P,P''''-DDE对睾丸支持细胞雄激素结合蛋白表达的影响

[目的]研究雄激素结合蛋白在P,P'-DDE致雄性大鼠生殖内分泌干扰过程中的作用机制。[方法]对大鼠睾丸支持细胞离体原代培养4-5 d;设溶剂(DMSO)及阴性对照,以终浓度为30、50、80、100 μmol／L的P,P'-DDE作用于支持细胞24h,计数200个细胞,计算支持细胞存活率;分别以浓度为10、30、50 μmol/LP,P’-DDE作用于支持细胞24h, 运用一步法RT-PCR检测支持细胞内雄激素结合蛋白基因mRNA水平。[结果]P,P'-DDE在50μmol／L及以下浓度作用 24 h后,支持细胞存活率>90％,而80μmol/L组仅45％;染毒24 h后,对照组及10、30、50 μmol/L的P,P’-DDE组支持细胞内雄激素结合蛋白mRNA灰度比值分别为0．3140±0．1020、0．3920±0．0949、0．5837±0．1221、0．6490±0．1718,随 p,p'-DDE所给浓度的增高而逐渐升高,且30、50 μmol/L组与对照组差异存在显著性(P<0．05),呈剂量依赖关系。[结论] p,p'-DDE作用于睾丸支持细胞后,雄激素结合蛋白基因转录水平可明显升高,从而表达增强,促进雄激素结合蛋白的生成,代偿性地维持生精过程。     

p,p'-DDE对离体培养的大鼠睾丸支持细胞内钙离子的影响

目的 研究p,p'-DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell)细胞内钙离子的影响.方法从大鼠睾丸组织中分离支持细胞并进行离体原代培养,设空白对照组、溶剂对照组和低、中、高剂量p,p'-DDE染毒组(10、30、50 μmol/L),然后以Fura-2/AM为钙探针,用细胞内双波长钙荧光系统通过测定荧光值计算细胞内钙离子浓度的变化.结果 高剂量组支持细胞中Ca2+浓度高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 p,p'-DDE可干扰支持细胞内钙离子稳态,造成钙的超负载.钙离子稳态失衡可能诱导支持细胞凋亡,最终可能导致生殖功能障碍.     

p，p＇-DDE、β-BHC对大鼠支持细胞FasL mRNA表达及NF-κB活性的影响

[目的]研究有机氯农药DDT和六六六的代谢产物（p，p＇-DDE）和β-BHC及联合染毒对离体培养大鼠支持细胞（sertoli cell）FasL mRNA表达及NF—κB活性的影响。[方法]分离大鼠睾丸支持细胞进行原代培养2d，以DMSO为溶剂对照，分别以终浓度为10、30、50μmol／L的p，p＇-DDE、β-BHC及联合染毒支持细胞24h，应用RT-PCR法研究支持细胞FasL mRNA的表达；用激光共聚焦显微镜检测NF—κB的转位激活状况。[结果]10、30、50μmol／L的p，p＇-DDE、β-BHC及其联合染毒支持细胞后，FasL mRNA表达升高，50μmol／L剂量组与对照组差异有统计学意义（P〈0．05），各组内低、中剂量组与高剂量组差异有统计学意义（P〈0．05）；NF-κB活性明显增强。[结论]支持细胞经p，p＇-DDE、β-BHC及其联合染毒后，FasL mRNA表达明显升高，NF—κB的活性随染毒剂量的增加而增强，且联合作用比单独作用更加明显。     

香烟烟雾暴露对大鼠睾丸转铁蛋白mRNA及蛋白表达水平的影响

目的探讨香烟烟雾暴露对大鼠睾丸结构及睾丸组织转铁蛋白(Tf)mRNA及其蛋白表达水平的影响。方法清洁级成年雄性SD大鼠160只,随机分为对照组及低(10根香烟)、中(20根香烟)、高(30根香烟)剂量染毒组,各染毒组大鼠分别染毒2、4、6、8、12周,共16组,每组10只。染毒组大鼠采用呼吸道静式染毒,1次/d,30 min/次。观察大鼠睾丸组织结构,采用RT-PCR及Western blot法检测睾丸组织Tf mRNA及其蛋白表达水平。结果染毒组大鼠睾丸病理切片可见生精上皮层次减少,生精细胞排列疏松,支持细胞空泡化。染毒4、8、12周时高剂量组大鼠睾丸组织Tf mRNA表达水平低于对照组和低剂量组,染毒8周时高剂量组大鼠睾丸组织Tf蛋白表达水平低于对照组,染毒12周时中、高剂量组大鼠睾丸组织Tf蛋白表达水平低于低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论香烟烟雾暴露可导致雄性大鼠睾丸组织损伤,并抑制Tf基因及蛋白表达。     

p,p’-DDE对大鼠睾丸支持细胞抑制素B表达的影响

目的研究p,p’-DDE对离体培养的大鼠睾丸支持细胞细胞内抑制素B的影响。方法从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养,在细胞毒性试验的基础上确定受试物的剂量,以RT-PCR方法定量抑制素B在不同剂量受试物作用下的变化情况。结果p,p’-DDE中、高浓度组与溶剂对照组和低浓度组比较差异均有显著性(P<0.05)。抑制素B的灰度值随着p,p’-DDE浓度的增高逐渐降低,呈剂量依赖关系。结论p,p’-DDE对大鼠睾丸支持细胞分泌抑制素B表达可能存在着抑制作用。     

双酚A对大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的 研究双酚A (bisphenol A,BPA)对离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞P38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)及相关凋亡基因表达的影响.方法 将睾丸支持细胞分别暴露于0(溶剂对照)、30、50、70 μmol/L的BPA.采用MTT法检测离体培养细胞活力,采用RT-PCR的方法检测p38 MAPK、caspase-3、FasL、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α) mRNA的相对表达情况,采用western-blotting的方法检测细胞中P38 MAPK、磷酸化P38 MAPK和caspase-3酶原蛋白的表达情况.结果 与溶剂对照组相比,30 μmol/L BPA组支持细胞p38 MAPK mRNA的相对表达量升高,而50 μmol/L BPA组p38 MAPK的表达明显降低(P＜0.05);各浓度BPA染毒组caspase-3mRNA的相对表达量均较高(P＜0.05);仅50 μmol/L BPA组TNF-α mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);50、70 μmol/LBPA组FasL mRNA的相对表达量增加(P＜0.05);各剂量BPA染毒组总P38MAPK蛋白的相对表达量无显著变化;50和70 μmol/LBPA组磷酸化P38 MAPK蛋白的相对表达量均明显升高(P＜0.05);仅70 μmol/L BPA组caspase-3酶原蛋白的相对表达量下降(P＜0.05).结论 BPA可激活离体培养青春前期大鼠睾丸支持细胞p38 MAPK,并诱发caspase-3活化,导致细胞凋亡,这可能是通过FasL凋亡途径介导的.     

p,p′-DDE对离体培养的大鼠睾丸支持细胞MAPK通路的影响

目的　研究p ,p′ DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞内信号转导通路的影响。方法　从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养 ,以SABC方法来检测细胞内p ERK的表达。结果　发现支持细胞细胞内p ERK随p,p′ DDE剂量的增高而染色加深 ,而且胞浆胞核都表达。结论　p ,p′ DDE可导致支持细胞内ERK磷酸化 ,诱导ERK下游通路的激活 ,从而影响到基因的转录和表达。     

氯乙烯影响雄性大鼠睾酮水平研究

目的探讨氯乙烯对雄性大鼠睾酮水平的影响和可能的机理。方法每组6只,4组雄性SD大鼠腹腔注射染毒28d,剂量分别为0、10、100和1000mg/kg.d。应用酶联免疫吸附法测定大鼠血清和睾丸组织中睾酮(testosterone,T)的水平,用荧光定量PCR测定睾丸组织中睾酮合成的限速酶P450胆固醇侧链裂解酶(P450cholesterol side-chain cleavage enzyme,P450scc)和类固醇激素合成急性调节蛋白(steroidogenetic acute regulatory protein,StAR)的mRNA水平。结果染毒28d后,相比对照组,100和1000mg/kg.d剂量组血清和睾丸中的睾酮水平明显下降,并有明显的剂量-反应关系;两者StAR mRNA表达水平显著下降;1000mg/kg.d剂量组的P450scc mRNA表达水平亦明显下降。结论氯乙烯对雄性大鼠血清和睾丸中的睾酮水平有影响,睾丸中StAR和P450scc mRNA水平的下调可能是其机制之一。     

壬基酚对睾丸支持细胞类固醇生长因子-1mRNA表达的影响

目的 研究壬基酚(nonylphenol,NP)对离体培养大鼠睾丸支持(Sertoli)细胞类固醇生成因子-1(steroidogenic factor 1,SF-1)表达的影响.方法 大鼠Sertoli细胞经离体原代培养后,分别用0.08、0.40、2.00、10.00 μg/L浓度NP染毒24 h.运用实时荧光定量PCR检测不同剂量染毒后的Sertoli细胞的SF-1 tuRNA水平.结果 0.08、0.40、2.00、10.00 μg/L NP染毒剂量组的SF-1基因相对表达量分别是3.10±0.88,10.10±0.18,4.83±0.30,3.27±0.81,而阴性对照组、β-雌二醇组的值则分别为12.34±1.37,2.08±0.01.与阴性对照组比较,除0.4 μg/L组外的各NP染毒组及β-雌二醇组Sertoli细胞SF-1mRNA表达均降低,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 NP可以抑制大鼠Sertoli细胞SF-1的表达,并可能是影响生殖功能的机制之一.     

p,p'-DDE对大鼠睾丸支持细胞细胞外信号调节激酶转导通路影响的机制研究

目的 研究p,p'-DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell)内的细胞外信号调节激酶(ERK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路影响机制.方法从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养,分别以0、10、30、50μmol/L的p,p'-DDE染毒,用MTT比色法、SABC法和Western ...     

p,p’-DDE对离体培养支持细胞DNA损伤与FasL基因表达的影响

目的研究p,p’-DDE对离体培养支持细胞DNA损伤与FasL基因表达的影响。方法从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养3天,加入不同浓度p,p’-DDE继续培养24h,应用单细胞凝胶电泳(SCGE)和反转录聚合链式反应(RT-PCR)研究p,p’-DDE诱导支持细胞DNA损伤和FasL基因表达。结果发现支持细胞DNA迁移度随着p,p’-DDE剂量的增高而增高,同时FasL的基因表达水平也随之增高。结论p,p’-DDE可诱导支持细胞DNA损伤和FasL基因表达,pp’-DDE可能是通过Fas/FasL途径诱导支持细胞损伤,破坏生精过程的动态平衡,最终导致精子减少。     

双(对氯苯基)二氯乙烯与β-六氯化苯对大鼠睾丸支持细胞凋亡的影响

目的 探讨双(对氯苯基)二氯乙烯[1,1-dichloro-2,2-bis(p-chlorophenyl)ethylene,p,p'-DDE]、β-六氯化苯(β-benzenehexachloride,β-BHC)及其联合作用对大鼠睾丸支持细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)途径的影响及其作用机制.方法 以不同浓度的p,p'-DDE、β-BHC(分别为10、30、50 μmol/L)及其联合(10 μmol/L p,p'-DDE+10 μmol/L β-BHC,30 μmol/L p,p'-DDE+30 μmol/L β-BHC,50 μmoL/L p,p'-DDE+50 μmol/L β-BHC)处理大鼠睾丸支持细胞24 h,设Caspase-3抑制剂组(先用100 μmol/L Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO处理支持细胞2 h,再用50 μmol/L p,p'-DDE+50 μmol/L β-BHC联合处理),采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定支持细胞的活性,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双重荧光染色测定支持细胞的凋亡率,RT-PCR法检测Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9 mRNA表达量的变化.结果 10、30、50、70 μmol/L p,p'-DDE组吸光度(A值)分别为0.498±0.039、0.481±0.065、0.397±0.032和0.286±0.049,相同浓度β-BHC组A值分别为0.518±0.103、0.490±0.060、0.454±0.054和0.302±0.030,10、30、50 μmol/L p,p'-DDE与β-BHC联合组A值分别为0.483±0.048、0.473±0.058和0.337±0.052,50 μmol/L浓度组与对照组比较,A值降低,差异有统计学意义(t值分别为4.599、2.716、6.537,P＜0.05).AO/EB双重荧光染色分析结果显示,10、30、50 μmol/L各染毒组的支持细胞凋亡率明显升高,与溶剂对照组(9.83±0.95)%、Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO组(15.60±2.74)%比较,p,p'-DDE处理组分别为(23.73±2.24)%、(30.03±2.84)%和(38.04±4.98)%,β-BHC处理组分别为(24.42±3.53)%、(30.64±1.06)%和(39.88±0.17)%,联合处理组分别为(37.08±1.71)%、(42.18±3.32)%和(41.25±3.36)%.逆转录(RT)-PCR结果表明,Caspase-3、Cagpase-8及Caspase-9 mRNA表达量随着p,p'-DDE、β-BHC及其联合浓度的增加而增加.结论 p,p'-DDE、β-BHC及其联合作用可通过激活启动Caspase-8和Caspage-9,进而激活下游效应Caspase-3引起支持细胞凋亡.     

Role of ghrelin on testosterone secretion and the mRNA expression of androgen receptors in adult rat testis

The present study was designed to determine the effects of ghrelin on in vivo and in vitro secretion of testosterone (T) and the expression of androgen receptor (AR) mRNA in the adult rat testis. The distribution of growth hormone secretagogue receptors (GHS-R(1a)) in the testis was also investigated. GHS-R(1a) immunoreactivity presented mainly in Sertoli and Leydig cells, primary spermatocytes, and secondary spermatocytes. Adult rats that were intracerebroventricularly (i.c.v.) administrated different dosages (1 nmol and 3 nmol) of ghrelin could significantly inhibit the secretion of T. The experession of AR mRNA in the testis was also notably reduced with 3 nmol ghrelin. Additionaly, in vitro exposure of the Leydig cells to increasing concentrations of ghrelin resulted in no obvious changes of T secretion in the culture media and AR mRNA expression of Leydig cells. Overall, our data demonstrate that the i.c.v. injection of ghrelin plays a physiological role in T secretion and AR mRNA expression in the testis, further confirming the reproductive role of ghrelin.     

p,p'-DDE对青春前期大鼠睾丸组织半胱氨酰天冬氨酸酶mRNA表达及活力的影响

目的研究p,p’-DDE在诱导青春前期SD大鼠睾丸细胞凋亡中半胱氨酰天冬氨酸酶(caspase)的作用。方法将22日龄清洁级雄性SD大鼠20只随机分为低(20mg/kg)、中(60mg/kg)、高(100mg/kg)剂量p,p’-DDE染毒组和对照组(玉米油),每组5只。采用腹腔注射染毒,注射容积为10ml/kg,隔天染毒1次,共进行10天。染毒结束后,处死大鼠,分离睾丸、肝、肾、脾、肺器官,称重后计算脏器系数。取睾丸制备组织匀浆,实时荧光定量PCR测定睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9mRNA的表达;比色法检测睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9的活力。结果各组大鼠体重和睾丸、肾、脾、肺的脏器系数间比较,差异均无统计学意义(P0.05)。与对照组比较,高剂量p,p’-DDE染毒组大鼠肝脏系数较高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,高剂量p,p’-DDE染毒组大鼠睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9和中剂量p,p’-DDE染毒组大鼠睾丸组织caspase-9表达均升高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,高剂量p,p’-DDE染毒组大鼠睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9活力均较高,差异有统计学意义(P0.05)。结论p,p’-DDE可能通过启动caspase-8和caspase-9,进而激活下游效应caspase-3的级联反应而诱导睾丸组织细胞凋亡。     

叶酸、VB6、VB12对血管细胞粘附分子-1表达影响

目的 观察叶酸(FA)、维生素B6(W6)、维生素B12(VB12)对同型半胱氨酸(Hcy)上调内皮细胞血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达抑制作用.方法 将对数生长期大鼠主动脉内皮细胞随机分为5组,空白对照组、1 mmol/L Hcy组、抑制组I(1 mmol/L Hcy+5 μmol/L FA)、抑制组Ⅱ(1 mmol/L Hcy+5 μmol/L FA+5 nmol/LVB12)、抑制组HI(1 mmol/L Hcy+5 μmol/L FA+0.1 μmol/L VB6+5 nmol/L VB12)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测血管细胞粘附分子VCAM-1的表达.结果 与空白对照组比较,1 mmol/L Hcy明显上调核转录因子Kb(NF-Kb)和VCAM-1 mRNA的表达,内皮-单核细胞粘附率由6.03%增加到59.04%(P<0.05);与1 mmol/LHcy组比较,3个抑制组NF-Kb(F=11.547,P=0.000)、VCAM-1 mRNA(F=94.014,P=0.000)的表达均明显下调,抑制组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的内皮-单核细胞的粘附率分别为44.98%,27.23%,10.83%,均明显低于1 mmol/L Hcy组(P<0.05).结论 叶酸、VB6、VB12均可抑制NF-Kb、VCAM-1 mRNA的表达,减少内皮-单核细胞的粘附,缓解Hcy对血管内皮细胞的损伤作用,且三者同时使用效果更好.