干扰素对肺腺癌A549细胞B7-H4分子表达的影响

目的:探讨IFN-α和IFN-γ对人肺腺癌细胞株A549 B7-H4 mRNA和蛋白表达的影响。方法:用不同浓度(100、500、1 000、2 000 U.ml-1)IFN-α和IFN-γ分别处理A549细胞,未经药物处理细胞作对照(对照组)。用MTT法观察细胞增殖活性的差异,RT-PCR观察B7-H4 mRNA表达水平的变化,蛋白质印迹法观察B7-H4蛋白表达水平的变化。结果:IFN-α和IFN-γ对人肺腺癌细胞株A549增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间和剂量依赖性(P<0.05)。随着IFN-α浓度的增加,B7-H4分子mRNA和蛋白表达增强(P<0.05),而IFN-γ对B7-H4分子mRNA和蛋白表达影响不明显(P>0.05)。结论:IFN-α和IFN-γ均可抑制人肺腺癌A549细胞株的增殖;IFN-α可增强B7-H4mRNA和蛋白水平的表达,而IFN-γ对B7-H4分子mRNA和蛋白表达影响不明显。     

几类实体肿瘤对IFN-α2a治疗敏感性与其细胞表面受体表达的关系

目的:探讨肿瘤细胞表面干扰素α受体的表达与其肿瘤对IFN-α 2a治疗敏感性之间的关系.为建立干扰素α敏感肿瘤的快速评价方法奠定基础.方法:MTT法体外筛选IFN-α 2a敏感与抗性肿瘤细胞株,选取人肺腺癌细胞A549,SPC-A-1,GLC-82和人低分化胃腺癌细胞MKN-45共4株细胞;通过构建荷瘤裸鼠模型,证实不同肿瘤对干扰素治疗的敏感性存在差异.流式细胞术、免疫组织化学、Western Blot检测肿瘤细胞表面IFN-α受体的表达差异.结果:体内、体外实验结果表明:A549,SPC-A-1为IFN-α2a敏感性细胞株,MKN-45,GLC-82为IFN-α 2a抗性细胞株.细胞和组织水平检测的结果表明:表达量由高到低依次为A549,SPC-A-1,MKN-45,GLC-82.结论:IFN-α受体表达的高低与肿瘤细胞对干扰素的敏感性具有密切的相关性,对实现有针对性的个体化治疗具有一定的指导意义.     

α-干扰素对人肺腺癌A549细胞周期和P53蛋白表达的影响

目的探讨α-干扰素(IFN-α)对人肺腺癌细胞株A549细胞周期和P53蛋白表达的影响。方法用2种不同质量浓度IFN-α(25μg/L，100μg／L)处理人肺腺癌A549细胞，并设空白为对照。用流式细胞仪测定IFN-α对A549细胞细胞周期的影响，用免疫荧光标记法测定P53蛋白的表达。结果IFN-α作用后的A549细胞，细胞周期明显改变，s期细胞数显著降低，且P53蛋白表达明显减少。结论IFN-α能阻止A549细胞细胞周期的进程，抑制P53蛋白的表达。     

消炎痛对活化小胶质细胞MHC-Ⅱ类分子和CD11b分子表达的影响

目的 探讨消炎痛对活化小胶质细胞MHC-Ⅱ类分子和CD11b分子表达的影响.方法 脂多糖(LPS)联合干扰素γ(IFN-γ)激活小胶质细胞株BV-2的同时采用不同浓度(0.1、0.5、1 mmol/L)的消炎痛进行干预,流式细胞仪检测表面分子MHC-Ⅱ类分子和CD11b分子的表达,Griess法检测培养上清中一氧化氮(NO)的浓度.结果LPS联合IFN-γ激活BV-2细胞后MHC-Ⅱ类分子和CD11b分子的表达上调,NO的生成增加;消炎痛以剂量依赖方式下调活化的BV-2细胞MHC-Ⅱ类分子和CD11b分子的表达,抑制NO的生成.结论 消炎痛下调BV-2细胞MHC-Ⅱ类分子和CD11b分子的表达并抑制NO的生成,提示消炎痛可能通过降低小胶质细胞免疫相关分子表达,抑制活化小胶质细胞的抗原提呈功能、吞噬杀伤及细胞毒效应.     

曲古抑菌素A下调人肺腺癌细胞A549内IDO表达的分子机制

【目的】研究曲古抑菌素A (-TSA)抑制γ干扰素（IFN-γ）诱导的人A549细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）表达的分子机制。【方法】 采用蛋白质免疫印迹技术检测TSA在IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达、信号转导及转录激活子1（STAT1）的磷酸化和干扰素调节因子1（IRF-1）的激活等过程中的作用,在激光共聚焦显微镜下观察TSA对STAT1核转位的影响,利用双荧光素酶报告基因系统检测TSA对γ-干扰素激活位点（GAS）、干扰素刺激应答元件（ISRE）和核因子-κB （NF-κB）的激活的影响。【结果】 TSA以浓度依赖方式下调A549细胞中IFN-γ诱导的IDO表达,并能明显抑制STAT1第701位酪氨酸的磷酸化和STAT1的核转位。双荧光素酶报告基因分析和Western blot结果表明：TSA能显著抑制GAS、ISRE和IRF-1 的激活却不能抑制NF-κB的激活。【结论】TSA能下调IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达,其机制可能是与其抑制STAT1的磷酸化和核转位,以及抑制STAT1与GAS的结合有关。     

结核分枝杆菌RelE毒素蛋白对肺癌A-549细胞成瘤性的抑制作用

目的探索结核分枝杆菌RelE毒素蛋白对动物体内的肺癌A-549细胞的成瘤性的影响,以及因此产生的对动物免疫功能的作用。方法构建BALB/C小鼠的免疫抑制模型,通过接种稳定表达结核分枝杆菌RelE毒素蛋白、RelB抗毒素蛋白和RelBE毒素-抗毒素蛋白的肺癌A-549细胞株,含空质粒PcDNA3.1（＋）的A-549细胞株,以及正常的肺癌A-549细胞,构建BALB/C小鼠荷瘤模型,观察各组小鼠的肿瘤生长情况,并测定各组小鼠的脾淋巴细胞增殖活性以及血清IFN-γ和IL-2的浓度。结果接种了表达RelE毒素蛋白的A-549细胞的小鼠组,肿瘤生长较其它实验组慢,肿瘤结节的瘤体体积和数量都较其它实验组有明显差异（P〈0.05）。对各组小鼠免疫功能变化的研究发现,各实验组小鼠的脾淋巴细胞增殖活性以及血清IFN-γ和IL-2的浓度的差异没有统计学意义（P〉0.05）。结论结核分枝杆菌RelE毒素蛋白对肺癌A-549细胞的成瘤性有抑制作用。     

树突状细胞负载前列腺癌细胞抗原后的抗肿瘤免疫作用

目的 探讨小鼠树突状细胞(DC)负载前列腺癌细胞株RM-1的裂解产物后，诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)及其抗肿瘤的免疫作用。方法 将RM-1细胞的裂解产物(T-lysate)作为肿瘤抗原负载小鼠骨髓来源的DC，构建DC瘤苗(T-lysate／DC)，采用流式细胞术和四唑氮蓝(MTT)还原法检测其免疫活性；ELISA法检测其诱导细胞因子白介素(IL)-2和γ-干扰素(IFN-γ)的作用；体内实验检测DC瘤苗的抗肿瘤免疫治疗作用和免疫保护作用。结果 DC负载RM-1细胞的裂解产物后，其主要组织相容性复合物(MHC-Ⅰ、Ⅱ)及共刺激分子(B7-1、B7-2)的表达明显增高；T-lysate／DC能够诱导小鼠产生RM-1特异性CTL，使细胞上清液中IL-2和IFN-γ水平升高，对小鼠具有免疫保护作用，并能有效抵抗肿瘤细胞的攻击；经T-lysate／DC治疗的荷瘤小鼠瘤体生长减慢，存活期延长，瘤体出现坏死和炎细胞浸润。结论 DC负载前内腺细胞解产物后，能够有效诱导搞肿瘤免疫反应，为前列腺癌的临床治疗提供了新策略。     

IFN-γ对骨肉瘤细胞组织蛋白酶L的表达及侵袭特性的影响

目的:探讨干扰素γ(interferon-γ, IFN-γ)对骨肉瘤细胞中组织蛋白酶L(cathepsin L, CATL)表达的调控,及其对MG-63细胞体外侵袭特性的影响,为临床上应用IFN-γ防治肿瘤转移提供实验依据.方法:采用IFN-γ对体外培养的MG-63骨肉瘤细胞CATL表达进行诱导调节,并利用RT-PCR方法对其表达水平变化进行半定量检测.Boydern小室检测各组细胞侵袭力的差异.结果:IFN-γ对骨肉瘤细胞中CATL的表达有显著的诱导降低作用,且随着浓度增加表达逐渐下降.同时可以使MG-63细胞的体外侵袭力下降.结论:IFN-γ可抑制骨肉瘤细胞中CATL的表达,并在一定程度上抑制骨肉瘤的侵袭转移潜能.     

α干扰素对A_(549)细胞端粒酶活性和p53蛋白的表达

目的 :探讨α 干扰素 (IFN α)对人肺腺癌细胞株A549细胞端粒酶活性和p5 3蛋白质表达的影响。方法 :用两种不同质量浓度IFN α(2 5 μg L ,10 0 μg L)处理人肺腺癌细胞株A549细胞 ,并设空白对照。采用TRAP 银染法检测端粒酶活性 ,用免疫荧光标记法测定p5 3蛋白的表达。结果 :IFN α作用后的A549细胞 ,端粒酶活性明显降低 ,且p5 3蛋白表达明显减少。结论 :IFN α能抑制肺腺癌细胞的端粒酶活性和p5 3蛋白的表达     

干扰素对肿瘤细胞Fas表达的上调作用及与细胞凋亡的关系

OBJECTIVE: To investigate effect of interferon-gamma (IFN-gamma) on Fas expression and Fas-mediated apoptosis in tumor cell lines. METHODS: Fas expression was detected by flow cytometry, and the tumor cell apoptosis evaluated by enzyme-linked immunosorbent assay and AnnexinV staining assay. RESULTS: All the 4 tumor cell lines used in this study, e.g. gastric cancer cell lines Kato-III AGS, lung cancer cell line A549 and laryngeal cancer cell line Hep-2, expressed Fas protein to varied degrees. Fas expression was up-regulated by IFN-gamma (P<0.05), which alone was enough to induce apoptosis in tumor cells and increase the susceptibility of them to anti-Fas antibodies. IFN-gamma induced Fas expression up-regulation and tumor cell apoptosis in a time-dependent manner. CONCLUSION: Fas-mediated apoptosis is one of the mechanisms for IFN-gamma to exercise its anti-tumor effect.     

人肺癌细胞系A549中肿瘤干细胞样细胞的分离及鉴定

目的从人肺癌细胞系A549中分离并鉴定肺癌干细胞。方法将A549细胞置于无血清条件培养基中培养,形成细胞球,采用平皿克隆形成实验、MTT细胞增殖实验、RT-PCR、Western blot、免疫荧光技术,检测并比较A549细胞和A549细胞球的增殖能力及干细胞相关标记的表达水平,鉴定细胞球的肿瘤干细胞特性。结果利用无血清条件培养基从A549细胞中分离出肿瘤干细胞样细胞;相比A549细胞,细胞球呈悬浮生长,增殖能力和克隆形成数目(104±7)高于贴壁细胞[(37±3)(P<0.05)],且干细胞相关标记Sox2(2.68±0.39)和Oct4(1.23±0.12)表达水平明显提高[贴壁细胞Sox2(0.05±0.02)、Oct4(0.10±0.02),P<0.05]。结论运用无血清条件培养基可以从A549细胞系中有效富集肺癌干细胞样细胞。     

新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡

目的研究新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝法检测LGN抑制人肺腺癌细胞株A549增殖的情况,利用Giemsa染色、Hoechst染色、流式细胞仪、DNA ladder检测LGN诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的情况,利用反转录-聚合酶链反应检测凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、原癌基因bcl-2、促凋亡基因bax、p53等。结果 LGN对A549细胞有良好的抑制活性,半数抑制率明显优于阳性对照药依托泊苷,差异有统计学意义(P<0.05)。LGN可诱导A549细胞产生显著凋亡,并可增加A549细胞中p53、caspase-3及bax的mRNA表达,同时降低bcl-2的mRNA表达,并有良好的量效关系。结论鬼臼毒素新衍生物LGN可以诱导A549细胞发生凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因表达有关。     

Effects of Exogenous p16^ink4a Gene on Biological Behaviors of Human Lung Cancer Cells

The effects of exogenous p16ink4a gene on biological behaviors of human lung cancer cell line with homozygous deletion of p16ink4a gene were investigated. Exogenous p16ink4a gene was transfected by lipofectin into human lung cell line A549, in which p16ink4a gene was homozygously deleted. The expression of p16ink4a mRNA and protein was detected by RT-PCR and immunocyto-chemistry, respectively. The changes in the behaviors of the transfected cell lines in vitro and in vivo were observed. In the transfected cell line A549, the exogenous p16ink4a gene could be stably ex-pressed. The growth of A549 cells transfected with p16ink4a gene was obviously slowed down. Flow cytometry revealed that transfection of the exogenous p16ink4a gene resulted in A549 cell lines arrest in G1 phase of cell cycle. The tumorigenicity of these transfected cells in nude mice could be inhib-ited, and the tumor growth of nude mice was significantly suppressed. It was concluded that exoge-nous p16ink4a gene may be stably expressed in human lung cancer cell line A549. The expression of the introduced p16ink4a could block lung cancer cells to entry into S phase of cell cycle and inhibit tumor malignant growth both in vitro and in vivo.     

人呼吸道合胞病毒M2-1基因转染对人肺腺癌细胞生长特性的影响

目的:探讨人呼吸道合胞病毒(hRSV)M2-1基因转染对人肺腺癌细胞体外生长特性的影响.方法:应用脂质体转染法,将携带M2-1基因的重组载体pXJ-41/M2-1转入人肺腺癌PAa和A549细胞,并获稳定表达;以不含M2-1基因的空白载体为对照,采用流式细胞术、MTT法、胰酶消化试验、软琼脂集落形成实验和Boyden小室等方法观察转染细胞的生长特性、贴壁能力及侵袭能力变化.结果:与转染前和转染空白质粒组比较,转染M2-1基因的PAa和A549细胞的G2/M期细胞比例均显著增加(P<0.05,P<0.01);细胞增殖明显加快(P<0.01),倍增时间缩短;集落形成率显著增加(P<0.01);PAa细胞胰酶消化离壁时间缩短(P<0.01),而A549细胞在3组间无统计学差异;Boyden小室实验中,A549细胞透膜数显著增加(P<0.01),而PAa细胞因透膜数很少,均无法计数.结论:M2-1基因转染能提高体外培养的PAa和A549细胞的增殖能力和侵袭能力,感染hRSV病毒的肺癌患者应引起重视.     

EGCG联合紫杉醇对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯［(-)-Epigallocatechin gallate,EGCG］及紫杉醇单独使用和联合使用时对肺癌A549细胞的形态、活性、细胞凋亡以及相关信号通路的影响。方法：不同浓度的EGCG、紫杉醇单用及联合应用在不同时间作用于肺癌A549细胞,用细胞集落形成实验检测细胞活力、WST-1法检测细胞增殖能力、Hoechst-33342荧光法检测细胞凋亡的情况、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western blot检测内质网应激标志蛋白GRP78表达。结果：①EGCG和紫杉醇均能抑制肺癌A549细胞的增殖;EGCG与紫杉醇联合的抑制率高于单用EGCG或紫杉醇组（P＜0.05）。②EGCG和紫杉醇均可诱导细胞凋亡,2种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强。③蛋白免疫印迹实验显示EGCG和紫杉醇联合可能是通过内质网应激信号通路发挥作用。结论：EGCG、紫杉醇均可抑制人肺癌A549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡,两者联合应用具有协同作用,能显著增强细胞凋亡作用。     

肉桂酸对A_(549)人肺腺癌细胞增殖和核仁组成区的影响

目的 :探讨低毒性的食品添加剂肉桂酸对A54 9人肺腺癌细胞的抑制作用。方法 :应用 1mmol/L和 3mmol/L的肉桂酸作用于人肺腺癌A54 9细胞 ,观察细胞增殖情况 ,进行核仁形成率的测定。结果 :1mmol/L和 3mmol/L肉桂酸能使A54 9人肺腺癌细胞增殖受到明显抑制 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,同时细胞的核仁形成率明显下降 ,核仁内核仁组成区嗜银颗粒明显减少 (P <0 0 1,P <0 0 0 1)。结论 :肉桂酸是A54 9人肺腺癌细胞有效的抑制剂 ,在抗癌作用方面具有潜在的应用价值。     

耐培美曲塞人肺癌细胞系的建立

目的培美曲塞是新一代的抗肿瘤药物,但其在肺癌治疗中的耐药现象日益明显,建立耐培美曲塞人肺腺癌细胞株A549/Pemetrexed有利于对培美曲塞耐药的深入研究。方法以人肺腺癌细胞株A549为亲代细胞,采用"血浆峰浓度冲击与逐步增加剂量相结合诱导"法,用培美曲塞进行诱导,建立耐培美曲塞细胞株A549/Pemetrexed,测定其生长曲线、倍增时间和克隆增长率,并与A549相比较。结果 A549/Pemetrexed对培美曲塞的耐药指数为(14.81±1.47),并对吉西他滨、5氟脲嘧啶、顺铂、卡铂耐药,耐药指数分别为(9.20±2.65)、(12.2±1.79)、(5.79±0.68)、(7.98±1.02);对紫杉醇、多西他赛敏感,耐药指数分别为(1.44±0.34)、(1.04±0.21);增殖速度与A549接近,分别为(63.03±0.98)h和(62.63±1.23)h。结论本研究建立的A549/Pemetrexed细胞株生长稳定,可用于下游的实验研究。     

三氧化二砷对人肺腺癌A-549细胞株增殖及c-Myc基因表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌A549细胞株的生长增殖、细胞周期、凋亡等方面的影响,并初步探讨其机制。方法选用不同浓度As2O3处理人肺腺癌A549细胞株,以MTT比色法检测细胞生长增殖的抑制情况;用流式细胞术测定细胞周期、凋亡率;以免疫组织化学法分析不同浓度As2O3对c-Myc基因表达的影响。结果 As2O3以时间和浓度依赖的方式抑制人肺腺癌A-549细胞的增殖,并能诱导细胞凋亡。不同浓度As2O3处理组可调控细胞周期分别发生G2/M期阻滞和S期阻滞,并下调c-Myc基因表达。结论三氧化二砷对人肺腺癌细胞株A-549的生长、增殖有明显抑制作用,其机制可能与细胞周期阻滞和抑制c-Myc基因的表达和诱导细胞凋亡有关。     

HSV-tk基因表达载体的构建及其对A549细胞的杀伤作用

目的构建自杀基因HSV-tk表达质粒,研究自杀基因疗法对人肺癌细胞的杀伤作用,探讨其治疗肺癌的可行性。方法PCR扩增tk基因带EcoRⅠ、XhoⅠ酶切位点,然后构成建到pcDNA3.0载体中成pcDNA3.0-tk;将pcDNA3.0-tk转染A549肺癌细胞,应用细胞生长曲线和MTT法测定前药GCV对A549细胞的杀伤作用。结果成功获得pcDNA3.0-tk克隆,RT-PCR、Western印迹法证明A549细胞转染pcDNA3.0-tk后可表达自杀基因,GCV能特异性地杀伤A549/tk细胞。结论HSV-tk基因表达质粒构建成功;HSV-tK/GCV系统对肺癌A549细胞有一定的杀伤作用。