树突状细胞扩增抗原特异性CD4+ CD25+调节性T细胞研究进展

CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)是同时具有免疫低反应性和免疫抑制性功能两大特征的T细胞.研究证实,CD4+ CD25+ Tr在抑制器官特异性自身免疫性疾病及GVHD是抗原特异性的,因此,应用器官特异性而不是多克隆性的Tr将大大促进以Tr为基础的免疫治疗.而具有调节活性的CD4+ CD25+ Tr仅占人类外周血CIM+ T细胞的1%～2%,因此,研究体外大量扩增的方法 对于以Tr基础的治疗至关重要.研究表明,树突状细胞(DC)作为机体强有力的专职抗原递呈细胞可以扩增具有抗原特异性的CD4+ CD25+ Tr且能增加后者的抑制活性,这为治疗自身免疫性疾病及GVHD提供了新的治疗前景.     

CD4+ CD25+调节性T细胞在流产中的研究进展

CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)是一个具有独特免疫调节功能的T细胞亚群.Tr免疫学特性主要在于抑制自身反应性T细胞的活化,并参与外周免疫耐受,对维持机体内环境的稳定起重要作用.Tr在流产中发挥重要的免疫调节作用.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞对巨噬细胞泡沫化的影响

目的 研究CD4~+ CD25~+调节性T细胞(Tr)对巨噬细胞泡沫化过程的影响及机制.方法 磁性细胞分离器(MACS)分离CD4~+ CD25~+ T细胞及CD4~+ CD25~- T细胞,在氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)作用下,将巨噬细胞分别与CD4~+ CD25~+ T细胞、CD4~+ CD25~- T细胞共培养48 h.采用油红O染色和细胞内脂质测定的方法观察CD4~+ CD25~+ T细胞对巨噬细胞泡沫化的影响;采用RT-PCR、real-time PCR、Western blot的方法测定泡沫细胞清道夫受体(CD36和SRA)的表达.结果 与对照组比较,CD4~+ CD25~+ T细胞可显著抑制巨噬细胞脂质聚集及清道夫受体的表达.结论 CD4~+CD25~+ T细胞可显著抑制巨噬细胞泡沫化,其作用机制可能为下调清道夫受体的表达.     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4+和CD8+T细胞PD-1的表达和意义

目的 探讨程序性死亡分子1 (PD-1)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4+和CD8+T细胞上的表达及临床意义.方法 应用流式细胞仪检测51例SLE患者和38例健康对照者外周血T细胞亚群表面PD-1表达水平,比较SLE稳定组、活动组和健康对照组以及狼疮肾炎组和无狼疮肾炎组之间CD4+和CD8+T细胞表面PD-1表达的百分比,并分析其与临床表现及实验室检查数据的相关性.结果 SLE活动组CD4+T细胞PD-1表达水平高于健康对照组和不活动组,差异均有统计学意义(P＜0.05).SLE活动组、稳定组CD8+T细胞PD-1表达水平均高于健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).狼疮肾炎患者CD4+PD-1+和CD8+PD-1+T细胞分别高于无狼疮肾炎患者(P＜0.01).SLE患者中抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、抗核小体抗体阳性组外周血CD4+和CD8+T细胞PD-1表达水平均高于对应阴性组.SLE患者CD4+和CD8+T细胞PD-1表达百分率与SLE疾病活动度指数(SLEDAI)、尿蛋白定量呈正相关,与补体C3呈负相关.结论 SLE患者外周血CD4+和CD8+T细胞PD-1表达异常,与SLEDA1和自身抗体产生有明确的相关性.     

CD4+CD25+调节性T细胞在肿瘤免疫中的作用

CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)是体内自然发生的调节性T细胞的重要亚群,具有无反应性和免疫抑制两大特性,主要通过与靶细胞的直接接触而起作用,其在体内不仅参与自身免疫性疾病、移植排斥反应等,还在肿瘤的发生、发展及免疫治疗中发挥重要作用.近几年来,Tr在肿瘤免疫中的作用倍受关注.     

调节性T细胞与恶性肿瘤免疫治疗

CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tr)是一类具有维持机体自身耐受的T细胞亚群,其分布广泛,且有不同的表型.它们可由胸腺自然产生,也可在外周血中诱导产生.这群细胞具有免疫无能和免疫抑制特性,其抑制作用机制可能是通过细胞间直接接触和/或分泌抑制性细胞因子发挥效应.去除CD4+CD25+Tr或抑制其功能可增强机体抗肿瘤作用,为肿瘤治疗提供了一种可行的免疫治疗方法.     

CD4+CD25+调节性T细胞在自身免疫性疾病中的研究进展

调节性T细胞(regulation T cells,简称Treg)是不同于Th1和Th2的具有调节功能的T细胞群体,在多种免疫性疾病中起重要调节作用.根据其表面标记、分泌的细胞因子及其作用机制不同,Treg可分为CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 Treg)、Tr1和Tr3等多种亚型.     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4+CD25high Tr和 CD4+CD25low T细胞PD-1表达的分析和意义

目的 探讨PD-1(programmed death-1)在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血CD4+ CD25high调节性T细胞(regulatory T cell,Tr)和CD4+ CD25lowT细胞上的表达及临床意义.方法 应用流式细胞仪检测51例SLE患者和38例健康对照者外周血CD4+ CD25high Tr和CD4+ CD25lowT细胞表面PD-1表达水平,同时收集SLE患者临床表现、实验室检查数据,比较SLE稳定组、活动组和健康对照组以及狼疮肾炎组和无狼疮肾炎组之间CD4+ CD25 high Tr和CD4+CD25lowT细胞表PD-1表达的百分比,并分析其与临床表现及实验室检查数据的相关性.结果 (1)SLE活动组和稳定组外周血CD4+ CD25 high Tr和CD4+ CD25lowT细胞的百分率均低于对照组.(2)SLE活动组和稳定组外周血CD4+ CD25 highTr表达PD-1的百分率均高于对照组.SLE稳定组和对照组外周血CD4+ CD25lowT细胞表达PD-1的百分率均高于活动组.(3)狼疮肾炎患者外周血CD4+CD25highTr表达PD-1的百分率高于无狼疮肾炎患者.而狼疮肾炎患者CD4+ CD25lowT细胞表达PD-1的百分率低于无狼疮肾炎患者.(4) CD4+CD25high PD-1+T细胞百分率与SLEDAI评分呈正相关;CD4+ CD25high Tr、CD4+CD25lowPD-1+T细胞百分率与SLEDAI评分呈负相关.结论 SLE患者外周血中CD4+ CD25high Tr、CD4+ CD25lowT细胞以及它们表面PD-1表达异常,并且与疾病活动性相关,PD-1/PD-L1信号通路可能对CD4+CD25highTr、CD4+CD25lowT细胞的数量和功能有影响.     

CD4+ CD25+调节性T细胞在肾脏疾病中的作用

CD4+ CD25+ 调节性T细胞(Tr)是一个具有独立功能的T细胞亚群,是机体维持自身免疫耐受的重要组成部分,在免疫病理、移植物耐受、阻止自身免疫反应和维持机体免疫平衡方面都有一定作用,其T细胞亚群在多种免疫性疾病中发挥重要的调节作用,但国内外有关该群细胞在肾脏疾病中作用的报道较少.     

HIV感染者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+/CD127low/-调节性T细胞表达水平对疾病进展的影响

目的:探讨HIV感染者外周血中CD4+ CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)、CD4+ CD25+ CD127low/-Treg的水平及其与其他免疫指标的关系.方法:采集68例未经抗HIV治疗的HIV/AIDS患者(长期不进展组即LTNP组29例、典型进展的HIV感染组27例、AIDS组12例)及20例健康成人的外周抗凝全血,经免疫荧光染色,应用流式细胞仪分析CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞及CD4+CD25+Foxp3+/CD127low/-Treg的含量,并进行统计学分析.结果:除CD8+T细胞外,HIV/AIDS患者外周血中CD4+T细胞、NK细胞、CD4 +/CD8+结果均明显低于健康对照组(P＜0.05);随着疾病的进展,LTNP组、HIV组、AIDS组CD4+T细胞百分比、绝对值计数,CD8+T细胞绝对计数,NK细胞绝对计数,CD4 +/CD8+比值逐渐下降,而CD8+T细胞百分比逐渐上升.对CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg与CD4+ CD25+CD127low/-Treg百分含量、绝对计数进行多重比较发现,各组间CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg与CD4-CD25+ CD127low/-Treg所占CD4+T细胞百分含量的差异均有统计学意义(P＜0.05),并且随着疾病的发展,CD4+ CD25+ Foxp3+/CD127low/ Treg细胞百分含量逐渐上升,LTNP组与健康对照组之间、HIV组和AIDS组之间CD4+ CD25+Foxp3+/CD127low/ Treg绝对计数差异无统计学意义(P＞0.05),其余各组间的差异均有统计学意义(P＜0.05),并且随着疾病的发展,CD4+ CD25+ Foxp3-/CD127low/-Treg绝对计数逐渐下降.结论:CD4+ CD25+ Foxp3 +/CD127low/-Treg在HIV持续感染的免疫发病机制中有一定作用.     

天然调节T细胞与结核病免疫病理关联

目的 检测调节性T细胞(Tr)在结核病病人是否增高,确证Tr与结核免疫病理的关联性,为Tr功能研究提供疾病模型.方法 流式细胞术(FACS)分选CD3+CD4+T及CD3+CD8+T等主要淋巴细胞亚群,通过RT-PCR测定Foxp3基因在正常和结核病病人T细胞亚群中的表达,FACS多色分析Foxp3 T细胞在CD4+CD25+细胞群体中的分布,累积病例分析Tr细胞在外周血扩增情况,免疫组化方法分析Tr在结核病理的浸润,结合临床资料分析Tr数量的改变与结核病的关联性.结果 Foxp3基因在正常和结核病病人CD3+ CD4+T细胞中特异性扩增,FACS分析表明foxp3主要表达于CD4+ CD25high亚群中,占CD4+ CD25highT细胞的80%以上,以CD4+CD2high Foxp3+三联标志检测40例正常与51例活动性结核病病人外周血Tr占CD4+T细胞比例分别为(0.23±0.20)%和(1.01±1.00)%,结核病病人较正常人高4.4倍,Tr在结核病明显扩增(P<0.01),结核病理组织中有高频率Foxp3+细胞浸润.Tr扩增与结核病有效治疗和预后的关联性有深入探讨价值.结论 Tr细胞在结核病病人增高,并与结核免疫病理损伤相关,结核病可作为Tr细胞功能研究的疾病模型.     

急性期川崎病Foxp3基因甲基化改变及意义初探

目的 探讨急性期川崎病(KD)Foxp3基因甲基化状态及其在KD免疫发病机制中的作用.方法 急性期KD患儿30例,正常同年龄对照组18例,KD患儿分别于静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前后直接取血备检.甲基化特异性定量PCR(MSQP)检测CD4+T细胞Foxp3基因启动子、调节性T细胞(Tr)特异性甲基化区(TSDR)CpG岛甲基化状态;流式细胞术检测外周血CD4+CD25+Foxp3+Tr的比例;荧光定量PCR检测CD4+T细胞Foxp3、CTLA4、GITR、LAG3、CCR8、UBD、LGALS3等基因mRNA表达.结果 (1)急性期KD患儿CD4+T细胞Foxp3基因启动子CpG岛非甲基化水平明显低于同年龄对照组(P＜0.01),经IVIG治疗后明显升高(P＜0.01);TSDR区CpG岛非甲基化水平各组间差异无统计学意义(P＞0.05);(2)急性期KD患儿CD4+CD25+Foxp3+Tr细胞比例及CD4+T细胞Foxp3 mRNA表达水平明显低于正常对照组(P＜0.01),且与Foxp3基因启动子CpG岛非甲基化水平呈正相关(CD4+CD25+Foxp3+Tr:r=0.76,P＜0.01;Foxp3:r=0.89,P＜0.01),IVIG治疗后显著上升(P＜0.01);(3)急性期KD患儿CD4+CD25+Foxp3+Tr细胞相关因子CTLA4、GITR、LAG3和CCR8等基因mRNA水平显著降低(P＜0.01),IVIG治疗后均有不同程度的恢复(P＜0.01);Foxp3依赖性分子UBD和LGALS3表达水平亦低于正常对照组(P＜0.01),IVIG治疗后基本恢复至正常水平(P＜0.01).结论 急性期KD患儿Foxp3基因启动子非甲基化水平低下可能与KD免疫调节功能紊乱有关.     

CD4+CD25+调节性T细胞对氧化型低密度脂蛋白活化的巨噬细胞功能的影响

目的 研究CD4+CD25+调节性T细胞对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)激活的巨噬细胞功能的影响及其机制.方法 磁性细胞分离器(MACS)分离CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25-T细胞,在oxLDL作用下,将巨噬细胞分别与CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞共培养48 h.采用流式细胞术检测巨噬细胞HLA-DR、CD86的表达;ELISA检测上清液MCP-1、MMP-9、TNF-α、TGF-β和IL-10细胞因子的表达;采用Griess反应测定NO生成量,RT-PCR测定iNOS表达.结果 与对照组比较,CD4+CD25+T细胞可显著抑制oxLDL激活的巨噬细胞HLA-DR及CD86的表达、减少NO生成、抑制iNOS mRNA表达和促炎细胞因子生成.结论 调节性T细胞可促使oxLDL激活的巨噬细胞由具有促炎表型的M1型向具有抗炎表型的M2型转化.     

CD4+CD25+调节性T细胞与系统性红斑狼疮病情活动性关系的研究

目的：检测系统性红斑狼疮患者外周血CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD8^＋调节性T细胞亚群，探讨其与疾病活动性、肾脏损伤、血清抗ds-DNA抗体及免疫球蛋白和补体C3含量的关系。方法：采用流式细胞术检测北京协和医院住院和门诊SLE患者（n=37）外周血CD4^＋CD25^＋T、CD4^＋CD8^＋T细胞群比例，以15例RA和15例SS组成自身免疫性疾病对照，30例健康体检者作为正常对照，观察调节性T细胞亚群与SLE患者疾病活动性指标SLEDAI、IgG、C3及血清抗ds-DNA抗体的关系。结果：①疾病活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞群比例显著低于正常对照组（P〈0.01），疾病稳定期和风湿性疾病对照组与正常对照组结果差异无统计学意义。疾病活动期和稳定期SLE患者CD4＋CD8＋T细胞群比例都略高于正常对照组，但未发现结果差异有统计学意义（P〉0.05）。②疾病活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞比例及CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值显著低于稳定期患者（P〈0.01）。SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值与SLEDAI、补体C3呈低度相关（r分别为-0.491、0.368，P〈0.05），CD4^＋CD25^＋T细胞数量与SLEDAI呈负相关（r=-0.578，P〈0.05）。③SLE并发肾病组外周血CD4^＋CD25^＋T细胞群比例及CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值显著低于非肾病组（P〈0.01；P〈0.05）。同一SLE患者治疗前后CD3^＋CD4^-CD8^-细胞和NK细胞降低，CD4^＋CD25^＋细胞、CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值及CD8^＋T细胞增加，但未发现这些结果差异有统计学意义。本次研究未发现NK细胞、CD4^＋CD8＋T细胞、CD4^＋CD25^＋T细胞群比例在ds-DNA＋组与ds-DNA-组之间结果差异有统计学意义。结论：SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞群比例与SLEDAI成负相关，与肾脏的损害也有密切关系，但与血清抗ds-DNA抗体产生的关系不明显。活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞减少，稳定期CD4^＋CD25^＋T细胞比例回升，因此推测CD4^＋CD25^＋T细胞的变化可能是导致疾病发生和病情发展及相关器官（如肾脏）损伤的关键环节之一。     

Regulatory T Cells and Their Association with Serum Markers and Symptoms in Systemic Lupus Erythematosus and Rheumatoid Arthritis

Purpose: Impairment in number and functions of regulatory T cells (Treg) has been found to be associated with many autoimmune diseases including systemic lupus erythematosus (SLE) and rheumatoid arthritis (RA). This study was conducted to identify and compare Treg by flow cytometry using two different staining approaches.Methods: Treg were identified by using CD4+CD25+high and CD4+CD25+CD127dim staining approaches in SLE and RA patients and healthy controls. Association of both identified Treg levels with various serum markers and clinical presentation was also examined.Results: Blood CD4+CD25+CD127dim cells levels were 11.4+3.57 %, 9.76+2.37 % and 6.95+1.16 %; while CD4+CD25+high cells were 1.46+1.09 %, 0.95+0.59 % and 1.87+1.14 % in SLE patients, RA patients and healthy controls respectively. Number of CD4+CD25+CD127dim cells was higher than CD4+CD25+high cells in blood samples of all three study groups. Levels of CD4+CD25+CD127dim cells were significantly higher in SLE and RA patients, compared to healthy controls, but this difference was not observed for CD4+CD25+high Treg. CD4+CD25+high levels showed significant correlation with serum C4, IFN-γ and IL-10 levels in healthy subjects and with C4 levels and fever in SLE patients. CD4+CD25+CD127dim levels showed significant association with alopecia and oral ulcers in SLE patients only, but no correlation with measured serum markers.Conclusion: Results suggest that both staining approaches detect Treg differently and also that Treg play different role in pathogenesis of SLE and RA.     

Regulatory T cells in patients with systemic lupus erythematosus

Regulatory T cells have an important role in the control of self-reactivity, and in the pathogenesis of autoimmune inflammatory conditions. The aim of this work was to perform a quantitative and functional analysis of regulatory T cells in patients with systemic lupus erythematosus (SLE). We studied twenty-three patients with SLE (19 active, 4 inactive), and twenty-seven healthy subjects as well as fifteen patients with rheumatoid arthritis (RA). The following cell subsets were analyzed in peripheral blood mononuclear cells by flow cytometry: CD4+CD25+, CD4+CD25(bright), CD4+Foxp3+ (Treg cells), CD8+CD28- (Ts cells), CD4+IL-10+ (Tr1 cells), and CD4+TGF-beta+ (Th3 cells). In addition, the in vitro suppressive activity of CD4+CD25+ lymphocytes was tested. We found no significant differences in the levels of all regulatory cell subsets studied in SLE patients compared to controls and RA patients. However, a defective regulatory function of CD4+CD25+T cells was observed in a significant fraction (31%) of patients with SLE. Our data indicate that although approximately one third of patients with SLE show an abnormal immunosuppressive function of Treg lymphocytes, their levels of the different regulatory T cell subsets in peripheral blood are not significantly different from those found in controls.