乙型肝炎病毒前C基因突变的研究进展

乙型肝炎病毒前Ｃ基因突变的研究进展北京医科大学微生物学系钱锋，卓宁综述朱万孚，庄辉审校乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的传播非常广泛，近年来人们从分子水平对其研究发展很快，尤以对前Ｃ基因的突变研究最多，本文从前Ｃ基因的突变形式，突变所引起的疾病以及对突变株的治...     

乙型肝炎病毒前S1蛋白抗原检测的临床意义

目的通过分析HBV前S1（PreS1）蛋白抗原和血清标志物之间的关系,探讨PreS1蛋白抗原检测在临床上的应用价值。 方法收集382例HBV患者血清样本,采用ELISA法检测HBVPreS1蛋白抗原和血清标志物,采用荧光定量PCR法检测HBV—DNA,并比较所有检测结果。 结果382例HBV患者血清样本PreS1蛋白抗原和HBV-DNA的检出率分别为33．8％和40．8％;其中HBeAg阳性的144例中,PreS1抗原阳性为112例,HBV-DNA阳性为134例,阳性率分别为77．8％和93．1％;HBeAg阴性的102例中,PreS1抗原阳性为17例,HBV-DNA阳性为22例,阳性率分别为7．1％和9．2％。HBV-DNA检出率稍高于PreS1抗原的检出率,但两者间检出率差异均无统计学意义（P〉0．05）。 结论HBVPreS1蛋白可反映HBV复制的情况,与HBV-DNA结果有较好的一致性,可作为临床上HBV感染诊断或监测的指标。     

乙型肝炎病毒前C/C区基因变异检测的临床意义

目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)前C?C区基因的一级结构及其变异特点。探讨前C区1896位基因突变与血清标志物,肝功能损害的关系。方法:收集慢性乙型病毒性肝炎患者血清388份,进行前C/C区基因测序,HBV标志物、HBV-DNA、ALT、AST测定。结果:HBVA1896突变毒株158例,A1899突变毒株57例。C区变异大部分集中在第5、27、60位氨基酸的序列中。结论:A1896突变与HBeAg分泌障碍有关。A1896突变可加重肝脏损害。     

乙型肝炎病毒前S1抗原检测及其临床意义

为探讨检测乙型肝炎病毒前S1抗原(Pre-S1Ag)的临床意义,本文对338例各型乙型肝炎患者进行Pre-S1Ag检测,同时检测HBV标志物和HBV-DNA,对其阳性率及相互关系进行分析比较.结果表明:338例患者,Pre-S1Ag阳性检测率为63.02%,HBeAg阳性检测率为48.52%,HBV-DNA阳性检测率为68.05%.Pre-S1Ag阳性与HBV-DNA阳性的符合率为78.56%;Pre-S1Ag与HBeAg阳性的符合率为81.17%;Pre-S1Ag与HBeAg、HBV-DNA具有显著相关性(P＜0.01),提示Pre-S1Ag能够较好地反映病毒复制状况,有可能作为体内病毒复制存在的实验室指标.     

C基因型乙型肝炎病毒前C区及基本核心启动子突变与疾病进展的相关性研究

目的探讨HBV前C区（PreC）及基本核心启动子（BCP）突变与慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者疾病进展的关系。方法收集88例慢性HBV感染者血清标本，包括36例无症状携带者（其中24例为HBV携带者，12例为HBsAg携带者）、36例慢性乙型肝炎（慢性乙肝）和16例肝硬化患者。所有标本均经型特异性引物PCR法鉴定为HBVC基因型，并用巢氏PCR法扩增HBVPreC和BCP基因片段，用PCR产物直接测序法测序，然后用ClustalW1．8软件进行序列分析。结果在50例HBeAg阳性患者中，无症状携带者、慢性乙肝和肝硬化组的T1762／A1764双突变率和T1846突变率分别为12．5％、42．1％、100％和0％、5．3％、28．6％，差异均有统计学意义（P值分别为0．03和0．02）。在38例HBeAg阴性HBV感染者中，无症状携带者、慢性乙肝和肝硬化组的T1762／A1764双突变率分别为16．7％、58．8％和66．7％，差异无统计学意义（P=0．08）。肝硬化组的C／G1753突变率显著高于无症状携带者及慢性乙肝组（分别为55．6％、8．3％、11．8％，P=0．01），其A1896突变率也高于无症状携带者组（分别为55．6％、8．3％，P=0．01）。结论HBVT1762／A1764双突变与C基因型HBV慢性感染者的疾病进展有关。     

乙型肝炎病毒基本核心启动子及前C区突变与基因型的关系

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)基本核心启动子 (BCP)及前C区突变与基因型之间的关系。方法　随机选取 113例慢性HBV感染者外周血 ,采用INNO LiPA法测定BCPT176 2 A176 4双突变及前C区A1896突变 ,测定HBVS基因序列明确基因型。结果　在C基因型感染者中BCPT176 2 A176 4双突变率明显高于B基因型感染者 ,差异有显著性 (34.2 %∶10 % ,χ2 =6 .74 ,P <0 .0 1) ,而前C区A1896突变率在B基因型和C基因型感染者中差异无显著性 (2 .5 %∶4 .1% ,χ2 =0 .0 0 ,P >0 .0 5 )。结论　与B基因型相比 ,C基因型感染者更易发生BCPT176 2 A176 4双突变。     

乙型肝炎病毒基因前C区热点变异及其意义

乙型肝炎病毒（HBV）基因组变异在病毒感染过程中扮演着非常重要的角色,曾经一度成为肝为研究的一个热点,其中前C区热眯变异是变异研究的重点,本文就HBV前C区基因的结构功能,热点变异发生的可能,机理与临床的关系等有关研究情况作一简述。     

四种乙型肝炎病毒前S抗体对肝组织相应抗原识别的比较

<正> 随着人们对乙肝病毒前S蛋白(简称前S)研究的不断深入,国内外学者已经制备出多种抗前S_1及抗前S_2抗体。其中一些已用于前S的免疫组化研究。本文将四种抗前S抗体同时用于免疫组化染色,比较这些抗体对石蜡切片肝组织内前S_1和前S_2的识别能力,并观察制片方法对前S检查结果的影响。     

乙型肝炎病毒前C/C基因准种与变异特点的研究

近年来的研究提出ＨＢＶ感染者体内存在有准种的假说 ,我们以前Ｃ/Ｃ基因为研究靶区域 ,应用多聚酶链反应(ＰＣＲ)技术扩增慢性乙型肝炎患者血清中的靶序列 ,随机选择克隆测序 ,比较其结果 ,证明了ＨＢＶ准种的存在 ,并发现多种基因突变形式。试验用 4例患者诊断为病毒性肝炎 ,乙型、慢性 ,临床检测ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｃ阳性。提取 2 0 0 μｌ血清中的ＨＢＶＤＮＡ ,用于多聚酶链反应 (ＰＣＲ)。以甘人宝等发表的ＨＢＶａｄｒ亚型序列为依据 ,设计引物序列。其上游引物为 :5′ＡＣＴＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＴＧＣＡＡＣＴＴＴＴ…     

乙型肝炎病毒前C区1 896位点突变的PCR分析法

近年研究表明,乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者体内,可能存在ＨＢＶ前Ｃ区突变。我们根据ＨＢＶ前Ｃ区ＤＮＡ序列,建立了３′碱基特异性聚合酶链反应（３′ＢＳＰＣＲ）法,检测ＨＢＶ前Ｃ区第１８９６位核苷酸的突变,并检测了７２例ＨＢＶ感染者、１４例甲型肝炎患者的血清ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位的突变。病例选择为１９９６年１１月～１９９７年８月期间,在安徽医科大学附属医院传染科就诊的门诊和住院病人。７２例ＨＢＶ感染者中,抗ＨＢｅ阳性７２例,其中慢性乙型肝炎４７例、慢重肝９例、肝炎后肝硬化１６例、另有甲型肝炎患…     

乙型肝炎病毒前S1抗原检测的临床意义

探讨乙型肝炎病毒前s1抗原（Pre-S1）检测在乙型肝炎病毒诊断中的临床意义。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光定量聚合酶链反应技术（fluorescenee quantitative PCR,FQ-PCR）对650份HBV-M不同阳性模式及40份HBV—M全阴性模式血清标本进行乙型肝炎病毒Pre-S1、乙肝五项和HBV—DNA检测,并对三种检测结果进行统计学分析。在650份HBV—M不同阳性模式标本中,在119份大三阳标本中Pre—S1阳性检出率92．4％,HBV-DNA阳性检出率100％,在186份小三阳标本中Pre—SI阳性检出率42．5％,HBV—DNA阳性检出率63．4％,在21例HBsAg（＋）和HBcAb（＋）阳性组中Pres1阳性检出率47．6％,HBV．DNA阳性检出率66．7％;在297例HBsAb（＋）标本中Pre—S1阳性检出率0．4％,HBV-DNA阳性检出率0％,在268例HBV—DNA阳性的标本中Pre-S1阳性检出率79．3％。在40份HBV—M全阴模式中Pre-S1阳性检出率0％,HBV-DNA阳性检出率0％。Pre—S1在大三阳、小三阳及HBV-DNA阳性组阳性检出率明显高于阴性组（P〈0．01）,Pre—S1检测可补充和完善乙肝“两对半”检测的不足,尤其对HBeAg阴性或变异的HBV感染者能更好的反映病毒的复制状态和传染性。     

乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白基因的筛选

目的筛选并克隆人肝细胞中与乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)相互作用的蛋白质基因。方法将重组诱饵质粒pGBKT7eAg转化酵母细胞AH109后与预转了人肝cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,提取质粒后转化大肠埃希菌并进行序列测定,进行生物信息学分析。结果配合后筛选出既能在4缺(SD/TrpLeuAdeHis)培养基又能在铺有Xα半乳糖(Xαgal)的4缺培养基上生长并变成蓝色的真阳性菌落245株。完成了101株克隆的测定,经过序列分析排除了重复同源序列后,最终确定其中有41株不同的基因,其中人类同源基因35条,其余6株为未知基因。结论成功克隆出肝细胞中的HBeAg结合蛋白基因,为进一步研究HBeAg的功能提供了新线索。     

乙型肝炎病毒前C区和BCP区突变株复制质粒的构建

目的　构建乙型肝炎病毒 (HBV)前C区和基本核心启动子区 (BCP)突变株的复制质粒。方法　以含 1 2倍拷贝HBVDNA全基因的质粒 (pHBV1 2 )为工具 ,采用分子克隆、PCR定点诱变、限制性酶切长度多态性和序列分析等技术构建目的质粒。转染肝癌细胞株Huh7后 ,测定培养上清HBsAg、HBVDNA来了解病毒抗原的表达和病毒复制。结果　成功构建了 10种HBV全基因前C区 /BCP区突变的表达质粒 ,转染肝癌细胞株 ,获得病毒的表达和病毒颗粒的分泌。其中 ,pUC HBVT176 2、A176 4双突变以及pUC HBVT175 3突变株复制效率较高 ,转染细胞培养上清的HBVDNA为3 16× 10 5拷贝 ml。野生型复制子培养上清HBVDNA含量稍低于BCP突变复制子。结论　获得 10株含有不同前C区和BCP区突变的HBV全基因复制质粒 ,为体外进一步研究上述变异的生物学意义提供基本模型。     

乙型肝炎病毒前S蛋白免疫组织化学的研究

An indirect immunohistochemical technique was established to detect pre-S1 and pre-S2 proteins in liver with monoclonal antibodies, and altogether 80 samples of liver were studied. Under light microscope, pre-S1 and pre-S2 were known to be expressed in a similar way and might be divided into three patterns: diffusion type, inclusion type and membrane type. Membranous type expression of both pre-S1 and pre-S2 was associated with activity of the liver diseases and liver cell necrosis. Pre-S1 and Pre-S2 were also expressed in several samples of hepatocellular carcinoma.     

双重表达乙肝病毒前S2抗原的重组质粒的疫苗效应

目的：乙肝病毒（HBV）的前S2抗原具有比S抗原更强的免疫原性，可以更有效地诱生特异性免疫应答。文中构建含有前S2抗原编码基因的3种重组质粒，观察接种后诱生特异性体液免疫应答的情况。方法：采用PCR技术扩增HBV的S2-S和S1-S2-S基因；同时串联拼接产生S2-S-S2片段。继而构建重组表达质粒pcDNA3．1／S2S、pcDNA3．1／S1S2S和pcDNA3．1／S2SS2。后者意在表达S抗原的同时，双重表达前S2抗原。然后将上述3种质粒分别以100μg肌肉接种BALB／c小鼠，于2、4周后各加强1次。初次接种后3、5、8和12周，分别采血检测小鼠的前S2抗体和抗-HBs。结果：初次接种后3周，S2SS2组小鼠血清的前S2抗体检出率为12．5％，低于S1S2S组（25％）和S2S组（37．5％）；但5周时则达到87．5％，并持续到12周，优于S1S2S组和S2S组；并且S2SS2组的前S2抗体滴度达到1：2000，高于S2S组（1：500）和S1S2S组（1：50）。不过，S2SS2组同期的抗-HBs检出率和抗-HBs滴度则低于S1S2S组和S2S组。结论：重组质粒pcDNA3．1／S2S-S2以串联拼接方式双重表达前S2抗原，能够诱生较高水平的特异性前S2抗体，但其诱生抗HBs的能力却明显降低，这是在设计改造基因疫苗时需要考虑的一个重要问题。     

乙型肝炎病毒基因点突变与临床的关系

本文对近几年来乙型肝炎病毒(HBV)的四个开放读码框(S区、C区、X区和P区)与临床关系较为密切的点突变的研究作了简要的综述。     

乙型肝炎病毒基因组前-前-S和前-X区基因分布的研究

目的研究不同基因型乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S和前-X区核苷酸和氨基酸序列分布。方法应用DNAstar软件中的MegAlign程序分析GenBank登记的35株和3株由本室测定的不同基因型HBV全序列中前-前-S和前-X区基因分布情况，并用Blast软件对GenBank中598株HBV全基因组序列进行前-前-S和前-X区的核苷酸和氨基酸相似性分析。结果除D基因型外，在各型HBV基因组中均存在前-前-S区核苷酸序列，但仅在C、F和H型HBV基因组中存在前-前-S区开放读码框架(ORF)。但前-X区核苷酸序列及其ORF仪见于C基因型HBV。在GenBank登记的598株不同基因型HBV中，与推导的前-前-S区相似氨基酸序列有36株，而与推导的前-X区相似的氨基酸序列有47株。结论前-前-S区序列存在于除D基因型以外的所有HBV基因型，而前-X区基因仅存在于C基因型HBV基因组中。