neonatal rats radial glia cells EM>in vitro/EM>. These data indicate     

HCNP与海马提取液对神经干细胞向胆碱能神经元分化的协同作用

目的:探讨海马胆碱能神经元刺激肽(hippocampal cholinergic neurostimulating peptide,HCNP)与海马提取液对海马神经干细胞向神经元及胆碱能神经元分化的协同作用。方法:取孕17 d SD大鼠海马组织进行神经干细胞的培养、增殖、传代,并将其接种于2块24孔板中,培养基中均含B27、微量脑源性神经营养因子(BD-NF),将培养孔分为6组:H+T组,加入HCNP和切割穹窿海马伞侧海马提取液;H+N组,加入HCNP和正常侧海马提取液;H组,加入HCNP;T组,加入切割穹窿海马伞侧海马提取液;N组,加入正常侧海马提取液;对照组,不加HCNP和海马提取液。分化14 d后行MAP-2/ChAT免疫荧光双标检测。结果:与其它各组相比,H+T组分化的MAP-2阳性神经元最多,ChAT/MAP-2双标阳性神经元占MAP-2阳性神经元的比例最高(P<0.05);与N组相比,H+N组MAP-2阳性神经元较多,ChAT/MAP-2双标阳性神经元占MAP-2阳性神经元的比例也较高(P<0.05);与对照组相比,H组T组均可见一定数量的MAP-2阳性神经元及ChAT/MAP-2双标阳性神经元(P<0.05);N组以及对照组中MAP-2阳性神经元的数量和ChAT/MAP-2双标阳性神经元占MAP-2阳性神经元的比例则最低。结论:在微量BDNF存在的情况下,HCNP可促进海马神经干细胞向神经元和胆碱能神经元分化,切割侧海马提取液与HCNP可发挥协同作用。     

海马胆碱能刺激肽促进神经干细胞向神经元分化

目的探讨海马胆碱能刺激肽(HCNP)在神经干细胞向神经元分化过程中所起的作用。方法切割SD大鼠右侧穹窿海马伞,14天后取切割穹窿海马伞侧海马制成海马提取液;将神经干细胞接种于24孔板中,分为HCNP与海马提取液联合培养组、HCNP组以及空白对照组,每组八孔;细胞分化至14天时行Tuj-1、MAP-2免疫荧光检测;计数Tuj-1、MAP-2阳性神经元数及细胞周长,并观察胞体大小和突起长度。结果联合培养组Tuj-1、MAP-2阳性神经元最多,胞体大,突起长;HCNP组神经元数量较前组少,胞体较小,突起数量和长度均小于前组;对照组则仅有少量胞体小、突起短的神经元。HCNP与切割穹窿海马伞侧海马提取液联合培养组神经元成熟度优于其它两组。结论 HCNP对神经干细胞向神经元的分化具有明显促进作用。     

干细胞与神经元、神经胶质细胞的分化

神经细胞与神经胶质细胞的分化是发育神经生物学中颇具挑战性问题，目前仍有许多问题有待探索与解决。对这一领域的研究作一回顾与总结，有助该课题的深入研究。     

大鼠大脑皮质星形胶质细胞的体外培养及其促神经突起生长作用研究

取生后１周以内ＳＤ大鼠大脑皮质，用胰蛋白酶消化结合机械吹打使细胞分散，制成较大量的初细胞悬液。将初细胞悬液先行粘附处理３０ｍｉｎ以排除其中的成纤维细胞，再制成较小量的次细胞悬液。将之接种到预先涂有鼠尾胶原的培养瓶中，令其贴壁３～５ｈ，细胞密度约１×１０５个／ｃｍ２。补加培养液，继续培养。培养液为含２０％小牛血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２混合培养液。俟细胞铺满瓶底后传代。届时细胞悬液亦行３０ｍｉｎ的粘附处理。以０．５×１０５个／ｃｍ２的细胞密度种植于培养瓶中。传代后先培养４８ｈ；换成无血清培养液再培养４８ｈ并收集条件培养液。对部分传代细胞进行胶质原纤维酸性蛋白免疫细胞化学杂色鉴定，证明传代后的细胞中星形胶质细胞比例达９４．７１％。取条件培养液及单纯ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液各１份，分别与２份有血清培养液混合，制成实验组与对照组两种培养液，以悬滴法培养鸡胚背根节。４８ｈ后，比较两组背根节神经突起的平均长度。经统计学分析揭示，实验组背根节神经突起平均长度显著大于对照组者，说明星形胶质细胞具有明显的促神经突起生长作用。     

衰老晚期海马CA1区胶质细胞超微结构改变

选用ＳＤ大白鼠２０只分青年组（３个月）、老年组（３４￣３６个月），应用透视电镜观察比较海马ＣＡ１区胶质细胞的超微结构变化，结果如下：和青年组相比，老年组海马ＣＡ１区胶质细胞胞体及突起出现反应性增生，肥大、包绕神经元及终末，胶质细胞内的线粒体数量减少，肿胀、空洞化线粒体增多，粗面内质网稀疏，脂竭素沉积严重等改变，表现为胶质细胞严重退变，表明衰老晚期海马ＣＡ１区胶质细胞出现对神经元退变代偿的反应性增大     

老年大鼠视上核胶质突起包绕轴突和终末的电镜观察

在透射电下观察了老年大鼠视上核中胶质突起对神经元成分的包绕。发现胶质突起形成１～５层的多层状鞘样结构，主要包绕于轴突，终末和突触等，被包绕的这类神经元成分中常聚集有神经分泌颗粒，各种突触沁泡等。文中还对该结构出现的机能意义及其发生年龄性变化的可能性作了探讨。     

神经元与胶质细胞的相互作用

<正> 在中枢神经系统的发育过程中,神经元沿着星状胶质细胞突起从特定的增生区迁移到目标区。小脑的分裂后期的颗粒细胞沿Bergmann胶质细胞突起从外颗粒层穿过分子层及Purkinje细胞层迁移到内颗粒层。神经元沿胶质细胞突起运动的机理可能与凝集素及细胞表面的糖蛋白有关。Lehimann近来报导用抗内源性小脑凝集素抗体及凝素集结合糖蛋白抗体处理小脑培养物可抑制颗粒细胞的迁移活动。他们推测可溶性的凝集素可在神经元及星状胶质细胞间形成一种“桥”,而细胞表面凝集素结合糖蛋白则介导凝集素“桥”的形成。这个“桥”的形成支持细胞粘连,这对胶质细胞介导的神经元运动有意义。Stitth及Hatten发现星状胶质细胞抑制素(astrostactin),为一种细胞糖蛋白,可抑制小脑颗粒细胞与星状胶质细胞的粘连,但不抑制神经元间的粘连。     

神经营养素-3能够促进体外受损伤大鼠脊髓神经元的存活及其神经突起生长

目的探讨神经营养素-3(NT-3)对体外机械性损伤的大鼠脊髓神经元存活及其神经突起生长影响。方法将体外培养的大鼠脊髓神经元分为4组:正常组、对照组、20 ng/ml NT-3组和40 ng/ml NT-3组。培养4 d后,除正常组外,其余3组建立划痕损伤模型。在划痕损伤后,对照组不做处理,另外2组分别在培养液中加入20 ng/mlNT-3和40 ng/ml NT-3继续培养。直至培养第6 d,应用4%多聚甲醛固定4组细胞。固定后的细胞分别做转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记(TUNEL)、微管相关蛋白2(MAP2)和生长相关蛋白-43(GAP43)免疫荧光染色,检测划痕损伤的神经元凋亡及其神经突起生长情况。结果免疫荧光化学染色显示,与对照组相比,应用NT-3处理的2组可以显著降低划痕损伤后的脊髓神经元凋亡率,并促进其神经突起生长。尤其是40 ng/mlNT-3组的神经元凋亡率最低,其神经突起可穿过划痕损伤边界。结论 NT-3能够促进体外机械性损伤的大鼠脊髓神经元存活及其神经突起生长。     

星形胶质细胞的神经干细胞特性

胶质细胞是脑内数量最多的细胞,它与神经元之间的相互联系是在发育期就精确建立的。不同神经元的功能已有较深入的研究,与之相比,胶质细胞仍是非常神秘的细胞,特别是星形胶质细胞,除了对神经元提供重要的结构、代谢、营养支持外,它与神经元之间复杂的相互联系仍不清楚。本文将对星形胶质细胞作为神经干细胞／祖细胞这一最新发现作一综述。