前列腺素E_2对人成骨样细胞白介素-6,骨保护素配体/骨保护素mRNA表达的影响

目的研究前列腺素E2(PGE2)对人成骨瘤细胞MG-63分泌的细胞因子白介素-6(IL-6)、骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、骨保护素配体(L igand of receptor activator ofNF-κB,RANKL)表达的调节,探讨PGE引发骨吸收的机制。方法体外培养成骨瘤细胞株(MG-63),分别给予不同剂量的PGE2进行干预试验,用钙估法显示成骨细胞碱性磷酸酶的表达;用MTT法测定PGE2对MG-63细胞刺激增殖作用;提取总RNA进行半定量逆转录PCR分析,检测IL-6,OPG,RANKL基因表达水平的改变。结果PGE2减少碱性磷酸酶的表达,抑制MG-63细胞的增殖,并呈剂量依赖性的上调IL-6mRNA,RANKL/OPG mRNA水平。结论PGE2可以通过IL-6,RANKL/OPG mRNA基因水平的上调,促进骨吸收,此可能为PGE2导致溶骨性病变的重要发病机制。     

破骨样细胞中骨保护素和NF-κB配体受体的表达及其意义

目的探讨破骨样细胞中骨保护素(OPG)和NF-κB配体受体(RANKL)表达情况。方法单独培养骨髓单核细胞前体,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和维生素D诱导其转化为破骨样细胞,在0、5、10、15 d用光镜观察和TRAP染色(抗酒石酸染色)评估破骨样细胞的转化程度,用RT-PCR检测OPG和RANKL的表达情况;然后构建主动脉中膜平滑肌细胞(SMC)与骨髓单核细胞前体共培养的模型,用维生素C和β-磷酸甘油诱导SMC转化为成骨样细胞,并在0、5、10、15 d用同样方法再次检测共培养中破骨样细胞转化的情况,以及两种细胞中OPG和RANKL的表达情况。结果不管是单独培养、还是共培养,破骨样细胞中始终没有OPG和RANKL的表达。结论破骨样细胞的转化可能主要受成骨样细胞分泌的OPG和RANKL调控,本身并没有分泌OPG和RANKL进行自身调节的机制存在。     

中耳胆脂瘤上皮中前列腺素E2和IL-1β的表达及临床意义

目的 探讨前列腺素(PG)E2及IL-1β在中耳胆脂瘤中表达及其相关性.方法采用酶联免疫法和放射免疫法测定胆脂瘤上皮组织匀浆液中及正常外耳道皮肤组织匀浆液中IL-1β、PGE2水平.结果在12例中耳胆脂瘤上皮及10例正常外耳道皮肤组织中,IL-1β的表达分别为(313.562±52.924)、(141.414±31.335)pg/ml, PGE2的表达分别为(1672.371±201.342)、(886.469±130.915)pg/ml(P均<0.01).在胆脂瘤上皮中,IL-1β表达与PGE2表达呈正相关(r=0.540,P<0.05).结论 IL-1β及PGE2在中耳胆脂瘤上皮中存在高表达.IL-1β可诱导PGE2表达,两者协同促进胆脂瘤上皮增生.     

前列腺素E2调节大鼠成骨细胞RANKL/OPG mRNA表达的信号通路研究

目的 探讨前列腺素E2(PGE2)对大鼠成骨细胞RANKL和OPG mRNA表达的调节及其信号转导机制.方法 培养大鼠UMR106成骨细胞,采用不同浓度的PGE2、不同信号通路的激动剂和阻断剂干预细胞不同时间后收集细胞提取总RNA,实时荧光定量PCR检测RANKL和OPG mRNA的表达水平.结果PGE2、Forskolin和db-cAMP均可促进RANKL mRNA表达,抑制OPG mRNA的表达.PMA促进RANKL和OPG mRNA表达而A23187则下调RANKL和OPG表达.KT-5720下调PGE2诱导的RANKL mRNA表达约53%(P<0.001),而chelerythrine、维拉帕米、W7、KN-62和PD98059则对PGE2>诱导的RANKL mRNA表达无明显影响(P>0.05).KT-5720(P=0.01)、维拉帕米(P=0.029)和W7(P<0.001)均能部分阻断PGE2对OPG mRNA表达的下调作用,KN-62、PD98059和chelerythrine则不影响PGE2对OPG表达的调节(P>0.05).结论 PGE2诱导的RANKL表达是由PKA信号通路介导的,而PKA和钙/钙调蛋白信号通路则介导了PGE2对OPG表达的抑制作用.     

前列腺素E1对肝硬变患者细胞因子IL-6,IL-8和TNF-alpha的影响及意义探讨

PGE1对各种不同肝损伤因子引起的肝损伤均具有保护作用,其疗效显著[1-5].但对肝硬变细胞因子的影响尚未查见报道.近年来研究表明,细胞因子在肝硬变发生发展中起着重要作用[6-10],已被引起广泛的重视,为探讨PGE1对肝硬变患者细胞因子IL-6,IL-8和TNF-α影响,达到防止肝细胞损伤,抑制肝纤维化的发展,我们进行了临床治疗观察及实验研究.旨在进一步阐明肝硬变的发病机制及为指导临床治疗提供科学的、客观的理论依据.     

前列腺素E1对肝硬变患者细胞因子IL-6,IL-8和TNF-α的影响及意义探讨

PGE1对各种不同肝损伤因子引起的肝损伤均具有保护作用,其疗效显著[1-5].但对肝硬变细胞因子的影响尚未查见报道.近年来研究表明,细胞因子在肝硬变发生发展中起着重要作用[6-10],已被引起广泛的重视,为探讨PGE1对肝硬变患者细胞因子IL-6,IL-8和TNF-α影响,达到防止肝细胞损伤,抑制肝纤维化的发展,我们进行了临床治疗观察及实验研究.旨在进一步阐明肝硬变的发病机制及为指导临床治疗提供科学的、客观的理论依据.     

补骨脂素对成骨细胞核因子-κB受体激活配体和骨保护素表达的影响

目的研究补骨脂素(psoralen,PSO)对体外培养的小鼠成骨细胞(OB)分化及核因子-κB受体激活配体(receptor activator of nuclearfactor-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法取第1代BALB/c小鼠颅盖骨成骨细胞,将PSO以0.1、1、10μmol/L3种浓度分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞培养液中,MTT法观察各组药物对成骨细胞的增殖作用并绘制细胞生长曲线;用PNPP法测定成骨细胞内碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性;RT-PCR法检测成骨细胞OPG和RANKL的转录水平。结果细胞生长曲线显示各组成骨细胞数量均随时间延长而增加,中、高浓度PSO能显著提高成骨细胞的ALP活性,促进OPG、RANKL的表达(P<0.05),OPG/RANKL升高(P<0.05)。结论低浓度PSO(0.1μmol/L)对骨更新作用不明显,而中、高浓度PSO(1、10μmol/L)能通过上调OPG、RANKL mRNA表达及OPG/RANKL比例,促进成骨细胞的生成功能,增强骨更新。     

AT2R通过NF-κB信号对人膝骨关节炎滑膜组织成纤维样细胞中IL-6、IL-1β表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ型受体(AT2R)在膝骨关节炎(OA)滑膜组织中表达及其调控成纤维样滑膜细胞(FLS)中炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β表达的潜在机制。方法以54例OA患者手术切除膝关节滑膜组织为OA组,以36例正常膝关节滑膜标本为对照组,采用Western印迹检测滑膜组织中AT2R蛋白表达;分别从正常膝关节滑膜标本和膝关节炎滑膜组织中分离正常人成纤维样滑膜细胞(H-FLS)和OA患者成纤维样滑膜细胞(OA-FLS)。并用Western印迹检测CD14、CD90、波形蛋白(Vimentin)表达;Western印迹检测IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α对H-FLS和OA-FLS中AT2R表达影响;OA-FLS细胞沉默AT2R和激活AT2R后,qPCR检测IL-6、IL-1β表达变化,荧光素酶报告基因实验检测核因子(NF)-κB活性变化;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力变化。结果与对照组相比,OA组中AT2R表达显著增加(P0.05)。与Blank组相比,TNF-α组、IL-1β组及IL-1β+TNF-α组H-FLS细胞及TNF-α组、IL-1β+TNF-α组OA-FLS细胞中AT2R表达均显著增加(P0.05)。与NC组相比,siAT2R组IL-6、IL-1βmRNA表达明显增加(P0.05),而AT2R agonist组IL-6、IL-1βmRNA表达显著降低(P0.05),与Control组相比,TNF-α组、siAT2R组NF-κB p65活性显著增加(P0.05),AT2R agonist组NF-κB p65活性明显被抑制(P0.05)。与Blank组相比,在48 h、72 h时TNF-α组、siAT2R组OA-FLS细胞增殖能力显著增强(P0.05),而AT2R agonis组细胞增殖能力被显著抑制(P0.05)。结论 AT2R激动剂可能成为临床治疗OA患者的一种新的治疗方法策略。     

白细胞介素-6通过反式信号通路诱导脐动脉平滑细胞成骨样分化及钙化

目的:探讨IL-6诱导人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）成骨样分化及钙化的跨膜信号转导机制。方法:体外培养HUASMC,分别给予IL-6、IL-6+可溶性IL-6受体（sIL-6R）、IL-6+sIL-6R+可溶性gp130（sgp130）刺激,设空白对照。茜素红及Von Kossa染色检测钙化水平,免疫印迹检测钙化相...     

骨保护素配体在燃煤型氟中毒大鼠骨组织中的表达

目的观察骨保护素配体(osteoprotegerin ligand,OPGL)在燃煤型氟中毒大鼠骨组织中的表达,(?)讨燃煤型氟中毒对大鼠OPGL表达的影响。方法以SD大鼠为研究对象,按体质量均衡随机分为5组(组内雌雄各半)：高氟组、高氟偏食组、低氟组、低氟偏食组、对照组(实验中所设偏食组为相对于对照组的低钙偏食)。以氟中毒病区煤烘玉米为主要饲料,复制氟中毒动物模型。对其胫骨干骺端进行常规组织切片,HE染色观察组织学改变；用免疫组织化学方法检测OPGL在大鼠胫骨干骺端的表达。氟离子选择电极法测定大鼠牙氟、骨氟。结果①OPGL表达水平：高氟组(118．62±1．27)、高氟偏食组(97．62±1．22)、低氟组(156．25±1．02)、低氟偏食组(145．25±1．25)大鼠干骺端OPGL表达增高,与对照组(189．23±1．25)比较差异有统计学意义(P＜0．05)。高氟偏食组与高氟组、低氟偏食组与低氟组比较,OPGL表达升高且差异有统计学意义(P＜0．05)。②骨病理改变：高氟、低氟组大鼠骨皮质厚度增加、密度增高,骨小梁成骨细胞数轻度增加,湿示成骨活跃：高氟偏食组大鼠胫骨骨皮质密质骨出现松质化。③骨密度：高氟偏食组大鼠骨密度低于对照组(P＜0．05),其余各实验组高于对照组,高氟组、低氟组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0．05)。④牙氟、骨氟：各染氟组牙氟、骨氟均高于对照组(P＜0．05)。结论①过量氟造成骨转换增高,氟可通过增强OPGL的表达来加强破骨细胞的活性；②低钙偏食可使氟骨症破骨性骨吸收增强。     

重组人结缔组织生长因子对人成骨细胞骨保护素/RANKL表达的影响

目的 研究重组人结缔组织生长因子(CTGF)对体外培养的人成骨细胞骨保护素/RANKL(receptor activator of NF-κB ligand)表达的影响,并探讨重组人CTGF调节骨保护素/RANKL表达的信号转导机制.方法 用重组人CTGF干预体外培养的人成骨细胞,采用Western印迹法检测骨保护素/RANKL蛋白表达水平的变化,同时观察重组人CTGF对人成骨细胞FAK、MAPK磷酸化的影响.结果 重组人CTGF可呈时间-剂量依赖性抑制人成骨细胞RANKL的表达,200 ng/ml重组人CTGF作用24～48 h达最大抑制效果,而对人成骨细胞骨保护素的表达无明显影响.重组人CTGF可明显增强p38MAPK磷酸化,并减少FAK磷酸化,重组人CTGF干预对ERK、JNK磷酸化无明显影响;p38MAPK阻断剂SB23058可阻断重组人CTGF对RANKL表达的抑制效应.结论 重组人CTGF通过增强p38MAPK磷酸化,减少FAK磷酸化下调人成骨细胞RANKL的表达.     

哮喘患者外周血单个核细胞NOD2 mRNA表达的研究

目的探讨外周单个核细胞NOD2 mRNA表达在哮喘发病机制中的作用以及与气道炎症的关系。方法将60例哮喘患者分为急性发作组和慢性持续期组,每组30人,经治疗症状体征好转后,作为临床缓解期组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和酶联免疫吸附测定(ELISA)法分别检测哮喘各组及健康对照组30人外周血单个核细胞核内NOD2 mRNA的表达量及血清IL-6的含量。结果急性发作期哮喘患者的NOD2 mRNA的表达量及IL-6的含量均明显高于慢性持续期哮喘患者(P0.05)。急性发作期和慢性持续期哮喘患者的NOD2 mRNA的及IL-6的表达,均明显高于健康对照组(P0.05)。急性发作期和慢性持续期哮喘患者经治疗后的NOD2 mRNA及IL-6的表达较各自治疗前水平明显降低,且均高于健康对照组水平,具有统计学意义(P0.05)。哮喘患者外周血单个核细胞核内NOD2 mRNA表达随血清IL-6含量呈正相关,相关系数r=0.85,P0.05。结论 NOD2和IL-6都参与了哮喘的气道炎症反应,且与哮喘患者的严度程度呈正相关。     

巴戟天多糖对去卵巢大鼠核因子-κB受体激活因子配体和骨保护素表达的影响

目的观察巴戟天多糖对去卵巢大鼠骨组织核因子-κB受体激活因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)mRNA表达的影响。方法成年雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、巴戟天多糖组,采用摘取双侧卵巢法建立骨质疏松模型,造模2 w后开始给药,给药3个月后观察各组大鼠骨密度(BMD),骨钙、骨磷含量,RANKL、OPG mRNA的表达水平。结果给药3个月后巴戟天多糖组能显著提高去卵巢大鼠的BMD和骨钙、磷的含量,上调OPG mRNA表达,下调RANKL mRNA表达,使RANKL/OPG值下降。结论巴戟天多糖对去卵巢所致的大鼠骨质疏松具有良好的防治作用,其机制可能与调控RANKL和OPG mRNA的表达,降低RANKL/OPG值有关。     

环氧合酶-1和前列腺素E2在多潘立酮对大鼠胃黏膜保护中的作用

目的　研究多潘立酮对大鼠胃黏膜损伤是否具有保护作用 ,并探讨胃黏膜细胞中环氧合酶 1(COX 1)及前列腺素 (PG)E2是否参与其中。方法　研究分为对照组和实验组。后者分别用多潘立酮 0 .5mg/kg、1mg/kg和 2mg/kg灌胃 ,3次 /d ,连续 3d。各组大鼠灌入无水乙醇后 ,肉眼观察胃黏膜损伤指数 (LI) ,光镜下观察黏膜缺损深度 ,并计算黏膜缺损深度与胃壁全层厚度百分比。放射免疫法测定各组胃黏膜PGE2的水平。免疫组织化学方法检测COX 1和COX 2蛋白表达水平并以平均吸光度值表示其强度。RT PCR检测胃黏膜COX 1和COX 2mRNA表达变化。结果　多潘立酮 1mg/kg组的LI及黏膜缺损深度与胃壁全层厚度百分比显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,0 .5mg/kg组和 2mg/kg的组LI亦显著低于对照组 (P <0 .0 5 )。多潘立酮 1mg/kg组大鼠胃黏膜COX 1蛋白表达水平及PGE2水平显著高于空白对照组 (P <0 .0 1)。各实验组和对照组在胃黏膜细胞内均无COX 2蛋白表达。三个实验组COX 1mRNA表达量与对照组比较差异均有显著性 (P <0 .0 1)。各组均未检测到COX 2mRNA表达。结论　多潘立酮对胃黏膜损伤具有保护作用 ,其机制之一可能与其增加胃黏膜COX 1mRNA和COX 1蛋白表达及促进胃黏膜PGE2分泌有关。     

NS398对人肝门部胆管癌QBC939细胞增殖及前列腺素E2的影响

目的观察选择性环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂NS398对肝门部胆管癌(hilar cholangiocarcinoma,HCC)QBC939细胞增殖的影响;检测经不同浓度NS398作用后HCC细胞培养液中前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的含量变化。方法体外培养人HCC QBC939细胞,加入不同浓度的NS398培养后,采用MTT法观察NS398对QBC939细胞增殖的影响;采用ELISA检测NS398作用后QBC939细胞的PGE2含量。结果 NS398对QBC939细胞的增殖有抑制作用,并在0~100μmol/L的浓度范围内呈剂量、时间依赖性(P0.05)。随着NS398浓度及时间的增加,QBC939细胞的PGE2含量明显降低(P0.01)。结论NS398可抑制人胆管癌QBC939细胞的增殖,并显著降低癌细胞中PGE2的含量。     

回药扎里奴思方对大脑中动脉闭塞模型大鼠白细胞介素-6、-2含量的影响

目的探讨回药扎里奴思方对脑缺血急性期再灌注损伤后大鼠脑内白细胞介素(IL)-6和IL-2含量的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、扎里奴思方组,除假手术组外其余各组均采用线栓法大脑中动脉闭塞(MCAO)复制脑缺血再灌注模型,用HE染色观察脑组织形态学改变,用酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫组化法测定各组大鼠脑组织中IL-6和IL-2的表达,并对各组进行神经功能评分。结果假手术组脑内有少量IL-6和IL-2;脑缺血再灌注后IL-6和IL-2的表达开始上升,IL-6在3 d时达到高峰;与模型组比较,尼莫地平组与扎里奴思方组均能显著降低大鼠神经功能评分,改善再灌注损伤后大鼠脑组织病理形态,减少IL-6和IL-2的表达(P<0.05);在7 d时,扎里奴思方的作用较尼莫地平显著(P<0.05)。结论扎里奴思方可明显抑制大鼠急性期脑缺血再灌注损伤后脑组织中IL-6和IL-2的含量,且与用药时间呈正相关,这可能是其脑保护作用机制之一。     

血小板活化因子对肾小球系膜细胞合成前列腺素E2的影响

目的：探讨血小板活化因子（ＰＡＦ）对肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）合成前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）的影响及其意义。方法：测定ＰＡＦ刺激对ＧＭＣ合成ＰＧＥ２的影响结果：ＰＡＦ刺激ＧＭＣ显著增加ＰＧＥ２的合成并呈剂量依赖性。１０＾－５ｍｏｌ／ＬＰＡＦ在５ｍｉｎ内即刺激ＧＭＣ合成ＰＧＥ２显著增加。刺激ＰＧＥ２合成的ＰＡＦ阈值为１０＾１０ｍｏｌ／Ｌ,刺激半量和最大量ＰＧＥ２合成的ＰＡＦ浓度分别约为１０＾－８ｍｏｌ／     

胃炎饮对胃溃疡大鼠胃黏膜前列腺素E2表达的影响

目的探讨胃炎饮对胃溃疡模型大鼠胃黏膜前列腺素E2(PGE2)表达的影响。方法采用冰醋酸腐蚀法建立实验性胃溃疡大鼠模型,以奥美拉唑为对照,观察胃炎饮对实验性胃溃疡大鼠胃黏膜溃疡面积和胃黏膜PGE2表达及含量的影响。结果与假手术组比较,模型组大鼠胃黏膜PGE2表达平均光度明显下降,平均灰度明显升高,同时PGE2含量明显下降(P0.01);与模型组比较,各用药组溃疡面积均明显缩小,平均光度明显升高,平均灰度明显下降,PGE2含量明显上升(P0.05);与奥美拉唑组比较,胃炎饮高剂量组溃疡面积明显缩小(P0.05),平均光度明显升高,平均灰度明显下降,PGE2含量明显上升(P0.05)。结论胃炎饮可促进胃溃疡大鼠胃黏膜PGE2的合成和分泌,提高胃黏膜PGE2含量,增强胃黏膜防御功能,促进溃疡愈合。     

1,25(OH)2D3对体外培养成骨细胞骨保护素mRNA表达的影响

维生素Ｄ体内活性形式 1,2 5 (ＯＨ) 2 Ｄ3具有促进骨吸收及骨形成作用。其骨吸收作用通过成骨细胞介导 ,然而机制尚未完全清楚。骨保护素 (ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ ,ＯＰＧ)是近年分离出的一种因子 ,由成骨细胞合成和分泌 ,在破骨细胞的分化形成中起信号传导作用〔1〕。我们于 2 0 0 0年 6～ 12月实验观察 1,2 5 (ＯＨ) 2 Ｄ3对体外培养乳鼠成骨细胞ＯＰＧ基因表达的影响 ,以探讨其对骨吸收功能的调节机制。　　一、材料与方法　　 1.细胞培养 :取新生 2 4ｈＳＤ大鼠颅骨 ,Ⅰ型胶原酶分阶段消化收集细胞 ,5 %ＣＯ2 、3 7℃培养 ,每…     

雌二醇对人成骨细胞护骨素、护骨素配体及其相关因子的调节

目的 观察17β雌二醇(17β—E2)和雌激素受体拮抗剂IC1182780(ICI)对人成骨细胞(HOB)表达护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)及其相关因子[肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、巨噬细胞集落刺激因子(TRAIL、M-CSF)]的影响，探讨它们在骨转换过程中的重要作用。方法 接种人成骨细胞，再分别用不同浓度17β-E2和ICI干预，用RT-PCR法检测基因表达情况，用Western blot分析法检测蛋白表达情况。结果 (1)17β-E2能上调人成骨细胞中OPG的表达，下调OPGL、M-CSF及TRAIL的表达；(2)ICI对被检基因有不同的调节活性，与17β-E2合用时，表现出对后者的拮抗作用或协同作用。结论 雌激素缺乏时，成骨细胞中OPG的表达减少，而OPGL、M—CSF和TRAIL等细胞因子的表达增加，使破骨细胞的数量和活性增加，导致骨吸收增强和骨量丢失，这可能是绝经后骨质疏松症的重要的发病机制之一；ICI在对雌激素受体调节中，具有拮抗和激动的双重效应，属一种选择性雌激素受体调节剂。