戴氏虫草多糖诱导肿瘤细胞分化的研究

目的：观察戴氏虫草多糖（ CDP）对人红白血病K562细胞和人早幼粒白血病HL-60细胞分化的影响。方法：用1、10、100及1000 mg/L浓度的CDP分别处理K562细胞和HL-60细胞2 d,台盘蓝染色计数两种细胞的死活细胞数,同时检测CDP处理后K562细胞的血红蛋白的含量,观察200个HL-60细胞的分化情况。结果：在CDP作用下,K562细胞存活率增高,K562细胞内血红蛋白含量增加;HL60细胞形态向中幼,晚幼阶段方向分化,且其阳性细胞数与CDP的浓度有明显的量—效关系。结论：CDP可诱导K562细胞与HL60细胞分别向红细胞系和粒细胞系方向分化。     

三氯乙烯诱导人表皮角质形成细胞凋亡中依赖Caspase-9的Caspase-3激活

目的 探讨有机溶剂三氯乙烯(TCE)诱导正常人表皮角质形成细胞(NHEK)凋亡过程中可能的信号通路.方法 用0.125、0.25、015、1.0、2.0 mmol/L的TCE处理NHEK4 h,并培养4、8、12、24 h,分光光度法测上清中Caspase-9和Caspase-3活性,Annexin-V/PI双染后流式细胞仪(FCM)测细胞凋亡;Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK和Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK预处理组,用100 μmol/L ZDEVD-FMK或Z-LEHD-FMK预处理NHEK 1 h,再用2.0mmol/L TCE染毒4 h后培养至12 h.结果不同浓度TCE处理NHEK 4 h后培养不同时间,可诱导Caspase-3和Caspase-9活性升高,培养12、24 h时,各TCE处理组Caspase-3和Caspase-9活性与溶剂对照比差异有统计学意义(P<0.05).不同浓度TCE处理NHEK 4 h后培养12 h.凋亡细胞(Annexin-V+/PI-)所占百分比随TCE剂量增加而升高,除0.125 mmol/L TCE组外,其它各处理组AnnexinV+/PI-细胞所占百分比与对照组比差异均有统计学意义(P<0.05).相关分析显示Annexin-V+/PI-细胞所占百分比与Caspase-3和Caspase-9活性都呈正相关(P<0.05).100 μmol/L Z-DEVD-FMK预处理明显抑制2.0 mmol/L TCE诱导的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-细胞所占百分比的增加(P<0.05),对Caspase-9活性影响不明显(P>0.05).100 μmol/L Z-LEHD-FMK预处理不仅抑制2.0mmol/L TCE诱导的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-细胞所占百分比的增加,还抑制Caspase-9活性上升(P<0.01).结论 TCE诱导NHEK凋亡中,内部凋亡途径中上游关键酶Caspase-9和下游效应分子Caspase-3均激活.且Caspase-3的激活依赖Casapase-9的活化.     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶在皮肤肿瘤细胞凋亡调控中作用的研究

细胞凋亡为一种形态学上的改变,是发生于基因调控下的细胞程序性的死亡。细胞凋亡的通路主要有3条:线粒体通路、死亡受体通路和内质网通路。在细胞凋亡中执行主要功能的为一类名为半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)的蛋白酶家族,通过各种机制的活化,产生级联反应,导致细胞凋亡。近年研究显示,细胞凋亡中caspase与皮肤肿瘤的发生、发展密切相关,深入研究细胞凋亡的信号通路及其分子机制将为皮肤肿瘤的治疗提供新的途径。     

半胱氨酸—天冬氨酸蛋白酶（Caspase）及其在细胞凋亡中的作用

白细胞介素β转化酶,即ＩＣＥ,与线虫死亡基因产物Ｃｅｄ－３蛋白相似,目前已发现１４种ＩＣＥ类似物,Ａｌｎｅｍｒｉ将ＩＣＥ家族统一命名为Ｃａｓｐａｓｅ（Ｃｙｓｔｅｉｎ－ａｓｐａｒａｔｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ,半胱氨酸－天冬氨酸蛋白酶）,Ｃａｓｐａｓｅ以结构酶原形式广泛存在于细胞。Ｃａｓｐａｓｅ酶原主要经细胞色素Ｃ及死亡受体激活。Ｃａｓｐａｓｅ活性中心含半胱氨酸,其选择性裂解底物天冬氨酸后残基,通过对蛋白     

维生素E琥珀酸酯对人大肠癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用

目的:检测维生素E琥珀酸酯(VES)对人大肠癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用并分析此种作用的可能机制.方法:VES分别以5、10和20 mg/L浓度作用于人大肠癌细胞株LS174T,12、24以及48 h后应用MTT法检测VES对大肠癌细胞的生长抑制作用.应用流式细胞仪分析不同浓度VES处理48 h后大肠癌细胞的细胞周期并计算凋亡率;以Western蛋白印迹法和流式细胞术检测VES处理后肿瘤细胞Fas蛋白水平和细胞表面Fas表达的变化.结果:VES能够显著抑制人大肠癌细胞的增殖并表现为剂量和时间依赖关系.以5、10和20 mg/L VES作用48 h后,肿瘤细胞的凋亡率由0.9%分别升高至15.9%、46.7%和64.5%.Fas中和性抗体能够明显阻断VES介导的凋亡.VES处理后,细胞Fas蛋白水平升高.流式细胞仪检测细胞表面Fas平均荧光强度由5.43升高至9.88、13.21和18.0.结论:VES能够诱导人大肠癌细胞的生长抑制和凋亡.调控凋亡诱导分子Fas的表达是主要机制之一.其作用主要与肿瘤细胞表面Fas分子表达的上调有关.     

结核分枝杆菌诱导小鼠树突状细胞凋亡及caspase-3、-8活化对凋亡的影响

目的:研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)诱导小鼠树突状细胞株(DC2.4)凋亡及caspase-3、-8活化对凋亡的影响.方法:建立小鼠树突状细胞DC 2.4的人结核分枝杆菌H37Rv细胞混合培养模型.采用DAPI荧光染色法和透射电镜分析凋亡DC 2.4细胞的形态特征;通过DNA琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析,FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测DC 2.4细胞凋亡情况;分光光度法检测H37 Rv诱导DC 2.4细胞凋亡过程中caspase-3、-8活性变化.结果:H37 Rv与DC 2.4细胞混合培养2h后,即有细菌侵入,培养4、6、8、10、12h后,细菌侵入现象更明显,侵入率分别为(16.1±4.3)%、(35.8±5.1)%、(50.2±5.7)%、(58.3±6.2)%和(65.9±6.9)%.H37Rv与DC 2.4细胞混合培养6h后,DAPI染色荧光显微镜、透射电镜观察均发现DC 2.4细胞发生凋亡并出现典型的凋亡特征——染色质浓缩及边缘现象;DNA琼脂糖凝胶电泳出现特征性的凋亡条带.H37R与DC 2.4细胞混合培养6h、12 h和24 h后,细胞凋亡率分别为(6.4±2.5)%,(11.8±5.3)%和(31.1±8.7)%.caspase-3、-8活性增高,caspase-3活性于10 h 达高峰(2.01 +0.09) U/μg,而caspase-8活性则在6h达高峰(2.40±0.07) U/μg,两者与对照组相比均具有统计学意义(P＜0.05),且caspase-8激活先于caspase-3.结论:结核分枝杆菌可诱导树突状细胞发生凋亡,其诱导凋亡的机制可能与caspase-3、-8活化有关.     

X连锁凋亡抑制蛋白通路在金黄色葡萄球菌α-毒素诱导人外周血单核细胞凋亡过程中的作用

目的研究金黄色葡萄球菌的主要毒力因子α-毒素感染人外周血单核细胞后细胞的凋亡率及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、凋亡抑制蛋白1/2(cIAP1/2)、Survivin、Bcl-2、Bax和半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)等的表达。方法以Annexin V异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染流式细胞仪检测人外周血单核细胞的凋亡率,Western blot法检测XIAP、cIAP1/2、Survivin、Bcl-2、Bax和caspase-3等的表达,采用荧光比色法测定细胞内caspase-3蛋白酶活性。结果α-毒素能够以时间依赖的方式诱导人外周血单核细胞凋亡,α-毒素感染30、60和90 min凋亡率与感染0 min比较,其差异有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。随着作用时间的延长,XIAP、cIAP1/2、Survivin和Bcl-2表达逐渐下降,而Bax和caspase-3表达逐渐增加。结论α-毒素可诱导人外周血单核细胞凋亡,XIAP信号通路在金黄色葡萄球菌的致病过程中起重要作用。     

Caspase3在哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡中的作用

目的 探讨哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡的机制。方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察哇巴因对Jurkat细胞生长的抑制作用；应用DNA片段分析、流式细胞术观察细胞凋亡；半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)基因表达水平；应用westernblot测定caspase3的活性亚单位；比色法检测caspase3活性。结果 哇巴因能诱导Jurkat细胞凋亡，在细胞凋亡过程中，caspase3活性明显升高。结论 caspase3活化参与了哇巴因诱导Jurkat细胞的凋亡过程。     

姜黄素对人食管癌Ec-9706细胞凋亡的影响机制

目的:观察姜黄素(euwumin)对人食管癌Ee-9706细胞凋亡作用及凋亡抑制蛋白livin,促凋亡蛋白Smae和caspase-3蛋白表达的影响,探索其分子机制.方法:应用40～160 pmol/L姜黄素处理Ec-9706细胞12～48 h后,采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测Ec-9706细胞凋亡率:免疫蛋白印迹技术(WesternBlot)检测livin,Srnac及caspase-3蛋白的表达.结果:姜黄素作用后Ec-9706细胞生长明显减慢,抑制率9.3%～73.2%(P＜0.01),凋亡率为6.0%～45.2%(P＜0.01),并呈良好的时间-剂量效应关系.药物作用后,Smac,caspase-3蛋白表达升高,livin蛋白表达下调(P＜0.01).结论:姜黄素能明显抑制Ec-9706细胞的增殖,诱导其凋亡.其机制可能与抑制livin蛋白表达,同时促进Smac,easpase-3表达有关.     

顺铂联合虫草素对OC3人口腔癌细胞的诱导凋亡作用

Objective:To evaluate apoptotic effects of cisplatin and cordycepin as single agent or in combination with cytotoxicity in oral cancer cells.Methods:The influences of cisplatin(2.5μg/mL)and/or cordycepin treatment(10 or 100μmol/L)to human OC3 oral cancer cell line were investigated by morphological observation for cell death appearance,methylthiazoletetrazolium(MTT)assay for cell viability,flow cytometry assay for cell apoptosis,and Western blotting for apoptotic protein expressions.Results:Data demonstrated that co-administration of cisplatin(2.5μg/mL)and cordycepin(10 or 100μmol/L)resulted in the enhancement of OC3 cell apoptosis compared to cisplatin or cordycepin alone treatment(24 h),respectively(P0.05).In flow cytometry assay,percentage of cells arrested at subG1 phase with co-treatment of cordycepin and cisplatin(30%)was significantly higher than cisplatin(5%)or cordycepin(12%)alone group(P0.05),confirming a synergistically apoptotic effect of cordycepin and cisplatin.In cellular mechanism study,co-treatment of cordycepin and cisplatin induced more stress-activated protein kinase/Jun terminal kinase(JNK),the expressions of caspase-7,and the cleavage of poly ADP-ribose polymerase(PARP)as compared to cisplatin or cordycepin alone treatment(P0.05).Conclusion:Cisplatin and cordycepin possess synergistically apoptotic effect through the activation of JNK/caspase-7/PARP pathway in human OC3 oral cancer cell line.     

靶向人端粒酶小干扰RNA对人喉癌Hep-2细胞系形态学影响

目的探讨靶向人端粒酶基因siRNA对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞形态学的影响。方法根据人端粒酶基因设计和合成人端粒酶siRNA和随机的siN.C作为阴性对照,通过转染载体Lipofectamine 2000脂质体转染Hep-2细胞,观察形态学结构。结果转染siRNA48h后细胞皱缩、变圆并开始脱落。HE染色显示细胞呈明显的良性转化。透射电镜下可见细胞凋亡、胀亡的形态改变。结论靶向人端粒酶基因的siRNA能促使Hep-2细胞形态呈良性转化,并能促进肿瘤细胞凋亡。     

洛伐他汀对喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨阿伐他汀对喉鳞状细胞癌（LSCC）细胞系Hep-2细胞增殖和凋亡的影响。方法给予体外培养Hep-2细胞阿伐他汀处理,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并分析超氧化物生成情况。结果阿伐他汀降低了Hep-2细胞活力,引起了Hep-2细胞凋亡,超氧化物水平升高。结论阿伐他汀对LSCC具有潜在的治疗作用。     

中草药三叶青抗肿瘤作用机制实验研究和临床应用

目的拟对民间常用中草药三叶青抗恶性肿瘤作用机制做深入的实验研究,并在此基础上按《保健食品注册管理办法(试行)》要求以三叶青为主,配以药食同用的黄芪、人参皂苷制成制剂金芪片经过临床验证研制成抗恶性肿瘤的功能性保健食品。方法按《保健食品检验与评价技术规范》对三叶青进行抗肿瘤功能实验、提高人体免疫功能实验和食品安全性毒理学评价实验,证实三叶青有明显抗肿瘤作用,且长期服用安全无毒。以三叶青为主配以黄芪、人参皂苷制成的制剂金芪片经临床验证,证实疗效确切无毒副反应。结果各项实验结果证实三叶青及金芪片提取物对人体肝癌细胞HepG2活性具有较强抑制作用,对小鼠HepG2细胞的端粒酶基因表达有抑制作用,并又增强小鼠细胞免疫和体液免疫功能的作用。三叶青提取物经急性毒性试验及长期毒性实验证实安全无毒。金芪片临床验证:120例恶性肿瘤病人服用90天,完全缓解52例,部分缓解42例,稳定18例,进展8例,总有效率78.33%。结论表明三叶青及其制剂金芪片对恶性肿瘤病人有较好的效果,值得推广,并可期盼做进一步研究开发成抗恶性肿瘤新药。     

miRNA-29c在喉癌组织中的表达及对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭的影响

目的 观察miRNA-29c 在喉癌组织和喉癌Hep-2 细胞株中的表达情况,研究其与肿瘤临床分期、淋巴转移及预后等临床病理参数的关系,并探讨miRNA-29c 对喉癌Hep-2 细胞增殖、侵袭的影响。 方法 选取2006 年1 月～2016 年12 月在我院确诊的86 例喉癌患者的蜡块标本,利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测喉癌组织和癌旁正常喉黏膜上皮组织中miRNA-29c 的表达,并分析其与临床病理学特征的关系;通过Q-RT-PCR 检测转染后每组细胞中miRNA-29c 的表达;CCK-8 检测细胞增殖能力变化情况;Transwell 实验检测跨膜细胞数量的变化。 结果miRNA-29c 在喉癌组织中相对表达量明显低于癌旁组织（P<0.01）,其表达量与不同临床分型、TNM分期、淋巴转移密切相关（P<0.05）;转染miRNA-29c 模拟物组细胞中的miRNA-29c 表达水平显著高于无关序列组和空白对照组（P<0.01）,并可抑制喉癌Hep-2 细胞的增殖和侵袭力（P<0.01）。 结论 在喉癌中,miRNA-29c 是一个抑制性miRNA,miRNA-29c 低表达可能是影响喉癌预后的重要因素;过表达miRNA-29c 可显著降低喉癌Hep-2 细胞的增殖和侵袭能力,miRNA 表达水平的下调可能参与了喉癌的发生发展及侵袭转移过程。     

不同培养条件及方法对组培暗紫贝母生长的影响

暗紫贝母(Fritillaria unibracteata Hisao et K.C.Hsia)是百合科植物,其鳞茎为川贝来源之一,具有清热润肺、化痰止咳、散结等功效。但由于它喜寒凉气候,为高山、高原特有植物,只能野生生长在3000～3500 m的高山上,栽培很难成活。为了弥补野生资源的不足,探讨药材生产新途径,本文在文     

响应面分析南方红豆杉黄酮微波提取工艺研究

目的:优化南方红豆杉[Taxus mairei (Lemee et Levl.) S.Y.Hu ex Liu]枝叶中总黄酮的微波提取工艺.方法:在单因素实验基础上,采用响应面分析法对影响南方红豆杉枝叶中总黄酮提取率的主要因素(提取时间、料液比和乙醇体积分数)进行优化,建立影响因素与响应值之间的数学模型,确定最佳微波提取工艺条件.结果:南方红豆杉枝叶中总黄酮最佳微波提取工艺为:料液比27.39(V/W),乙醇体积分数61.44%,提取时间15.27min,微波频率1 887MHz.结论:采用响应面法对南方红豆杉中总黄酮的提取条件进行优化,该方法合理可靠,为生产工艺提供理论依据.     

岩白菜中岩白菜素的纯化及提取工艺研究

目的：优选岩白菜中岩白菜素最佳提取工艺并考察其纯化方法。方法：用紫外-可见分光光度计测定岩白菜素的含量为指标,考察了影响大孔吸附树脂纯化及醇提工艺的主要因素。结果：确定岩白菜的最佳提取工艺条件为10倍量50%的乙醇,回流提取3次,每次0.5h,最佳的纯化条件为每克D-101树脂（干重）最大上样量2.5g原生药材,上样静置吸附30m in后用6倍柱床体积20%的乙醇洗脱。结论：在该提取及纯化的最佳参数组合下,岩白菜素的含量达14.023%,结果可靠。     

透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,探讨透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的分子机制。方法荧光显微镜观察透骨草提取物对SMMC-7721细胞形态的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。结果荧光显微镜可见,40.91μg/mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞,细胞皱缩,细胞核固缩,呈新月状且边集,呈现凋亡现象。免疫组化结果显示40.91μg/mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞Bcl-2蛋白表达明显低于对照组（P〈0.05）,而Bax蛋白表达明显高于对照组（P〈0.05）。结论透骨草提取物可能通过下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达诱导SMMC-7721细胞凋亡。     

红茴香根皮提取液对神经细胞生长和增殖作用的影响

目的探讨红茴香根皮提取液对神经细胞生长和增殖的影响。方法①对未分化的PCI2细胞的促神经生长作用：将未分化的PCI2细胞制成细胞悬液,分成8组：阴性对照组、神经生长因子（NGF）阳性对照组、红茴香根皮提取液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,以及红茴香根皮提取液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分别与NGF（50彬L）联合用药组。连续3d（24、48、72h）进行光镜观察,计算突起生长细胞（≥2倍细胞直径）占总细胞的百分率。②对NGF分化的PCI2细胞的促增殖作用：取NGF诱导分化的PCI2细胞,分成8组：阴性对照组、NGF阳性对照组、红茴香根皮提取液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组、以及红茴香根皮提取液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ与NGF（300μg/L）联合用药组。用酶联免疫检测仪测定570nm处的吸光度（OD570）,计算增殖率。结果①促神经生长作用：与阴性对照组相比,提取液各剂量组均能显著促进PCI2细胞突起生长,第2天（48h）诱导分化活性最强,提取液各剂量组与NGF联合应用时,对促进PCI2细胞突起生长有明显的协同作用。②促增殖作用：在有血清培养条件下,红茴香根皮提取液中剂量和高剂量组均对PCI2细胞有明显促增殖作用;在无血清培养条件下,受试药红茴香根皮提取液各剂量组均对PCI2细胞有明显促增殖作用,与阴性对照组比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论红茴香根皮提取液可能是神经营养因子样物质,具有促神经细胞生长和增殖作用。     

山核桃叶不同萃取物及DHMC对大鼠胸主动脉条收缩功能的影响

目的：研究山核桃叶95％醇提物不同萃取层和黄酮单体2,6＇-二羟基-4＇-甲氧基查耳酮（DHMC）对大鼠胸主动脉条收缩功能的影响并探讨DHMC的作用机理.方法：采用离体血管环灌流装置,观察不同受试药物对大鼠胸主动脉条收功能的影响判断其舒张血管的作用.结果：山核桃叶各萃取层对去甲肾上腺素（NE） 100 nmol/L预收缩的大鼠离体胸主动脉条的影响作用各不相同：水层和正丁醇层基本无作用,石油醚和氯仿层具有一定舒张动脉条作用且氯仿层作用较强,而乙酸乙酯层具有加强血管收缩作用;DHMC对NE和KCl预收缩的动脉条都有明显的舒张血管作用.结论：山核桃叶中同时具有收缩和舒张血管的化学成分,其中山核桃叶中含量较高的黄酮类化合物DHMC舒张血管效应明显,其作用机制可能与抑制细胞外钙内流及抑制细胞内储存钙的释放有关.