幽门螺杆菌lpp20基因与麦芽糖结合蛋白基因的融合表达与纯化

目的 研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H．pylori)lpp20基因与麦芽糖结合蛋白基因的融合表达产物的纯化方法，为幽门螺杆菌基因工程疫苗的制备建立基础。方法 采用本研究室分离的HpMEL-HP27菌株提取染色体DNA，用PCR方法从HP染色体DNA上扩增出lpp20基因片段，将目的基因插人到表达载体pMAL-c2X中，用重组质粒转化大肠杆菌(E．coil TB1)。采用IPTG进行诱导表达。用多糖树脂(amylose resin)作为填充料，制备层析柱，将可溶性菌体蛋白进行亲和层析。应用SDS-PAGE方法对纯化产物进行分析。结果 融合蛋白的分子量约为60kDa，融合蛋白的表达量约占全菌总蛋白的34％；纯化后的融合蛋白纯度达90％以上。结论 与麦芽糖结合蛋白基因融合的lpp20基因在E．coli TB1中能够高效表达；用多糖树脂作为填充料，进行亲和层析的方法，具有良好的纯化效果。     

4种血清型登革病毒多表位重组抗原的表达及血清学初步评价

目的在原核表达系统中对登革病毒包膜蛋白(E蛋白)和非结构蛋白1(NS1)融合的B细胞抗原表位进行表达、纯化及血清学评价。方法将B细胞抗原表位用形成α螺旋的连接肽(EAAAK)2作为接头,串联合成1条全新的多表位融合重组基因rE,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达融合蛋白,用镍柱对重组蛋白纯化,并用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达产物。以融合蛋白为抗原,用间接ELISA检测登革热病人血清IgM抗体。结果重组表达载体pET28a-rE构建成功,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达。融合蛋白主要以包涵体形式存在,用镍柱纯化获得高纯度的目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测结果显示蛋白分子量大小与预期结果相符,建立的间接ELISA具有较高的准确性。结论原核表达的登革病毒多表位融合蛋白具有良好的血清学检测价值。     

人Angiopoietin-2剪接体Ang2443的快速克隆及高效表达

目的构建Angiopoietin-2剪接体Ang2443全长及功能结构域（CC区和FL区）的原核和真核表达质粒，并在大肠杆菌内获得高产量表达。方法利用RT—PCR方法从人脐静脉内皮细胞中扩增获得Ang2443功能结构域CC区和FL区，以剪接扩增PCR克隆全长片段，亚克隆至pET-32b（-）载体，IPTG诱导获得融合蛋白表达。凝血酶酶切后经柱层析纯化获得完全蛋白。结果在所培养的人脐静脉内皮细胞中，Ang244，是唯一表达的剪接体。以此构建了pET—CC、pET—FL和pET—Ang2三个原核和真核表达载体，并在大肠杆菌内获得高产量表达。1mM IVPG诱导表达后蛋白产量60％。凝血酶酶切完全，经柱层析纯化后获得完全蛋白。结论成功克隆并表达了在所培养的人脐静脉内皮细胞中唯一表达的Angiopoietin-2剪接体Ang2443全长及功能结构域蛋白。     

人新的生长激素异形体基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的　构建含新的生长激素异形体 (GHv)基因全长编码区的pGEM TEasy质粒和GHv 谷胱甘肽转硫酶 (GST)融合蛋白的表达质粒并在大肠杆菌表达出其融合蛋白。方法　采用克隆和亚克隆技术构建GHv GST融合基因的表达质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1并用异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导其表达GHv GST融合蛋白 ,谷胱甘肽 Sepharose 4B纯化试剂盒纯化融合蛋白。 结果　含GHv GST融合基因表达质粒的大肠杆菌表达出相对分子质量约 43 0 0 0的GHv GST融合蛋白 ,SDS PAGE结果显示纯化的融合蛋白为单一条带。结论　成功构建成GHv GST融合基因的表达质粒并且GHv GST融合蛋白在大肠杆菌BL2 1中有高表达。上述工作为制备多抗 ,深入研究GHv基因的功能奠定了基础。     

大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)无毒突变体mLT63在大肠杆菌中的融合表达及纯化

目的 在大肠杆菌中表达并纯化大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63融合蛋白，并探索其免疫反应性。方法采用不同的诱导温度，IPTG浓度，葡萄糖含量，pH值以及不同的培养基优化重组菌TB1（pMAL-c2X-mlt）的表达条件，表达产物经超声粉碎,超声上清经初步盐析、应用直链淀粉亲和层析柱纯化，Western blot鉴定纯化产物的免疫学反应性。结果 融合蛋白在诱导表达产物中的含量达到16．11％,纯化产物的纯度达到72．58％。纯化产物能够被抗CT血清所识别。结论 成功表达并纯化出了大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63，获得了纯度较高并具有良好免疫反应性的融合蛋白。     

树鼩载脂蛋白AV基因的克隆、表达和纯化

目的　构建树鼩载脂蛋白AV原核表达载体并利用His标签纯化该蛋白。方法　从树鼩肝细胞中提取总RNA,经逆转录合成cDNA第一链,以cDNA第一链为模板,扩增载脂蛋白AV基因。PCR扩增产物和pET32a原核表达载体经过双酶切,将纯化回收的酶切产物按适当的摩尔比通过T4　DNA连接酶16℃连接过夜,连接产物转化大肠杆菌感受态细胞Top10,挑克隆测序。将克隆成功的载脂蛋白AV重组质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,并优化诱导条件。表达的载脂蛋白AV经镍离子螯合树脂纯化,采用BCA法分析蛋白浓度,纯度测定采用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合薄膜凝胶扫描分析获得。结果　挑选的克隆经测序证实载脂蛋白AV基因已经成功连接入pET32a原核表达载体中。在大肠杆菌BL21（DE3）中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,有分子量大小约60　kDa的特异性蛋白产生,与预期大小一致。重组蛋白诱导的最佳表达时间为5　h左右,最佳浓度约在20　μmol/L。镍离子螯合树脂柱亲和层析获得的纯化蛋白,经过聚丙烯酰胺凝胶电泳后薄膜凝胶扫描分析显示目的蛋白的纯度在95%以上。结论　成功构建了载脂蛋白AV的原核表达载体,该蛋白在大肠杆菌BL21（DE3）中实现了高效表达,纯化后的载脂蛋白AV纯度约95%,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。     

家蝇幼虫抗菌肽天蚕素基因的克隆及其在大肠杆菌中融合表达(英文)

目的从家蝇三龄幼虫中提取总RNA,先利用RT-PCR扩增编码天蚕素Cecropin的cDNA序列,克隆入T载体pUCm-T并测定其序列。然后以pUCm-T/Cecropin为模板,通过PCR方法扩增Cecropin成熟肽cDNA序列,并将该序列的N-端大肠杆菌稀有密码子GGA点突变为GGC,C-端终止密码子TAA前加进一个天冬酰胺(Asn)密码子AAC,命名为mCecropin。mCecropin基因序列克隆至融合表达载体pGEX-4T-1中。酶切分析和测序鉴定后,将阳性重组子质粒转入不同的大肠杆菌宿主细胞中进行融合表达。经SDS-PAGE分析,选用E.coliBL21(DE3)作为表达宿主菌。表达的融合蛋白GST-mCecropin通过GSTrap亲合柱纯化后用凝血酶酶切GST标签,mCecropin经HiTrap柱进一步纯化后,具有较强的抗菌活性。     

疟原虫蛋白在粘液菌Distyotelium中的表达和纯化

粘液菌Distyotelium作为一种低等真核蛋白表达系统,能够高效表达外源蛋白。以Distyotelium和植物凝集素discoideum为标记构成的表达系统,所表达的融合蛋白可借助discoideum与半乳糖的特异结合性,通过琼脂糖凝胶Sephrose-4B进行过柱纯化。在外源蛋白和discoideum之间加上凝血酶切割位点,可利用凝血酶将过柱后的融合蛋白中的discoideum切去,而得到进一步纯化后的外源蛋白。     

PTD4-Apoptin融合蛋白可溶性表达及其对Hela细胞的抑制作用

目的构建PTD4-Apoptin融合蛋白的原核表达载体并表达蛋白,检测其对Hela细胞的生长抑制作用。方法人工合成Apoptin序列和PTD4序列,构建p GEX-6p-1-PTD4-Apoptin原核表达载体,使其在E.coli BL21(DE3)中表达。使用GST亲和层析柱纯化融合蛋白,并使用超滤管浓缩纯化后的目的蛋白,得到高浓度的融合蛋白。向Hela细胞中加入融合蛋白,检测其对Hela细胞的生长抑制作用。结果 PTD4-Apoptin融合蛋白在大肠杆菌中可溶性表达成功,对Hela细胞生长具有抑制作用,PTD4-Apoptin对Hela细胞抑制率达82.34%。结论成功构建PTD4-Apoptin融合蛋白表达载体,并表达可溶性的融合蛋白,PTD4-Apoptin对Hela细胞具有明显的抑制作用。     

日本血吸虫22.6 kDa重组抗原的高效融合表达及特性鉴定

目的： 大量获得纯化的日本血吸虫２２６ ｋ Ｄａ 重组抗原。方法： 用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法将其编码基因序列经改造后亚克隆入载体质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｘ １λ Ｔ 进行表达。结果： 得到了融合表达的蛋白抗原。此融合蛋白表达量大, 用凝血酶酶切后易大量制备纯化的重组２２６ ｋ Ｄａ 抗原。结论： 以此融合蛋白免疫的小鼠抗血清进行免疫印迹试验, 表明 Ｓｊ２２６／ Ｓｊ２６ Ｇ Ｓ Ｔ 融合重组蛋白具有与 Ｓｊ２２６ 蛋白一样的免疫学活性。     

Receptor-binding domain of SARS-Cov spike protein: Soluble expression in purification and functional characterization

AIM: To find a soluble and functional recombinant receptor-binding domain of severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus (SARS-Cov), and to analyze its receptor binding ability.METHODS: Three fusion tags (glutathione S-transferase,GST; thioredoxin, Trx; maltose-binding protein, MBP),which preferably contributes to increasing solubility and to facilitating the proper folding of heteroprotein, were used to acquire the soluble and functional expression of RBD protein in Escherichia coli( BL21( DE3 ) and Rosetta-gamiB(DE3) strains). The receptor binding ability of the purified soluble RBD protein was then detected by ELISA and flow cytometry assay.RESULTS: RBD of SARS-Cov spike protein was expressed as inclusion body when fused as TrxA tag form in both BL21 (DE3) and Rosetta-gamiB (DE3) under many different cultures and induction conditions. And there was no visible expression band on SDS-PAGE when RBD was expressed as MBP tagged form. Only GST tagged RBD was soluble expressed in BL21(DE3), and the protein was purified by AKTA Prime Chromatography system. The ELISA data anti-RBD mouse monoclonal antibody 1A5. Further flow cytometry assay demonstrated the high efficiency of RBD's binding ability to ACE2 (angiotensin-converting enzyme 2)positive Vero E6 cell. And ACE2 was proved as a cellular receptor that meditated an initial-affinity interaction with SARS-Cov spike protein. The geometrical mean of GST and respectively.CONCLUSION: In this paper, we get sufficient soluble N terminal GST tagged RBD protein expressed in E. coli BL21(DE3); data from ELISA and flow cytometry assay demonstrate that the recombinant protein is functional and binding to ACE2 positive Vero E6 cell efficiently. And the recombinant RBD derived from E. coli can be used to developing subunit vaccine to block S protein binding with receptor and to neutralizing SARS-Cov infection.     

重组人psoriasin蛋白的制备与鉴定

目的制备鉴定人psoriasin重组蛋白,为其作用机制的深入研究奠定基础。方法PCR法扩增人psoriasin基因,克隆至pET28原核表达载体,转化大肠杆菌BL21（DE3）。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达,用Ni2＋-NTA凝胶亲和层析纯化目的蛋白,用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western blot法对重组蛋白的相对分子质量、纯度和免疫原性进行分析。结果psoriasin编码区基因扩增得到一306 bp特异条带,BLAST分析显示碱基无突变,阅读框架正确;SDS-PAGE显示纯化出相对分子质量为14 kD的重组psoriasin,纯度〉95%;Western blot显示该重组蛋白能与抗人psoriasin单克隆抗体发生特异性反应。结论psor-iasin重组蛋白成功制备,该蛋白具有较好的免疫活性,可用于进一步的研究。     

Receptor-binding domain of SARS-Cov spike protein： Soluble expression in E.coli,purification and functional characterization

AIM: To find a soluble and functional recombinant receptor-binding domain of severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus (SARS-Cov), and to analyze its receptor binding ability. METHODS: Three fusion tags (glutathione S-transferase, GST; thioredoxin, Trx; maltose-binding protein, MBP), which preferably contributes to increasing solubility and to facilitating the proper folding of heteroprotein, were used to acquire the soluble and functional expression of RBD protein in Escherichia coli(BL21(DE3) and Rosetta-gamiB (DE3) strains). The receptor binding ability of the purified soluble RBD protein was then detected by ELISA and flow cytometry assay. RESULTS: RBD of SARS-Cov spike protein was expressed as inclusion body when fused as TrxA tag form in both BL21 (DE3) and Rosetta-gamiB (DE3) under many different cultures and induction conditions. And there was no visible expression band on SDS-PAGE when RBD was expressed as MBP tagged form. Only GST tagged RBD was soluble expressed in BL21(DE3), and the protein was purified by AKTA Prime Chromatography system. The ELISA data showed that GST·RBD antigen had positive reaction with anti-RBD mouse monoclonal antibody 1A5. Further flow cytometry assay demonstrated the high efficiency of RBD's binding ability to ACE2 (angiotensin-converting enzyme 2) positive Vero E6 cell. And ACE2 was proved as a cellular receptor that meditated an initial-affinity interaction with SARS-Cov spike protein. The geometrical mean of GST and GST·RBD binding to Vero E6 cells were 77.08 and 352.73 respectively. CONCLUSION: In this paper, we get sufficient soluble N terminal GST tagged RBD protein expressed in E.coli BL21 (DE3); data from ELISA and flow cytometry assay demonstrate that the recombinant protein is functional and binding to ACE2 positive Vero E6 cell efficiently. And the recombinant RBD derived from E.coli can be used to developing subunit vaccine to block S protein binding with receptor and to neutralizing SARS-Cov infection.     

人Calcineurin B基因克隆、表达和纯化

目的：构建人CalcineurinB（CnB）基因表达载体,征大肠杆菌中高效表达并纯化CalcineurinB蛋白。方法：用RT-PCR方法从人胎脑总RNA中反转录扩增CalcineurinB,将其插入克隆载体pGEM—T—easy中,测序鉴定阳性克降,并将鉴定正确的CalcineurinB亚克隆至表达载体pET-32b（＋）,构建重组表达载体pET—CnB。结果阳性重组子在大肠杆菌BL2l（DE3）和NBL21（DE3）pLySS中,经IPTG诱导可高效表达Calcineurin B,经15％SDS—PAGE分析可观察到分子量与理论值相符（39kD）的诱导表达条带,并发现Calcineurin B主要以可溶性形式表达。Western blot结果证实,39kD的表达条带可与抗硫氧还蛋白的单克隆抗体起特异反应。用His—bind亲和层析纯化得到了纯度较高的calcineurin B融合蛋白。结论：用基因工程技术在大肠杆菌中高效表达人calcineurinB,并得到了纯度较高的calcineurinB融合蛋白,为进一步研究其生物学功能及研制calcineurinB单克隆抗体奠定_『基础。     

金黄色葡萄球菌锰超氧化物歧化酶的表达纯化及活性分析

目的克隆表达、纯化金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)并测定其活性。方法使用Clustal Omega比对不同来源Mn-SOD的序列,使用Swiss model网站预测金黄色葡萄球菌Mn-SOD的三级结构。提取细菌DNA,以此为模板PCR扩增获得Mn-SOD基因并将其与pET28a连接,构建pET28a-Mn-SOD重组质粒。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)获得重组菌BL/pET28a-Mn-SOD,使用IPTG诱导表达重组Mn-SOD,通过镍柱亲和层析纯化Mn-SOD蛋白并测定不同pH条件下的酶活性。结果金黄色葡萄球菌Mn-SOD具有Mn-SOD的特征序列和锰离子结合位点。成功得到重组质粒pET28a-Mn-SOD,转化大肠埃希菌BL21后表达相对分子质量为24.8×10^3的Mn-SOD,使用Ni^2+柱纯化后得到高纯度的Mn-SOD,且在pH值为7.5时活性较高,约为3 200 U/mL。结论成功构建了pET28a-Mn-SOD重组质粒能,表达的Mn-SOD重组蛋白纯化后仍具有SOD活性。     

日本血吸虫硫氧还蛋白编码基因的克隆和表达

目的克隆和表达日本血吸虫大陆株硫氧还蛋白(SjcTrx)的编码基因。方法根据日本血吸虫菲律宾株硫氧还蛋白基因序列设计一对引物,上游引物引入BamHI酶切位点和起始密码子ATG,下游引物引入SalI酶切位点和终止密码子TAA。以日本血吸虫大陆株成虫总RNA为模板,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增SjcTrx基因。经双酶切并纯化的PCR产物与同样双酶切并纯化的pET28a质粒DNA片段用T4 DNA连接酶连接,构建重组质粒pET28a-SjcTrx,转化BL21感受态菌并大量扩增。重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切、PCR、琼脂糖凝胶电泳和核苷酸序列测定进行鉴定。pET28a-SjcTrx/BL21用IPTG诱导表达。结果SjcTrx编码基因RT-PCR产物约334 bp,构建的重组pET28a-SjcTrx表达质粒DNA经限制性内切酶双酶切和PCR扩增产物于琼脂糖凝胶电泳均观察到相同大小基因片段。根据核苷酸序列测序结果推导的氨基酸序列与日本血吸虫菲律宾株和曼氏血吸虫Trx分别有97%和43%的同源性。表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,约14kDa。Western blotting显示该重组蛋白可被日本血吸虫感染兔血清和重组抗原免疫小鼠血清所识别。结论SjcTrx基因的表达获得成功,并获得纯化蛋白,为开展动物保护性免疫试验创造了条件。     

细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的表达及抗原性分析

目的在原核系统表达并初步鉴定细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(EgTPx)基因重组蛋白的抗原性。方法对已构建的重组质粒pMD-18T-EgTPx进行限制性酶切,获取目的基因片段后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-EgTPx,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,对表达产物纯化后用Western-blot方法和ELISA鉴定重组EgTPx蛋白的抗原性。结果构建的重组表达质粒pET30a-EgTPx阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定无基因突变,开放阅读框正确;含有pET30a-EgTPx重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为27 kDa,而且主要以包涵体形式存在;Western-blot和ELISA结果表明EgTPx重组抗原可以被棘球蚴感染羊阳性血清特异性识别。结论成功构建了pET30a-EgTPx表达质粒,EgTPx重组蛋白得到了高效表达,表达产物具有良好的抗原性。     

重组人神经肽Y融合蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备与鉴定

目的：构建人神经肽Y（NPY）基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备兔抗人NPY抗血清。方法：取已构建好且经测序确认无误的再组质粒pET28a—NPY转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS—PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化,以纯化后的融合蛋白pET28a—NPY为抗原免疫家兔,获得抗血清,Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清。结果经IPTG诱导含有pET28a—NPY重组质粒的DE3菌,表达出重组人NPY融合蛋白。重组蛋白经Ni^2＋-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白,用纯化的融合蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体,Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论：成功表达了人NPY蛋白并获得了其多克隆抗体,为进一步研究人NPY蛋白的功能奠定了基础。     

结核分枝杆菌组合蛋白的表达及血清学诊断价值的评价

目的取得能用于结核病血清学诊断的敏感性、高特异性强的组合蛋白。方法用DNA双链全合成的方法合成ESAT6,MPT64,38KD,Ag85B等结核分枝杆菌特异性抗原的抗原表位基因,用PCR法将这些基因片段连接起来成为新型抗原的编码基因。将该编码基因克隆于pET24b载体,经测序鉴定后转化于大肠杆菌BL21菌株用IPTG进行诱导表达。组合蛋白经镍柱纯化后用Western印迹法和酶联免疫实验（ELISA）对其抗原性和特异性进行检测。结果携带重组质粒的菌株经IPTG诱导后以包涵体的形式大量表达组合蛋白,经镍柱纯化后蛋白质浓度达到0．5mg／ml,western实验表明：该组合蛋白能与结核病人血清特异性结合,而不与健康人血清结合。以该组合蛋白为包被抗原采用ELISA法检测结核抗体的灵敏度为61％,特异性为97．3％。PPD检测的灵敏度和特异性分别为73．7％和91．8％。该组合蛋白检测卡介苗接种阳转血清的阳性率为2．1％,特异性为97．9％,而PPD检测卡介苗接种阳转血清的阳性率为22．3％,特异性为79．7％。结论该组合蛋白用于结核病血清学诊断具有较高的灵敏度和特异性,能够为结核病的临床诊断提供一定的指导。     

弓形虫主要表面抗原1单链抗体与绿色荧光蛋白的融合表达及其生物活性初步观察

目的 构建、表达和纯化刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）主要表面抗原1（SAG1）单链抗体S1与绿色荧光蛋白（GFP）的融合蛋白，体外观察其与弓形虫速殖子的特异性结合能力。 方法 分别设计引物，构建原核表达质粒pET-26b-GFP和pET-26b-GFPS1，测序验证后转化大肠埃希菌BL21（DE3），以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG)诱导表达，荧光显微镜观察融合基因中GFP的表达情况。用Ni²⁺螯合柱亲和纯化融合蛋白GFPS1，十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测融合蛋白GFPS1。荧光显微镜观察融合蛋白GFPS1与弓形虫速殖子体外孵育后单链抗体S1对弓形虫速殖子的靶向作用。 结果 测序结果显示，弓形虫SAG1单链抗体S1与GFP的融合基因构建到原核表达载体pET-26b（+）中；IPTG诱导表达后，在荧光显微镜下可观察到E.coli BL21发出的特异性绿色荧光。SDS-PAGE检测到表达的融合蛋白GFPS1相对分子质量（Mr）约为53 000，多以包涵体形式存在。免疫荧光检测可见弓形虫速殖子表膜周围发出特异性的绿色荧光，表明纯化的GFPS1可特异性地结合到弓形虫速殖子表膜。 结论 弓形虫主要表面抗原1（SAG1）单链抗体S1与弓形虫速殖子表膜有较强的结合能力。