PCR快速检测幽门螺杆菌

应用ＰＣＲ扩增１５个幽门螺杆菌分离株的ＤＮＡ，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳均显示一条２９８ｂｐ的区带，而１２株与幽门螺杆菌相关的肠道杆菌都不能扩增出该片段。ＰＣＲ可检出少至１００个幽门螺杆菌细胞，并能检出胃粘膜活检标本中的此菌，全部实验可在５小时内完成。     

cagA基因阳性幽门螺杆菌培养滤液对人胃粘膜上皮细胞系GES-1生长的影响

目的：研究cagA^ 幽门螺杆菌（Hp）培养滤液对人胃粘膜上皮细胞（GES－1）的作用及机制。方法：制备Hp培养滤液，PCR鉴定cagA基因。采用倒置显微镜、电镜、细胞生长曲线、克隆形成实验、单细胞微凝胶电泳及流式细胞仪等，观察Hp (cagA^ ）培养滤液对GES－1细胞的作用。结果：经Hp(cagA^ )培养滤液处理GES－1细胞，细胞核增大、畸形、核染色质变粗、核仁肥大、核分裂。生长曲线可见细胞增生活跃，增殖率195％。克隆形成试验显示细胞克隆形成能力增强，增殖率达到337．5％。流式细胞仪S期细胞比率显著高于对照组。Hp(cagA^ ）培养滤液可使GES－1细胞形成彗星现象。结论：Hp(cagA^ )培养滤液可以导致GES－1细胞的生长特性改变，呈现肿瘤细胞的形态学及生长特征。DNA损伤可能是cagA诱导GES－1细胞生长特性改变的机制之一。     

cagA和cagM在中国人群感染幽门螺杆菌中的检测

ｃａｇ致病岛(ｃａｇｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｉｓｌａｎｄ)为新近在ｃａｇＡ表达阳性的幽门螺杆菌(Ｈｐ)菌株中发现的又一致病相关的基因群,其编码蛋白被认为是毒素及毒素转运机能相关的分泌系统。ｃａｇ致病岛被认为是由水平转移的方式来源于质粒或噬菌体,具有部分或全部丢失等不稳定性表现。通常ｃａｇ致病岛在Ｈｐ中呈连续状态存在,少部分被插入序列分割基金项目:国家自然科学基金资助项目(Ｎｏ.39670648);欧共体委员会科学基金资助项目(ＩＣ18ＣＴ950024)作者单位:第二军医大学长海医院消化内科通信作者:刘炯,200433上海,第二军医大…     

北京人群感染幽门螺杆菌cagA分布特征

幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)是慢性胃炎与消化性溃疡的主要病因 ,ｃａｇＡ被认为是Ｈｐ致病程度相关菌株的一种标志 ,ｃａｇＡ并非存在于所有的菌株中 ,它在Ｈｐ菌株中的存在状态有地区差异。为了解我国ｃａｇＡ存在情况以及与疾病的关系 ,本研究采用ＰＣＲ方法 ,检测了从北京地区分离的Ｈｐ菌株ｃａｇＡ基因存在情况 ,并与国际上这方面的研究作了比较。对 6 4株Ｈｐ(由本实验室中国幽门螺杆菌科研协作组菌株库提供 ,其中胃癌来源 2株 ,胃及十二指肠炎 34株 ,胃基金项目 :国家自然科学基金资助项目(39870 0 32 …     

幽门螺杆菌中国株cagA全长基因克隆

世界范围内不同Hp菌株CagA分子变异较大，该变异可能导致不同菌株的cagA生物学作用乃至致病性不同。我国作为Hp感染较严重的国家之一，临床分离株中超过90％含有cagA基因，从克隆和分析全长cagA基因入手，开展cagA基因／CagA蛋白功能研究，对于揭示CagA在Hp致病中的分子机制具有现实意义。     

幽门螺杆菌致胃粘膜损害机制

幽门螺杆菌（ＨＰ）能引起胃粘膜损害，如破坏粘液分泌，影响粘液层的完整性，引起炎症反应，免疫反应。ＨＰ感染可影响胃的正常生理功能，扰乱胃的环境，导致慢性活动性胃十二指肠炎、消化性溃疡、萎缩性胃炎及胃淋巴瘤等。     

幽门螺杆菌感染者胃粘膜中IL-1β mRNA的竞争RT-PCR检测

目的从分子水平检测胃粘膜中细胞因子ＩＬ－１βｍＲＮＡ的含量，以探讨幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染对其影响。方法以竞争ＲＴ－ＰＣＲ方法检测１０例Ｈｐ感染者根除治疗前后胃粘膜中ＩＬ－１βｍＲＮＡ的表达量。结果根除治疗后粘膜中ＩＬ－１βｍＲＮＡ的表达量显著下降（Ｐ＜０．０１）。试验证明该方法简便、敏感、结果准确。结论Ｈｐ感染可诱导粘膜中产生过量的ＩＬ－１β     

半巢式PCR技术检测牙菌斑唾液及胃黏膜中幽门螺杆菌

本文通过半巢式PCR对 82例慢性胃炎和十二指肠溃疡患者的牙菌斑、唾液及胃黏膜中的幽门螺杆菌 (Hp)进行了检测。 82例患者中活动期十二指肠溃疡患者 2 4例 ,慢性浅表性胃炎 2 7例 ,慢性萎缩性胃炎 31例 ,其中男性 4 2例 ,女性 4 0例 ,平均年龄 4 2 .3岁。半巢式PCR首先以 1对引物扩增出磷酸葡萄糖胺变位酶基因 (phosphogluco saminemu tasegene ,glmM) 75 6bp的片段作为模板 ,再以半巢式引物扩增出 4 96bp的最终产物。引物 0 :5′ CGCGAGCCACAACCCTTTTGAAG 3′ ;引物 1:5′ CGCGCTCACTTGCAAAGCGCACAC 3′;引物 2 :5′…     

幽门螺杆菌cagA基因探针的制备与临床应用

目的研究ｃａｇＡ＋Ｈｐ（幽门螺杆菌）与胃肠道疾病的关系,并探讨长臂光敏生物素标记的ｃａｇＡ基因探针的临床意义。方法构建含ｃａｇＡ基因片段的重组质粒克隆株,以重组质粒ＤＮＡ为模板ＰＣＲ扩增ｃａｇＡ基因片段用长臂光敏生物素标记产物ＤＮＡ,对病人进行基因探针检测及ＰＣＲ、尿酶试纸检测。结果浅表性胃炎、深度胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、慢性萎缩性胃炎及胃癌病人的检测结果是：尿酶检测阳性百分率为：７０．３、７２．２、７７．７、６９．２、２５;ＰＣＲ阳性百分率分别为：５９．２、７７．８、７１．４、７０．７、７５、７８;基因探针杂交检测阳性率分别为：４８．１、６１．１、７０．３、７０．７、６６．７、６６．６、７２．２。结论ｃａｇＡ是胃、十二指肠疾病严重程度的标志,长臂光敏生物素标记的ｃａｇＡ基因探针具有特异性强、灵敏度高的特点,为临床检验中Ｈｐ强毒株分型检测的有效方法     

幽门螺杆菌cagA蛋白的制备级复性和纯化

目的通过优化复性液的组成、pH值、稀释度等,建立幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A(cytotoxin associated gene A,cagA)表达产物的制备级复性及纯化方法。方法以包涵体形式存在的cagA表达产物先用5mL/LTritonX-100进行初步纯化,使其纯度达到约90%;再用含8mol/L脲的变性剂溶解包涵体,用复性液[0.1mol/LTris-HCl、2mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)、0.1mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSG)、8mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)及50mmol/L精氨酸(Arg),pH8.0]稀释复性后,用DEAE-HP阴离子交换色谱进行纯化。结果用稀释法复性及液相色谱法纯化,一次可得到100~140mg的cagA。ELISA检测其抗原活性为1∶16000;SDS-PAGE检测纯度为98%。结论用制备级复性、纯化制备的cagA,可作为抗原用于制备检测抗幽门螺杆菌抗体的检测芯片,效果良好,并已获得国家新药批文。     

幽门螺杆菌cagA基因探针的制备与制备应用

目的 研究ｃａｇＡ＋Ｈｐ（幽门螺杆菌）与胃肠道疾病的关系，并探讨长臂光敏生物素标记的ｃａｇＡ基因探针的临床意义。方法 构建含ｃａｇＡ基因片段的重组质粒克隆株，以重组质粒ＤＮＡ为模板ＰＣＲ扩增ｃａｇＡ基因片段用长壁光敏生物素标记产物ＤＮＡ，对病人进行基因探针检测及ＰＣＲ、尿酶试纸检测。结果 浅表性胃炎、深度胃炎、胃溃疡、十旨肠 治疗慢性萎缩性胃炎及胃癌病人的检测结果是：尿酶检测阳性百分率为：７０．３     

胃溃疡患者唾液和胃粘膜幽门螺杆菌HP－DNA的检测

胃溃疡患者唾液和胃粘膜幽门螺杆菌ＨＰ－ＤＮＡ的检测刘平，鲁严，唐建英越来越多的证据表明胃溃疡与幽门螺旋杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，ＨＰ）感染有关。ＨＰ的传染主要通过“口—口”或“粪—口”途径［１，２］。我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技...     

幽门螺杆菌诱导大鼠胃粘膜细胞分泌胃蛋白酶原

为研究幽门螺杆菌 (Ｈｐ)超声提取物对大鼠胃粘膜细胞系合成与分泌胃蛋白酶原的影响 ,大鼠胃粘膜细胞ＯＵＭＳ 37(34代 )在ＤＭＥＭ培养基中培养 3ｄ后细胞生长到紧密状态时 ,换以新鲜的培养基 ,加入Ｈｐ超声提取物或试剂后 ,采用酸变性法 ,按指定时间取培养上清及细胞裂解液测定胃蛋白酶原活力。结果显示 ,不同浓度的Ｈｐ超声提取物(10 0ｍｇ/Ｌ ,2 0 0ｍｇ/Ｌ ,40 0ｍｇ/Ｌ)对细胞存活无影响。Ｈｐ超声提取物可在 30ｍｉｎ～ 180ｍｉｎ内呈剂量依赖性地诱导大鼠胃细胞分泌胃蛋白酶原。ＤｉｂｕｔｙｒｙｌｃＡＭＰ显著诱导胃粘膜细胞分泌胃…     

浙江地区幽门螺杆菌cagA基因3''区多态性研究

幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)的重要毒力基因cagA具有高度保守的5′区和可变的3′区,3′区中重复序列类型和数量的差异造成了cagA基因产物(CagA蛋白)在分子大小上的不同。cagA基因 CagA蛋白的结构差异可能最终影响Hp感染的临床结局。亚洲Hp菌株和非亚洲菌株cagA基因3′区的结构存在明显差异。Yamaoka等研究发现,日本Hp菌株cagA基因3′区可根据重复序列数量和类型的不同分成A、B、C、D 4个亚型,且亚型的差异与Hp感染后不同的临床结局有一定关系。本研究通过聚合酶链反应(PCR)技术对浙江地区Hp临床分离株cagA基因3′区进行多…     

中国幽门螺杆菌cagA基因敲除突变株生物学特性分析

细胞毒素相关基因A蛋白（cytotoxin-associatedgeneA，CagA）是幽门螺杆菌（Hp）最重要的毒力因子之一。流行病学研究认为，CagA阳性肋感染与消化性溃疡和胃癌发生的关系比CagA阴性菌株更为密切，提示CagA可能是一种重要的疾病相关蛋白，在坳致病过程中发挥作用。由于却菌株自身的变异，CagA阳性株与CagA阴性株间除CagA基因外存在许多差异之处，因此，在自然状态下很难对CagA基因功能做出真实判断。     

一种新的检测胃黏膜幽门螺杆菌荧光定量PCR法

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)是全球最常见的人类感染菌之一,其被认为是慢性胃炎、消化性溃疡的主要原因,且与胃癌的发生密切相关[1,2]。WHO将HP列为第1类致病因子。因此快速准确地检测HP感染对大众健康具有重要意义。实时荧光定量PCR(fluorogenic quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)技术具有高灵敏度和高特异性的优点,并能对细菌进行定量,国内外已有多项研究应用FQ-PCR法检测HP不同的基因片段。本文以HP尿素酶