链霉素对豚鼠耳蜗外毛细胞钙敏感外向钾电流的影响

目的研究链霉素对豚鼠耳蜗外毛细胞底侧膜K+电流的影响,以进一步揭示氨基甙类抗生素耳毒性的离子机制。方法全细胞膜片钳制技术。结果记录到Ca2+敏感的外向K+电流［Ik(Ca)］;分别观察了0.1,1,10,100,1000μmol/L链霉素对Ca2+敏感的外向K+电流的影响。在指令电位+80mV时,链霉素的抑制率分别为0,(6.72±4.42)%,(15.54±5.43)%,(18.02±5.32)%,(30.86±11.21)%。结论链霉素以浓度依赖方式抑制Ca2+敏感的外向K+电流,这可能是其急性耳毒性机制之一。     

豚鼠耳蜗离体外毛细胞底侧膜的钙激活钾通道

豚鼠耳蜗离体外毛细胞底侧膜的钙激活钾通道李煜兴汤浩殷萍吴玉环章小芳王忠（中国医科大学生理教研室１１０００１）哺乳类动物内耳听毛细胞具有机电换能作用。有文献报导，内毛细胞的作用是将声音振动转变为神经信息；外毛细胞对特定声音频率具有选择性即调谐作用。这...     

一氧化氮对大鼠离体幽门窦环行肌的松弛作用

目的 ]观察一氧化氮对大鼠幽门窦环行肌运动的影响 ,并初步探讨其作用机制 .[方法 ]制备幽门窦环行肌肌条 ,肌条的运动通过等张换能器记录于多导生理记录仪上 .利用铜和硝酸的化学反应制取一氧化氮 .[结果 ]一氧化氮能抑制幽门窦环行肌的自发性收缩运动 ,而且这种抑制具有明显的量效关系 ;而在对照组 ,氮气对幽门窦环行肌运动无明显影响 ;一氧化氮抑制由乙酰胆碱引起的幽门窦环行肌的收缩 ,但一氧化氮引起的抑制效应不受乙酰胆碱、阿托品、酚妥拉明、心得安及河豚毒素的影响 ;一氧化氮的这种抑制作用能被氧合血红蛋白取消 .[结论 ]一氧化氮能够模拟非肾上腺素能非胆碱能抑制神经对大鼠幽门窦环行肌运动的效应 ,一氧化氮的这种抑制效应是通过它对平滑肌细胞的直接作用实现的     

D型钠尿肽对豚鼠胃窦环形肌细胞钙敏感钾电流的影响及其作用机制

[目的]记录D型钠尿肽（DNP）对豚鼠胃窦环形肌钙敏感钾电流[IK（Ca）]的影响以探讨DNP抑制胃动力的离子通道机制。[方法]用全细胞式膜片钳技术观察DNP对豚鼠胃窦环形肌细胞IK。、和瞬间外向钾电流（STOCs）的影响。[结果]DNP明显增加豚鼠胃窦环形肌IK‰1和STOCs,并显示剂量依赖关系。0．1、1、10和100nmol/L的DNP能增加IK‰、的幅度,分别为（16．7±1．12）％、（26．5±2．3）％、（46．2±3．3）％和（58．3±3．7）％.细胞外液用无钙液或Rynodine受体的阻断剂均不能阻断此效应,但IP3受体的阻断剂肝素或鸟苷酸环化酶抑制剂LY83583能抑制这种效应。另外,cGMP敏感的磷酸酯酶抑制剂Zaparinast可明显增强DNP对STOCs的增加作用。[结论]DNP通过增加cGMP的产生和激活IP3受体使豚鼠胃窦环形肌细胞上IK（Ca）增加,细胞超极化,从而实现对胃窦环形肌的舒张作用。     

吡拉西坦对海马神经元钙激活钾通道的作用

目的 研究吡拉西坦对原代培养海马神经元钙激活钾通道（KCa通道）的作用,以揭示吡拉西坦抗缺血性脑损伤的电生理机制。方法 应用膜片钳制技术记录原代培养的海马神经元的单通过电流活动,经p-CLAMP软件进行微机采样储存数据和数据的分析处理。结果 吡拉西坦对KCa通道具有明显的激活作用,增加通道开放概率,缩短通道关闭时间（P＜0．01）。结论 吡拉西坦可能通过激活KCa通道而对缺血神经元具有保护作用。     

人动脉平滑肌钙激活钾通道与遗传因素的关系探讨

目的探讨高血压病(Essential hypertension ,EH)患者及正常血压者肠系膜动脉平滑肌钙激活钾通道(Ca2+ activated K+ channel ,Kca)的功能活动及其与遗传因素的相关性.方法用膜片钳单通道记录技术记录胞内和胞外Ca2+对无EH家族史的正常血压者(Nn组)、有EH家族史的正常血压者(Nf组)、无EH家族史的EH患者(En组)、有EH家族史的EH患者(Ef组)肠系膜动脉平滑肌(Mesenteric arterial smooth muscle,MASM)细胞的Kca开放概率(Po)、平均开放时间(To)、平均关闭时间(Tc)及电流幅值(Am)的影响.结果内面向外式膜片下,Nf组、Ef组MASM细胞Kca的Po、To、Tc与Nn组和En组比较,无显著性差异;细胞贴附式膜片下,当胞外Ca2+浓度≥1.8×10-3mmol/L时,Nf组和Ef组的MASM细胞Kca的Po分别低于Nn组,En组,To缩短和Tc延长.结论人MASM细胞Kca对胞内Ca2+的敏感性与遗传因素无关;人MASM细胞Kca对胞外Ca2+的敏感性降低与遗传因素有关,Kca对胞外Ca2+的敏感性降低可能是EH的发生机制之一.     

一氧化氮对大鼠离体幽门窦环行肌的松驰作用

目的 观察一氧化氮对大鼠幽门窦环行肌运动的影响，并初步探讨其作用机制。方法 制备幽门窦环行肌肌条，肌条的运动通过等张换能器记录于多导生理记录仪上，利用铜和硝酸的化学反应制取一氧化氮。结果 一氧化氮能抑制幽门窦环行肌的自发性收缩运动，而且这种抑制上有明显的量效关系；而在对照组，氮气对幽门窦环行肌运动无明显影响；一氧化氮抑制由乙酰胆碱引起的幽门窦环行肌的收缩，但一氧化氮引起的抑制效应不受乙酰胆碱、阿托     

人脐血红细胞膜的钙激活钾通道

作者应用膜片钳技术研究了人脐血红细胞电压依赖和钙活钾通道的电学特性。在细胞吸附膜片中，对称性140mM钾溶液条件下，该通道有一个28．6pS的斜率电导，同时表现出高度K＋选择性．实验发现通道对细胞内钙敏感，当膜电位变正或胞内Ca2＋从10－6M升高到10－5M时，通道开放的频率与时间增加。胞外应用TEA10mM能有效阻断通过电流。从该通道表现出的小电导、能被膜去极化和胞内Ca2＋升高所激活，能被TEA阻断和对K＋高度选择性这样一些特点，我们得出结论，这个通道类似于在其它不同组织上发现的钙激活钾通道．     

钾通道阻断剂和一氧化氮对肺动脉平滑肌细胞钾电流的作用

目的：研究钾通道阻断剂、一氧化氮（NO）对继代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）钾电流（IK）的作用。方法：使用全细胞膜片钳技术观察继代培养大鼠PASMC IK及钾通道阻断剂格列本脲（Gli），四乙胺（TEA），4－氨基吡啶（4－AP）和NO供体S－亚硝基乙酰青霉素胺（SNAP）对其的作用。结果：继代培养大鼠PASMC较急性分离者之IK明显降低。4－AP和高浓度TEA显著降低继代培养大鼠PASMC之IK，SNAP显著增加继代培养大鼠PASMC之IK。结论：继代培养大鼠PASMC钾通道特性发生改变，但通道阻断剂和NO仍能显著改变其活性。     

厄贝沙坦电生理作用的实验研究

目的:研究厄贝沙坦(Irbesartan)对正常豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)、内向整流性钾电流(IK1)、快钠流(INa)以及跨膜动作电位的影响.方法:应用膜片钳全细胞记录方法记录各项离子流和跨膜动作电位.结果:①厄贝沙坦呈浓度依赖性阻断ICa-L,10,100和1000 nmol/L的厄贝沙坦分别使ICa-L密度 (pA/pF)从 (-9.8±1.1)减少到(-6.7±0.9),(-4.2±0.8)和(-2.1±0.4)(n=5,P<0.05或P<0.01).②厄贝沙坦可使ICa-L I-V曲线上移,但不改变其激活的电压依赖性和反转电位.③厄贝沙坦呈使用依赖性阻滞ICa-L.④厄贝沙坦对ICa-L激活曲线无明显影响,但可使钙电流稳态失活曲线左移,加速钙通道电压依赖性失活,对照组V1/2和κ值分别为(-30±5)mV,(8.2±0.7),厄贝沙坦组为(-39±7) mV,(11.6±1.3)(n=5,P均<0.05).⑤厄贝沙坦100 nmol/L使ICa-L失活后再激活的恢复时间常数(τ)从对照组(62.5±2.3) ms延长至(126.4±2.6) ms(P<0.01).⑥厄贝沙坦对IK1和INa无明显影响.⑦厄贝沙坦(100 nmol/L)可使单个心室肌细胞动作电位时程(APD30,APD50,APD90)从(106±10),(125±16),(178±23)ms缩短至(82±16),(99±6),(122±18) ms(n=5,P<0.05),对静息电位、动作电位幅度无影响. 结论:厄贝沙坦作用于L-型钙通道的失活态从而阻断ICa-L.     

救心复脉注射液对豚鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的：探讨救心复脉注射液(枳实提取液)有效成分辛弗林(311)、N-甲基酪胺(417)对豚鼠心室肌细胞膜L型钙通道电流（ICa-L）的影响。方法：用酶解法分离单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,观察辛弗林、N-甲基酪胺对豚鼠心室肌细胞膜ICa-L的影响。结果：用辛弗林（10,25,50,100 mmol/L)时能增大 ICa-L ,增加率分别为 8.27%,27.29%,41.01% 和 48.74% (P<0.05)。 用N-甲基酪胺（10,25,50,100 mmol/L） 时能增大 ICa-L ,增加率分别为 10.05%, 30.12%,43.05% 和51.90%(P<0.05)。辛弗林和N-甲基酪胺只改变电流幅度,不改变I-V曲线形状。结论：辛弗林和N-甲基酪胺有浓度依赖性的增大豚鼠心室肌细胞ICa-L,促进钙通道开放的作用。     

Effect of temperature on the activation of myocardial KATP channel in guinea pig ventricular myocytes: a pilot study by whole cell patch clamp recording

Background The myocardial ATP sensitive potassium channel (K(ATP) channel) has been known for more than two decades, the properties of this channel have been intensively investigated, especially the myocardial protection effect by opening this channel. Numerous studies, including hypothermic, using K(ATP) agonists to achieve a hyperpolarizing cardioplegic arrest, have shown a better myocardial protection than potassium arrest. However, there is no evidence showing that K(ATP) channel could be opened by its agonists under profound hypothermia. We investigated the effect of temperature on activation of myocardial K(ATP) channel by nicorandil.Methods Isolated ventricular myocytes were obtained by collagenase digestion of the hearts of guinea pigs and stored in KB solution at 4&#730;C. With a steady ground current, the myocytes were perfused with 1 mmol/L nicorandil until a steady IK(ATP) occurred. Then the cells were perfused with 1 mmol/L nicorandil plus 1 &micro;mol/L glybenclamide. Currents signals were recorded on whole cells using patch clamp technique at several temperatures. The temperature of the bath solution around myocytes was monitored and was controlled at 4&#730;C, 10&#730;C, 20&#730;C, 25&#730;C and 35&#730;C respectively. About 10 cells were tested at each temperature, the cells were considered useful only when the outward current could be induced by nicorandil and blocked by glybenclamide. All data were analyzed using Graphpad PRISM 3.0 (Graphpad, San Diego, CA, USA). Nonlinear curve fitting was done in Clampfit (Axon) or Sigmaplot (SPSS). Results At 4&#730;C, 10&#730;C, 20&#730;C, 25&#730;C and 35&#730;C, the time needed to open the myocardial K(ATP) channel was (81.0±0) minutes, (50.5±11.7) minutes, (28.8±2.3) minutes, (9.4±10.2) minutes and (2.3±1.0) minutes respectively (P=0.003). The linear relationship between temperature and time needed to open the channel was y (min) = (4348.790－124.277x)/60, where y (min) is time needed to open K(ATP) channel, x is temperature, correlation coefficient r =－0.942 (P=0.00), regression coefficient b =－124.277 (P=0.00). The current densities among different temperatures were statistically different (P=0.022), the current density was greater after the activation of K(ATP) channel at higher temperatures. The lower the temperature, the fewer cells in which K(ATP) channels could be opened. At 4&#730;C, only one cell in which the K(ATP) channel could be opened, took a quite long time (81 minutes) and the I-V curve was quite untypical.Conclusions K(ATP) channel activated by nicorandil is temperature dependent and the temperature linearly related to time needed to open K(ATP) channel; the lower the temperature, the longer the time needed to open channel and the smaller the current density. At profound hypothermia, it is difficult to activate K(ATP) channels.     

白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞钾离子通道的影响

目的 研究白藜芦醇对正常豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流的影响,旨在探讨白藜芦醇抗心律失常作用机制.方法 酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术研究白藜芦醇对豚鼠单个心室肌细胞钾电流的影响.结果 白藜芦醇可明显增强慢性激活延迟整流钾电流(IKS),并呈剂量依赖性.结论 白藜芦醇可增强IKS,缩短动作电位时程(APD).     

一种适用于膜片钳研究的豚鼠心室肌细胞急性分离方法

目的 获得适用于心肌细胞膜片钳研究的单个心室肌细胞.方法 应用酶消化和机械分离的方法分离出生25～30 d的豚鼠心室肌细胞,从形态学及电生理学方面鉴定急性分离的豚鼠心室肌细胞活性,在电镜下观察活性较好的豚鼠心室肌细胞形态学特点,并选用活性较好的单个心室肌细胞进行膜片钳钳制,记录心室肌细胞Ik电流.结果 形态学方面:活性...     

卡介苗对哮喘豚鼠一氧化氮水平的影响

目的：研究卡介苗治疗哮喘豚鼠的疗效并探讨其机抽。方法：将豚鼠30只随机分为5组，每组6只，除正常组外，其他组用10％鸡卵蛋白（ovalbamin,OVA）致敏，15d发敏，连续激发4d后将豚鼠麻醉，取肺组织，测定肺组织中一氧化氮（NO）的含量。结果：哮喘组豚鼠肺组织中NO的水平明显高于正常对照组、卡介苗组、地塞米松预防组、扎鲁斯特预防组（P＜0.01）。卡介苗组、地塞米松预防组、扎鲁斯特预防组豚鼠肺组织中NO的水平明显高于正常对照组（P＜0.05）。结论：卡介苗通过调节Th1/Th2型细胞的平衡而减少Th2型细胞因子（如IL－5）的分泌，抑制气道嗜酸性细胞和肥大细胞的浸润，从而降低其NO的产生。     

NO-cGMP通路对下丘脑钙激活钾通道的调控研究

目的研究一氧化氮（ＮＯ）对ＳＤ乳鼠下丘脑神经元钙激活钾（ＫＣａ）通道的作用及其机制。方法采用内面向外 式及细胞贴附式膜片钳技术比较浴槽液中加入１００μmol/L硝普钠（ＳＮＰ）前后动物下丘及神经元ＫＣａ通道动力学 的改变。结果细胞贴附式时浴槽液中加入１００μmol/L ＳＮＰ,通道开放概率由（７．３±１．５）％升高至（４０．２±６．５）％,开放时 间由（７．１２±１．４１） ｍｓ增大至（１５．３４±３．４５） ｍｓ,开放频率由（１１．３±３．５）Ｈz升高为（２６．６±４．２） Ｈz（ｎ＝１０, Ｐ＜０．０５）。结论 ＮＯ－cＧＭＰ通路可显著提高通道的开放概率,这种增强作用是通过延长通道开放时间及增加开放频率实现的,它的 病理或生理作用还有待于进一步研究。     

老年豚鼠耳蜗核复合体NOS的表达

目的 :检测一氧化氮合酶 (NOS)在老年豚鼠耳蜗核复合体 (CNC)中的表达 ,探讨NO在老年性聋中的作用。方法 :30月龄老年豚鼠 8只 ,听阈 10～ 2 0dBnHL(老年组 ) ,另取 3～ 9月龄健康豚鼠 8只 ,听阈 0～ 2 0dBnHL(正常组 )为对照。采用活体灌注、Nissl染色法、NADPH d组织化学染色方法 ,观察正常组和老年组CNC中NOS阳性神经元的表达。结果 :老年组豚鼠CNC的NOS阳性神经元数目 (2 9.0 7± 5 .71)和面积 (5 6 3.0 2± 4 33.82 )与正常组 ((6 0 .2 0± 13.4 8)和 (5 89.37± 30 6 .74 ) )相比 ,差异均有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :老年豚鼠CNC中NOS阳性神经元细胞数目和细胞面积均减少 ,提示老年豚鼠CNC中NO合成减少。NO在老年性聋的发生和发展中可能起一定的作用     

Changes of nitric oxide synthase and cyclic guanosine mono- phosphate in form deprivation myopia in guinea pigs

Background  The form deprivation (FD) reduces spatial contrasts and induces myopia.  Nitric oxide and cyclic guanosine monophosphate (cGMP) are involved in visual signal transmission. This study investigated changes in nitric oxide synthase (NOS) activity and cGMP concentration in ocular tissues in acute and chronic form deprivation myopia.
Methods  Guinea pigs had one eye covered by translucent glass for 7, 14 or 21 days. Untreated litter mates were used as controls. NOS activity and cGMP concentrations in the retinal, choroidal and scleral tissues of FD eyes and control eyes were analyzed by radioimmunoassay after various durations of FD. The expression of NOS subtypes was identified by immunohistochemistry.
Results  Myopia was successfully induced in FD eyes after 14 days. Compared with control groups, the retinal NOS activity and cGMP concentrations in the FD eyes significantly increased after 14 and 21 days while the retinal NOS activity in the FD eyes was transiently suppressed by 7 days of FD. The NOS activity and cGMP concentrations of choroid and sclera in the FD eyes were higher than in the control groups at 21 days. The three isoenzymes of nitric oxide synthase were detected in the ocular tissues of guinea pigs.
Conclusions  The NOS activity and cGMP concentrations were upregulated after chronic FD and the retinal NOS activity was transiently suppressed at acute FD. The function of elevated NOS activity may be mediated by cGMP.