聚合酶链反应检测细菌16SrRNA基因

根据细菌１６ＳｒＲＮＡ基因的高度保守性,设计合成所有细菌,革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌的共同引物,采用聚合酶链反应检测已知细菌１３株,三对引物分别扩增的阳性率为１００％,倍比稀释法能检出细菌浓度为４ＣＦＵ．ｍｌ＾－１,同时检测临床样本４０份,阳性率为６７．５％,同期细菌培养阳性率为４５％,二者比较差异有显著性。     

多重聚合酶链反应分析Dystrophin基因缺失突变

应用mPCR技术、Dystrophin基因的14对外显子扩增引物对26例DMD／BMD患者进行了基因缺失性分析。其中16例的Dystrophin基因出现缺失突变，占61．5％。缺失突变（13／16）主要发生在基因中央突变热点区（exon 43-51),特别是exon 48更是缺失突变的集中位点（10／16）。本文对Chamberliam 9对引物的扩增条件作了一定修改，并用扩增Chamberlian引物的反应条件和参数扩增5对Beggs引物，获得良好结果。     

应用多重聚合酶链反应检测结核杆菌

作者合成两对引物，建立结核杆菌ＤＮＡ多重ＰｃＲ法，用以检测分枝杆菌标准菌株，仅人型和牛型结核杆菌呈阳性，灵敏度≥７ｃｆｕ结核杆菌呈阳性。４０例肺结核患者痰，经多重ＰＣＲ法检测２７例呈阳性，而采用Ｂａｃｔｃｃ４６０ＴＢ系统快速培养法培养仅１９例阳性；多重ＰＣＲ法栓出率较一对引物ＰＣＲ法高１５％～１７．５％，具有较好的敏感性和林异性。     

多重聚合酶链反应检测口腔鳞癌多肿瘤抑制基因初探

为探讨多肿瘤抑制基因（ＭＴＳ１，ＣＤＫＮ２）与口腔鳞癌的关系，应用自行设计合成的ＭＴＳ１基因特异引物建立的多重聚合酶链反应（ｍ－ＰＣＲ）技术，检测ＭＴＳ１基因在口腔鳞癌中的表达水平。结果：１４例鳞癌中２例有ＭＴＳ１基因变异，提示二者相关。     

多重聚合酶链反应检测结核菌耐异烟肼相关基因

目的：建立耐异烟肼(isoniazid,INH)结核分枝杆菌(M.tuberclasis,MTB)多重聚合酶链反应(multiple PCR,multi-PCR)检测系统，在一次扩增中快速，特异地同时检出aphC启动子，inhA和kagG基因，用于快速初步诊断结核分枝杆菌对INH的耐药性．方法：根据结核分枝杆菌的aphC启动子，inhA和kagG序列，分别设计出3对特异性寡聚核苷酸引物，采用multi—PCR技术，同时检出对结核分枝杆菌耐INH起作用的3个基因．结果：应用multi—PCR反应体系，对引物的相关性实验结果表明引物之间不会因相互干扰而出现假阳性结果；multi—PCR扩增的预期结果为：单基因引物出现一条特异性扩增区带，多重基因引物出现2或3条特异性扩增区带，经实验达到预期的扩增结果；对H37Rv标准株、INH敏感株及INH耐药株分别采用常规PCR和multi—PCR进行同时扩增，结果两种扩增方法均能扩增出预期的目的片段，符合率达100％．结论：multi—PCR能有效地为多基因耐药的临床病原体的诊断提供快速、准确的诊断手段，更能提高检验效率。     

聚合酶链反应检测新生儿巨细胞病毒

聚合酶链反应检测新生儿巨细胞病毒肇庆市第一医院（５２６０２０）蔡定邦，郭亮，李誉成，张传顺，陈享，陈伟红巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染后引起巨细胞包涵体病（ＣＩＤ），致全身多个器官损害并出现临床症状，使受损器官组织内出现巨细胞包涵体改变，多见于小婴儿。人巨...     

应用聚合酶链反应直接检测HIV基因序列

作用计算机辅助分析和比较１６种ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２序列并设计了一对用于检测ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２的通用ＰＣＲ引物ＰＧ０３和ＰＧ０４。它们在ＡＲＶ－２病毒序列上分别位于４５７～４７８和７６６～７９８位核苷酸。两引物在ＡＲＶ－２基因上指导合成一个长３４２ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ｐＡＲＶ－２／７Ａ和含有ｇａｇ基因的亚克隆质粒ｐＪＧ４２３作模板，均可扩增出特异性靶基因序列，而用不含ｇａｇ基因的亚克隆质粒ｐ     

聚合酶链反应技术用于汉坦病毒的基因分型

应用反转录ＰＣＲ技术对国内外分离的１８株汉坦病毒基因进行了检测，结果１０株血清Ⅰ型病毒仅能用Ⅰ型引物扩增，８株血清Ⅱ型引物扩增，与既往空斑减少中和试验的分型结果完全一致。     

多重半巢式聚合酶链反应检测巨细胞病毒DNA多聚酶基因

目的：探讨多重半巢式聚合酶链反应（msnPCR)在研究巨细胞病毒（CMV）DNA多聚酶基因（UL-54）中的应用价值。方法：从8例心肺移植患者血标本中提取DNA,以CMV-UL54为模板,自行设计6条特异性引物,建立msnPCR扩增系统。扩增产物在DNA测序仪上自动测序。结果：msnPCR能扩增出427bp和1052bp两条目的片段,扩增产物测序表面存在导致氨基酸改变的碱基有义突变。结论：msnPCR扩增结合测序,可检测CMV-UL54的7个功能区目片段中的碱基突变,msnPCR比普通PCR更加省时和经济。     

聚合酶链反应检测老年人急性白血病IgH基因重排的意义

目的 为进一步了解老年人急性白血病的分子生物学特征。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测２８例老年人急性白血病免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排 结果 ６６．７％（４／６）老年人急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）和４０．９％（９／２２）急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）存在ＩｇＨ基因重排;ＩｇＨ基因重排阳性老年人ＡＮＬ治疗缓解率（２２．２％）显著低于ＩｇＨ基因重排阴性老年人ＡＮＬＬ（６６．７％）（Ｐ〈０．０     

免疫组织化学和聚合酶链反应检测乳腺癌易患基因研究

目的 研究免疫组织化学和聚合酶链反应检测乳腺癌易患基因.方法 方便选取该院2015年4月—2017年4月收治的40例乳腺癌患者的临床资料进行统计分析.结果 乳腺癌组患者的乳腺癌易患基因1表达显著低于良性乳腺疾病组、健康对照组(F=31.027,P<0.05),Her2(F=27.012)、CK5/6(F=150.452)、EGFR(F=188.347)表达均显著高于良性乳腺疾病组、健康对照组(P<0.05);聚合酶链反应检测乳腺癌组患者乳腺癌易患基因1、CK5/6、EGFR阳性表达率87.5％(35/40)、42.5％(17/40)、45.0％(18/40)均显著高于免疫组织化学检测57.5％(23/40)、17.5％(7/40)、22.5％(9/40)(x2=5.02,7.38,9.35,P<0.05),灵敏度、特异度、准确度均显著高于免疫组织化学检测(P<0.05).结论 聚合酶链反应检测乳腺癌易患基因的效果较免疫组织化学好.     

先进的基因检测技术（聚合酶链反应）

聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)是一种体外扩增特异性DNA的技术。此技术具有快速、灵敏、简便、特异的特点,可检测出0.1μg基因组DNA中仅含一个拷贝的靶序列,合成的片段长度可达2.3kb。此方法对DNA模板质量的要求比其它基因实验低得多,实验样品可来源于血、尿、痰、汗、泪液及乳汁,精液、脑脊液,亦可来源于干血样,石蜡包埋的组织等。基于PCR技术的巨大优越性,使其在很短     

聚合酶链反应检测细菌16S rRNA基因

根据细菌１６ＳｒＲＮＡ基因的高度保守性,设计合成所有细菌、革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌的共同引物,采用聚合酶链反应检测已知细菌１３株,三对引物分别扩增的阳性率为１００％,倍比稀释法能检出细菌的最低浓度为４ＣＦＵ·ｍｌ－１,同时检测临床样本４０份,阳性率为６７５％（２７／４０）,同期细菌培养阳性率为４５％（１８／４０）,二者比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结果提示聚合酶链反应检测细菌１６ＳｒＲＮＡ基因具有高度的特异性和敏感性。     

16 SrRNA基因聚合酶链反应检测细菌感染的研究

目的：探索快速可靠的检测细菌感染的新方法。方法：通过自行设计合成的细菌１６ＳｒＲＮＡ基因高度保守区引物,对２０ 种标准菌株、１２ 种２７ 株临床分离的细菌株、人基因组ＤＮＡ及巨细胞病毒进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。结果：对所测细菌株均获得３７１ ｂｐ 扩增产物,而与人基因组ＤＮＡ、巨细胞病毒无交叉阳性反应,ＰＣＲ最低能检测ｌｐｇ 大肠杆菌ＤＮＡ。结论：建立了用共同引物ＰＣＲ扩增以判断是否存在细菌感染的方法,该方法检测快速,敏感性和特异性高。     

聚合酶链反应检测老年人急性白血病IgH基因重排的意义

目的为进一步了解老年人急性白血病的分子生物学特征。方法应用聚合酶链反应（PCR）检测28例老年人急性白血病免疫球蛋白重链（IgH）则基因重排结果66.7％（4／6）老年人急性淋巴细胞白血病（ALL）和40．9％（9／22）急性非淋巴细胞白血病（ANLL）存在IgH基因重排：IgH基因重排阳性老年人ANLL治疗缓解率（22．2％）显著低于IgH基因重排阴性老年人ANLL（66.7％）（P＜0.05）。结论应用PCR技术检测老年人急性白血病基因重排可帮助了解老年人白血病的分子生物学特征和预后,此方面尚需进一步研究。     

聚合酶链反应阵列同时定量检测37种白血病融合基因

目的建立一种同时定量检测多种白血病染色体易位形成的融合基因的荧光实时定量聚合酶链反应（real-time PCR）方法,了解阵列式PCR的应用可行性。方法组合使用82条引物,设立66个PCR平行管,同时定量检测37种白血病常见融合基因形成的125种剪切体和4种白血病常见的原癌基因活化。实时定量PCR采用Eva Green荧光染料法,用ABL基因做内参,用比较Ct法进行相对定量。用此方案对31例白血病患者标本进行检测,其中6例慢性粒细胞白血病（CML）患者做治疗前后或治疗过程中不同时间的对比检测,28人次与多重巢式PCR方案的检测结果进行对照。结果我们建立的PCR阵列方案有较大的线性检测范围（10^2～10^8拷贝／μl）,有较高的检测灵敏度（232拷贝／μl）和精确性;在31例患者标本的检测中,共检测到14种融合基因类型和所有4种原癌基因活化;检测到一例同时有5种融合基因阳性和两种原癌基因活化的患者;和多重巢式PCR检测结果的对比显示本方案灵敏度略低于巢式PCR,但差异没有统计学意义（P=0．009）;6例CML患者标本的检测显示治疗后患者标本中BCR／ABL融合基因及WT1和EVI1原癌基因表达量均呈现不同程度的降低,与临床治疗情况符合;基因定量分析的结果表明本方案能够对常见白血病融合基因和癌基因活化情况进行定量分析,在白血病的诊断及疗效监测中有应用价值。结论PCR阵列法同时定量检测多种白血病融合基因适于白血病初诊患者融合基因的筛查及微小残留病（MRD）的检测,对于检测同时有多种融合基因存在的病例及治疗过程中融合基因的变异情况更为有用。