巴戟天盐蒸工艺研究

目的：建立巴戟天多糖、还原糖含量的测定方法,优选巴戟天最佳盐蒸工艺。方法：采用苯酚-硫酸法测定巴戟天中多糖含量,采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定巴戟天中还原糖含量,并进行方法学考察;以盐蒸巴戟天色泽、质、味等方面的性状评分和多糖、还原糖及总糖含量为指标,采用拉丁方试验优选巴戟天盐蒸工艺,通过GraphPad Prism 5.0软件分析工艺参数。结果：苯酚-硫酸法测定巴戟天多糖精密度、重复性、稳定性的RSD分别为0.69%、3.00%、2.39%,加样回收率为98.39%。DNS法测定巴戟天还原糖精密度、重复性、稳定性的RSD分别为0.35%、3.10%、2.85%,加样回收率为98.85%。拉丁方试验优选巴戟天盐蒸工艺最佳加盐量、闷润时间、蒸制时间分别为3、4、9 h。巴戟天盐蒸后多糖、还原糖及总糖含量均有增加。结论：通过苯酚-硫酸法、DNS法测定巴戟天中多糖及还原糖含量,获得了最佳的巴戟天盐蒸工艺参数。     

巴戟天盐蒸过程中梅拉德反应及其产物的研究

目的:观察巴戟天盐蒸不同时间对水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸和5-羟甲基糠醛含量的动态变化。方法:采用HPLC梯度洗脱的方法,测定巴戟天盐蒸过程中的水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸和5-羟甲基糠醛的含量。同时对蒸制过程中的p H值、吸光度等进行监测。结果:随着巴戟天盐蒸时间的不断延长,环烯醚萜苷类成分水晶兰苷的含量逐渐下降,去乙酰车叶草苷酸的含量变化不大;巴戟天盐蒸后新产生的5-羟甲基糠醛的含量逐渐升高。结论:巴戟天在盐蒸过程中可能发生了美拉德反应。     

饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天主要化学成分的含量差异分析

目的 考察目前市场上的饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天中主要化学成分的含量差异。方法 在主要产区和国内主流药材市场上,收集饮片巴戟天41批、巴戟肉32批、盐巴戟天10批;在前期对巴戟天药材中糖类成分研究的基础上,利用超高液相色谱飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）技术鉴别饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天中的主要的差异成分,利用UPLC对主要成分含量进行测定,并结合热图对三者的主要化学成分的含量进行差异分析。结果 饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天三者的主要成分有显著差别,表现在果糖、葡萄糖、蔗糖以及低聚糖GFn的含量及种类两方面。巴戟肉和盐巴戟天中10种低聚糖GFn（n=2~11）的含量均分别低于饮片巴戟天中相应成分的含量（P<0.01）,巴戟肉中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量均高于巴戟天和盐巴戟天中相应成分的含量,差异极显著（P<0.01）。饮片巴戟天、巴戟肉和盐巴戟天中水晶兰苷的质量分数分别为42.6,39.8,32.3 mg·g^-1,其中巴戟天与盐巴戟天中的含量差异显著（P=0.031）;各批次的巴戟天和盐巴戟天中耐斯糖的质量分数均高于4.0%,高于2015年版《中国药典》（简称“药典”）标准的要求;而巴戟肉中耐斯糖的平均质量分数为14.7 mg·g^-1,只有少数批次的巴戟肉符合药典要求。结论 蒸制使巴戟天中大部分的低聚糖转化成了果糖、葡萄糖、蔗糖;盐制使巴戟天中的各低聚糖和水晶兰苷的含量均显著降低,但是,各低聚糖含量降低的程度远小于巴戟肉。巴戟天和盐巴戟天的耐斯糖含量符合药典质量要求,巴戟肉中耐斯糖含量低于药典中限量要求。建议开展巴戟天药典标准的提升和修订,以保持药典的科学性、先进性和适用性,增强药典对巴戟天药材质量控制的导向作用。该研究结果为饮片巴戟天、巴戟肉、盐巴戟天的质量标准修订及其功效物质基础研究提供了参考依据。     

不同栽培年限及采收期的巴戟天寡糖含量动态变化分析

目的研究巴戟天不同栽培年限和1年内不同采收期寡糖类成分含量变化规律,确定最佳采收时间。方法采用高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法测定不同栽培年限及1年内不同采收期的巴戟天中耐斯糖等6种寡糖类成分的含量,并对寡糖含量变化趋势进行分析,确定最佳采收时间。结果不同栽培年限及采收期的巴戟天中寡糖类成分的含量有较大差异,5年生巴戟天中耐斯糖含量最高,为64.35 mg·g~(-1);5年生巴戟天样品,于3月份采收时耐斯糖含量最高。结论巴戟天不同生长时期寡糖类成分的积累具有一定的规律性,以耐斯糖含量为采收指标时,宜采收4～5年生巴戟天,最佳采收期为3月份。     

不同生物有机肥料对巴戟天主要有效成分的影响

目的　考察不同种生物有机肥料对巴戟天有效成分形成的影响 ,为巴戟天规范化种植提供科学的依据。方法　运用 HPL C方法考察不同生物有机肥料对巴戟天中甲基异茜草素 - 1-甲醚的含量 ,同时利用紫外分光光度法考察低聚糖、多糖的含量。结果　不同生物有机肥料对提高巴戟天有效成分的含量作用不同 ,其中以含有生物菌肥的有机肥料效果最好。结论　建议在巴戟天种植过程中可考虑使用加有微生物菌肥的生物有机肥料     

不同商品规格巴戟天质量评价

目的:HPLC法测定不同商品规格巴戟天中6种寡糖类成分的含量。方法:采用Waters XBridge~(TM )Amide(250 mm×4.6 mm,3.5μm)色谱柱,流动相为含0.2%三乙胺的乙腈-0.2%三乙胺溶液,流速为0.8 mL/min,二元梯度洗脱,进样量为20μL;柱温为35℃。结果:巴戟天不同规格样品寡糖类成分的含量存在差异。不同等级生巴戟天中耐斯糖含量高低与其商品规格分类不一致;盐巴戟天样品大多不符合相关规定;九蒸九制的巴戟天样品中仅检测到D-果糖及D(+)-无水葡萄糖;巴戟膏样品中耐斯糖的含量符合相关规定,D(+)-无水葡萄糖、D-果糖的含量较高。结论:不同商品规格的巴戟天质量参差不齐,需制定不同商品规格巴戟天的质量标准。     

HPLC测定不同产地和批次巴戟天中主要环烯醚萜苷含量

目的:提取、分离和鉴定巴戟天中的主要环烯醚萜苷并测定不同产地不同批次巴戟天中主要环烯醚萜苷的含量。方法:巴戟天的70%乙醇提取物,经大孔吸附树脂、活性炭、反相硅胶柱纯化得到化合物Ⅰ和化合物Ⅱ,并进行结构鉴定;利用HPLC法测定其在巴戟天中的含量,流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(5∶95);流速为1.0mL/min;检测波长为235 nm;进样量5μL。结果:从巴戟天中分离得到的主要环烯醚萜苷是水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸,其在生巴戟天和制巴戟天中的平均含量分别为0.991%和0.432%,0.691%和0.404%。结论:巴戟天中富含环烯醚萜苷类,主要为水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸,采用本方法可以简便、准确测定二者在巴戟天的含量。     

蒸制时间对盐巴戟天含量及特征图谱的影响研究

目的建立盐巴戟天含量和特征图谱测定方法,考察不同蒸制时间对盐巴戟天含量及特征图谱的影响。方法采用超高效液相色谱(UPLC)法同时测定水晶兰苷含量和环烯醚萜类特征图谱、高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定耐斯糖含量和超高效液相色谱-电喷雾检测器(UPLC-CAD)法测定寡聚糖类特征图谱,并结合方差分析对不同蒸制时间的特征图谱进行差异性研究。结果分别建立了盐巴戟天环烯醚萜类和寡聚糖类UPLC特征图谱,确定共有特征峰分别为12个和20个;不同蒸制时间的水晶兰苷含量、耐斯糖含量及特征图谱均发生明显变化,优选盐巴戟天蒸制时间为1 h。结论实验建立的方法稳定、准确、灵敏度好,可用于盐巴戟天的质量控制。     

不同炮制方法对巴戟天中寡糖类成分和水晶兰苷含量的影响

目的:考察不同炮制工艺对巴戟天中寡糖类成分和水晶兰苷含量的影响。方法:采用不同方法制备巴戟天炮制品,比较不同炮制品中寡糖类成分和水晶兰苷的含量。利用HPLC-CAD测定寡糖类成分含量,Shodex Asahipak NH2色谱柱,流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0~15 min,86%~81%A;15~20 min,81%~75%A;20~35 min,75%~70%A;35~50 min,70%~58%A;50~60 min,58%~40%A;60~65 min,40%~20%A);运用HPLC-DAD测定水晶兰苷含量,Venusil MP C18色谱柱,检测波长235 nm,流动相甲醇-0.4%磷酸溶液梯度洗脱(5∶95~28.8∶71.2,15 min)。结果:巴戟天不同炮制品中寡糖类成分总质量分数顺序为盐巴戟天>巴戟肉>制巴戟天>生巴戟天;水晶兰苷含量排序为盐巴戟天>生巴戟天>制巴戟天>巴戟肉。结论:巴戟天不同炮制品中寡糖类成分和水晶兰苷的含量差异较大,为巴戟天的饮片质量控制及炮制机制解析提供参考。     

炮制方法对巴戟天有效成分水晶兰苷含量的影响

目的:测定巴戟天炮制品中水晶兰苷的含量。方法:采用HPLC法。色谱条件:Krom alsil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm);甲醇-0.4%磷酸水溶液(5∶95→28.8∶71.2,15 min)为流动相;流速1 ml/min;检测波长231 nm;柱温25℃。结果:巴戟天不同炮制品中水晶兰苷含量与生品比较有较大差异,生巴戟天、巴戟肉、盐巴戟天、制巴戟天中水晶兰苷的平均含量分别为13.92 mg/g、9.10 mg/g、9.21 mg/g、12.86 mg/g。结论:不同炮制方法使巴戟天炮制前后水晶兰苷的含量发生改变。     

不同炮制品及不同产地巴戟天中4种环烯醚萜成分的含量测定

目的:建立UPLC同时测定巴戟天中水晶兰苷、去乙酰基车叶草苷酸、车叶草苷酸和车叶草苷含量的方法,并检测巴戟天不同炮制品及不同产地样品中4个环烯醚萜成分的含量。方法:采用ZOBAX SB-C18(150 mm×3mm,3.5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速为0.6 mL/min,进样量为1μL,检测波长为235 nm,柱温为40℃。结果:水晶兰苷在978.8~7830×10-3μg、去乙酰基车叶草苷酸在462.5~3700×10-3μg、车叶草苷酸在8.1~64.8×10-3μg、车叶草苷在8.4~67.2×10-3μg范围内线性关系良好;平均加样回收率分别为99.65%、100.38%、100.21%、100.94%。不同产地24个巴戟天样品中4种环烯醚萜成分含量范围分别为5.642~25.250 mg/g、2.587~10.330 mg/g、0.019~0.620 mg/g和0.000~0.053 mg/g;巴戟天经不同方法炮制后,除车叶草苷含量升高外,其余3种环烯醚萜成分含量均降低;巴戟天须根及木心均含有较高的水晶兰苷和去乙酰基车叶草苷酸。结论:所建立的含量测定方法简便、准确、重复性好,可为巴戟天质量控制提供参考。不同产地巴戟天4种环烯醚萜成分含量差异较大,四种炮制方法均可引起成分含量变化;巴戟天须根及木心部位具有潜在利用价值。     

巴戟天枯萎病对寄主显微构造及成分的影响

枯萎病能显著影响巴戟天肉质根的显微构造,并显著影响巴戟天营养器官B,Mn等元素的转运以及根、茎的β-谷甾醇含量,使肉质根总糖含量下降5.42%～15.29%。     

不同巴戟天炮制品中糖的分布与含量测定

目的探讨不同巴戟天炮制品的糖含量与入药意义。方法采用紫外可见分光光度法对净巴戟天、去木芯巴戟天、巴戟天木芯及蒸制后的巴戟天肉中总糖和多糖含量进行测定。结果净巴戟天总糖为54.83%,多糖为12.09%;去木芯巴戟天总糖含量为59.58%,多糖为13.01%;巴戟天木芯总糖为23.12%,多糖为5.91%;而炮制后的巴戟肉总糖56.61%,多糖12.93%,糖的含量比净巴戟天高。结论巴戟天糖主要分布在肉的部分,不同巴戟天炮制品中其糖的含量存在明显的差异。通过蒸制除去木芯,使药材得到净化,更有利于用药准确。     

巴戟天炮制前后蒽醌类成分含量变化

目的:对巴戟天炮制前后3种蒽醌类化学成分的含量进行比较研究。方法:采用HPLC同时测定3种蒽醌类成分1,8-二羟基-3-羟甲基蒽醌,1,8-二羟基-3-甲基-5-羟甲基蒽醌,1-甲基蒽醌的含量,色谱柱:Agilent-C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相以甲醇-水梯度洗脱(60∶40→85∶15,25 min);流速1.00 mL·min-1;柱温30℃;检测波长278 nm;进样量10μL。测定巴戟天生品和炮制品中三种蒽醌的含量。结果:3种蒽醌的线性范围分别为1,8-二羟基-3-羟甲基蒽0.019 9～0.199 2μg,1,8-二羟基-3-甲基-5-羟甲基蒽醌0.0331～0.331 2μg,1-甲基蒽醌0.0197～0.196 8μg,3种蒽醌的平均回收率均在98.50%～100.31%。巴戟天炮制前后蒽醌类成分有所变化。结论:所建立的分析方法可以同时测定巴戟天不同炮制品3种蒽醌类化合物的含量,为解析巴戟天炮制原理提供一定的科学依据。     

巴戟天炮制前后微量元素的含量变化研究

目的:测定经不同加工炮制后巴戟天饮片中Fe、Cu、Mn、Zn、Cd等微量元素的含量,并进行比较,分析加工炮制方法对其微量元素含量的影响。方法:采用原子吸收分光光度法,其中Fe、Cu、Mn、Zn用火焰法,Cd用石墨炉法,测定生巴戟天、巴戟肉、盐制巴戟天、甘草制巴戟天炮制后微量元素含量。结果:巴戟肉中各微量元素含量均比生巴戟天高,经过盐制和甘草制后的巴戟肉微量元素含量比蒸制过的巴戟肉低。结论:不同炮制方法会引起巴戟天微量元素含量产生变化,可以为进一步研究巴戟天的炮制机理提供参考数据。     

星点设计-效应面法优选制巴戟天炮制工艺

目的优选制巴戟天的最佳炮制工艺。方法以巴戟肉为原料,通过单因素试验,选取加甘草汁量、煮制时间、闷润时间为自变量,以甲基异茜草素-1-甲醚、耐斯糖、水晶兰苷、甘草苷、甘草酸含量的综合评分为因变量,采用星点设计-效应面法优选制巴戟天最佳炮制工艺。结果制巴戟天的最佳炮制工艺为:加甘草汁量1.5倍,闷润时间4 h,煮制时间25 min。实际测量值与OD预测值的偏差为1.39%。结论采用星点设计-效应面法优选的制巴戟天炮制工艺稳定可行且预测性良好,可为制巴戟天的规范化生产提供依据。     

巴戟天净制工艺的优化

目的:比较巴戟肉与巴戟心之间的化学成分的差异,优选巴戟天净制去心工艺。方法:采用HPLC方法,以甲基异茜草素-1-甲醚、水晶兰苷、和耐斯糖为指标,测定巴戟天的木心与趁鲜去心、润制去心和蒸制去心得到的巴戟肉的化学成分的含量。结果:巴戟肉(趁鲜去心)中的主要有效成分最高,而巴戟心的化学成分与巴戟肉相似,但是含量均较低。结论:巴戟天最好是在产地趁鲜去心,得到巴戟肉的质量最好。     

巴戟天及不同炮制品蒽醌含量比较研究

目的 通过采用紫外分光光度法测定巴戟天中蒽醌的含量来比较巴戟天的不同炮制品,为巴戟天的质量控制方法提供一定的依据.方法 采用紫外分光光度法测定其含量,以0.5%醋酸镁甲醇液为显色剂,测定波长为498nm.结果 1,8-二羟基蒽醌浓度在0.004-0.028mg/ml范围内与吸收度线性关系良好,回归方程为A=41.795C-0.0281,r=0.9997.结论 该方法简单、准确且专属性强.     

巴戟天微型饮片工艺优选

目的优选巴戟天微型饮片切制工艺参数,探讨其是否适用于不同产地来源的巴戟天。方法以蒸制时间、饮片长度、饮片厚度、烘干温度为影响因素,以水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸、甲基异茜草素-1-甲醚、甲基异茜草素、耐斯糖的含量及出膏率、休止角为评价指标,采用正交试验优选巴戟天微型饮片切制工艺,并建立不同产地来源巴戟天微型饮片HPLC指纹图谱。结果巴戟天微型饮片最佳切制工艺为:常压蒸制软化30 min,切片长度3 mm,切片宽度1～2 mm,40℃烘干。结论巴戟天微型饮片软化切制工艺简单易行,具有良好的适用性。     

炮制方法对南靖巴戟天蒽醌含量的影响

目的：测定巴戟天各炮制品中蒽醌的含量。方法：采用分光光度法测定。结果：巴戟天不同炮制品中蒽醌含量与生品比较有较大差异,生巴戟天、巴戟肉、盐蒸巴戟天、盐炙巴戟天、制巴戟天中总蒽醌的平均含量分别为1．1350mg／g、1．3450mg／g、1．0925mg／g、0．7025mg／g、1．5775mg／g;游离蒽醌的平均含量分别为0．2255mg／g、0．6675mg／g、0．3875mg／g、0．1818mg／g、1．4525mg／g。结论：巴戟天炮制前后蒽醌的含量发生改变,且不同炮制方法的影响亦不同。