应用噬菌体十二肽库筛选卫氏并殖吸虫抗原模拟表位

目的从噬菌体12肽库中筛选卫氏并殖吸虫抗原模拟表位。方法将卫氏并殖吸虫病患者血清免疫粗球蛋白(Ig)作为靶分子筛选噬菌体随机12肽库。经过5轮淘筛，随机挑取24个蓝色噬菌斑进行扩增，以ELISA检测其免疫活性并分析其诊断并殖吸虫病的价值。结果24个克隆中有12个可以被卫氏并殖吸虫病患者血清Ig所识别，其中有2个克隆(P5、P6)具有较好的特异性和敏感性，可能为特异性的卫氏并殖吸虫抗原模拟表位。结论应用噬菌体肽库筛选可以获得卫氏并殖吸虫抗原模拟表位，为并殖吸虫病诊断抗原和短肽疫苗的研究提供了新的方法学依据。     

应用噬菌体十二肽库筛选卫氏并殖吸虫抗原模拟表位

目的　从噬菌体 12肽库中筛选卫氏并殖吸虫抗原模拟表位。　方法　将卫氏并殖吸虫病患者血清免疫粗球蛋白 (Ig )作为靶分子筛选噬菌体随机 12肽库。经过 5轮淘筛 ,随机挑取 2 4个蓝色噬菌斑进行扩增 ,以ELISA检测其免疫活性并分析其诊断并殖吸虫病的价值。　结果　 2 4个克隆中有 12个可以被卫氏并殖吸虫病患者血清Ig所识别 ,其中有 2个克隆 (P5、P6)具有较好的特异性和敏感性 ,可能为特异性的卫氏并殖吸虫抗原模拟表位。　结论　应用噬菌体肽库筛选可以获得卫氏并殖吸虫抗原模拟表位 ,为并殖吸虫病诊断抗原和短肽疫苗的研究提供了新的方法学依据。     

利用噬菌体展示肽库筛选和鉴定沙门氏菌O9抗原的模拟表位

目的　用生物素标记沙门氏菌O9单克隆抗体 (3- 4 7-O)作为分子探针 ,从两个九肽噬菌体展示文库中筛选鉴定该抗体所识别的抗原模拟表位 ,从而为模拟多糖的多肽疫苗或编码该模拟表位的DNA疫苗研制奠定基础。方法与结果　经过三轮的亲和筛选 ,得到了两个能与O9单抗反应的强阳性单克隆扩增物gm6 2和 gm6 8,其序列分别为SHHVRGGGG和YQKWYLPKS。竞争ELISA实验表明 ,10 10转导单位噬菌体 gm6 8对肠炎沙门氏菌与 3- 4 7-O结合的抑制率达到 6 5 % ,而噬菌体 gm6 2的抑制率仅为 2 0 % ,且 gm6 8可以诱导产生针对沙门氏菌O9的抗体 ,而gm6 2则不能。 结论　实验结果显示九肽YQKWYLPKS是具有免疫原性的O9抗原模拟表位。     

噬菌体随机环7肽库筛选恶性疟原虫EBA-175的结合肽

目的从噬菌体随机环7肽库中筛选恶性疟原虫EBA175抗原的结合肽。方法以EBA175重组蛋白为靶筛选噬菌体随机环7肽库,通过ELISA、竞争抑制试验、Westernblot等方法鉴定获得的噬菌体短肽与EBA175之间的结合特性。对阳性克隆进行DNA序列测定,推导其氨基酸序列并与GPA氨基酸全序列进行了同源性比较。结果获得9株可与EBA175结合的阳性噬菌体克隆,序列分析显示为3种氨基酸序列,P1(MLLITIR)、P2(TRKLPRT)、P3(KRLMPLK)。其中出现频率最高的P1序列中LLI与EBA175的受体GPA的108110位氨基酸同源。竞争性ELISA显示展示序列P1的噬菌体能竞争抑制EBA175与其单抗的结合。结论获得了可与EBA175特异结合的阳性噬菌体短肽,·LLI··几位氨基酸可能对EBA175与GPA的结合起重要作用。     

利用噬菌体展示技术筛选日本血吸虫模拟抗原表位

目的　从噬菌体肽库筛选日本血吸虫抗原模拟抗原表位。方法　制备亲和纯化的日本血吸虫病人血清抗体 Ig G,用此 Ig G包被酶标板对 12肽库进行反复淘选 ,对获得的目的噬菌体进行鉴定及免疫原性分析。结果　获得一批阳性噬菌体克隆 ,其中一部分与血吸虫病人血清反应产生较高的吸光值 ,Western blotting分析表明这些噬菌体能被血吸虫病人血清所识别 ,具有类似于血吸虫抗原的免疫原性。结论　获得一批具有模拟日本血吸虫抗原表位的噬菌体克隆 ,为今后进一步研究它们在血吸虫病诊断及疫苗研究中的作用奠定了基础。     

用噬菌体随机肽库鉴定日本血吸虫22.6kDa抗原分子的表位

目的　筛选和鉴定日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6kDa抗原 (Sj2 2 .6)的表位。　 方法　用纯化的抗Sj2 2 .6的多克隆抗体IgG对噬菌体十二肽库进行 5轮免疫学筛选 ,挑取克隆 ;采用Westernblotting免疫识别 ,将获得的阳性克隆免疫小鼠 ,并采用dot ELISA筛选能刺激小鼠产生较高滴度抗Sj2 2 .6抗体的阳性克隆 ;测定核苷酸序列 ,分析其表位与Sj2 2 .6抗原的同源性。　结果　经 5轮免疫学筛选后挑取的 1 4个克隆 ,用Westernblotting方法均能被抗Sj2 2 .6抗体识别。经动物免疫初步实验筛选 ,共获得 6个免疫原性较强的阳性克隆 ,测序结果获得 4种不同表位 ,其中 1种表位与Sj2 2 .6抗原具有较高的同源性 ,其余 3种表位与其无一级结构的同源性。　结论　获得的 4种日本血吸虫中国大陆株抗原表位 ,1种可能为结构表位 ,3种为模拟表位     

用噬菌体肽库筛选SjC-TPI的模拟抗原表位

目的　筛选日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 (SjC TPI)分子的模拟抗原表位 ,研究其免疫学特性。方法　用纯化的抗重组SjC TPI抗体 (IgG)筛选 12肽库 ,获取SjC TPI的模拟抗原表位 ,并研究其抗原特性。结果　获得SjC TPI分子的两个模拟抗原表位M1和M2 ,Westernblotting分析结果表明由这两个模拟抗原表位免疫小鼠产生的免疫血清能识别SjC TPI分子和含此两抗原表位的噬菌体外壳蛋白。DNA测序结果显示这两个模拟抗原表位的氨基酸序列与SjC TPI无同源性。结论　本研究获得的模拟抗原表位M1及M2为SjC TPI的空间构型抗原的模拟表位 ,具有较好的抗原性     

用日本血吸虫感染新模型兔血清筛选噬菌体随机肽库的初步研究

目的在建立一种有成虫寄生但无虫卵肉芽肿形成的日本血吸虫感染小鼠及家兔新模型,并观察其具有较高的抗攻击感染保护力的基础上,用新模型兔血清筛选噬菌体随机12肽库,并初步鉴定阳性噬菌体克隆诱导小鼠抗日本血吸虫感染的免疫保护作用.方法用大肠杆菌抗原吸收后的新模型兔血清,经抗体捕获法筛选噬菌体12肽库,经3轮亲和筛选、富集后获得阳性多克隆.用常规ELISA法检测阳性多克隆噬菌体的抗原性.用滴度为1×1014pfu的阳性多克隆噬菌体按0-2-4周方案皮下多点注射免疫小鼠,末次免疫4周后,用日本血吸虫尾蚴攻击感染,同时设立常规感染兔血清筛获的阳性克隆免疫组、原始肽库免疫组、攻击感染对照组.结果①新模型兔血清筛获的多克隆噬菌体(滴度为1×1014pfu)与新模型兔血清(稀释度为1:400)反应为强阳性,与常规感染兔血清(1:400)反应为弱阳性,与正常兔血清(1:400)反应为阴性.②用新模型兔血清筛获的多克隆噬菌体、常规感染兔血清筛获的多克隆噬菌体及原始肽库分别免疫小鼠后诱导抗攻击感染的减虫率及每克肝脏减卵率分别为27.2%和38.8%、17.8%和35.0%、4.5%和6.0%.结论与用日本血吸虫常规感染模型兔血清筛获的多克隆噬菌体比较,经新模型兔血清筛获的含有模拟日本血吸虫抗原表位的多克隆噬菌体能诱导小鼠更高的抗攻击感染减虫率(P＜0.05)及相似的减卵率(P＞0.05);与原噬菌体随机肽库相比较,能诱导小鼠较高的抗攻击感染减虫率(P＜0.01)及减卵率(P＜0.05).     

用噬菌体十二肽库筛选日本血吸虫病诊断抗原

目的　从噬菌体十二肽库中筛选出特异、灵敏的日本血吸虫病诊断抗原。　方法　以日本血吸虫急感患者血清免疫球蛋白(Ig)作为靶分子,免疫筛选噬菌体随机十二肽库。经过3轮吸附洗脱扩增的淘筛过程,随机挑取10个蓝色噬菌斑扩增,用ELISA检测其免疫活性,并通过对并殖吸虫病及旋毛虫病患者血清的检测分析其诊断日本血吸虫病的价值。　结果　6个克隆可以与日本血吸虫急感患者血清免疫球蛋白(Ig)特异结合。其中A492值最高的克隆(SjA1)具有较好的特异性和灵敏性。　结论　从噬菌体随机十二肽库中筛选到的克隆对日本血吸虫病具有较高的诊断价值。     

应用噬菌体随机肽库研究细粒棘球蚴抗原模拟表位

用抗细粒棘球蚴B抗原(EgB)多克隆抗体筛选噬菌体随机7肽库。经过5轮筛选后,噬菌体回收率从第1轮的4.15×10-5增加到第5轮的4.30×10-2,说明阳性克隆得到富集。随机挑取60个蓝色噬菌斑进行扩增,对其核苷酸序列进行测定分析并与EgB进行同源性比较。采用ELISA法对阳性噬菌体与抗EgB多克隆抗体结合特性进行检测,共检测出45个与抗EgB多克隆抗体结合的克隆株(阳性率为75%),其递呈的七肽序列与EgB的同源性低。采用ELISA法检测所选多肽对棘球蚴病所致过敏性休克患者抗血清的反应性,结果显示,细粒棘球蚴病患者抗血清与45个阳性噬菌体克隆反应的吸光度(A410值)比其与7肽库反应的A410值大2倍以上,该45个阳性噬菌体克隆与EgB多克隆抗体的结合是特异的。提示成功分析细粒棘球蚴囊液B抗原肽表位以及模拟表位。     

用随机肽库筛选胃癌相关抗原MGb2—Ag模拟肽表位

的　运用肽库筛选技术寻找胃癌单克隆抗体ＭＧｂ２ 所识别的胃癌相关抗原的短肽模拟表位。方法　以胃癌单克隆抗体ＭＧｂ２ 作为筛选配基，对呈现于噬菌体衣壳蛋白ｐⅧ上的两个九肽库进行了亲和富集和免疫筛选；阳性克隆用荧光标记和硝酸纤维素膜斑点印迹证实结合活性；随机抽取部分阳性克隆进行了ＤＮＡ 测序分析。结果　经ＤＮＡ 测序分析推导出相应的氨基酸序列并加以比较分析，得到具有保守性的表位信息。结论　具有相对保守性的ＶＣＸＸＤＧＶ 可能为胃癌单克隆抗体ＭＧｂ２所识别的表位基序。     

两种方法筛选噬菌体肽库所获日本血吸虫抗原模拟表位的抗原性比较

目的比较两种不同方法筛选噬菌体肽库所获得的日本血吸虫抗原模拟表位的抗原性.方法以日本血吸虫病患者血清免疫球蛋白(Sj-Ig)作为靶分子, 分别以噬菌体12肽库(SjA)和经过蚯蚓免疫兔血清免疫球蛋白(L-Ig)筛选一轮后的噬菌体12肽库(SjB)为原肽库,进行3轮吸附-洗脱-扩增免疫筛选.随机挑取SjA和SjB蓝色噬菌斑各24个, 扩增后用ELISA方法检测其抗原性.结果 24个SjA克隆中有6个可以与Sj-Ig特异结合, 其中A491 nm值较高的2个克隆具有较好的特异性和敏感性;24个SjB克隆中有10个可以与Sj-Ig特异结合, 其中A491 nm值较高的5个克隆具有较好的抗原性.比较SjA 和SjB两组间克隆的抗原性,结果显示SjB的目的克隆具有更好的特异性和敏感性.结论从SjA 和SjB中均筛选到了对日本血吸虫病具有较高潜在诊断价值的抗原模拟表位,提示以异源性抗体结合后的肽库作为原肽库来筛选寄生虫抗原模拟表位是可行的,同时也为从噬菌体肽库中筛选抗原模拟表位提供了一个新的实验方法.     

从噬菌体十二肽库筛选旋毛虫抗原模拟表位

目的　从噬菌体肽库筛选旋毛虫抗原的模拟表位 ,为研究和开发新的旋毛虫病诊断抗原提供实验依据。方法　以纯化旋毛虫病患者血清免疫球蛋白(Ts IgG)对噬菌体十二肽库进行5轮筛选 ,随机挑选24个克隆 ,通过ELISA选取吸光值(A)较高的6个克隆 (T1～T6) ,并检测其敏感性和特异性。　结果　T1～T6敏感性与旋毛虫幼虫抗原(TsA)相同(阳性率为100%,P>0.05) ,特异性与TsA无明显差异 (阴性率为0～40%,P>0.05),其中T3,T6与并殖吸虫病患者血清无交叉反应 ,特异性高于TsA(P<0.05),T6与日本血吸虫病患者血清无交叉反应 ,特异性亦高于TsA(P<0.05)。　结论　利用噬菌体十二肽库筛选到旋毛虫抗原模拟表位     

从噬菌体肽库中筛选弓形虫抗原模拟表位初探

以弓形虫感染兔血清免疫球蛋白（Ig）作为靶分子，免疫筛选噬菌体随机7肽库和12肽库。经3轮筛选，随机挑取70个噬菌体克隆用ELISA检测其特异性，共获得43个阳性克隆。对23个ELISA反应较强的克隆进行测序，根据序列分析选择有代表性的克隆A7作为模拟表位抗原进行ELISA检测。对47份弓形虫感染兔血清进行ELISA检测，结果32份为阳性，敏感性为68.1%；155份健康人血清中弓形虫抗体呈阳性者10份，特异性为93.5%。从噬菌体随机肽库中能筛选到弓形虫抗原模拟表位有诊断弓形虫病的潜在价值。     

用噬菌体肽库筛选配体及其用途

外源多肽能够在丝状噬菌体表面表达,是Smith等人于1980年第一次报道的。当把外源多肽核酸序列插入到丝状噬菌体外壳P3或P8基因中后,感染宿主菌,P3或P8蛋白氨基端就可以表达出多肽,并且该噬菌体依然具有侵染宿主菌的能力。在此后的二十年里此项研究已发展成为噬菌体肽库的表达,克隆好的噬菌粒经转化进入宿主     

血型A抗原模拟多肽与抗A抗体的分子对接

目的：从分子结构水平研究血型A抗原及其模拟多肽（肽P1 QIWYERTLPFTF,肽P2EYWYCGMNRTGC）与血型A抗体的相互作用。方法：利用Chimera软件构建血型A抗原模拟多肽（P1,P2）的三维结构;将天然血型A抗原及其模拟多肽通过Autodock软件与血型A抗体Fv段（PDB：1jv5）对接。结果：天然血型A抗原和多肽P1、P2都能与1jv5分子中一个由疏水性氨基酸组成的凹槽对接,且对接部位重叠。天然A抗原和P1可以与1jv5形成2个氢键,且天然抗原和模拟多肽都能够与1jv5中的多个氨基酸相合作用。结论：通过生物信息学计算软件成功模拟了血型A抗原及其模拟多肽与抗体1jv5的相互作用情况。此2个模拟多肽是从功能上对天然A抗原进行模拟的。     

噬菌体随机十肽库的构建

目的采用丝状噬菌体表达载体,构建表达于丝状噬菌体尾丝蛋白P3N末端的随机十肽库。方法人工合成编码随机十肽的寡核苷酸片段及两条分别有SfiI和Notl酶切位点的引物,通过PCR反应得到其双链片段,将其克隆入载体pHEN1中,将重组产物转化入大肠杆菌TG1,构建成随机肽库。结果所建肽库含 1×10~9个集落形成单位(cfu)。随机挑取8个克隆测序,其核苷酸序列及推断出的氨基酸序列均随机。结论成功构建了有较高库容量的噬菌体随机十肽库。     

利用噬菌体肽库筛选特异性哇巴因结合肽

目的 寻找与哇巴因特异性结合的多肽，为实现阻断或拮抗哇巴因与钠泵的作用，减少EO致高血压作用奠定实验及理论基础。方法 采用噬菌体随机肽库表面呈现技术筛选出哇巴因特异性结合肽，通过测序，获得氨基酸序列，进行同源性分析，合成筛选出的12肽，采用放射性配基受体结合法检测哇巴因结合肽与哇巴因的结合能力。结果 从噬菌体12肽库中筛选出三种多肽，肽A（12肽的筛选一致率达到66．7％（8／12）；肽B（8肽，插入片段中出现终止子）筛选一致率为16．7％（2／12），肽C（12肽）的筛选一致率达到66．7％（8／12），肽B（8肽，插入片段中出现终止子）筛选一致率为16．7％（2／12）；肽C／（12肽）为8．3％（1／12），仅1例未见插入的多肽片段。Genbamk中蛋白质同源性分析结果：肽A，B，C均未见同源蛋白。结论 哇巴因特异性结合肽蛋白质序列的获得，为哇巴因的研究提供了实验基础。     

利用噬菌体肽库筛选特异性哇巴因结合肽

目的寻找与哇巴因特异性结合的多肽,为实现阻断或拮抗哇巴因与钠泵的作用,减少EO致高血压作用奠定实验及理论基础.方法采用噬菌体随机肽库表面呈现技术筛选出哇巴因特异性结合肽,通过测序,获得氨基酸序列,进行同源性分析,合成筛选出的12肽,采用放射性配基受体结合法检测哇巴因结合肽与哇巴因的结合能力.结果从噬菌体12肽库中筛选出三种多肽,肽A(12肽)的筛选一致率达到66.7%(8/12);肽B(8肽,插入片段中出现终止子) 筛选一致率为16.7%(2/12);肽C(12肽)为8.3%(1/12);仅1例未见插入的多肽片段.Genbamk中蛋白质同源性分析结果肽A、B、C均未见同源蛋白.结论哇巴因特异性结合肽蛋白质序列的获得,为哇巴因的研究提供了实验基础.