EGCG对阿米卡星诱导大鼠螺旋神经元诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[（-）．epigallocatechin-3-gallate，EGCG]对阿米卡星（amikaein，Amk）诱导的大鼠耳蜗螺旋神经元（spiral ganglion neuron；SGN）诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）表达的影响。方法将30只SD大鼠分为生理盐水对照组、Amk（450mg/kg·d×14d）损伤组和Amk加EGCG（50mg/kg·d×14d）保护组。各组动物均经深度麻醉后，半身灌注固定处死，取右侧耳蜗标本固定、脱钙、石蜡轴位包埋、轴位切片，近中轴位切片行iNOS免疫组化染色，光学显微镜下检测耳蜗SGN表达情况，并通过切片图像分析进行半定量处理比较。站杲对照组SGN胞浆及细胞核基本上不着色（SGN iNOS染色平均灰度值为111．04±3．15），损伤组SGN部分神经元胞浆内有棕黄色或黄色颗粒或斑片（SGN iNOS染色平均灰度值为90．32±5．26），保护组胞浆及细胞核无明显着色（SGN iNOS染色平均灰度值为109．35±4．89），图像分析结果显示，损伤组与对照组、损伤组与保护组之间的SGN iNOS染色平均灰度值差异有统计学意义。结论iNOS参与Amk耳中毒时耳蜗螺旋神经元的氧化损伤。EGCG可以减弱Amk耳中毒时耳蜗螺旋神经元iNOS的表达，从而减轻Amk耳毒性。     

EGCG抑制口腔鳞癌Tca8113细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的：研究绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对人口腔鳞癌Tca8113细胞生长抑制及促凋亡的作用。方法：应用MTT法检测不同浓度的EGCG对Tca8113细胞体外增值抑制作用;采用HE染色、Hochest33258染色法检测EGCG对Tca8113细胞凋亡的影响。结果：MTT法检测显示EGCG对Tca8113细胞有明显增殖抑制作用并呈现时间及浓度依赖性（P〈0.05）;HE、Hochest33258染色显示,EGCG处理Tca8113细胞中出现了典型的凋亡形态学改变如核碎裂、核浓缩。结论：EGCG对Tca8113细胞的生长具有显著的抑制及促凋亡作用,且呈现时间及浓度的依赖性。     

EGCG对 APP/PS1 双转基因小鼠神经突触损伤的保护作用

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯（epi-gallocatechin-3-gallate,EGCG）对APP/PS1 双转基因小鼠中神经突触损伤的保护作用及其可能机制。方法：实验采用APP/PS1 双转基因小鼠,随机分为模型组（0.1 mL/10 g,生理盐水灌胃）、EGCG组[20 mg/（kg?d）,EGCG灌胃],每组 10 只,另以同窝同性别阴性小鼠10只设立正常组（0.1 mL/10 g,生理盐水灌胃）,共 3组。Morris 水迷宫实验测试各组小鼠逃避潜伏期和跨越平台变化,电镜观察各组小鼠海马神经元损伤情况,免疫组化法检测小鼠海马PSD95、GAP43 表达,RT-PCR检测小鼠海马PSD95 mRNA、GAP43 mRNA含量。结果：模型组逃避潜伏期明显延长,海马神经元损伤严重,PSD95表达下降、GAP43表达增高。免疫组化结果表示,EGCG组PSD95平均光密度高于模型组[（0.11±0.03） vs. （0.05±0.02）,P=0.001],EGCG组GAP43平均光密度低于模型组[（0.10±0.03） vs. （0.16±0.04）,P=0.002]。RT-PCR检测结果再次验证,EGCG组PSD95 mRNA表达高于模型组[（0.82±0.11） vs. （0.50±0.06） ,P=0.000],EGCG组GAP43 mRNA表达低于模型组[（1.12±0.11） vs. （1.56±0.16）,P=0.000]。结论：EGCG对 APP/PS1 转基因小鼠的空间学习记忆和突触损伤具有明显的改善作用,其机制可能与影响小鼠海马突触结构,提高PSD95表达、下调GAP43 表达有关。     

EGCG诱导人胶质瘤细胞U251凋亡及对survivin表达的影响

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导人胶质瘤细胞(U251)凋亡的生物学效应及对survivin蛋白表达的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度EGCG对U251细胞增殖抑制作用;吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染法观察各组细胞凋亡形态,计算凋亡率;Wester Blot法检测不同剂量EGCG处理48h对survivin蛋白表达的影响。结果:EGCG显著抑制U251细胞生长,呈浓度依赖性;EGCG可以诱导U251细胞凋亡,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而逐渐增加。Wester Blot结果显示EGCG抑制Survivin蛋白的表达。结论:EGCG具有诱导U251细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制Sur-vivin蛋白的表达相关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制人胃癌细胞增殖和诱导凋亡作用的研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养人胃癌细胞系SGC-7901增殖抑制作用,并初步探讨其诱导SGC-7901细胞凋亡的分子机制.方法:采用平皿克隆形成实验法测定不同剂量EGCG对SGC-7901细胞锚定依赖性生长能力的影响;Wester Blot法检测不同剂量EGCG处理人胃癌细胞(SGC-7901)48 h前后NF-κB(p65)、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达变化情况.结果:平皿克隆形成实验法显示:EGCG可抑制人胃癌细胞SGC-7901生长,且呈剂量依赖性,其对SGC-7901细胞IC50值为63.5 μg/mL;Wester Blot显示随着药物浓度升高,EGCG可以逐渐下调NF-κB和Bcl-2的蛋白表达,上调Bax、Caspase-3蛋白表达.结论:EGCG具有诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制核转录因子NF-B活化,导致Bax/Bcl-2比值的上调,促进Caspase-3的活化有关.     

EGCG联合紫杉醇对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯［(-)-Epigallocatechingallate,EGCG］及紫杉醇单独使用和联合使用时对肺癌A549细胞的形态、活性、细胞凋亡以及相关信号通路的影响。方法：不同浓度的EGCG、紫杉醇单用及联合应用在不同时间作用于肺癌A549细胞,用细胞集落形成实验检测细胞活力、WST-1法检测细胞增殖能力、Hoechst-33342荧光法检测细胞凋亡的情况、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Westernblot检测内质网应激标志蛋白GRP78表达。结果：①EGCG和紫杉醇均能抑制肺癌A549细胞的增殖;EGCG与紫杉醇联合的抑制率高于单用EGCG或紫杉醇组（P＜0.05）。②EGCG和紫杉醇均可诱导细胞凋亡,2种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强。③蛋白免疫印迹实验显示EGCG和紫杉醇联合可能是通过内质网应激信号通路发挥作用。结论：EGCG、紫杉醇均可抑制人肺癌A549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡,两者联合应用具有协同作用,能显著增强细胞凋亡作用。     

EGCG诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡及对Survivin蛋白表达的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocat-echin-3-gallate,EGCG)对人前列腺癌细胞PC-3凋亡及对其Survivin蛋白表达的影响。方法使用不同浓度的EGCG(0、20、40、80μg/mL)处理前列腺癌细胞株PC-3,通过细胞增殖曲线实验检测EGCG对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度EGCG处理PC-3细胞48h后对细胞周期及凋亡的影响;用RT-PCR法检测各浓度EGCG作用48h后PC-3细胞中Survivin基因的表达差异,使用Western blot进行确认。结果 EGCG可以抑制PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用随EGCG浓度的增加而增强(P<0.05);Sur-vivin在PC-3细胞中高表达,EGCG促使PC-3细胞的Survivin表达下调,其表达水平随EGCG浓度的增加而减少(P<0.01)。结论 EGCG能下调PC-3细胞中Survivin蛋白的表达,这可能是EGCG抑制PC-3细胞增殖、诱导其凋亡的关键机制。     

绿茶提取物EGCG对人肝癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨绿茶提取物EGCG对人肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖和凋亡的影响,预测其对人肝癌的抗癌作用。方法体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,采用不同浓度的EGCG对其进行干预,用MTT法观测其对肝癌细胞增殖能力的影响;用免疫细胞化学法检测肝癌细胞中Ki67的表达变化;用流式细胞仪检测其对肝癌细胞凋亡的影响。结果在EGCG的作用下,SMMC-7721细胞增殖能力明显受到抑制（P〈0．05）,Ki67表达水平下调（P〈0．05）,细胞凋亡明显增加（P〈0．05）。结论EGCG可能通过增加细胞凋亡,抑制Ki67表达达到抗癌作用。     

EGCG对糖尿病大鼠肾氧化应激的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对糖尿病大鼠肾脏损害的治疗作用及糖尿病大鼠肾氧化应激的影响。方法采用链脲佐菌素（STZ）诱导大鼠糖尿病模型，观察12周时肾脏损害和氧化应激改变，以及给予EGCG（2．5mg／kg和5mg／kg）治疗后的变化。结果12周时糖尿病大鼠与正常对照组比较：肾质量指数显著增加，肾脏的抗氧化能力显著降低且氧化应激增强；EGCG治疗组与糖尿病组比较：肾指数显著降低，总抗氧化能力和肾脏超氧化物岐化酶活性显著提高，脂质过氧化产物丙二醛（MDA）显著降低。结论糖尿病大鼠与正常大鼠相比抗氧化能力降低且氧化应激增强，EGCG可显著提高糖尿病大鼠肾脏的抗氧化能力和降低氧化应激。对糖尿病大鼠肾脏具有保护作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯抗氧化及神经元保护作用的研究进展

表没食子儿茶素没食子酸酯（epigalloeatechingallate,EGCG）是茶多酚中儿茶素的一种,约占儿茶素总量的50%～80%[1],也是儿茶素最关键的核心物质[2]。研究[3-8]表明,EGCG具有很强的抗氧化、抗癌变、防治糖尿病、降血脂、     

表没食子儿茶素没食子酸酯对阿米卡星诱导大鼠螺旋神经元Bcl-2和Bax表达的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3gallate,EGCG]对阿米卡星(amikacin,Amk)诱导的大鼠耳蜗螺旋神经元(spiral ganglion neuron,SGN)Bcl-2和Bax表达的影响.方法 设生理盐水对照组、Amk[450 mg/(kg·d)×14 d]损伤组和Amk加EGCG[50 mg/(kg·d)×14 d]保护组.各组动物均深度麻醉后半身灌注固定处死,取右侧耳蜗标本固定、脱钙、石蜡轴住包埋、轴位切片,近中轴位切片行Bcl-2和Bax免疫组化染色,光学显微镜下检测耳蜗SGN表达情况、并通过切片图像分析进行半定量处理比较.结果 对照组SGN Bcl-2染色胞浆有棕黄色或黄色颗粒或斑片呈中度着色、Bax染色胞浆有棕黄色或黄色颗粒或斑片呈轻度着色[SGN Bcl-2和Bax染色平均灰度值分别为(81.24±3.10)和(90.92±3.62)1,损伤组SGN Bcl-2染色胞浆着色减轻、Bax染色胞浆着色加深fSGN Bcl一2和Bax染色平均灰度值分别为(99.58±3.97)和(71.12±2.98)1,保护组SGN Bcl-2染色胞浆着色加深、Bax染色胞浆着色减轻[SGN Bcl-2和Bax染色平均灰度值分别为(82.86±8.10)和(89.15±2.85)],图像分析结果 显示损伤组与对照组、损伤组与保护组之间的SGN Bcl-2和Bax染色平均灰度值差异有显著性.结论 Amk耳中毒诱导耳蜗螺旋神经元氧化损伤时Bcl-2表达下调,Bax表达增强.EGCG可以减弱Amk耳中毒时耳蜗螺旋神经元Bax的表达,同时增强Bcl-2的表达,从而减轻Amk耳毒性.     

5羟色胺1B受体在小鼠耳蜗螺旋神经元上的表达及意义

目的研究小鼠耳蜗螺旋神经元上5羟色胺（serotonin,5-HT）1B受体的表达并探讨其意义。方法采用成熟昆明小鼠耳蜗石蜡切片,运用免疫组化技术检测耳蜗螺旋神经元上5羟色胺1B受体的表达。结果实验组小鼠耳蜗螺旋神经元胞浆内显示阳性表达信号,阴性对照组未发现阳性信号。结论5羟色胺1B受体存在于听觉传导通路的第一级神经元,支持5羟色胺作为其递质,对神经兴奋性起着重要的调节作用。     

EGCG对H2O2诱导的螺旋神经节细胞MnSOD基因表达的影响

目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸盐（EGCG）在双氧水（H2O2）诱导耳蜗螺旋神经节细胞（SGCs）氧化损伤中对线粒体抗氧化酶基因-MnSOD基因表达的影响。方法：培养离体SGCs,采用半定量RT-PCR方法检测加入不同浓度H2O2和/或EGCG后螺旋神经元MnSOD基因的表达情况。以经典抗氧化剂维生素C作对照。结果：随着H2O2浓度提高,MnSOD基因的表达亦随之升高;在H2O2浓度大于100 μmol/L时MnSOD基因表达明显上调(P<0.05),100 μg/ml EGCG能明显抑制H2O2诱导的MnSOD基因表达(P<0.05)。 结论：EGCG可能通过清除氧自由基,提高MnSOD酶活性,抑制H2O2诱导的螺旋神经节细胞MnSOD基因表达。     

EGCG对阿米卡星所致大鼠听功能损害的保护作用

目的:本实验研究表没食子儿茶素没食子酸酯对阿米卡星诱导的大鼠听觉功能损害的保护作用。方法:设生理盐水对照组、Amk(450mg/kg.d×14d)损伤组和Amk加EGCG(10mg/kg.d,50mg/kg.d,100mg/kg.d×14d)保护组。五组动物各6只分别于试验前和试验的第7天、14天、21天以及35天行听觉脑干反应阈值检测。结果:第7天、14天、21天以及35天Amk损伤组跟对照组比较10kHz及20kHz阈移显著,10mg/kg EGCG保护组与损伤组比较10kHz及20kHz阈移不显著,损伤组与50mg/kg和100mg/kg EGCG保护组比较10kHz及20kHz阈移显著。结论:EGCG可以减轻阿米卡星诱导的ABR阈移,有效地抑制Amk所诱导的耳毒性。     

连接蛋白29在小鼠耳蜗中的表达

目的研究连接蛋白29（connexin 29, Cx29）在小鼠内耳的表达,探讨Cx29突变致聋的原因。方法野生型小鼠耳蜗冰冻切片,用神经丝蛋白(neurofilament, NF)、髓鞘相关糖蛋白抗体（myelin associated glycoprotein, MAG）和神经胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）抗体与Cx29抗体行双重免疫荧光染色,荧光显微镜观察染色结果。结果Cx29主要表达于位听神经和螺旋神经节细胞髓鞘,MAG与Cx29的共同表达于内耳位听神经处,表达呈圈状;GFAP只在内听道以外的脑干部位表达,与Cx29无共同表达;Cx29形成一个个圈样围绕NF;血管纹处可见Cx29微量表达。结论Cx29在小鼠内耳中大量表达,可能对维持小鼠正常听觉功能起重要作用。     

老年大鼠耳蜗螺旋神经节Caspase-3、Calretinin的表达

目的探讨老年性聋的发病机制。方法建立D-半乳糖衰老大鼠模型,获取老年大鼠耳蜗标本并以正常青年大鼠作对照,用免疫组化SP法检测老年大鼠和青年大鼠耳蜗螺旋神经节Caspase-3,Calretinin的表达。结果老年大鼠耳蜗螺旋神经节Caspase-3,Calretinin的积分光密度明显高于对照组（P〈0．05）。结论老年大鼠耳蜗螺旋神经节Caspase-3、Calretinin含量升高。     

Neuroprotective effect of Qinggan Lishui formula on retinal ganglion cell apoptosis in a microbead-induced rat chronic glaucoma model

OBJECTIVE

To investigate a possible mechanism for protective effects of a decoction of the Qinggan Lishui formula (QF) on retinal ganglion cells (RGCs) in a rat model of microbead-induced chronic intraocular hypertension (COH).

小鼠螺旋神经节神经元的分离和A型钾通道的电生理特性

目的机械分离并酶解小鼠耳蜗螺旋神经节神经元(SGN)细胞,观察其A型钾通道的电生理特性。方法对生后1～6d的小鼠耳蜗螺旋神经节组织进行机械分离并酶解,对SGN进行免疫细胞化学染色鉴定,并利用全细胞膜片钳技术记录和分析A型钾通道电流。结果新生小鼠SGN在机械分离和酶解条件下,可以获得良好的细胞形态。SGN的A型钾通道在-60mV时激活,+40mV时失活,能被细胞外的4-氨基吡啶阻滞。结论成功建立了机械分离并酶解SGN细胞的方法,SGN的A型钾通道具有激活快、失活快的特点。     

Caspase-dependent retinal ganglion cell apoptosis in the rat model of acute diabetes

Background Neural apoptosis is generally believed to be mediated by two distinct pathways, caspase-dependant and caspase-independent pathways. This study investigated the apoptotic pathways involved in retinal ganglion cells in acute diabetes in rats. Methods Diabetes was induced in male Wistar rats by a peritoneal injection of streptozotocin （STZ）. Expression and localization of caspase-3 and apoptosis-inducing factor （AIF） proteins in the retina of diabetic rats was examined by Western blotting and immunohistochemistry analyses. Terminal transferase dUTP nick end labeling （TUNEL） assay and immunofluorescent staining specific for caspase-3 and AIF were applied to analyze for apoptosis of retinal ganglion cells. In addition, a caspase-3 inhibitor DEVD-CHO was injected intravitreally to further determine the apoptotic pathways of retinal ganglion cells triggered in acute diabetes. Results Two weeks after induction of diabetes, a significant increase in caspase-3 protein expression and localization occurred in the nerve fiber layer, ganglion cell layer, and inner plexiform layer of the retina. Four weeks after the onset of diabetes, the increase in caspase-3 expression was profound eight weeks postinduction of diabetes （P 〈0.05）. Meanwhile, no AIF protein expression was detected in this study. In addition, intravitreal administration of the caspase-3 inhibitor DEVD-CHO reduced apoptosis of retinal ganglion cells by its direct inhibitory action on caspase-3. Conclusion Caspase-dependent apoptotic pathways may be the main stimulant of STZ-induced retinal ganglion cell apoptosis in acute diabetes.