黏附分子T-cadherin表达对胶质母细胞瘤C6细胞的生抑制作用

目的 探讨T—cadherin分子表达对胶质母细胞瘤C6细胞增殖的影响。方法 利用脂质体将pcDNA3和pcDNA3．T—cadherin表达质粒转染C6细胞，以克隆形成试验和细胞增殖试验研究T-cadherin表达对C6细咆增殖的影响。结果 转pcDNA3．T-cadherin质粒的C6细胞形成的细胞克隆数显著少于转染pcDNA3载体质粒的C6细胞形成的克隆数，两者差异有统计学意义（P〈0．01）。转染后表达T—cadherin分子C6细胞的生长速度明显慢于转染空载体不表达T—cadherin的C6克隆（P〈0．01），且T—cadherin表达水平与C6细胞增殖速度呈负要关。结论 T—cadherin分子表达显著抑制胶质母细胞瘤C6细胞的增殖。     

黏附分子T-cadherin表达诱导C6胶质母细胞瘤细胞G2期阻滞

目的 研究T-cadherin分子表达抑制胶质母细胞瘤C6细胞增殖的机制。方法 利用脂质体转染pcDNA3和pcDNA3-T-cadherin质粒后获得的表达和不表达T-cadherin的C6细胞克隆，以流式细胞仪检测两种克隆细胞的细胞周期的变化，同时分析其细胞周期与细胞分裂指数的关系。结果 转染后表达T-cadherin的C6细胞在去血清培养48h使细胞周期同步后，分别用血清刺激培养12h后行流式细胞仪检测，与转染空载体的1、2克隆相比，转染T-cadherin基因后表达T-cadherin的3、4克隆于G2／M期的细胞比例显著增加（3、4克隆为52．60％和51．84％，1、2克隆为16．17％和13．47％），而G1期的细胞比例显著下降（3、4克隆为0．66％和0．39％，1、2克隆为50．6％和57．9％）。在血清刺激0、4、8、12、24和48h时，空载体克隆1在各时间点的分裂指数与其G2／M期的细胞比例一致，而表达T．cadherin的克隆3在各时间点的分裂指数显著低于其G2／M期的细胞比例数。结论 T．cadherin分子表达能诱导C6细胞G2期细胞阻滞，该机制可能是T-cadherin抑制C6细胞增殖的主要机制。     

黏附分子T-cadherin抑制C6胶质母细胞瘤增殖与p21表达相关

目的探讨T-cadherin分子表达抑制胶质母细胞瘤C6细胞增殖的分子机制。方法利用脂质体将pcDNA3和pcDNA3．T-cadherin表达质粒转染C6细胞，筛选出表达T-cadherin的C6克隆3、4和5以及转染空载体后不表达T-cadherin的C6克隆1和2，以Westerrl Bolt检测各克隆的p21和p27的表达；同时，以pcDNA3和pcDNA3．T-cadherin表达质粒分别转染野生型（p21＋／＋）和p21缺失突变型（p21-／-）成纤维细胞，研究T-cadherin分子介导的细胞增殖抑制是否依赖细胞周期蛋白p21的表达。结果转染pcDNA3．T-cadherin质粒后表达T-cadherin分子的C6克隆3、4和5的p21表达水平明显升高，而p27的表达与C6细胞是否表达T-cadherin无关。另外。转染pcDNA3．T-cadherin质粒的野生型表达p21的成纤维细胞的增殖显著受抑。而转染pcDNA3．T-cadherin质粒对p21缺失突变的成纤维细胞的增殖不产生抑制作用。结论T-cadherin分子抑制胶质母细胞瘤C6细胞的增殖与p21表达密切相关，且T-cadherin分子对成纤维细胞的增殖抑制作用依赖于p21的表达。     

氯胺酮对大鼠脊髓背角星形胶质细胞的保护机制

目的 探讨氯胺酮对N-甲基-D天冬氨酸（NMDA）诱导的大鼠脊髓背角星形胶质细胞损伤的保护机制。方法 取新生2～3dWistar大鼠40只T12～L5脊髓背角星形胶质细胞,原代纯化培养3周。将细胞随机分六组：NMDA组（N组）,氯胺酮组（K组）、NMDA加不同浓度氯胺酮组（标记为NK1～NK3组）,对照组（C组）。加药后培养30min或24h取各组细胞检测超氧化物岐化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量,免疫细胞化学观察Bcl-2／Bax表达,流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率和胞内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）。结果 与C组比较,N组细胞发生大量凋亡（P〈0．01）,Bax强阳性表达,Bcl-2阴性表达,SOD活性显著降低（P〈0．01）,MDA含量明显增加（P〈0．01）,[Ca^2＋]i显著升高（P〈0．01）。与N组比较,NK2、NK3组细胞凋亡明显减少（P〈0．05或P〈0．01）,Bcl-2阳性表达,Bax阴性表达,[Ca^2＋]i低（P〈0．05或P〈0．01）,SOD活性增加（P〈0．01）,MDA含量低（P〈0．01）。结论 氯胺酮抑制激活的背角星形胶质细胞内Ca^2＋超载,增强Bcl-2蛋白表达,抑制NMDA诱导的细胞凋亡,并增强抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化反应引起的细胞损伤。     

人结肠癌相关成纤维细胞对结肠癌Lovo细胞生物学行为的影响

目的探讨人结肠癌相关成纤维细胞（CAF）对结肠癌Lovo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭等生物学行为的影响。方法收集人结肠CAF及正常成纤维细胞（NF）条件培养基,建立结肠CAF、NF与Lovo细胞间的共培养模型,以无血清培养基处理的Lovo细胞作为空白组．进行细胞增殖、黏附、迁移及Transwell侵袭能力检测。结果Lovo细胞与结肠CAF共培养后。增殖48和72h反映细胞增殖的吸光度（A）值分别为（0．667±0．059）和（0．709±0．030）,明显高于空白组[（0．574±0．031）和（0．593±0．031）]和NF组[（0．597±0．036）和（0．652±0．029）],差异均有统计学意义（P〈0．01）;黏附细胞的A值为（0．588±0．067）,也明显高于空白组（0．226±0．039）和NF组（O．375±0．059）,差异也均有统计学意义（P〈O．01）;12h和24h细胞迁移率分别为（35．2±8．7）％和（64．6±7．1）％,明显高于空白组[（14．7±3．6）％和（26．3±10．3）％]和NF组[（14．1±7．3）％和（35．2±9．8）％]（P〈O．01）;透膜细胞数为（56．2±4．8）个,多于空白组的（14．6±2．2）个和NF组的（22．9~4．5）个（P〈O．01）。结论人结肠CAF具有增强结肠癌Lovo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭的能力。     

模拟CO2气腹对胃癌细胞黏附分子表达的影响

目的研究体外模拟不同压力CO2气腹环境对人胃癌MKN,45细胞表面黏附分子表达的影响。方法体外建立模拟CO2气腹环境,实验组分为3个亚组,气腹压力分别为1．2、1．6和2．0kPa,作用时间均为4h。实验组经气腹处理后第0、24、48、72和96h,对照组普通细胞培养4h,用流式细胞仪检测胃癌MKN-45细胞表面黏附分子CD44v6、细胞间黏附分子1（ICAM-1）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）表达。结果胃癌MKN-45细胞经1．2、1．6kPaCO2气腹作用后CD44v6和ICAM-1表达呈现先升高后回落,24h时与对照组的差异有统计学意义（P〈0．01）,48h时达到高峰,然后逐渐下降,72h时与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,96h恢复至对照组水平：E-cadherin表达变化为先降低后回升,处理后即较对照组明显下降（P〈0．01）,然后开始回升,48h时与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,96h恢复至对照组水平。2．0kPa组CD44v6、ICAM-1和E-cadherin表达变化均更为显著．CD44v6和ICAM-1在处理后即显著高于对照组（P〈0．05）．E-cadherin表达在48h仍然明显低于对照组（P〈0．05）。结论模拟临床常用的CO2气腹压力对胃癌MKN．45细胞表面黏附分子表达可产生一过性影响．但均能在较短时间内恢复。     

靶向Survivin基因的短发卡RNA对U251细胞生长和凋亡的影响

目的观察Survivin基因特异性短发卡RNA（shRNA）对人脑胶质母细胞瘤U251细胞体外生长和细胞凋亡的影响。方法对U251细胞，稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1-SR的U251-SR细胞，以及稳定转染空载体pWH1的U251-P细胞。分别采用细胞计数法绘制生长曲线和平板克隆形成实验观察各组细胞的体外生长情况；采用流式细胞术（FCM）定量测定各组细胞的细胞周期和凋亡细胞数量；采用HE染色、Hoechst染色和原位末端标记（TUNEL）方法观察各组细胞形态学特征。结果与U251和U251-P细胞相比，U251-SR细胞生长明显减缓（P〈0．01），细胞克隆形成明显减少（P〈0．01）；U251-SR细胞G1期细胞增多，S期细胞减少，凋亡细胞增加至20．9％，并呈现典型的细胞凋亡形态学改变。结论靶向Survivin基因的特异性shRNA能够在体外明显抑制U251细胞的生长并诱导其发生大量凋亡。     

细胞间黏附分子1和CD44V6及E钙黏蛋白在人胃癌组织中的表达及意义

目的探讨细胞间黏附分子1（ICAM-1）、CD44V6和E钙黏蛋白在胃癌中的表达及其意义。方法检测ICAM-1、CD44V6和E钙黏蛋白在78例胃癌、30例胃良性病变和30例正常胃组织的表达，分析其之间的相关性及与临床病理特征的关系。结果ICAM-1、CD44V6蛋白表达阳性率：胃癌组织显著高于胃良性病变及正常胃组织（P〈0.01），有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组（P〈0.05），T3、T4组明显高于T1、T2组，Ⅲ、Ⅳ期组明显高于Ⅰ、Ⅱ期组（P〈0．05）。E钙黏蛋白表达阳性率：胃癌组织显著低于胃良性病变及正常胃组织（P〈0．01）；无淋巴结转移组明显高于有淋巴结转移组（P〈0．01），T1、T2组明显高于T3、T4组，Ⅰ、Ⅱ期组明显高于Ⅲ、Ⅳ期组（P〈0．05）。胃癌组织中ICAM-1蛋白表达水平与CD44V6、E钙黏蛋白表达水平之间无相关性（P〉0．05）。联合检测胃癌组织中CD44V6、E钙黏蛋白和ICAM-1的表达，对胃癌转移的敏感度为97．78％，明显高于单项测定指标。结论黏附分子ICAM-1、CD44V6、E钙黏蛋白的阳性表达预示胃癌具有较强的侵袭转移能力，联合检验这3种指标能更准确地判断胃癌的转移情况。     

细胞黏附分子在高容量血液滤过防治多器官功能障碍中的表达变化及意义

目的研究细胞黏附分子在高容量血液滤过（HVHF）干预多器官功能障碍（MODS）猪模型过程中的表达变化情况。方法18头实验动物被随机分为2组：模型组（M组）实施失血性休克＋内毒素注射“二次打击”，而治疗组（HF组）在二次打击后接受HVHF干预。检测两组中性粒细胞（PMN）表面CD11b、L-选择素（selectin）的表达和血浆中可溶性E选择素（sE-seleetin）、可溶性细胞间黏附分子（sICAM-1）的浓度。结果HVHF治疗开始后，HF组CD11b表达出现下降，在各个时间点与M组比较，差异有统计学意义P〈0．01；治疗组中L-selectin的表达在治疗后24、48h处表达高于M组的表达（P〈0．05）。治疗开始后sE-selectin浓度就出现明显下降，治疗后24h与M组比较差异有统计学意义（P〈0．01），到治疗后48h（P〈0．05）和72h（P〈0．01）已经高于M组水平；治疗后24h，HF组中sICAM-1水平低于M组（P〈0．05），此后维持于较高水平，至治疗后72h高于M组（P〈0．01）。结论HVHF可以间接、双向调节MODS发生过程中细胞黏附分子的表达水平以及PMN、内皮细胞的活化状态。     

E-cadherin反义寡核苷酸对肿瘤细胞浸润能力影响的研究

目的 了解上皮型钙黏附分子（E—cadherin）下调对肿瘤细胞浸润能力的影响。方法 选用人胰腺癌细胞株JHP-1，经E—cadherin反义寡核苷酸（ASODN）作用，应用免疫细胞化学染色、Westernblot法检测细胞E—cadhefin蛋白表达情况，细胞浸润MTT比色法检测该细胞对基底膜的浸润能力。结果 经E—cadherinASODN作用后，JHP-1细胞膜E—cadherin表达减弱，E—cadherin蛋白含量与对照组相比明显降低；JHP-1细胞对基底膜浸润能力明显高于对照组（P〈0．001）。结论 E—cadherin与肿瘤细胞的浸润能力有关。     

SLC22A18基因表达对胶质瘤细胞生物学特性的影响

目的 观察SLC22A18基因表达对人胶质瘤U251细胞生物学特性的影响.方法 U251细胞分别转染pcDNA3.SLC22A18和pcDNA3表达质粒后,筛选3个表达不同水平SLC22A18的U251克隆和2个不表达SLC22A18的U251克隆,研究SLC22A18蛋白表达水平对U251细胞黏附、迁移及聚集能力的影响.结果 与不表达SLC22A18的U251细胞比较,表达SLC22A18的U251细胞在附着后1 h和4 h时的细胞黏附能力均显著增强,分别平均增强65.7%和26.5%(P＜0.01),而其细胞过河实验显示过河时间平均延长67.8%(P＜0.05),并且细胞迁移能力平均下降71.5%(P＜0.01).同时,SLC22A18表达诱导显著的同源细胞聚集,聚集指数平均下降53.2%(P＜0.01).结论 SLC22A18蛋白表达显著抑制人胶质瘤U251细胞的恶性生物学特性.

Abstract：

Objective To study the effect of SLC22A18 gene expression on the biological behaviors of human glioma U251 cells. Methods Three U251 clones with different expression levels of SLC22A18 and two U251 clones without SLC22A18 expression after transfecting U251 cells with pcDNA3. SLC22A18 and pcDNA3 using lipofectin were chosen to study the effects of SLC22A18 gene expression on cell adhesion,motility and aggregation. Results Compared to the non-SLC22A18-expressing U251 cells, SLC22A18-expresing U251 cells indicated enhanced cell adhesion, and average 65. 7% and 26. 5% increases in cell adhesion at 1st and 4th h of the culture were observed (P ＜0. 01) , but the crossing-river time of SLC22A18-expresing U251 cells was averagely prolonged by 67. 8% (P ＜0. 05) , and their motility was decreased by 71.5% ( P ＜ 0. 01 ). At the same time, SLC22A18-expressing U251 cells demonstrated significantly homophilic aggregation, and aggregation index was decreased by 53. 2% compared to the non-SLC22A18-expressing U251 cells (P＜0. 01). Conclusion SLC22A18 gene expression significantly suppresses the malignant biological behaviors of U251 glioma cells.     

反义AKT2 RNA逆转C6胶质瘤的细胞恶性表型

目的研究反义AKT2RNA逆转C6鼠脑胶质瘤细胞恶性表型。方法将逆转录病毒LXSN为载体的反义AKT2构建体脂质体复合物直接转染人脑胶质瘤细胞系TJ905和鼠脑胶质瘤细胞系C6,LXSN载体转染组为空载对照。随机筛选阳性克隆并应用蛋白印记和原位杂交鉴定转染。MTT法和TUNEL法评价细胞的增殖活性和凋亡,Transwell法分析侵袭能力,划痕实验研究细胞迁移能力,流式细胞法分析细胞周期,并进行GFAP的表达分析。结果转染ASAKT2cDNA后C6细胞AKT2表达显著抑制。与C6对照组和LXSN空载组比较,转染反义AKT2后C6细胞存活率均明显下降(P<0.01),凋亡指数增加(0.33vs13.67,P<0.01),侵袭能力和细胞迁移能力抑制,诱导细胞出现G0/G1细胞周期阻滞,上调GFAP的表达。结论反义AKT2RNA基因治疗通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭与迁移并使G0/G1细胞周期阻滞逆转其恶性表型,AKT2可作为基因治疗胶质瘤的重要优选靶的。     

转染连接蛋白基因对胶质瘤细胞细胞间隙连接通讯及其生长变化的研究

目的　研究连接蛋白 (Cx)基因对C6胶质瘤细胞的增殖抑制及细胞间隙连接通讯(GJIC)的作用 ,探讨以Cx43基因治疗胶质瘤的可行性。方法　将含Cx43cDNA的质粒以Lipofec tamine介导转染Cx43表达缺失的C6胶质瘤细胞 ,通过Northern印迹杂交、原位杂交及免疫组织化学染色检测Cx43mRNA及蛋白表达 ,划痕标记荧光染料示踪技术 (SLDT)检测GJIC ,MTT法测定细胞增殖率 ,核仁组成区嗜银蛋白 (AgNOR)染色检测细胞增殖活性 ,TUNEL法检测细胞凋亡。结果　转染后C6细胞有不同程度的Cx43mRNA及蛋白表达和GJIC恢复。表达Cx43的克隆细胞增殖明显下降 ,培养 2～ 6d时 ,每天除C6组与空载组差异无显著性外 ,其余各组差异均有非常显著性 (P <0 .0 1) ,但细胞凋亡并未增加。结论　Cx43基因及GJIC在恶性胶质瘤的发生发展过程中起重要作用 ,可能成为恶性胶质瘤基因治疗的优选靶的之一。     

Increased invasive capacity of connexin43-overexpressing malignant glioma cells

OBJECT: Malignant glioma cells, similar to astrocytes, express connexin43 (Cx43) universally but at widely varied levels. Data from previous studies have demonstrated that malignant glioma cells form functional gap junction channels among themselves as well as with astrocytes and that such a communication has the potential to modulate the phenotypic characteristics of astrocytes. Recently, gap junctions have been demonstrated to play a role in the invasive phenotype of malignant gliomas. In this study, the authors have further investigated the motility and invasion ability of Cx43-overexpressing and Cx43-deficient malignant glioma cells. METHODS: Using a standard invasion system of a Matrigel transwell invasion chamber, the authors found that the number of Cx43-transfected C6 glioma cells (C6-Cx43 cells) migrating through the Matrigel-coated membrane was similar to that of mock-transfected control cells (C6-mock cells) during the first 24 hours, but increased significantly thereafter. When these cells were cocultured with astrocytes, the number of invading C6-Cx43 cells was more than threefold greater than the number of invading C6-mock cells. Results of an in vitro cell motility assay also demonstrated that C6-Cx43 cells were more motile and scatter-active than C6-mock cells. Furthermore, zymographic analysis of MMPs, an important determinant in glioma invasion, demonstrated that the amounts of MMP-2 and MMP-9 in culture medium collected from C6-Cx43 cells were orders of magnitude higher than those from C6-mock cells. In addition, BB-94, a synthetic MMP inhibitor, significantly inhibited C6-Cx43 cell invasion. CONCLUSIONS: The overexpression of gap junction proteins in glioma cells and the intercellular communication between tumor and nontumor glia cells may play important roles in the facilitation of glioma cell invasion.     

腺病毒载体介导反义Src基因治疗胶质瘤

目的 探讨腺病毒载体介导的反义Src基因对胶质瘤生长的作用及其机制.方法 应用携带反义Src基因的重组腺病毒体外感染C6胶质瘤细胞,观察其对细胞形态、生长曲线和克隆形成率的影响.建立大鼠胶质瘤动物模型,原位注射重组腺病毒.观察其治疗作用,Western blot检测肿瘤组织Src、Ras、MAPK蛋白的表达,实时逆转录-聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)检测肿瘤组织Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表达.结果 体外研究表明感染反义Src基因的C6胶质瘤细胞生长受到显著抑制.体内研究表明应用携带反义Src基因的腺病毒原位注射治疗大鼠胶质瘤能够抑制肿瘤生长,减少Src、Ras、MAPK蛋白的表达,增加Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表达.结论 腺病毒载体介导的反义Src基因能够抑制大鼠胶质瘤细胞的生长.Src-Ras-MAPK信号通路参与胶质瘤的生长,抑制该信号通路可以增加凋亡通路关键蛋白Caspase-3、Caspase-8的表达.     

脑胶质瘤白细胞介素-6自分泌或旁分泌环路的研究

目的　研究白细胞介素 6(IL 6) /IL 6受体 (IL 6R)自分泌或旁分泌环路与脑胶质瘤的关系。方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测IL 6和IL 6R基因在 4株脑胶质瘤细胞株、62例脑胶质瘤组织标本、5例良性脑膜瘤组织和 5例人正常脑胶质细胞中的表达 ;将IL 6单抗 (McAb)或IL 6RMcAb与脑胶质瘤细胞共同孵育 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测对细胞生长的抑制作用。结果　脑胶质瘤细胞株C6、9L、U 2 5 1和SHG44均有IL 6和IL 6R的表达 ,脑胶质瘤组织标本中 47例 (75 .81% )表达IL 6、5 2例 (83 .87% )表达IL 6R、41例 (66.13 % )同时表达IL 6和IL 6R ;良性脑膜瘤组织 4例表达IL 6,人脑正常胶质细胞仅有IL 6弱表达 ,两者均无IL 6R表达。IL 6McAb和IL 6RMcAb能够显著抑制脑胶质瘤细胞的增殖 ,并存在剂量依赖关系(P <0 .0 1)。结论　脑胶质瘤很可能存在IL 6/IL 6R自分泌或旁分泌环路 ,阻断此环路可以明显抑制胶质瘤细胞的恶性增殖     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对MDA-MB-231乳腺癌细胞SLIT2基因去甲基化作用及细胞运动能力的影响

目的 观察5-氮杂-2’-脱氧胞苷( 5-Aza-dc)对恶性乳腺癌MDA-MB-231细胞Slit2启动子的去甲基化作用及细胞运动能力的影响.方法 用5、10、20 μmol/L 5-Aza-dc分别处理MDA-MB-231乳腺癌细胞;噻唑蓝(MTT)比色法筛选能够恢复MDA-MB-231细胞Slit2表达的5-Azadc最适浓度为10 μmol/L;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测对照组和10μmol/L处理组Slit2mRNA的表达;划痕实验和趋化实验检测5-Aza-dc给药后,乳腺癌细胞的非定向与定向运动能力的变化;聚集实验检测5 -Aza-dc对MDA-MB-231细胞间黏附能力的影响.结果 在RT-PCR结果中,对照组和10 μmol/L 5-Aza-dc处理组Slit2/GAPDH的密度比值分别为0.630±0.042和1.307±0.057,表明5-Aza-dc可有效恢复乳腺癌MDA-MB-231细胞Slit2的表达(P＜0.05).体外趋化实验显示10 μmol/L 5-Aza-dc处理的MDA-MB-231细胞定向运动能力降低(P＜0.01),趋化凶子上皮生长因子(EGF)浓度为10 μg/L时实验组穿过膜的细胞数为49.46±2.92;对照组为99.44±2.54.伤口愈合实验发现10μmol/L 5-Aza-dc处理的MDA-MB-231细胞非定向运动能力降低(P＜0.05),24h时实验组运动的距离为(0.330±0.016) mm;对照组为(0.440±0.045) mm.聚集实验显示10 μmol/L 5-Aza-dc处理的MDA-MB-231细胞间黏附能力增加(P＜0.01),60 min时实验组聚集指数为0.300±0.028,对照组为0.600±0.034.结论 5-Aza-dc可以使MDA-MB-231乳腺癌细胞Slit2启动子区去甲基化,使Slit2基因表达升高,恢复其抑制肿瘤运动的能力.