突变系无毛小鼠近交系的繁殖性能观察

目的：观察突变系无毛小鼠近交系的繁殖性能，找出最佳保种方式。方法：从21代到29代分别采用无毛纯合子雄性与有毛杂合子雌性、无毛纯合子雌雄、无毛纯合子雌雄、有毛杂合子雄性与无毛纯合子雌性4种酱方式，对其生产胎数、胎平均产仔数、离乳数、无毛小鼠的生产机率等进行观察统计。结果：前2种交配方式，生育小鼠中均有无毛小鼠，生产胎数以2或3胎为主，平均产仔数和平均离乳率无明显差异，但无毛纯合子雄性与有毛杂合子雌性交配，无毛小鼠的生产机率明显高于有迁杂合子雌雄交配（P＜0.01）。后2种酱方式，无毛纯合子雌性受孕较难，即使受孕，所产仔鼠于生后不久全部死亡，无一存活至离乳日龄。结论：无毛突变系的繁殖保种最好采取无毛基因纯合的雄性（具有繁殖力）和有毛杂合的雌性交配。     

FMR1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定

目的繁殖和鉴定脆性X智力低下蛋白基因敲除小鼠。方法引进FMR1基因敲除小鼠,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,获得的雄性纯合子子代小鼠与杂合子雌鼠进行交配。结果 FMR1基因敲除小鼠的饲养和繁殖获得成功,获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是获得FMR1基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

瞬时性受体电位通道香草酸受体亚型6基因敲除小鼠模型的建立

目的 建立Trpv6基因剔除小鼠模型,为在体研究Trpv6的生物学功能及其与骨代谢关系创造条件。 方法 从Ensembl数据库中获得小鼠Trpv6基因组序列。设计基因剔除策略,构建基因剔除载体pBR322-MK-Trpv6。以电穿孔方法将基因剔除载体导入ES细胞,用G418和Ganciclovoir进行正负筛选,获得双抗性克隆。PCR鉴定出正确同源重组的胚胎多能干细胞（ES细胞）克隆。将正确同源重组的ES细胞注射到C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合体小鼠。挑选嵌合率在50%的雄鼠与C57BL/6J小鼠交配,获得的灰鼠,PCR鉴定为杂合子小鼠。杂合子小鼠交配后获得纯合子小鼠。 结果 成功构建了打靶载体pBR322-MK-Trpv6。电穿孔后,共获得24个正确同源重组的克隆,同源重组效率为25%。同源重组的克隆经显微注射后,共获得4只嵌合率大于50%的雄鼠。嵌合鼠与野生型C57BL/6J交配,获得57只来源于ES细胞的灰鼠,PCR鉴定证实17只为杂合子小鼠,阳性率为33.3％。杂合子小鼠交配获得纯合子小鼠。经Western印迹证实纯合子小鼠无Trpv6蛋白的表达。 结论 已成功建立了Trpv6基因剔除小鼠模型,其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象。     

FSCB基因敲除对雄性小鼠生殖功能的影响

目的 利用fscb基因敲除小鼠,探讨FSCB蛋白在小鼠精子运动和授精功能中的作用.方法 应用免疫荧光观察fscb基因敲除雄鼠睾丸组织及精子中FSCB蛋白表达情况;应用计算机辅助精液分析(computer assisted sperm analysis,CASA)系统分析fscb基因敲除小鼠精子在体外的运动特征、活率和运动参数改变情况;在体外获能培养条件下检测精子的体外受精能力;将fscb基因敲除纯合子(KO)、杂合子(HET)、野生型(WT)雄鼠分别与野生型C57BL/6J成年雌鼠交配,观察雌鼠怀孕率、怀孕胚胎数量、自然产仔数及子代成年雄鼠生殖腺形态学是否存在差异.结果 免疫荧光显示纯合子雄鼠睾丸组织及精子中均无FSCB蛋白表达,杂合子雄鼠睾丸组织及精子中FSCB蛋白表达与野生型相比明显减低.CASA显示各组雄鼠精子数、活率、各项运动参数差异均无统计学意义(P＞0.05);野生型、杂合子和纯合子雄鼠精子与透明带完整卵细胞及与无透明带卵细胞结合的精子平均数、卵细胞的受精率差异均无统计学意义(P＞0.05);各组雄鼠对应雌鼠的受孕率差异无统计学意义(P＞0.05);野生型、杂合子和纯合子对应雌鼠受孕后每只雌鼠胚胎数分别为(7.00±1.41)、(7.33 ±1.53)、(7.20±1.48)只,每窝自然产仔数分别为(6.00±2.00)、(6.75±1.71)、(7.80±1.30)只,组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);各组子代成年雄鼠生殖腺发育差异无统计学意义(P＞0.05).结论 敲除fscb基因对雄性小鼠精子的运动功能及体内外受精能力均无明显影响,提示该基因所编码的FSCB蛋白的功能对于精子的运动和授精能力的维持可能是非必需的或可被替代的.     

Caveolin-1基因敲除小鼠子代基因型鉴定及繁育方法研究

目的 探讨小凹蛋白-1（Caveolin-1）基因敲除小鼠的鉴定方法与最优繁育方式，为深入研究Caveolin-1在脑缺血损伤修复中的作用提供理想的动物模型。方法 将引进的Caveolin-1基因敲除小鼠饲养于SPF级实验室，煮沸裂解法提取鼠尾组织基因组DNA，根据美国杰克逊实验室（Jackson Laboratory）提供的引物序列进行PCR反应检测其基因型，采用Caveolin-1+/-杂合子互交、杂合子与Caveolin-1-/-纯合子杂交（正交及反交）、纯合子互交4种不同的交配方式，观察亲代小鼠的受孕率、子代小鼠的外形特征及纯合率。结果 琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物分子量大小约200bp和661bp，与预期的目的基因片段分子量大小一致，成功鉴定了Caveolin-1基因敲除小鼠的不同基因型；不同交配方式的繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律，且雌性、雄性Caveolin-1-/-纯合鼠具有一定的繁殖能力，三种不同基因型小鼠的外形特征无明显差异。结论 煮沸裂解法提取基因组DNA、PCR法能够快速可靠鉴定Caveolin-1基因敲除小鼠的基因型；Caveolin-1杂合子小鼠互交与纯合子互交相结合的繁育方法可能是短期内获得足量纯合子子鼠与同源野生子鼠的较好方式。     

水通道蛋白1基因敲除小鼠的饲养繁殖与基因型鉴定

目的 繁殖和基因型鉴定水通道蛋白1（aquaporin-1，AQP-1）基因敲除小鼠。方法 将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖，繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型，提取每只小鼠尾部基因组DNA，用PCR法进行鉴定，一旦获得雄性纯合子，将其与雌性杂合子交配，依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果AQP-1基因敲除杂合子小鼠的饲养和繁殖及鉴定均获得成功，并得到较多的基因敲除纯合子小鼠。结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从亲代杂合子小鼠中获得AQP-1基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

水通道蛋白3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的: 繁殖和鉴定水通道蛋白3(AQP-3)基因敲除小鼠。方法: 将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每种基因型小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,将其雄性纯合子与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结果: AQP-3杂合子小鼠的繁殖和饲养均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠。结论: 正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得AQP-3基因敲除纯合子小鼠的有效途径。     

SRC-3基因敲除小鼠的饲养繁殖及鉴定

目的繁殖和鉴定SRC-3基因敲除小鼠.方法将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,一旦获得雄性纯合子,就将其与雌性杂合子交配,依照孟德尔遗传定律就有可能获得较多的基因敲除纯合子小鼠.结果SRC-3杂合子小鼠的饲养和繁殖均获得成功,亦获得了较多的基因敲除纯合子小鼠.结论正确的饲养繁殖以及鉴定方法是从杂合子中获得SRC-3基因敲除纯合子小鼠的有效途径.     

类固醇受体辅活化子-1基因敲除小鼠的繁殖与筛选

目的 繁殖和鉴定SRC-1基因敲除小鼠.方法 将所引进的雄性野生型小鼠和雌性SRC-1基因敲除小鼠进行交配繁殖,繁殖成功后其子代均为杂合子,杂合子和杂合子再交配就可以得到野生型、杂合型及纯合子3种基因型,提取每只小鼠尾部基因组DNA,用PCR法进行鉴定,一旦获得雌性和雄性纯合子,其子代就均为纯合子.结果 SRC-1小鼠的饲养和繁殖均获得成功,亦成功获得了较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.结论 正确的饲养繁殖以及筛选方法,可以获得较多的SRC-1基因敲除纯合子小鼠.     

NLRP3基因敲除小鼠的繁殖与基因型鉴定

目的 繁殖及鉴定NLRP3基因敲除（NLRP3^-/-）小鼠。方法 将引进的NLRP3基因敲除杂合子小鼠,单独进行饲养及配种繁殖,繁殖后其子代出现3种基因型：野生型、杂合子型及纯合子型,提取每只小鼠的基因组DNA,用PCR和T7E1酶切方法进行鉴定,将获得的纯合子小鼠与异性杂合子交配,以获得更多的基因敲除纯合子小鼠。结果 NLRP3杂合子小鼠的饲养及繁殖均获得成功,获得了NLRP3基因敲除纯合子和杂合子小鼠。结论 正确的饲养、繁殖及鉴定方法是从NLRP3基因敲除杂合子小鼠中获得纯合子小鼠的有效途径。     

A/California/7/2009与A/California/4/2009病毒感染力比较

目的甲型H1N1流感病毒A/California/7/2009与A/California/4/2009病毒序列比较同源性在99%以上,本实验旨在比较两株病毒感染BALB/c小鼠研究感染力强弱。方法分别将A/California/7/2009(CA7)与A/California/4/2009(CA4)两株病毒分别连续10倍稀释后,对4~6周龄雌性BALB/c小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,每个稀释度接种10只实验小鼠,测定CA7 MLD50为101.24/0.05 mL,检测小鼠感染、致病的多项指标,观察期为14 d。结果相同TCID50的CA7和CA4病毒感染小鼠,CA4感染小鼠后14 d内死亡率为20%,而CA7感染小鼠后8 d内死亡率为100%。CA7 106TCID50感染的小鼠病理表现为重度弥漫性间质性肺炎,CA4 106TCID50感染的小鼠病理表现为中度-重度间质性肺炎。结论在相同条件下,CA7感染力明显强于CA4。     

LC/MS/MS法测定兔血浆中的盐酸伪麻黄碱及美敏伪麻溶液的药动学研究

目的建立兔灌胃美敏伪麻溶液后血浆中的盐酸伪麻黄碱的LC/MS/MS测定方法,并研究该制剂的药动学。方法兔灌胃给药后采集各时点血样,经甲醇沉淀蛋白法处理,应用HPLC-ESI-三级四极杆串联质谱测定盐酸伪麻黄碱的浓度,采用统计矩分析方法计算药动学参数。结果盐酸伪麻黄碱的线性范围为1～300 ng.mL-1（r=0.995 5）,回收率为97.5%～108.5%,RSD均小于10%;药动学参数：t1/2为（1.8±0.4）h,Cm ax为（26.6±9.6）μg.L-1,Tm ax为（0.6±0.3）h,AUC0-t为（82.8±24.6）μg.h.L-1。结论建立的方法灵敏、准确、快速、特异性强,适用于盐酸伪麻黄碱的血药浓度测定和药动学研究。     

Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与自噬调控作用的研究进展

自噬是机体保守的自我防御机制,是将细胞内变形坏死的细胞器和多余蛋白降解为小分子,以供循环利用。自噬在生理和病理状态下均发挥重要作用,可通过多条信号通路影响胞内物质的表达。目前已知Ras/Raf/MEK/ERK信号通路不仅广泛参与调控细胞生长、增殖、分化、凋亡等多个生理病理过程,并且参与调控自噬,并具有促进肿瘤细胞发生自噬性死亡的作用,但是其具体参与调控自噬的作用机制尚未完全阐明。本文就Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与调控自噬的作用的研究进展进行详细阐述,以期为研究Ras/Raf/MEK/ERK信号通路调控自噬的作用机制提供参考。     

重庆地区C/adrq+亚型 HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC标准参照序列的初步建立

目的：建立重庆地区基因型C／血清型adrq HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC基因标准参照序列，为HBV变异的研究奠定基础。方法：测定18例无症状携带者HBV的PreS/S、EnhII/CP/PreC序列，应用同源性分析和对齐比较等方法确定HBV亚型，并拟定基因型C／血清型adrq HBV的PreS/S、EnhII/CP/PreCC标准参照序列。结果：9株基因型B／血清型adw2、6株基因型C／血清型adrq ，3株基因型B／血清型aywl；建立的重庆地区HBV基因型C／血清型adrq HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC标准参照序列与东北华南地区同亚型的标准序列比较分别用13个、2个核苷酸差异，可引起4个、1个氨基酸差异。结论：初步建立了重庆地区基因型C／血清型adrq HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC基因标准照参照序列。     

无嘌呤无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1的研究进展

无嘌呤无嘧啶核酸内切酶／氧化还原因子1（APE／Ref-1）具有修复DNA损伤、影响氧化还原反应及调节转录因子DNA结合活性等功能，对细胞的生存有重要作用。近年来有关APE／Ref-1的研究在其基因、功能、分布以及与某些疾病尤其是神经系统疾病和肿瘤之间的关系等方面都取得了长足的进展，本文对此进行了综述。     

PET/CT和微PET/CT的应用

PET/CT一出现就成为最先进的医学影像设备。它是PET和CT的完美的结合,PET/CT的核心是可以进行图像融合,提供了来自两台扫描仪的信息。PET/CT的临床应用包括在肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病等方面。PET/CT推进了影像医学的进步。微型PET/CT使现代医学基础研究获得质的飞跃。     

IL－2／TNF／LAK／TIL治疗晚期肺癌的近期疗效及免疫机理研究

作者报道用ＩＬ－２／ＴＮＦ／ＬＡＫ／ＴＩＬ治疗３０例失去手术机会和不能耐受全程化疗的晚期肺癌的结果。该法总有效率（ＣＲ＋ＰＲ）达４３．３％，９例伴有恶性胸水者经ＩＬ－２／ＴＮＰ／ＴＩＬ局部胸腔治疗后显效５例，有效４例。文中对该疗法的免疫机理作了初步探讨。     

知母药材的HPLC/PDA/ELSD指纹图谱研究

[目的] 建立知母药材的高效液相色谱仪-二极管阵列检测器-蒸发光散射检测器联用(HPLC/PDA/ELSD)指纹图谱。[方法] 采用Waters Symmetry Shield^TM RP C18(5 μm,4.6 mm×250 mm )色谱柱,流动相为乙腈-0.1%冰醋酸,梯度洗脱流速1.0 mL/min,柱温30 ℃,检测波长258 nm,ELSD检测器载气气压30 Psi,漂移管温度80 ℃。[结果] 建立了知母的HPLC/PDA/ELSD指纹图谱,在HPLC-PDA色谱图中标定了17个共有峰,HPLC-ELSD色谱图中标定了14个共有峰。[结论] 该方法重复性好,可用于知母药材的全面质量控制。     

HL60/VCR耐药细胞荷瘤鼠模型的建立

目的建立白血病HL60/VCR耐药细胞株移植动物模型方法。方法将生长状态良好的耐药细胞株HL60/VCR1.0×107/0.2ml接种到BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下,定期观察裸鼠生长状况,测量移植瘤大小,留取标本检测不同脏器肿瘤负荷及多药耐药基因MDR1表达情况。结果 2.0×106HL60/VCR细胞皮下接种BALB/c-nu/nu裸小鼠,成瘤率为67.7%,免疫组化检测荷瘤裸鼠肝脏和脾脏均可见巢状分布白血病细胞,PCR检测成瘤组织表达MDR1基因。结论皮下移植可成功建立耐药细胞株荷瘤鼠模型,为研究多药耐药细胞株动物体内生物学行为及逆转多药耐药提供了动物模型。     

重庆地区HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC 基因标准参照序列的初步建立

目的：建立重庆地区HBV流行株PreS／S、EnhⅡ/CP／PreC基因标准参照序列，为HBV变异的研究莫定基础：方法：测定15例无症状携带HBV的PreS／S、EnhⅡ/CP／PreC序列，应用同源性分析和对齐比较等方法确定基因型／血清型，并拟定标准参照序列。结果：9株基因型B／血清型adw2、3株基因型B／血清型aywl、3株基因型C／血清型adrq ；建立的重庆地区HBV流行株(基因型B／血清型adw2)PreS／S、EnhⅡ/CP／PreC标准参照序列与华东华南地区同亚型的标准参照序列比较分别有6个、1个核苷酸差异。结论：初步建立了重庆地区HBV流行株PreS／S、EnhⅡCP／PreC基因标准参照序列。