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相似文献
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1.
本文利用免疫沉淀、双相凝胶电泳技术分析了某些DR位点纯合子细胞DR抗原电泳图谱。待检细胞用~3H-亮氨酸生物合成性标记,提取膜蛋白,对抗DR单态型抗血清做免疫沉淀,沉淀物用双相凝胶电泳进行分析。结果表明,DR抗原α肽链电泳图单一,各DR型间无差异:β肽链电泳图谱因DR型别而异,是区分DR型别的主要依据。此外,2例DR2纯合子细胞图谱明显不同,提示为两个不同的亚型。  相似文献   

2.
本文应用O'Farrell建立并改进的NEPHGE和SDS-PAGE双相凝胶电泳方法分析了4株中国人HLA纯合细胞的DR_5抗原的多态性。用Iodogen法标记抗原,然后用单抗进行免疫沉淀,得到DR_5抗原后进行双相凝胶电泳,同时还将一株国外参考细胞HVB的DR_5抗原进行电泳并比较其格局。结果表明SMY-129A,SMY-129B属于DR_(w11)而SMY-43A及SMY-124D可能与DR_(w12)有关。  相似文献   

3.
15个HLA—DR5HTC的RFLP结果分析及与细胞学分型比较结果   总被引:3,自引:1,他引:2  
本文报告国内外15个DR 5纯合细胞(HTC)的RFLP结果,其中9个HTC还做了MLC棋盘。研究结果表明,DR5是一个高度多态的抗原决定簇。根据DR和DQ的多态性可将DR5HTC分成若干亚型,这些亚型与细胞学检出的D_w特异性相吻合,说明DR和DQ都参与了D_w特异性的表达。15个HTC中有4个是中国人DR5HTC,RFLP和MLC棋盘结果都表明,它们的D_w特异性与现知的D_w5、DB2和DB6都不同,分别属于3种新的D_w特异性。  相似文献   

4.
自身混合淋巴细胞反应中DR抗原诱导作用的初探   总被引:2,自引:0,他引:2  
本文摸索和稳定了AMLR方法,对AMLR中的技术关键,如T和非T细胞分离纯度、AMLR是否受外来抗原干预以及DR抗原是否诱发AMLR等进行了研究。结果表明AMLR不受FCS外来抗原干预。用DR McAb封闭自体刺激细胞上的DR抗原,自体反应性T细胞的增殖显著降低;相反,用PWM诱导自体刺激细胞上的DR抗原表达,则自休反应性T细胞增殖显著增高。  相似文献   

5.
为探讨鼻咽癌细胞人白细胞DR(HLA-DR)抗原表达与临床和预后的关系,采用免疫组化ABC方法检测77例鼻咽癌组织中HLA-DR抗原表达情况,并分析了该抗原表达与鼻咽癌临床病理及预后的关系。结果显示44.2%(34例/77例)的鼻咽癌细胞表达HLA-DR抗原,而癌旁非肿瘤上皮细胞中该抗原阴性。HLA-DR抗原表达与鼻咽癌临床分期关系密切。随肿瘤进展,其阳性率呈阶梯状下降,不同临床分期肿瘤间该抗原阳性率差异存在显著性(Pw<0.05)。随访8年以上的资料分析表明HLA-DR抗原阳性鼻咽癌的预后非常显著地优于该抗原阴性的鼻咽癌(P<0.01)。以上结果提示HLA-DR检测对于评估鼻咽癌预后有所帮助,支持肿瘤细胞可能产生免疫调节作用的观点。  相似文献   

6.
抗人DR5抗体mDRA- 6细胞毒作用机制分析   总被引:5,自引:1,他引:5  
目的:探讨鼠抗人DR5单克隆抗体(mAb)mDRA-6对Jurkat细胞的细胞毒作用及其机制。方法:以流式细胞术测定mAbmDRA-6对Jurkat细胞的细胞毒作用和细胞凋亡作用,以及caspase8、9的抑制剂对mAbmDRA-6诱导的Jurkat细胞凋亡的影响。在荧光显微镜下,观察mAbmDRA-6对Jurkat细胞形态的影响。以琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞中的DNA片段化。结果:mAbmDRA-6对Jurkat细胞具有显著的细胞毒作用,并呈剂量和时间依赖性。经mAbmDRA-6处理后,Jurkat细胞可出现典型的细胞凋亡的形态特征:细胞膜皱缩,出泡,染色质浓缩,形成凋亡小体等。经mAbmDRA-6处理后,Jurkat细胞膜表面高表达丝氨酸磷脂,并可导致Jurkat细胞中的DNA片段化。caspase8的抑制剂可明显抑制mAbmDRA-6诱导的Jurkat细胞凋亡,caspase9的抑制剂的影响很小。结论:mAbmDRA-6可通过死亡受体信号传导途径诱导Jurakt细胞凋亡,对Jurkat细胞产生细胞毒作用,其在以TRAIL/DR5系统进行的肿瘤治疗和探讨DR5功能结构域方面具有广阔的应用前景。  相似文献   

7.
诱导细胞凋亡的抗hDR5单抗的研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的 研制能诱导肿瘤细胞凋亡的抗人DR5单克隆抗体(McAb)。方法 以可溶性人死亡受体(death receptor,DR)5胞外段免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人DR5的McAb;MTT方法筛选分泌有细胞毒活性McAb的杂交瘤细胞;亲和层析方法纯化McAb;夹心ELISA法测定McAb亚型;Western blot和斑点ELISA法检测McAb的抗原表位类型;间接ELISA法检测McAb的特异性;流式细胞仪检测FITC-annexinⅤ/PI双色标记的Jurkat细胞的凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳测定凋亡细胞的DNA片段化。结果 获得1株杂交瘤细胞,其分泌的McAb命名为mDRA-6,为IgG1;其抗原表位类型为构象表位;其特异性识别hDR5,与hFas、hDR4等无交叉反应。mDRA-6对Jurkat细胞具有细胞毒作用;经McAb mDRA-6处理后,Jurkat细胞膜表面高表达丝氨酸磷脂,并导致Jurkat细胞中的DNA片段化。结论 mDRA-6是一个具有诱导细胞凋亡活性的新的抗人DR5功能性抗体,在以TRAIL/DR5系统进行肿瘤治疗和探讨DR5的功能结构域研究方面具有广泛应用前景。  相似文献   

8.
目的探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗——YM366EC对Jurkat细胞增殖的影响,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制。方法MTF方法检测抗体对Jurkat细胞存活率,FrlE—AnnexinV/PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响。交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12h收集细胞,提取蛋白Westernblot检测Bcl-2、Cyt—C、Caspase-8、Caspase-3、Bax、Caspase-9的变化。结果抗DR5抗体单独应用不能抑制高表达DR5分子的Jurkat细胞增殖,但应用抗小鼠IgG交联DR5抗体后可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变。并且Westernblot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bel-2蛋白表达减少;Cyt—C、Bax,有活性的Caspase-8、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达增加。结论交联抗DR5抗体YM366EC对Jur—kat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、Caspase.8、Caspase-3、Caspase-9。  相似文献   

9.
HLA—DR抗原在肝细胞癌中的表达及意义   总被引:1,自引:0,他引:1  
HL A- DR通过 MHC 类分子限制的 T细胞对外来抗原的识别 ,在机体免疫应答和免疫调节过程中发挥重要的作用。许多肿瘤细胞表面常出现 HL A - DR的异常表达 [1 ,2 ] ,这种现象在肿瘤发生、发展及自身免疫调节过程中具有一定的生物学意义 ,而成为肿瘤免疫学研究的热点之一。本研究采用免疫组化技术对 HCC肝组织中 HL A- DR抗原的表达进行了检测 ,并探讨其意义。1 材料与方法2 0例正常肝组织取自肝部分切除术患者 ,男 13例 ,女7例 ,平均年龄 (41.8± 6 .2 )岁。 44例 HCC和癌旁组织取自1997~ 1999年本院肝胆外科手术切除标本 ,全部…  相似文献   

10.
IL—2诱导的内皮细胞HLA—DR抗原表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
用间接免疫荧光染色及微量细胞毒试验证实.人白细胞介素2(Interleukin 2,IL-2)脬育原代培养生长呈融汇状的人脐带静脉内皮细胞24~72小时.可诱发细胞的HLA—DR抗原表达,而内皮细胞抗原和Ⅷ因子相关抗原在这一过程仍呈阳性反应.IL-2影响内皮细胞摄取~8H-TdR和~3H-UR.同时对细胞形态也育影响。T淋巴细胞和经植物凝集素(PHA)激活的T细胞及其条件培养液也影响内皮细胞对~3H-TdR和~3H—UR的摄入.结果提示IL-2不仅可诱发内皮细胞的HLA-DR抗原表达.且影响细胞的代谢.  相似文献   

11.
高千伏胸部摄影在DR系统的应用   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:探讨DR高千伏胸部摄影的条件,评价DR胸部影像。方法:①选择5种体型人体(特瘦、瘦、中等、胖、特胖)各10人,将KV固定为125KV,按7种不同档次的mAs进行正侧位投照。②选取最佳成像的摄影条件,按此条件对1000例患者进行摄影。③对1000例DR胸部影像进行质量评定。结果:①高千伏投照5种体型最佳成像的mAs范围,正位2.0-6.4mAs,侧位4.0-10.0mAs。②1000例DR胸部影像甲级片占50.6%,乙级片占38.5%,丙级片占10.9%,无废片影像。结论:高千伏DR胸部摄影可代替高千伏屏-胶胸部摄影,并具有更多的优越性。  相似文献   

12.
目的:观察抗死亡受体5(Death receptor 5,DR5)单克隆抗体--mDRA-6与顺铂(DDP)对HL-60细胞的协同杀伤作用.方法:DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗DR5单抗--mDRA-6;流式细胞术测定顺铂对HL-60细胞表面DR5表达及细胞凋亡率;荧光显微镜下观察mDRA-6与顺铂协同作用下HL-60细胞形态变化;MTT法测定不同浓度的顺铂与mDRA-6对HL-60细胞存活的影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6与顺铂联合对HL-60细胞DNA片段化的影响.结果:顺铂可诱导HL-60细胞表面DR5表达增加,mDRA-6与顺铂联用致HL-60细胞出现染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成等细胞凋亡形态学变化;250 ng/ml的mDRA-6作用于HL-60细胞10小时,细胞凋亡率为16.61%;0.16 μg/ml的DDP作用于HL-60细胞10小时,细胞凋亡率为2.35%;二者联合作用后,HL-60细胞凋亡率增至57.10%;mDRA-6与DDP联合作用HL-60细胞,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显“梯形”条带.结论:抗DR5单抗--mDRA-6与DDP对HL-60细胞具有强大的协同杀伤作用.  相似文献   

13.
目的:探讨抗人DR5功能性单克隆抗体mDRA-6对食管鳞癌EC9706和109细胞的细胞毒作用及其作用机制。方法:利用MTT法检测mAb mDRA-6对食管癌细胞的细胞毒作用;在显微镜下观察食管癌细胞死亡的形态变化;以琼脂糖凝胶电泳检测食管癌细胞中的DNA片段化。利用流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5表达、细胞凋亡率和线粒体膜电位;利用caspase抑制剂分析mAb mDRA-6的细胞毒作用机制。结果:mAb mDRA-6对食管鳞癌细胞有显著的细胞毒作用,并呈剂量和时间依赖性,但对食管上皮细胞NEC细胞没有毒性。经mAb mDRA-6处理,食管鳞癌细胞出现典型的细胞凋亡特征:细胞膜皱缩,出泡,染色质浓缩,形成凋亡小体以及DNA片段化等。流式细胞术检测结果显示,食管癌细胞表面表达DR5,而食管上皮细胞NEC细胞不表达;经1.2μg/ml的mAb mDRA-6作用24小时后,大多数食管鳞癌EC9706和109细胞的表面均表达磷脂酰丝氨酸。Caspase 8的抑制剂几乎完全抑制mAb mDRA-6诱导的细胞凋亡,Caspase 9抑制剂的则影响小。此外,在mAb mDRA-6诱导的食管癌细胞凋亡的早期,线粒体膜电位不改变,在凋亡的晚期,线粒体膜电位降低。结论:mAb mDRA-6主要通过死亡受体信号传导途径诱导细胞凋亡,对食管鳞癌细胞产生细胞毒作用,其在以TRAIL/DR5系统进行的肿瘤治疗和探讨DR5功能结构域方面具有广阔的应用前景。  相似文献   

14.
目的:研究鼠抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对白血病细胞U937的凋亡诱导作用。方法:光镜下观察mDRA。6作用后U937细胞的形态变化;流式细胞术检测15937细胞表面DR5表达率;MTT法检测mDRA-6对U937细胞生长的影响;AnnexinV—FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测U937细胞DNA的片段化降解;JC-1单染流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位改变。结果:mDRA-6作用U937细胞后呈现典型的细胞凋亡特征;MTT法检测显示mDRA-6作用U937细胞24小时死亡率为61.09%,并呈时间、浓度依赖性;流式细胞仪检测显示10mg/L的mDRA-6作用4小时,U937细胞凋亡率为79.12%;琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型;mDRA-6作用U937细胞后线粒体膜电位明显下降。结论:mDRA-6能够诱导白血病U937细胞凋亡,是具有诱导细胞凋亡活性的功能性抗体。  相似文献   

15.
目的从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗人死亡受体5(DR5)单链抗体(sc Fv)并对其抗原结合活性进行鉴定。方法以前期真核表达纯化的DR5-Fc蛋白包被筛选管,从自主构建的大容量天然噬菌体抗体库中,通过4轮筛选过程获得噬菌体抗体,采用免疫细胞化学染色、ELISA鉴定其抗原结合活性;DNA指纹图谱分析和序列测定确定其抗体类型。结果经过4轮筛选,获得26株与DR5特异性结合的阳性克隆,DNA指纹分析有4种不同的可变区片段;经过基因测序,分析可变区基因的亚群,并将其制备成可溶性的抗体,进一步用免疫细胞化学技术证实所获得的抗体可特异性结合SW480细胞的DR5蛋白。结论利用噬菌体抗体库技术成功获得了特异性抗DR5的人源性sc Fv。  相似文献   

16.
 目的 研究中国汉族白血病患者及其相关人群罕见的HLA-DR/DQ连锁不平衡单倍型。方法 对2000-2005年在我院进行异基因造血干细胞移植前HLA配型的白血病患者及与患者有血缘关系的家系供者共1500例的血液标本,采用低分辨序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法进行HLA-DR/DQ基因分型,并对两位点间连锁不平衡参数进行统计学分析。1500例中患者650例,平均年龄25岁;家系供者850例,平均年龄42岁。结果 在41例的血液标本中发现13种罕见的连锁不平衡单倍型,主要为HLA-DQ8 或HLA-DQ9与不同DR位点的连锁。其中DR14/DQ4、DR4/DQ5、DR9/DQ6、DR9/DQ7、DR8/DQ8、DR9/DQ8、DR12/DQ8、DR13/DQ8和DR14/DQ9共9种单倍型尚未见报道。650例白血病患者中有20例存在12种罕见的连锁不平衡单倍型,850例家系供者中有21例存在8种罕见的连锁不平衡单倍型。DR8/DQ8单倍型只见于家系供者,而DR14/DQ4、DR12/DQ6、DR11/DQ8、DR13/DQ8和DR14/DQ9单倍型则只见于白血病患者。41例HLA-DR/DQ基因分型结果显示,连锁不平衡单倍型与DR52(DRB3)宽抗原相关联者占58.5%(24/41),与DR53(DRB4)宽抗原相关联者占36.6%(15/41),而与DR51(DRB4)宽抗原相关联者仅占4.9%(2/41)。所发现单倍型频率最高的为DR12/DQ8(0.0023)和DR9/DQ8(0.0023),其次为DR11/DQ9(0.0020)和DR12/DQ9(0.0017)。13种连锁不平衡单倍型的绝对及相对连锁不平衡参数均为负值,说明它们在中国汉族人群中较为罕见,并处于连锁不稳定状态。结论 发现了罕见的DR/DQ连锁不平衡单倍型,对补充中国汉族人群HLA-DR/DQ基因的连锁不平衡类型,提高HLA分型结果的准确性具有一定意义;同时,DR/DQ连锁不平衡单倍型在不同人群中的差异为疾病关联研究提供了思路。  相似文献   

17.
抗人DR5单克隆抗体mDRA-6对HL-60细胞的诱导凋亡作用   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 观察抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体nDRA-6对HL-60细胞的凋亡作用.方法 制备抗人DR5单克隆抗体mDRA-6;荧光显微镜下观察mDRA-6作用后HL-60细胞的形态变化;MTT法测定不同浓度mDRA-6在不同作用时间对HL-60细胞存活的影响;通过FITC-Annexin V及PI标记细胞,以流式细胞仪检测mDRA-6对HL-60细胞凋亡率的影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6对HL-60细胞DNA片段化的影响.结果 mDRA-6导致HL-60细胞染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;mDRA-6对HL-60细胞具有明显的杀伤作用,24ng/mL mDRA-6作用HL-60细胞10 h,细胞死亡率达21.2%;1μg/mL的mDRA-6作用8 h,可使HL-60细胞死亡44.1%;Annexin V及PI双染显示,10μg/mL mDRA-6作用2 h,HL-60细胞的凋亡率达48.1%;20μg/mLmDRA-6作用HL-60细胞3 h,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显的"梯形"条带.结论 抗DR5单克隆抗体mDRA-6具有诱导HL-60细胞凋亡作用.  相似文献   

18.
目的:探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法:光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MTT法检测Jurkat细胞的增殖,利用FITC-AnnexinV及PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12小时时Bcl-2、Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9的表达变化。结果:DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但应用抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的caspase3和caspase9蛋白的表达增加。结论:交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9。  相似文献   

19.
目的:探讨抗人死亡受体5(Death receptor 5,DR5)单克隆抗体mDRA-6诱导Jurkat和U937细胞凋亡的线粒体信号通路。方法:MTT法检测mDRA-6对Jurkat和U937细胞生长增殖的影响,以及caspase-9、3抑制剂对mDRA-6抑制Jur-kat和U937细胞生长增殖的影响;琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat和U937细胞DNA片段化降解;Western blot检测mDRA-6对Jurkat和U937细胞bax、bcl-2、bcl-xl、Cyt c及caspase-9、3的激活改变。结果:mDRA-6呈时间、浓度依赖性地抑制Jurkat和U937细胞的生长增殖,10 mg/L的mDRA-6作用6、8和10小时,Jurkat细胞增殖抑制率分别达59.38%、72.56%和76.28%,U937细胞增殖抑制率分别达38.67%、47.54%和50.59%。琼脂糖凝胶电泳显示,10 mg/L的mDRA-6作用6小时,Jurkat和U937细胞均呈现凋亡细胞特有的DNA梯形条带;Western blot检测结果发现,随着mDRA-6作用时间延长,Jurkat和U937细胞内促凋亡分子bax增多,抗凋亡分子bcl-2及bcl-xl减少,Cyt c释放明显增多,同时caspase-9、caspase-3也显示明显的激活表现。预先使用caspase-9抑制剂孵育细胞1小时,mDRA-6所致Jurkat和U937细胞生长抑制率分别降低了24.36%(t=5.44,P﹤0.01)和20.82%(t=4.29,P﹤0.01),mDRA-6所致Jurkat和U937细胞凋亡率分别降低了32.89%和23.97%。结论:线粒体信号通路激活是抗人死亡受体5(Death receptor 5,DR5)单克隆抗体mDRA-6诱导Jurkat和U937细胞凋亡的途径之一。  相似文献   

20.
为探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号转导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制。观察了交联366EC对Jurkat细胞的形态变化,细胞增殖和细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测YM366EC作用于Jurkat细胞不同时间Bcl-2、Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9的表达变化。结果发现DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,形成凋亡小体,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bel-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的Caspase 3和Caspase 9蛋白的表达增加。结果表明交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9。  相似文献   

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