白细胞介素-12基因修饰对树突状细胞表面分子表达及细胞因子分泌的影响

目的 观察白细胞介素(IL)-12基因修饰对树突状细胞(DC)表面分子及细胞因子分泌的影响.方法 采用重组逆转录病毒介导IL-12基因修饰人外周血单个核细胞(PBMC)来源的Dc;ELISA法检测各组DCs和各组T细胞上清中IL-12、IL-10、IFN-γ因子的分泌水平;流式细胞仪(FACS)分析各组DC表面CD83、CD86的表达;MTT法检测DC刺激同源T淋巴细胞增殖的能力;统计学分析比较各组间的差异.结果 IL-12基因修饰使得DC高表达CD83和CD86分子,分泌高水平IL-12及IFN-γ,但对IL-10因子的分泌无明显影响,刺激同源T淋巴细胞增殖明显,诱导激活的T细胞上清中IFN-γ水平显著增高、IL-10分泌水平显著降低.结论 经IL-12基因修饰后的DC表型成熟,分泌IL-12及IFN-γ的能力增强,对IL-10因子的分泌无影响,能抑制T细胞分泌IL-10因子,优化抗原提呈的微环境.     

体外调节Th1/Th2平衡治疗脑胶质瘤

目的 观察外源性细胞因子白细胞介素( IL)-2、干扰素(IFN)-γ和IL-4单克隆抗体(McAb)、IL-10 McAb在体外能否促使Th2型细胞因子分泌优势向Th1型逆转,抑制胶质瘤细胞生长。方法 体外培养大鼠C6胶质瘤细胞,加入外源性细胞因子共同孵育,光学显微镜观察细胞形态学变化,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Th1/Th2类细胞因子表达变化。结果 实验组较对照组细胞体积变小,生长密度低,细胞数目少;实验组与对照组比较细胞增殖抑制率分别为(26.41 ±3.60)％,其A值与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。对照组细胞只表达Th2类细胞因子,Th1类细胞因子表达缺如,实验组IFN-γ表达增加,IL-4和IL-10表达减弱,但是未见IL-2表达。结论 外源性细胞因子能够抑制脑胶质瘤细胞的生长,促进Th2型细胞因子分泌优势向Th1型逆转。     

IFN-γ上调MHC-Ⅱ分子表达对KC免疫原性的影响

目的观察在炎症因子IFN-γ的作用下,角质形成细胞（Keratinocyte,KC）免疫原性的变化情况。方法 KC体外传代培养,按不同的INF-γ浓度分组后作用于传代的KC。将高表达MHC-Ⅱ分子的KC与异体淋巴细胞混合培养后,观察淋巴细胞的增殖情况;同时,将KC植入异体小鼠皮下,观察免疫排斥迹象。结果在6 000 U/mL IFN-γ的作用下,MHC-Ⅱ+的KC超过90%。高表达MHC-Ⅱ分子的传代KC无明显刺激异体淋巴细胞增殖的作用,植入异体小鼠皮下后也无明显淋巴细胞浸润现象。结论传代后的KC在IFN-γ作用下高表达MHC-Ⅱ分子,表达MHC-Ⅱ分子的KC无明显免疫原性。     

血栓痔病人外周血Th1／Th2分析

为探讨血栓痔发病与T淋巴细胞活化及释放的Th1／Th2细胞因子失衡状态的关系,对32例血栓痔（实验组）和30例健康人（对照组）的外周血单个核细胞（PBMC）,经PMA诱导培养后,用流式细胞术测定CD3^＋标记T细胞内自细胞介素-4（IL-4）和干扰素-γ（IFN-γ）含量和CD8^-标记T细胞内IL-4和IFN-γ的含量,进行比较分析,从而估计Th1／Th2细胞的漂移状态。结果显示,实验组的IL-4和IFN-γ含量均显著高于对照组（P〈0．001）;且实验组IL-4^＋含量高于IFN-γ含量（P〈0．05）。结果表明,血栓痔病人发病时,体内的T淋巴细胞免疫系统被激活,且以Th2细胞为主,这种Th1／Th2细胞因子失衡可能在血栓痔发病过程中起到重要作用。     

免疫性血小板减少症脾切除疗效与外周血Th亚群细胞因子表达的关系

目的探讨原发性免疫性血小板减少症（ITP）脾切除血液学疗效与外周血辅助性T细胞（Th）亚群细胞因子的mRNA表达水平的关系。方法采用QuantiGene Plex（QGP）方法,分别检测14例手术有效（R组）和8例手术无效（NR组）的ITP患者腹腔镜脾切除术前后外周血Th1（IL-2、IFN-γ）、Th2（IL-4、IL-5、IL-6、IL-10）、Th3（TGF-β1）、Th17（IL-17）细胞因子的mRNA表达水平的变化。对照组为30例健康体检者。结果术前及术后R组TGF-β1 mRNA的表达水平均明显高于NR组（P值分别为0.001和0.006）及对照组（P值分别为0.001和〈0.001）。术前及术后R组和NR组之间IL-2、IFN-γ与IL-17 mRNA的表达水平差异均无统计学意义。结论脾切除疗效不同的ITP患者TGF-β1的mRNA表达水平存在差异,检测术前TGF-β1的表达水平有助于预测手术疗效。     

转化生长因子β1诱导的耐受性树突状细胞及其机制

目的探讨耐受性树突状细胞（DC）的诱导及其机制。方法以20ng／ml转化生长因子β1（TGF-β1）与C57BL／6小鼠来源的树突状细胞系（DC2．4）共培养6d，诱导耐受性DC（TGFβ-DC）；以脂多糖（LPS）刺激DC 48h即为成熟DC（LPS-DC）；以特异性针对免疫球蛋白样受体B（PIR—B）的小RNA干扰片段（PIR-B siRNA）转染TGF-DC（si—DC）。应用半定量逆转录聚合酶链反应和流式细胞仪测定各细胞表面PIR-A／B共同的胞外段PIR的表达、PIR—A／B及其mRNA的表达，以Balb／c小鼠脾淋巴细胞为反应细胞进行混合淋巴细胞反应（MLR），观察各组DC刺激反应细胞增殖的能力，同时以酶联免疫吸附试验测定MLR上清液中γ干扰素（IFN-γ）的水平。结果TGFβ-DC的PIR—B mRNA表达明显上调，PIR-A mRNA的表达明显下调（P〈0．05），而LPS-DC的PIR—B mRNA表达明显下调，PIR-A mRNA表达明显上调（P〈0．05），二者表面PIR的表达均增加，但差异无统计学意义（P〉0．05）；转染PIR-B siRNA后，TGFβ-DC的PIR-B mRNA表达明显下调，细胞表面的PIR表达也受到明显抑制（P〈0．05）。正常DC2．4细胞可以刺激异基因淋巴细胞增殖；LPS-DC刺激异基因淋巴细胞增殖的能力明显增强，其反应体系中的IFN-γ水平明显升高；TGFβ-DC刺激淋巴细胞增殖的能力受到明显抑制，其反应体系中的IFN-γ水平明显下降；而转染PIR—B siRNA后，TGFβ-DC刺激淋巴细胞增殖的能力得到明显恢复，其反应体系中的IFN-γ水平明显回升。结论TGF-β1可诱导产生耐受性DC，其高度表达免疫抑制性受体PIR—B，上调PIR—B的表达可能是TGF-β1诱导产生耐受性DC的分子机制之一。     

凝血酶对狼疮肾炎末梢血单个核细胞分泌Th1/Th2细胞因子的影响

目的探讨狼疮肾炎(LN)患者凝血活性对其Th1/Th2平衡的影响。方法LN患者20例,按红斑狼疮病情活动指数(SLEDAI)分为稳定组11例(SLEDAI<9分),活动组9例(SLEDAI≥9分)。健康对照组8例。采集末梢血单个核细胞(PBMC),进行高、低浓度凝血酶刺激下体外培养。ELISA法检测培养液上清IL-10、IFN-γ水平。RT-PCR检测IL-10和IFN-γmRNA表达。结果凝血酶呈浓度依赖性上调LN患者PBMCIL-10表达,但不影响IFN-γ表达,故增加IL-10/IFN-γ比值。结论凝血酶加重狼疮肾炎患者PBMC分泌Th1/Th2细胞因子的平衡紊乱。     

转化生长因子β对白介素-1β诱导人骨关节炎软骨细胞表达NO的影响

目的 探讨转化生长因子β(TGF-β)对白介素-1β(IL-1β)诱导人骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞表达一氧化氮(mitrlc oxide,NO)的影响.方法 体外培养OA患者软骨细胞,施以不同浓度的IL-1β,收集细胞培养液,检测其上清液表达NO的情况;选取某一合适浓度的IL-1β,然后施以不同浓度的TGF-β,检测其上清液表达N0的情况.结果 IL-1β诱导下,软骨细胞增加NO的表达,并呈剂量依赖关系;而TGF-β可抑制IL-1β诱导软骨细胞表达NO的作用,随着TGF-β剂量的加大,抑制N0的作用愈明显.结论 TGF-β具有抑制IL-1β诱导人骨关节炎OA软骨细胞表达NO的作用.TGF-β可能是OA的一种保护因子.     

胰岛素对大鼠牙周膜细胞增殖及其炎性因子表达的影响

目的:研究胰岛素对大鼠牙周膜细胞增殖及其炎性因子表达的影响。方法:分离培养原代大鼠牙周膜细胞,在体外高糖培养液培养,分别加入浓度为0nmol/L、25nmol/L、50nmol/L和100nmol/L的胰岛素,0nmol/L浓度为对照组,其余均为实验组,用不同浓度的胰岛素处理细胞后,MTT法检测大鼠牙周膜细胞增殖水平变化;根据MTT实验结果,选取25nmol/L浓度胰岛素处理组为实验组,进行炎性因子表达差异研究,实时定量RT-PCR检测不同浓度胰岛素处理后炎性因子IL-1β、PGE2、TNF-α、IFN-γ、IL-10的表达;ELISA法检测IL-1β、PGE2、TNF-α、IFN-γ、IL-10含量;通过上述实验验证胰岛素对牙周膜细胞增殖及对牙周膜细胞炎性因子表达的影响。结果:与对照组相比,随着胰岛素浓度的增高,抑制作用越明显;在mRNA水平和蛋白水平,胰岛素处理的实验组牙周膜细胞,其炎性因子表达量均明显增高(P0.05)。结论:胰岛素会抑制大鼠牙周膜细胞的增殖,且对牙周膜细胞的炎性因子表达有促进作用。     

肿瘤相关巨噬细胞对肾癌细胞增殖的影响及其相关机制

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞对肾癌细胞增殖的影响及其相关机制。方法通过十四烷酰佛波醇乙酸酯(PMA)、细菌内毒素(LPS)、干扰素-γ(IFN-γ)刺激人单核细胞白血病细胞系THP-1, 建立肿瘤相关巨噬细胞(TAM)模型。TAM模型与肾癌细胞(ACHN、786-O细胞)在体外共培养, 采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测TAM培养上清液细胞因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的变化;采用MTT法检测TAM上清和TAM上清联合IL-6中和抗体托珠单抗处理后肾癌细胞增殖情况;采用蛋白质印迹法检测肾癌细胞与TAM和TAM联合托珠单抗共培养后乳酸脱氢酶A(LDHA)的表达。使用TAM上清液培养LDHA基因过表达及干扰的肾癌细胞(ACHN、786-O细胞), 采用MTT法检测细胞增殖情况, 并计算相对增殖率。结果 80 ng/ml PMA联合20 ng/ml LPS、20 ng/ml IFN-γ可诱导THP-1细胞分化成TAM, 其细胞表面标志物CD68表达率为(36.2 ± 4.5)%。将TAM与ACHN细胞共培养, ELISA检测结果提示...     

γ干扰素对瘢痕疙瘩成纤维细胞转化生长因子β/Smad信号通路的作用

目的 了解γ干扰素(IFN-γ)对瘢痕疙瘩Fh(KFb)中TGF-β/Smad信号通路的作用,探讨IFN一γ治疗病理性搬痕的可能机制. 方法 切取3例患者的瘢痕组织,体外分离培养KFb,实验选用第3～5代细胞.(1)将KFb分为:对照组,加无血清DMEM培养;TGF-β_1组,用10 ng/mL的TGF-β_1单独作用;IFN-γ组,用100 ng/mL的IFN-γ单独作用;TGF-β_1+IFN-γ组,10 ng/mL的TGF-β_1与100 nS/mL的IFN-γ联合作用.采用实时荧光定量RT-PCR、蛋白质印迹法和免疫荧光细胞化学染色法,分别检测结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA、蛋白表达,以及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达与阳性细胞表达情况.(2)另取KFb,用10 ng/mL的IFN-γ作用,于作用前及作用后30 min和1、2、4、6、8 h通过实时荧光定量RT-PCR检测Smad 3和Smad 7的mRNA表达,于作用前及作用后1、2、4、6、8 h用蛋白质印迹法检测Smad 3和Smad 7的蛋白表达.(3)另取KFb,根据添加的IFN-γ终浓度不同分为1、10、100 ns/mL IFN-γ组,均作用4 h;设立未添加IFN-γ的KFb为对照组.同前检测各组Smad 3和Smad 7的mRNA及蛋白表达. 结果 (1)IFN-γ组KFb CTGF的mRNA和蛋白表达量为0.017±0.009与1.198±0.004,较对照组(0.024±0.013与1.229±0.011)显著减少(P<0.05);TGF-β1+IFN-γ组CTGF的mRNA和蛋白表达量为0.634±0.138与1.204±0.010,较TGF-β_1组(1.331±0.298与1.727±0.004)显著减少(P<0.01).IFN-γ组KFb中,α-SMA阳性细胞荧光强度(0.922±0.059)和α-SMA蛋白表达量(0.3051±0.0031)较对照组(1.055±0.005与0.4513±0.0094)显著减少(P<0.01);TGF-β1+IFN-γ组SMA阳性KFb荧光强度(1.129±0.004)和SMA蛋白表达量(0.6734±0.0098)较TGF-β_1组(1.270±0.005与1.38420.0024)显著减少(P<0.01).(2)10 ng/mL IFN-γ作用后第1个时相点,Smad 3的mRNA和蛋白表达量均出现一过性增高,随后降低,mRNA表达量于作用后4 h降至最低点,随后缓慢上升,至作用后8 h仍低于作用前(P<0.01);其蛋白表达量于作用后2~8 h显著低于作用前(P<0.01).而Smad 7的mRNA和蛋白表达量在INF-γ作用后逐渐增高,分别于作用后2、4 h达峰值随后降低,至作用后8 h仍高于作用前(P<0.05).(3)与对照组比较,1、10、100 ng/mL IFN-γ组Smad 3的mRNA及蛋白表达量显著减少(P<0.05或P<0.01),Smad 7的mRNA及蛋白表达量显著增加(P<0.05或P<0.01),且随IFN-γ浓度升高,减少或增高幅度愈为显著. 结论 IFN-γ呈时间和剂量依赖方式下调Smad 3、上调Smad 7,降低基础状态下或经TGF-β_1诱导后KFb的CTGF和α-SMA表达量,表现出对TGF-β/Smad 信号通路的显著拮抗作用,这可能是IFN-γ治疗病理性瘢痕的重要机制.     

正常妊娠与自然流产小鼠模型母胎界面细胞因子表达特征的比较

目的　比较正常妊娠与自然流产模型母胎界面细胞因子表达特征的差异 ,探讨T辅助细胞 (Th) 1型和 2型 (Th1 /Th2 )细胞因子在介导流产发病中的作用机制。　方法　建立正常妊娠模型CBA×BALB/c和自然流产模型CBA×DBA/ 2。采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定两组模型孕第 9和 1 4天母胎界面组织培养上清中Th1 /Th2型及相关细胞因子表达水平 ;以白细胞介素 4/干扰素 γ(IL 4/IFN γ)比值作为衡量Th2 /Th1型免疫调节平衡的指标。　结果　孕第 9天 ,与正常妊娠模型相比 ,自然流产模型母胎界面IL 4、IL 1 0和转化生长因子 (TGF) β2的表达显著降低 (P <0 .0 5) ;IFN γ、肿瘤坏死因子 (TNF) α的表达显著升高 (P <0 .0 5) ,IL 4/IFN γ比值显著降低 (P <0 .0 5)。至孕第 1 4天 ,自然流产模型母胎界面IFN γ、TNF α表达仍显著高于正常妊娠模型 (P <0 .0 5) ,IL 1 0表达、IL 4/IFN γ比值仍低于正常妊娠模型 (P <0 .0 5) ,IL 4和TGF β2在两组模型中的表达无显著差异。两组模型孕第 9和 1 4天母胎界面均未测到IL 2的表达。　结论　与流产模型相比 ,无论在妊娠早期或中晚期 ,正常妊娠模型母胎界面局部均呈现明显的Th2型免疫偏倚。母胎界面Th1 /Th2型细胞因子表达调节失衡是导致流产的重要原因之一     

人白细胞介素-15与18的协同刺激体外活化肿瘤浸润淋巴细胞的作用

目的 观察白细胞介素(IL)-15与IL-18协同刺激活化肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的作用.方法 用IL-15与IL-18共同刺激从结肠癌患者分离得到的肿瘤浸润淋巴细胞,通过测定其分泌转化生长因子(TGF)-β、IL-4、干扰素(IFN)-γ水平以及肿瘤浸润淋巴细胞的杀伤功能,观察IL-15与IL-18活化肿瘤浸润的淋巴细胞的功能.结果 IL-15与IL-18共同作用于肿瘤浸润淋巴细胞,能够抑制TGF-β、IL-4的分泌(P＜0.05),促进IFN-γ的分泌(P＜0.05),同时能提高肿瘤浸润淋巴细胞的杀伤活性.结论 IL-15与IL-18协同刺激能活化肿瘤浸润淋巴细胞.     

肾综合征出血热患者多种免疫促炎因子及抗炎因子变化及其作用

目的探讨肾综合征出血热（HFRS）患者急性期（包括发热期、低血压休克期、少尿期）与恢复期促炎因子和抗炎因子的变化及其作用。 方法检测2016年4月至2017年6月哈尔滨医科大学第四附属医院和黑龙江省农垦红兴隆管理局中心医院收治的30例确诊为HFRS急性期和恢复期患者血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-6（IL-6）和抗炎因子转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-10（IL-10）的水平,同期检测患者的胱抑素C（Cys-C）、肌酐（Cr）、乳酸脱氢酶（LDH）以及部分凝血活酶时间（APTT）等指标。另选同期13名健康志愿者作对照组,检测TNF-α、IFN-γ、IL-6、TGF-β1和IL-10水平。应用SAS 9.3国际标准统计学编程软件对结果进行分析。 结果HFRS患者急性期IFN-γ（χ²= 4.273、P= 0.0336）、TNF-α（χ²= 16.3562、P < 0.0001）、IL-6（χ²= 9.752、P = 0.0018）和IL-10（χ²= 6.3352、P= 0.0118）水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义。HFRS患者急性期TGF-β1水平显著低于对照组,差异有统计学意义（χ²= 7.822、P= 0.0056）。HFRS患者恢复期TGF-β1水平与对照组接近或略低,差异无统计学意义（χ²= 3.000、P = 0.0833）。HFRS患者发病不同时期Cys-C、Cr、LDH和APTT等指标均于急性期升高,于恢复期下降,与IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-10变化趋势一致。 结论HFRS急性期时IFN-γ、TNF-α和IL-6等促炎因子分泌增加,主要因CD4⁺CD25⁺FoxP3 Treg细胞（调节性T细胞）产生的抗炎因子TGF-β1分泌不足,细胞因子失衡是导致机体免疫病理损伤的重要机制。     

第三方骨髓间充质干细胞诱导同种异体移植受体免疫耐受机制的研究

目的 初步研究第三方骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)诱导同种异体移植受体免疫耐受的作用机制.方法 40只雌性C57BL/6小鼠作为供体,40只雄性BALB/C小鼠作为受体,建立稳定的同种异体皮肤移植模型,BMSCs取自SD大鼠骨髓.将40只BALB/C小鼠随机分为4组,每组10只.①空白对照组:只进行皮肤移植,未给予其他治疗;②环磷酰胺组(CP组):大剂量环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)腹腔注射,200 mg/kg,连用2 d(q.d.);③单纯给予SD-BMSCs移植组(SD-BMSCs组):移植当天自受体小鼠尾静脉输注2×106个SD-BMSCs;④细胞药物联合应用组(CP+SD-BMSCs组):大剂量CP腹腔注射,200 mg/kg,连用2 d(q.d.),并于移植当天自受体小鼠尾静脉输注2×106个SD-BMSCs.检测指标包括:移植皮片存活情况;SD大鼠BMSCs表面抗原CD29、CD34、CD45和CD90鉴定;流式细胞仪检测受体脾脏调节性T细胞(CD4+、CD25+、Foxp3+、Treg细胞)的比例;ELISA检测受体外周血TGF-β、IL-10、IFN-γ的含量;异基因T淋巴细胞与经60Co照射的不同来源BMSCs共培养后,MTT法测定异基因T淋巴细胞增殖的情况.结果 CP+SD-BMSCs组皮肤移植物存活时间为(15.7 ±1.4)d,空白对照组为(6.1±1.1)d,CP组为(12.3±1.5)d,SD-BMSCs组为(12.6±1.8)d,CP+SD-BMSCs组皮肤移植物存活时间明显比后3组延长(P＜0.05).全骨髓贴壁培养的BMSCs表面抗原鉴定:CD29+、CD44+分别为99.7%和96.7%,CD34-、CD45-分别为1.6%和1.3%.流式细胞仪检测Treg含量SD-BMSCs组和CP+SD-BMSCs组明显高于空白对照组和CP组(P＜0.05);ELISA检测受体外局血SD-BMSCs组和CP组TGF-β和IL-10明显高于空白对照组,SD-BMSCs和CP组IFN-γ则明显低于空白对照组(P＜0.05);共培养结果显示:来源于C57小鼠和SD大鼠的BMSCs可以明显抑制T淋巴细胞的增殖反应(P＜0.05),而上述两组组间比较差异则无统计学意义(P＞0.05).结论 第三方BMSCs诱导同种异体移植免疫耐受作用可能与诱导受体Treg细胞增殖和促进免疫耐受因子的表达,抑制免疫排斥因子的表达有关.

Abstract：

Objective To study the immuno-tolerance mechanism of the third-party bone marrowderived mesenchymal stem cells ( BMSCs) in the allogeneic transplantation. Methods Forty female C57BL/ 6 mice and forty male BALB/C mice were respectively used as donors and recipients in skin allogenic graft model. Forty male BALB/C mice were divided randomly into 4 groups: blank control group, CP group, BMSCs group , CP + BMSCs group , with 10 mice in each group. Before skin graft, high-dose abdominal injection of cyclophosphamide ( 200 mg/kg,2 d,q. d. ) was performed in recipient mice in CP and CP + BMSCs groups. On the transplantation day, a bonus of 2 x 106 BMSCs from the SD rat (SD-BMSCs) were injected through the tail vein in the BMSCs and CP + BMSCs groups. The observation and HE staining of skin grafts were used. The expressions of CD29, CD34, CD45 and CD90 of cells were analyzed by using flow cytometry in order to identify BMSCs. The CD4+ , CD25+ , Foxp3+ and Treg cells of spleen were detected by flow cytometry. Cytokine in peripheral blood of recipient mice were measured by ELISA,including TGF-β, IL-10 and IFN-γ. T cells were co-cultured with 60 Co-irradiated bone marrow MSCs from different individuals. The proliferative activity of T cells were evaluated with MTT assay. Results The skin graft survival time was significantly prolonged in the CP + BMSCs group, as compared with that in the blank control group, the CP group, the BMSCs group, respectively. Cells cultured by whole bone marrow adherent cultivation showed CD29+ (99.7% ) ,CD44+ (96.7% ) ,CD34 (1.6% ) ,CD45( 1. 3% ). Compared with the control group and CP group, the ratio of the CD4+ ,CD25+ ,Foxp3+ and Treg cells significantly increased in the SD-BMSCs group and CP + BMSCs group (P ＜ 0. 05). Analysis of peripheral blood by ELISA showed significant high level of TGF-β, IL-10 and low level of IFN-γ in BMSCs group and CP group, compared with that in control group. When co-cultured with BMSCs from different individuals, T- lymphocytes proliferation decreased apparently in SD-BMSCs group and C57-BMSCs group (P ＜ 0. 05) , but there was no significant difference between SD-BMSCs group and C57-BMSCs group ( P ＞ 0. 05 ). Conclusions The immunotolerance mechanism of the third-party bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the allogeneic transplantation might be associated with its effect on the proliferation of Treg cells and increasing expression of TGF-β and IL-10, decreasing expression of IFN-γ.     

人脐带间充质干细胞移植对大鼠流产模型妊娠结局的影响

目的探讨人脐带间充质干细胞(WJ-MSCs)移植对大鼠流产模型妊娠结局的影响及机制。方法将48只孕鼠随机分为6组,每组8只。生理盐水对照组(a):孕6~8d皮下注射生理盐水0.4mg·kg~(-1)·d~(-1),孕9d尾静脉注射生理盐水1ml/kg;乙醇对照组(b):孕6~8d皮下注射75%乙醇0.4mg·kg~(-1)·d~(-1),孕9d尾静脉注射生理盐水1ml/kg;流产模型组(c):孕6~8d皮下注射溴隐亭0.4mg·kg~(-1)·d~(-1),孕9d尾静脉注射生理盐水1ml/kg;实验组d1、d2、d3分别于孕6~8d皮下注射溴隐亭0.4mg·kg~(-1)·d~(-1),孕9d尾静脉注射WJ-MSCs 1×105个、1×106个、1×107个(生理盐水使用量为1ml/kg,将细胞制成混悬液后注射)。各组大鼠均于孕14d处死并取材,观察各组大鼠胚胎吸收率,RT-PCR检测蜕膜组织白介素-10(IL-10)、干扰素-γ(IFN-γ)和IL-17mRNA的相对表达量。ELISA检测各组外周血IL-10、IFN-γ和IL-17的含量。结果 c组和d1组的平均胚胎吸收数和平均胚胎吸收率均显著高于a、b、d2、d3组(P0.05)。c组、d1组与a、b、d2、d3组比较,IL-10mRNA表达显著降低(P0.05),IFN-γ和IL-17mRNA表达显著升高(P0.05)。c组、d1组与a、b、d2、d3组比较外周血IL-10含量显著降低(P0.05),IFN-γ和IL-17含量显著升高(P0.05)。c组与d1组间,a、b组与d2、d3组间的观察指标比较均无显著性差异(P0.05)。结论一定浓度的WJ-MSCs移植入大鼠流产模型体内,可以降低胚胎吸收率,改善大鼠流产模型的妊娠结局;其机制可能与WJ-MSCs上调IL-10、下调IFN-γ和IL-17的含量有关。     

慢性移植物肾病患者外周血淋巴细胞细胞因子表达的研究

探讨慢性移植物肾病(chronic allograft nephropathy,CAN)患者外周的血淋巴细胞细胞因子的表达情况.方法 选取2004年7月至2005年8月在中国人民解放军第309医院器官移植研究所就诊的15例CAN和22例移植肾功能正常的肾移植受者,分别列为CAN组和非CAN组.所有患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定.两组患者分别抽取空腹外周血4 ml,分离外周血淋巴细胞.采用实时荧光定量聚合酶链反应比较两组患者外周血淋巴细胞细胞因子白介素(IL)-2、IL-10、干扰素(IFN)-γ及转化生长因子(TGF)-β1的信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)表达的差异.结果 与非CAN组比较,CAN组的IL-2和IL-10 mRNA表达差异无统计学意义(均为P>0.05),IFN-γ、TGF-β1 mRNA表达明显较高,差异有统计学意义(分别为P<0.05、P<0.01).结论 IFN-γ、TGF-β1 mRNA的高表达可能与CAN的发生、进展有关.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对转化生长因子β1诱导皮肤成纤维细胞作用的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂对转化生长因子(TGF)-β1诱导成纤维细胞(Fb)转分化及对胶原牛成作用的影响.方法 体外培养成人正常皮肤Fb,免疫荧光细胞化学法观察PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)、曲格列酮对TGF-β1诱导的α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,Western blot检测15d-PGJ2、曲格列酮对TGF-β1诱导的α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响,噻唑蓝(MTT)比色法观察对Fb增殖活性的影响.结果 与TGF-β1诱导组比较,10μmoL/L曲格列酮、10 μmol/L 15d-PGJ2预处理组的α-SMA表达量显著减少(P<0.01),抑制效应分别为31%、57%;预处理组的Ⅰ型胶原表达量也屁著减少(P<0.01),抑制效应分别为57%、38%.曲格列酮、15d-PGJ2对Fb的增殖活性影响分析,各实验组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 PPARγ激动剂能抑制TGF-β1诱导的人正常皮肤Fb的转分化和Ⅰ型胶原合成增多的效应,具有抗瘢痕的潜在作用.     

内毒素对人皮肤成纤维细胞转化生长因子-β1和γ-干扰素分泌的诱导作用及意义

目的：观察细菌内毒素（LPS）对体外培养人皮肤成纤维细胞分泌转化生长因子-β1（TGF-β1）和γ-干扰素（IFN-γ）作用的影响,探讨其在增生性瘢痕形成中的可能作用。方法：取增生性瘢痕患者的正常皮肤进行成纤维细胞培养,分别用终浓度为0．005、0．010、0．050、0．100、0．500和1．000μg／ml的大肠杆菌LPS（E．coli055：B5）刺激,传代至表型稳定（第8代）。酶联免疫吸附法测定LPS刺激后8、24和γ2h细胞培养上清液中TGF-β1和IFN-γ含量的变化。阴性对照为DMEM培养基;阳性对照为增生性瘢痕成纤维细胞培养上清液。结果：随着LPS浓度的增加（0．005～0．100μg／ml）,各时间点细胞培养上清液中TGF-β1的含量增加,而IFN-γ的含量降低,呈明显量一效依赖关系,在0．100μg／ml浓度时作用最为明显,TGF-β1、IFN-γ的含量与阳性对照相近（P〉0．05）。但随着浓度的进一步增加（0．500μg／ml）,这一作用开始下降,当刺激浓度达到（1．000μg／ml）时,则呈相反作用。结论：一定浓度的LPS刺激可促进成纤维细胞分泌TGF-β1并抑制IFN-γ的分泌,这可能是增生性瘢痕形成的重要机制之一。