尾加压素Ⅱ和组织型转谷氨酰胺酶在大鼠肾间质纤维化组织中的表达及意义

目的：探讨尾加压素Ⅱ（UⅡ）和组织型转谷氨酰胺酶(tTG)在大鼠肾间质纤维化组织中的表达及意义,为进一步明确UⅡ致纤维化的机制提供实验依据。方法：雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（n=8）和模型组（n=8）,采用左侧输尿管结扎术制备肾间质纤维化模型。术后第2周末处死各组大鼠。采用HE和Masson染色观察肾组织病理学改变;采用免疫组化法检测肾间质中UⅡ、tTG和纤维连接蛋白(FN)的表达;采用RT-PCR技术检测UⅡ和tTG mRNA的表达水平。结果：HE和Masson染色可见,模型组大鼠肾间质增宽,胶原纤维明显增生。免疫组化显示,假手术组大鼠UⅡ、tTG和FN在肾小管、肾间质区有少量表达,肾小球内除UⅡ有微量表达外,tTG和FN无阳性表达;模型组大鼠UⅡ、tTG和FN在肾小管和肾间质区的表达信号较假手术组明显增强(P<0.01),模型组大鼠UⅡ的蛋白表达与FN的蛋白表达呈正相关关系（r=0.724,P<0.05）。模型组UⅡ和tTG的基因表达明显高于假手术组(P<0.05),模型组大鼠肾内UⅡ基因和蛋白表达与tTG基因和蛋白表达均呈正相关关系（r=0.647,P<0.05 ;r=0.787,P<0.01）。结论：UⅡ和tTG可能共同参与肾间质纤维化,UⅡ的致纤维化作用可能部分是通过tTG的活化而实现的。     

胰岛素样生长因子1对大鼠肾间质纤维化组织中CTGF的表达影响

目的观察胰岛素样生长因子1（IGF-1）对肾间质纤维化大鼠结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法 30只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、IGF-1组,每组10只。应用单侧输尿管结扎制备肾间质纤大鼠模型。假手术组打开腹腔后即缝合;模型组每日腹腔注射生理盐水0.5ml;IGF-1组腹腔注射重组人IGF-1 750ng.kg-1.d-1。术后第14d麻醉大鼠后取材,检测肾功能,观察Ⅳ型胶原蛋白、结缔组织生长因子（CTGF）的表达。结果模型组血肌酐、尿素氮、Ⅳ型胶原蛋白、CTGF的表达水平均高于假手术组,差异有统计学意义（P〈0.05）;IGF-1干预后,IGF-1组血尿素氮、血肌酐、Ⅳ型胶原蛋白、CTGF的表达水平均高于假手术组及模型组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 IGF-1参与梗阻性肾病的病理生理过程,尤其在肾间质纤维增生过程中起着重要作用。     

转化生长因子β、结缔组织生长因子与肾纤维化

由于血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin-converting enzyme inhibitor，ACEL)和氮肽霉素(araz,opeptin，ARB)的大量应用，慢性肾脏病的治疗已经取得相当大的进展，但这些治疗仅仅是延缓或减慢慢性肾脏病进展。目前迫切需要找到一种新的治疗靶点能够阻止或进一步减慢慢性肾病的发展。     

硒对肾间质纤维化大鼠肾组织结缔组织生长因子表达及肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的探讨硒对肾间质纤维化大鼠肾组织结缔组织生长因子（CTGF）表达及肾小管上皮细胞表型转化的影响。方法以单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将54只SD大鼠随机分为假手术组（A组）、单侧输尿管梗阻（UUO）组（B组）、U-UO+硒组（C组）,每组18只。C组给予亚硒酸钠0.2mg/（kg·d）灌胃。A、B组给予同等剂量0.9%氯化钠溶液灌胃。术后第7、14、21天各组随机处死6只大鼠,肾组织行HE、Masson染色评定肾间质纤维化程度,免疫组织化学半定量法检测CTGF和α-平滑肌肌动蛋白（α- SMA）的表达。Western印迹法检测肾组织CTGF蛋白表达。化学比色法检测肾组织氧化指标谷胱甘肽过氧化物酶（GSH- Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的表达水平。结果术后各时点C组肾间质纤维化程度较B组明显减轻（P＜0.05）,肾组织CTGF和α- SMA的表达强度明显低于B组（P＜0.05或0.01）、GSH- Px和SOD水平明显高于B组（P＜0.05）,MDA含量明显低于B组（P＜0.05）。B组肾组织中CTGF、a- SMA表达量之间呈正相关（P＜0.05）,CTGF和a- SMA表达量与肾间质纤维化病变程度呈正相关（P＜0.05）。结论硒可以减轻UUO模型大鼠肾间质纤维化程度,其机制可能与硒的抗氧化作用、下调肾组织CTGF的表达、抑制肾小管上皮细胞－肌成纤维细胞转分化有关。     

结缔组织生长因子与肾小管间质纤维化

肾小管间质纤维化(tubu lointerstitial fibrosis,TIF)是各种肾脏疾病慢性进展,最后导致慢性肾功能衰竭的共同机制。它以肾小管损伤,肾间质单个核炎细胞浸润,间质纤维化为特点,以肾间质细胞外基质沉积为主要表现。多种细胞因子参与了肾小管间质纤维化的过程,转化生长因子-β(tr     

中药芪红合剂对肾间质纤维化模型大鼠肾组织中CTGF表达的影响

目的 观察中药芪红合剂在肾间质纤维化过程中对致纤维化因子结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,探讨其可能的肾保护作用机制.方法 采用单侧输尿管结扎(UUO)致肾间质纤维化的动物模型,40只雄性Wistar大鼠随机分为4组:假手术组(A组)、手术模型组(B组)、芪红合剂组(C组)、依那普利组(D组).术后14d处死各组大鼠,收集血清测定血肌酐(Scr)、尿素氮(Bun)水平,取结扎侧肾组织分别用HE、Masson染色,采用免疫组化方法检测肾组织中结缔组织生长因子(CTGF)的表达,并用计算机图像分析系统进行分析. 结果 模型组大鼠肾组织中CTGF的表达较假手术组显著升高,两治疗组较模型组明显降低.模型组大鼠血肌酐、尿素氮水平较假手术组明显增高,两治疗组较模型组显著下降.结论 中药芪红合剂可降低大鼠血尿素氮、血肌酐水平,并可通过抑制CTGF的表达,而起到减轻肾间质纤维化病变程度的作用,推测其抑制CTGF表达上调的作用可能是其抗肾小管间质纤维化的作用机制之一.     

益气活血方对肾间质纤维化大鼠肾脏TGF—β／smad信号通路及结缔组织生长因子的影响

目的：观察益气活血方对肾间质纤维化大鼠肾脏TGF-β／smad信号通路及结缔组织生长因子（connectivetissue growthfactor,CTGF）的影响。方法：健康雄性Wistar大鼠30只诱导建立单侧输尿管梗阻（unilateralureteralobstruction,UUO）致肾小管间质纤维化模型,模型成功后随机分为模型组,益气活血方大、中、小剂量组和西药组,另取健康雄性Wistar大鼠6只设为假手术组。3周后处死大鼠,称取体质量;取血清检测肌酐（creatinine,Cr）、尿素氮（bloodureanitrogen,BUN）水平;取肾脏组织采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法和免疫印迹法检测各组转化生长因子G（transforminggrowthfactor—B,TGF-β）、smad2、smad7、CTGFmRNA和蛋白表达水平;苏木精一伊红染色和Masson染色检测各组肾间质纤维化指数。结果：模型组大鼠血清Cr和BUN值较假手术组偏高;与模型组比较,大剂量益气活血方可以降低Cr和BUN值,但差异无统计学意义。苏木精-伊红染色和Masson染色显示模型组肾小管上皮细胞萎缩,大部分肾小管管腔扩张,间质纤维组织增生,大量炎性细胞浸润,肾小球数目明显减少,胶原成分显著增加。益气活血方大剂量组、中剂量组和西药福辛普利钠组大鼠肾间质炎性细胞浸润、纤维组织增生、肾小管扩张情况较模型组明显减轻,胶原成分明显减少。与假手术组比较,模型组大鼠肾脏组织中TGF—D、smad2和CTGFmRNA以及蛋白表达水平明显升高（P〈0．05）,smad7的表达水平则明显降低（P〈0．05）。与模型组比较,益气活血方大剂量组和中剂量组大鼠TGF-β、smad2、CTGFmRNA和蛋白表达明显下降（P〈0．01,P〈0．05）,smad7表达明显升高（P〈0．01,P＜0．05）。结论：UUO大鼠肾组织中CTGFmRNA的表达可能通过TGF-β／smad信号通道进行调节;益气活血方可以通过下调TGF—β、smad2和上调smad7的表达来抑制CTGF表达,进而遏制肾纤维化的进展。     

肝细胞生长因子在大鼠肾间质纤维化中作用机制的研究

目的：通过观察大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)后，肝细胞生长因子(HGF)的表达及其与转化生长因子-β1(TGF-β1)之间的动态变化关系，以探讨HGF在肾间质纤维化中的作用机制。方法：将36只雄性SD大鼠中的18只行左侧输尿管结扎术，另外18只行假手术。于术后第3、7、14天分别处死各组中的6只大鼠，用免疫组化方法测定HGF、TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及纤维粘连蛋白(FN)的表达，并行苏木精-伊红(H—E)和Masson染色，动态观察肾的病理学改变。结果：在肾间质纤维化早期，肾HGF表达明显增加而TGF-β1表达却明显下降；在肾间质纤维化晚期，肾HGF表达明显下降而TGF-β1表达却明显上升，同时α-SMA和FN的表达明显增强，肾的病理改变明显，而且HGF表达与TGF-β1、α-SMA及FN表达呈明显负相关。结论：HGF可能是肾间质纤维化进程中重要的调节因子，它与TGF-β1相互作用，共同调节肾间质纤维化的发生和发展。     

结缔组织生长因子协同转化生长因子β1的促肾纤维化效应

目的　探讨结缔组织生长因子 (CTGF)和转化生长因子 β1(TGF β1)对肾脏成纤维细胞合成和分泌基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )和细胞表型转化的影响。方法　将大鼠肾成纤维细胞分为对照组、CTGF刺激组、TGF β1刺激组、CTGF加TGF β1联合刺激组 ,以明胶酶谱法和Western印迹方法分别检测细胞上清中MMP 2活性和蛋白的变化 ,实时定量 聚合酶链反应 (PCR)方法检测细胞中MMP 2mRNA的水平。Western印迹方法检测成肌纤维细胞标志蛋白α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的表达水平和细胞上清中细胞外基质成分纤黏连蛋白 (FN)的水平。结果　MMP 2的活性和蛋白水平在刺激 2 4h时 ,各组之间无明显差异 ;刺激 4 8h ,10 0ng/mlCTGF组和 5ng/mlTGF β1组明显属于对照组 (P <0 0 5 ) ;而不同浓度的CTGF加TGF β1联合刺激组分别低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 ,其中 10 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1、5 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1均分别明显低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 (P <0 0 5 )。上述各组细胞刺激 12h ,MMP 2mRNA水平在 10 0ng/mlCTGF组和 5ng/mlTGF β1组均明显高于对照组 (1 72 ,1 6 8vs 1 2 9,P <0 0 1) ,而 10 0ng/mlCTGF加 5ng/mlTGF β1联合组明显低于CTGF刺激组、TGF β1刺激组 (0 6 7v     

姜黄素抑制大鼠肾间质纤维化的研究

目的:观察姜黄素对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)模型大鼠肾间质转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响.方法:将54只大鼠随机分为3组,每组18只:假手术组、模型组、姜黄素组.模型组和姜黄素组行右侧输尿管结扎术,假手术组只游离不结扎.术后第3,7,14天分别随机处死各组中的6只大鼠,检测BUN、SCr.采用苏木精-伊红和Masson染色,动态观察肾脏病理情况,同时用免疫组织化学方法测定TGF-β1、CTGF的表达情况.结果:姜黄素对BUN、SCr有显著性影响,能显著减少大鼠肾间质TGF-β1、CTGF的表达,并有效改善肾脏的病理改变.结论:姜黄素有助于改善UUO所致的肾脏损伤,并能抑制肾间质纤维化,提示姜黄素有潜在的延缓慢性肾功能衰竭进程的作用.     

Role of connective tissue growth factor in experimental radiation nephropathy in rats

Background Connective tissue growth factor （CTGF） is a potent fibrogenic cytokine which has been associated with progressive glomerulosclerosis and tubulointerstitial fibrosis. We investigated the role of CTGF on the progression of a rat model of radiation nephropathy. Methods The model of radiation nephropathy in rats was established as follows： control group （n=12）, underwent only laparotomy; irradiated group （n=-20）, underwent a laparotomy, then the rats were subjected to a single dose 25 Gy X-ray to the kidneys. The rats were followed up one, three, six and nine months after renal exposure to radiation. Results Renal dysfunction was noted early in irradiated rats. Histological analysis showed focal glomerular sclerotic lesions at an early stage after irradiation. Radiation-induced glomerular and tubulointerstitial injuries were particularly severe the sixth month after irradiation as compared to the control group （P 〈0.01）. By immunohistochemistry, increased expression of CTGF was noted in the irradiated kidneys, which began to increase from the first month after irradiation, and remained significantly higher at the sixth and ninth month after irradiation （P 〈0.01）. Upon Western blot analysis CTGF protein expression showed an increase in the radiation treated kidneys compared with the control rats. The expression of CTGF closely correlated with the progression of radiation nephropathy. The expression of α-smooth muscle actin, vimentin, type Ⅲ collagen and type Ⅳ collagen was also high in the irradiated kidney as compared to control rat kidneys （P 〈0.05）, and was most severe at the sixth and ninth month after irradiation （P 〈0.01）. By double immunostaining, CTGF expressing cells were found to be α-SMA-positive myofibroblasts and vimentin-positive tubular epithelial cells. Glomerular expression of CTGF closely correlated with the glomerular expression of a-SMA （r=0.628, P 〈0.01）, vimentin （r=0.462, P 〈0.05） and accumulation of type IV collagen （r=0.584,     

结缔组织生长因子与慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的关系

①目的 探讨结缔组织生长因子在慢性心力衰竭大鼠心肌的表达及慢性心力衰竭心室重构和心肌纤维化可能的发病机制.②方法 用腹主动脉结扎的方法进行慢性心力衰竭模型的制作.将实验大鼠随机分为4组:假手术组,心衰1天组,心衰7天组,心衰14天组.用免疫组化的方法对结缔组织生长因子在4组的左室心肌的分布及表达进行半定量分析.用Masson染色法观察左室心肌的胶原沉积情况.③结果 在心力衰竭的不同阶段,大鼠的心室肌结缔组织生长因子表达明显增加(P＜0.05);心衰后的各个阶段心肌的胶原沉积明显多于假手术组.④结论 结缔组织生长因子参与了慢性心力衰竭心肌纤维化的过程.     

积雪草苷对烫伤创面成纤维细胞及结缔组织生长因子表达的影响

目的探讨积雪草苷对烫伤创面成纤维细胞及结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法将30只SD大鼠按随机数字表法进行分组,选取6只大鼠不予烫伤,其余进行烫伤建模,采用积雪草苷和凡士林对烫伤创面组织进行同体对照研究,HE染色评估成纤维细胞变化,免疫组织化学法检测CTGF蛋白表达情况,并用透射电镜观察成纤维细胞微观结构改变。结果积雪草苷治疗组大鼠伤后第14天创面CTGF含量高于对照组（P〈0．05）,伤后第21天创面CTGF含量低于对照组（P〈0.05）。成纤维细胞HE染色的大体形态及电镜观察呈现双相动态变化。结论积雪草苷可能对成纤维细胞增殖及CTGF表达存在双相调节作用,对促进创面少瘢痕愈合有一定作用。     

结缔组织生长因子在大鼠肝纤维化发生中的作用机制初探

目的:研究结缔组织生长因子(CTGF)在大鼠肝纤维化形成中的作用机制。方法:雄性SD大鼠32只,体重250~300g,皮下注射四氯化碳(CC l4)制备大鼠肝纤维化模型,分别于注射后1、4、8周处理动物,采用免疫组化、RT-PCR、W estern b lot等方法对肝组织中CTGF的表达进行检测。结果:免疫组化、W estern b lot结果显示,CC l4注射诱导后,大鼠肝组织中CTGF的表达较正常对照明显增强,且CC l4注射1、4、8周组肝组织中CTGF的表达强度呈明显递增趋势。CTGF主要表达于肝星状细胞胞质中。RT-PCR检测结果显示CTGF mRNA的表达与其蛋白质水平的改变相一致。结论:CTGF作为一种致纤维化因子,其过表达促进肝星状细胞的活化增殖及细胞外基质的形成,从而促进大鼠肝纤维化的发生、发展。     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾组织结缔组织生长因子表达的影响

目的探讨霉酚酸酯(MMF)对糖尿病大鼠肾组织结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法建立单侧肾切除糖尿病模型,大鼠随机分为对照组、糖尿病组与MMF给药组。8周末检测24小时尿白蛋白排泄率(AER)、肾组织与尿丙二醛(MDA)含量;并行肾组织形态学指标观察;应用免疫组化方法检测肾组织CTGF表达。结果MMF 给药组大鼠肾重、肾重/体重、AER与肾小球面积、肾小球容积、系膜区面积明显低于模型组(P<0.05,P<0.01);MMF 给药组可明显减少糖尿病大鼠肾组织及尿MDA含量(P<0.05);模型组肾小球CTGF表达明显高于对照组(P<0.01), MMF给药组这些改变明显减轻(P<0.01)。结论MMF对糖尿病大鼠肾脏有明显保护作用,其机制可能部分与抑制肾组织氧化应激、下调CTGF表达有关。     

结缔组织生长因子在肾血管性高血压大鼠心肌中的表达及意义

目的：研究结缔组织生长因子（CTGF）的表达与肾血管性高血压（RVH）大鼠心肌肥厚的关系,探讨CTGF在RVH大鼠心肌肥厚发生、发展过程中的作用。方法：用两肾一夹方法构建RVH大鼠模型。构建成功的RVH大鼠随机分为RC1及RC2组,同时设置对照组（SC组）。以心肌胶原含量、左心室重量（LVW）、左心室重重与体重比值（LVW/BW）作为心肌肥厚的指标,应用免疫组化法检测CTGF蛋白的表达。结果：①RVH大鼠术后第8周出现心肌肥厚,第12周进一步加重。②RC1和RC2组CTGF蛋白表达显著增加（较假手术组）;且RC2较RC1组大鼠CT-GF蛋白表达增加更显著。结论：肾血管性高血压大鼠CTGF表达增多,提示CTGF参与了肾血管性高血压大鼠心肌肥厚的发生。     

多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢中结缔组织生长因子及基质金属蛋白酶-9的表达

目的 探讨卵巢中结缔组织生长因子(CTGF)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达与多囊卵巢综合征的关系。方法 52只SPF级SD雌性大鼠(6周龄,具备规律动情周期)依照不同造模方式分为对照组和模型组,每组26只。对照组行羧甲基纤维素灌胃建模,模型组行等量来曲唑建模。分析研究对象动情周期不在出现固定规律,且具有连续性特征时,两组均采集其血清以及卵巢组织,采用放射免疫法(RIA)测定促黄体生成激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E₂)、垂体泌乳素(PRL)、睾丸素等指标对大鼠内分泌改变情况进行评定分析;并应用免疫组织化学的方法使用CTGF一抗、二抗、三抗和MMP-9一抗、二抗、三抗来测定和分析两种因子在该疾病组织中的表达情况。结果 模型组PRL、LH、睾丸素、窦前卵泡卵泡膜胞浆中CTGF、黄体中MMP-9等表达高于对照组(P<0.05),FSH、E₂、卵泡基底膜内MMP-9表达水平均发生显著下降趋势(P<0.05)。结论 卵巢中结缔组织生长因子水平变化与该疾病中小卵泡过多表达或者排卵障碍之间存在一定关联性,MMP-9则与多...     

转化生长因子β1/结缔组织生长因子通路在强直性脊柱炎中的表达

目的:了解强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)骶髂关节中转化生长因子β1(transforming growthfactor beta 1,TGF-β1)/结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)通路的主要分子表达情况,探讨TGF-β1/CTGF通路与AS关节纤维化的关系。方法:30例AS患者均通过酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosor-bent assay,ELISA)法检测血清TGF-β1、CTGF水平,通过免疫组织化学方法检测TGF-β1、p-smad3、smad7、CTGF、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。结果:与正常对照相比,AS骶髂关节组织可见TGF-β1、CTGF高表达,主要在骨髓及血管翳中炎症细胞的胞浆中表达;smad7明显低表达,p-smad3则主要表达于骨髓及血管翳中炎症细胞的细胞核中,提示smad3已被激活;Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原大量沉积,但血清中的TGF-β1和CTGF的水平与正常对照组间差异无统计学意义。结论:AS骶髂关节存在TGF-β1的过高表达,smad信号通路的激活,samd7的低表达,导致CTGF高表达,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原大量沉积。     

转化生长因子β1对人胚肺成纤维细胞结缔组织生长因子及低密度脂蛋白受体相关蛋白表达的影响

目的:探讨体外培养人胚肺成纤维细胞(human pulmonary fibroblasts-1,HPF-1)在外源性转化生长因子β1(transforming growth factor beta, TGF-β1)作用下结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)与低密度脂蛋白受体相关蛋白(low density lipoprotein receptor related proteins, LRP) 的表达变化及意义.方法:将HPF-1用5 μg/L的TGF-β1分别作用0, 3, 6, 12和 24 h.用RT-PCR方法检测CTGF及LRP mRNA的表达;用蛋白免疫印迹检测LRP蛋白表达变化;用免疫沉淀方法检测TGF-β1作用不同时间,与LRP结合的CTGF的数量变化;用细胞免疫荧光检测细胞中LRP表达情况.结果:相关分析显示,以3 h为关键点,CTGF mRNA(131.53±2.86)与LRP mRNA(224.87±7.00)表达变化具有正相关性(r=0.840 2,P＜0.05);LRP蛋白随TGF-β1作用时间不同,表达水平先升高,于3 h达高峰,而后逐渐下降,用免疫印迹法分析,相对于0 h组(190.85±2.86),3 h组(222.45±3.66)表达具有统计学意义(F=18.06,P＜0.05);用免疫荧光标记细胞LRP也得到类似的结果,比较0 h组(27.56±6.72)和3 h组(88.66±15.72)LRP蛋白表达(F=244.36,P＜0.01)差异具有统计学意义.结论:LRP作为CTGF的受体蛋白,在TGF-β1作用不同时间的情况下,表达量发生变化,并与CTGF的表达成正相关,提示其在肺间质纤维发生中发挥作用.