环氧化酶-2抑制剂塞来昔布联合顺铂对A549人肺腺癌细胞株增殖影响的体外实验研究

目的观察环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布（Celecoxib）与化疗药物顺铂（DDP）联合应用对A549人肺腙癌细胞增殖的影响。方法应用MTS法检测Celecoxib与DDP联用对人肺腺癌A549细胞增殖的影响。结果在一定浓度范围内，Celecoxib和DDP均可抑制A549人肺腺癌细胞的生长，其抑制作用呈量-效关系。Celecoxib（0．35mg／L）与DDP联用可增强对A549细胞生长的抑制作用，DDP浓度≥1mg／L时两者具有协同或相加作用；且在一定浓度范围内，Celecoxib与DDP联用对细胞的生长抑制作用呈时-效关系。结论Celecoxib与DDP联合可增强对A549人肺腺癌细胞的生长抑制效应。     

环氧化酶-2抑制剂联合顺铂治疗肺癌的实验研究

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼米舒利(NIM)与化疗药顺铂(DDP)联合应用治疗肺癌的效应及可能机制。方法 应用MTT试验及流式细胞术分别检测NIM与DDP联用对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响，裸鼠移植瘤实验检测NIM与DDP联用对A549细胞成瘤性的影响。结果 在一定浓度范围内NIM、DDP均可抑制A549细胞的生长，其抑制作用呈量一效关系。NIM(25umol／L)与DDP合用可增强对A549细胞生长的抑制作用，DDP浓度≥1mg／L时二者有协同或相加作用。NIM及DDP可有效诱导A549细胞凋亡，联用后凋亡率显著增加。裸鼠移植瘤体内实验显示NIM与DDP均可抑制移植瘤生长，联用后抑瘤率显著增高。结论 NIM与DDP联用对A549细胞、肺癌移植瘤有显著的协同抗肿瘤效应，该作用可能是通讨增强对A549细胞增殖的抑制以及诱导其凋亡来实现的。     

地塞米松预处理人肺腺癌 A549 细胞对顺铂抗肿瘤活性的影响

目的：探讨地塞米松（dexamethasone,DEX）预处理人肺腺癌A549细胞后,对化疗药物顺铂（cispla—tin,DDP）抗肿瘤活性的影响。方法：以不同浓度（500、1000nmol／L）DEX预先作用于人肺腺癌A549细胞12h后,再用不同浓度（1．25、2．5、5u/ml）DDP处理。流式细胞术测定细胞凋亡,细胞计数观察细胞生长密度、形态。结果：DEX对A549细胞增殖有抑制作用。DDP能够明显抑制A549细胞增殖,促进其凋亡。DEX预处理后DDP干预A549细胞的增殖抑制作用较单一用DDP增强,且随着DEX浓度的增加,其对化疗药物DDP凋亡抑制作用的影响增强。结论：DEX预处理对顺铂诱导的人肺腺癌A549细胞的凋亡具有明显的促进作用,能增强DDP的抗肿瘤活性。     

Amorphigenin联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞的协同抗肿瘤作用

背景与目的 Amorphigenin是从紫穗槐属植物的种子中分离提取的鱼藤酮类化合物,研究发现amorphigenin对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用。本研究拟探讨amorphigenin对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的抗肿瘤作用及其可能的分子机制。方法采用CCK-8法测定A549/DDP细胞的增殖;克隆形成实验测定A549/DDP细胞的克隆形成;流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot技术检测caspase-3、PARP和LRP蛋白的表达。结果Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞的增殖48 h[半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentra-tion, IC50）]为（2.19±0.92）μmol/L、抑制克隆形成及诱导细胞凋亡。此外,Amorphigenin与顺铂联合可协同地抑制A549/DDP细胞生长和促进凋亡;降低耐药蛋白LRP蛋白的表达。结论 Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞增殖和促进细胞凋亡;amorphigenin可能是通过抑制耐药蛋白LRP蛋白表达,进而与顺铂对A549/DDP细胞产生协同抑制作用。     

地塞米松联合顺铂对肺腺癌 A549 细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨地塞米松（dexamethasone,DEX）联合顺铂（cisplatin,DDP）在体外对肺腺癌2,549细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法：体外培养人肺腺癌A549细胞。MTF法检测DDP和DEX对A549细胞增殖的影响。流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡。Westernblot检测DEX和DDP对A549细胞内VDR表达水平的影响。结果：地塞米松≥500nmol／L浓度时对A549细胞有一定的增殖抑制作用（P〈0．05）;〈500nmol／L浓度时对A549细胞无明显抑制作用（P〉0．05）;DDP浓度在0．3125-10ug／ml范围内对A549细胞增殖有明显的抑制作用,并呈浓度及时间依赖性（P〈0．05）。流式细胞仪检测到DDP＋DEX组的G．期细胞比例下降,s期比例上升（P〈0．05）,且细胞凋亡数目增加（P〈0．05）。Westernblot观察到DDP＋DEX组VDR表达水平明显升高（P〈0．05）。结论：DEX可能通过上调A549细胞内VDR表达水平,与顺铂协同促进细胞凋亡、诱导细胞周期阻滞,进而提高顺铂化疗敏感性。     

多烯紫杉醇和姜黄素联用对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究姜黄素和多烯紫杉醇对肺腺癌A549细胞增殖及调亡的影响,并探讨两种药物的合用是否可增强抗癌作用及降低不良反应。方法体外培养肺腺癌细胞系A549细胞,采用 MTT 法计算细胞抑制率;Giemsa 染色法观察细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞的凋亡率。结果经MTT法检测显示,姜黄素能明显抑制A549细胞的生长,多烯紫杉醇50 μg/ml与姜黄素5、10、20 μmol/L联用对A549细胞的抑制作用明显大于两药单用时的抑制作用（P<0.01）;Giemsa染色显示多烯紫杉醇与姜黄素联用后诱导细胞凋亡的作用增强,可见典型的凋亡小体;流式细胞仪结果表明姜黄素能增加多烯紫杉醇的细胞凋亡率,其作用呈剂量依赖性。结论姜黄素与多烯紫杉醇可协同抑制人肺腺癌A549细胞的增殖;二者联合化疗有增效减毒作用。     

氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53基因对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨氧化铁磁性纳米颗粒介导野生型p53基因（wild type p53,wt-p53）对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP增殖抑制和凋亡诱导的作用。方法：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53转染肺腺癌细胞A549/DDP作为实验组,以纳米颗粒介导空载体pcDNA3转染作为阴性对照组,脂质体介导wt-p53转染作阳性对照组。MTT法和绘制生长曲线观察基因转染对A549/DDP细胞增殖抑制作用,荧光显微镜、流式细胞术观察其对A549/DDP细胞诱导凋亡作用,RT-PCR检测其对A549/DDP细胞Bax mRNA表达的影响。结果：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53对人肺腺癌细胞A549/DDP增殖有持续的抑制作用,而以脂质体介导wt-p53对增殖抑制作用持续时间短暂;纳米颗粒介导wt-p53对人肺腺癌细胞A549/DDP诱导凋亡作用明显强于以脂质体载体;同时介导wt-p53上调Bax mRNA表达水平的作用也明显强于以脂质体载体。结论：氧化铁磁性纳米颗粒介导wt-p53转染对人肺腺癌细胞A549/DDP有持续的增殖抑制和诱导凋亡的作用。     

咖啡酸联合顺铂对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究咖啡酸(caffeic acid)与化疗药物顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其可能的分子作用机制。方法:体外培养A549细胞,采用MTT法检测咖啡酸与DDP单药或联合用药对A549细胞增殖抑制率的影响;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学的变化,FCM检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及caspase-3表达水平的改变。结果:咖啡酸或DDP单药或联合用药均对A549细胞有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,且两药联合应用具有协同作用。蛋白质印迹法检测结果表明,咖啡酸与DDP联合用药可协同抑制Bcl-2蛋白的表达,增强Bax的表达,活化caspase-3蛋白的表达。结论:咖啡酸联合DDP作用于肺腺癌A549细胞可以抑制其增殖并诱导细胞凋亡,两者联合应用有一定的协同效应。     

环氧化酶-2 抑制剂联合依托泊苷对肺癌细胞增殖凋亡的影响

 目的 探讨环氧化酶-2（COX-2）抑制剂尼米舒利（NIM）与化疗药依托泊苷（VP-16）联用对肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 培养人肺癌细胞A549：①NIM（25μmol／L）与VP-16（2～32μg／mL）联合，MTT试验观察干预48h后细胞增殖变化及增殖抑制率；②分为对照组、NIM组（25μmol／L）、VP-16组（8μg／mL）和NIM＋VP．16组，观察12h、24h及48h后A549细胞生长情况，描记生长曲线；流式细胞术检测干预48h后细胞凋亡率。结果 ①VP-16能抑制肺癌A549细胞的增殖，且呈量一效关系（r=-0．908，P〈0．01），NIM与VP-16联用后，抑增殖作用增强，二者有相加或协同作用；②NIM及VP-16均可抑制A549细胞的生长，诱导凋亡，二者联用后作用增强。结论 NIM与VP-16联用可增强对肺癌细胞增殖的抑制和凋亡的诱导，二者具有协同抗肿瘤作用。     

高温联合顺铂及多西他赛对肺腺癌A549细胞体外作用的研究

目的：研究高温联合顺铂（DDP）及多西他赛（TXT）对肺腺癌细胞株A549的体外作用。方法：不同处理因素作用于A549细胞后,应用四氮唑盐比色法（MTT法）测定细胞增殖情况,根据Veleriote法判断高温联合化疗药的作用效果;通过两药相互作用指数判断药物联合作用效果;流式细胞仪检测不同处理后细胞凋亡情况;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态学变化。结果：高温和化疗药单独作用均对A549有生长抑制作用（P〈0．05）;化疗药有剂量依赖关系;高温有温度依赖关系;高温与药物联合对细胞生长抑制作用强于单独高温组或单独化疗组（P〈0．01）;DDP与高温联合为协同作用;TXT与高温联合为次加作用;DDP和rr）（T联合作用对细胞生长抑制为协同作用;42℃、DDP2μg/ml和TXT1IXg／ml三者联合凋亡率明显高于其他处理组（P〈0．01）;普通光镜和荧光显微镜下42％、DDP2μg/ml和TXT1μg/ml三者联合凋亡细胞数较对照组和42℃组明显增多,细胞形态学变化明显。结论：DDP、TXT、高温三者体外联合作用对A549有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

塞来昔布对宫颈癌细胞的化疗增敏作用

目的探讨特异性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对顺铂诱导宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）,测定塞来昔布对顺铂诱导Hela细胞增殖活性的作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Hela细胞中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果 5、10μmol/L的塞来昔布分别与顺铂联合应用,可增强顺铂对Hela细胞增殖抑制作用。塞来昔布（5μmol/L）能促进顺铂诱导Hela细胞的凋亡。塞来昔布作用于Hela细胞后,Bcl-2蛋白表达水平下调、Bax蛋白表达水平上调呈浓度依赖关系。结论塞来昔布能促进顺铂对Hela细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,起化疗增敏作用,可能与其下调Bcl-2蛋白表达水平、上调Bax蛋白表达水平有关。     

塞来昔布抑制人肺腺癌细胞的增殖和表皮生长因子受体的表达*

目的:探讨不同浓度的环氧化酶-2 抑制剂塞来昔布（Celecoxib ）在不同时间点对肺腺癌A549 细胞株增殖和表皮生长因子受体（EGFR）表达的影响。方法:人肺腺癌A549 细胞株培养于含10% 胎牛血清RPMI1640培养基中。实验细胞分组如下:A组,正常对照;B 组,Celecoxib（12.5 μ mol/L）;C 组Celecoxib（25μ mol/L）;D 组Celecoxib（50μ mol/L）,E 组Celecoxib（75μ mol/L）,均以RPMI1640培养液配置。使用不同浓度塞来昔布（12.5、25、50和75μ mol/L）处理肺癌A549 细胞24、48、72h 后,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）测定细胞增殖抑制率;AnnexinⅤ/PI 染色法与Hoechst33258 染色法检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测药物作用周期;Real-time RT-PCR 法检测EGFR mRNA 的表达情况。结果:塞来昔布明显抑制了A549 细胞的生长,呈时间、剂量依赖性。塞来昔布组细胞凋亡率明显高于正常对照组（P<0.01）,且呈剂量依赖性,S 期细胞比例明显减少（P<0.01）,G0/G1 期细胞比例明显增加（P<0.01）,提示塞来昔布能将大多数A549 细胞阻滞于G0/G1 期。塞来昔布组细胞EGFR mRNA 表达明显减弱（P<0.05）,且呈浓度依赖性,各浓度间差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论:塞来昔布显著抑制A549 细胞生长,可能机制是通过促进凋亡、增强G0/G1 期阻滞、下调细胞中EGFR mRNA 的表达,从而为应用塞来昔布治疗肺腺癌,以及塞来昔布和表皮生长因子受体抑制剂联用提供了一定的实验依据。      

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞放疗的增敏作用

目的:探讨塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞的放射增敏作用及其可能机制。方法:四唑盐比色法（MTT）测定塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞株的抑制率。采用克隆形成实验检测塞来昔布处理的CNE-2细胞经不同剂量X 线(0、2、4、6、8 和10Gy)照射后的存活分数(SF),并通过单击多靶模型拟合细胞存活曲线,计算增敏比(SER)。流式细胞仪（FCM）分析细胞周期分布及凋亡率。结果:MTT实验显示塞来昔布在（10～80）μg/ml范围内对CNE-2细胞有抑制作用,抑制率与浓度、时间呈依赖关系;在2～10Gy照射范围内,10、20、40、80μg/ml塞来昔布处理后的SF均低于0μg/ml(P<0.05),且SF随塞来昔布浓度的增加而降低;相对于0μg/ml,10、20、40、80μg/ml塞来昔布处理后的SER分别为1.06、1.79、2.29 和3.34;流式细胞仪测得塞来昔布可呈浓度依赖的方式诱导CNE-2细胞凋亡(P<0.05),S期细胞比例降低,G2/M期细胞比例升高。结论:塞来昔布能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖,诱导CNE-2细胞细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,具有放疗增敏作用。     

川芎嗪对人肺腺癌 A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用与机制

目的：探讨川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对人肺腺癌 A549细胞增殖及侵袭的影响。方法：川芎嗪治疗组分别用0.1μg/ ml、1μg/ ml、10μg/ ml、100μg/ ml、250μg/ ml 浓度的川芎嗪干预 A549细胞,同时设无药的阴性对照组及加顺铂的阳性对照组。24、48、72、96小时后,MTT 法检测川芎嗪对 A549细胞株增殖的抑制作用,划痕实验和 Transwell 法观测川芎嗪对 A549细胞株迁移侵袭能力的影响,采用细胞流式术检测川芎嗪对 A549细胞周期和凋亡的干预作用。结果：川芎嗪显著抑制 A549细胞的增殖,抑制 A549的迁移和侵袭,流式细胞术显示川芎嗪诱导 A549细胞发生 G1期阻滞和早期凋亡（P <0.05）。结论：川芎嗪对非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用可能是通过诱导 G1期细胞阻滞和早期凋亡引起的。     

奥曲肽联合顺铂和5-氟尿嘧啶对人肺腺癌细胞株A549抑制的增效作用

 目的  探讨生长抑素类似物奥曲肽能否增强人肺腺癌细胞株A549对化疗药物的敏感性.方法 将不同浓度奥曲肽、顺铂和5-氟尿嘧啶（5-Fu）作用于人肺腺癌细胞株A549,运用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测奥曲肽单独以及与顺铂和5-Fu联合作用后48 h对A549细胞株生长的影响,每个药物浓度6个复孔,实验重复3次,结果取平均值,并用Isobologram分析评价药物联合应用的作用性质。结果 MTT法结果显示,奥曲肽对A549细胞生长起抑制作用,在浓度1.3～166.7 mg/L范围内,抑制率呈剂量依赖性;其与顺铂和5-Fu共同作用后,对A549细胞的抑制作用明显增高。3种药物联合作用比奥曲肽单用或顺铂、5-Fu 两药联合作用差异均具有统计学意义（P<0.05）,其半数抑制浓度（IC₅₀）的效应点落在Isobologram图中的协同区域。结论 在体外实验中,奥曲肽能够抑制A549细胞增殖,且联合顺铂和5-Fu后对A549细胞生长抑制作用增强,为协同作用。奥曲肽能提高A549细胞对顺铂和5-Fu的敏感性。     

塞来昔布对人肝癌细胞增殖抑制及放疗增敏作用

目的探讨塞来昔布对肝癌细胞huh-7增殖抑制及放疗增敏作用。方法以人肝癌细胞株huh-7为研究对象,以塞来昔布和高能射线作为干预手段,采用四唑氮蓝还原法(MTT),检测不同浓度塞来昔布和作用不同时间对huh-7细胞的增殖抑制作用,采用流式细胞技术,检测塞来昔布联合放疗对huh-7细胞凋亡和周期的影响。结果 MTT显示塞来昔布对人肝癌细胞huh-7生长有显著抑制作用,且呈时间和剂量依赖性;塞来昔布对肝癌放疗具有明显增敏作用。与对照组比较,药物组G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,G2/M变化无明显意义;照射组G2/M期细胞比例升高,联合组G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少。结论塞来昔布能提高人肝癌细胞株huh-7放疗敏感性作用,其作用可能是通过诱导细胞凋亡、改变细胞周期时相分布来实现的。     

Survivin-siRNA抑制肺癌A549细胞的增殖并增强其对顺铂的敏感性

目的：构建靶向存活素（survivin）的干扰RNA（siRNA）质粒,观察其对A549细胞增殖、凋亡以及顺铂敏感性的影响。方法：应用pSilencerU6质粒构建survivinsiRNA干扰质粒,RTPCR和Western blotting检测survivin mRNA和蛋白的表达,DAPI染色法检测细胞的凋亡,MTT法检测细胞的增殖。结果：成功构建了survivinsiRNA干扰质粒。SurvivinsiRNA质粒转染可明显下调A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达、抑制A549细胞的增殖、促进细胞的凋亡、增强A549细胞对顺铂的敏感性。结论：SurvivinsiRNA沉默survivin在肺癌细胞中的表达能够抑制肿瘤细胞的增殖、促进细胞凋亡,并能增强肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性,survivin 可作为肺癌治疗的潜在靶点。     

Celecoxib通过抑制Survivin表达促进肺癌A549细胞凋亡

[目的]研究Celecoxib对肺癌A549细胞生长和凋亡的影响并探讨其作用机制.[方法]用Western blot法检测Celecoxib抑制肺癌A549细胞后生存素（Survivin）表达的变化;用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清液中前列腺素2（prostaglandin-2,PGE2）含量的变化;用四唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖;流式细胞仪测定细胞周期.[结果]随着Celecoxib剂量的增加和时间的延长,PGE2的含量减少,survivin表达也相应减少,细胞增殖减少而凋亡增加.[结论]Celecoxib可以通过PGE2的途径下调A549细胞survivin的表达并促进细胞凋亡.