输精管结扎对大鼠生精细胞凋亡的影响

目的:研究输精管结扎对大鼠曲细精管生精细胞凋亡的影响及其机制。方法:将大鼠输精管结扎,1～10周后利用免疫组化法检测曲细精管生精细胞Bax和Bcl-2的表达情况,并应用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术检测生精细胞的凋亡数目。结果:免疫组化法显示结扎后大鼠生精细胞Bcl-2的表达同假手术组比较无明显差异,而Bax的表达明显升高。结扎后不同时期组与同期假手术组比较,TUNEL法显示生精细胞凋亡数前者均高于后者(P<0.05)。结论:输精管结扎会导致大鼠曲细精管生精细胞凋亡数增加。     

生精细胞的凋亡

睾丸生精细胞的凋亡是生精过程中的生理现象，对维持正常精子数量起了一个重要作用。现证明它与年龄、激素以及特殊的生精上皮时相有关。睾丸生精过程中凋亡现象的研究，将对男性生育调控有一定意义。     

锰对大鼠生精细胞凋亡及caspase-3表达的影响

[目的]研究染锰大鼠睾丸生精细胞凋亡和caspase-3表达的变化。[方法]雄性SD大鼠48只随机分为6组:空白对照组,15mg/kg、30mg/kgMnCl2组。8只/组。15mg/kg、30mg/kgMnCl2组分别染锰(MnCl2·4H2O)4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水(NS),给锰及生理盐水途径均为腹腔注射,5d/周,1次/d,大鼠分别于第4周末和第6周末处死,取睾丸和附睾作以下检测:①检测精子数量;②应用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术(terminal deoxynucleotidy transferase mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测睾丸生精细胞凋亡指数(apoptosis index,AI);③免疫组组织化学链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(streptavidin-biotin-peroxidase complex,SABC)法检测生精细胞caspase-3表达。[结果]①与空白对照组比较,各染锰组精子数量均显著降低(P﹤0.05),生精细胞AI均升高(P﹤0.05),caspase-3阳性细胞率均显著升高(P﹤0.05)。②染锰剂量相同,染锰6周组与染锰4周组比较,精子数量均显著降低,生精细胞AI与caspase-3阳性细胞率均显著升高(P﹤0.05)。③染锰时间相同,30mg/kgMnCl2组与15mg/kgMnCl2组比较,精子数量均显著降低(P﹤0.05),生精细胞AI和caspase-3阳性细胞率均显著升高(P﹤0.05)。④各组大鼠精子数量和生精细胞AI呈负相关(r=-0.700,P﹤0.05),和生精细胞caspase-3阳性细胞率呈负相关(r=-0.870,P﹤0.05),生精细胞AI和caspase-3阳性细胞率呈正相关(r=0.855,P﹤0.05)。[结论]过量锰诱发大鼠生精细胞caspase-3高表达,从而导致凋亡增加,精子数量减少,这可能是大鼠生精障碍的主要机制。     

精索静脉曲张对青春期大鼠生精细胞凋亡的影响

目的研究实验性精索静脉曲张对青春期大鼠生精细细胞凋亡的影响,探讨精索静脉曲张影响睾丸生精功能的机制。方法通过部分结扎左肾静脉建立青春期大鼠左侧精索静脉曲张模型;用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测睾丸生精细胞凋亡。结果曲张组的细胞凋亡指数显著高于假手术对照组(P<0.001),且双侧睾丸组织均见大量生精细胞凋亡。结论实验性精索静脉曲张所引起的双侧睾丸生精细胞凋亡增加,可能是精索静脉曲张影响睾丸生精功能的机制之一。     

砷染毒大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力的变化

目的观察不同剂量的染砷(As2O3)大鼠生精细胞凋亡及端粒酶活力表达的变化。方法将40只健康雄性清洁级SD大鼠随机分成4组,分别为低、中、高剂量(0.375、0.75、1.5 mg/kg)砷染毒组和对照组,以灌胃法连续染毒16周后计算各组大鼠精子头计数,并计算睾丸脏器系数、每日精子生成量(DSP)。采用TUNEL原位细胞杂交方法检测大鼠生精细胞凋亡,免疫组化法检测大鼠生精细胞端粒酶活力的表达。结果与对照组比较,中剂量组(0.75 mg/kg)和高剂量组(1.5 mg/kg)睾丸精子头计数和DSP均显著降低(P<0.01),生精细胞凋亡指数(AI)显著升高(P<0.01),生精细胞端粒酶活力表达明显降低(P<0.01);每日精子生成量与生精细胞凋亡呈负相关(r=-0.563,P<0.01);生精细胞凋亡与端粒酶活力呈负相关(r=-0.896,P<0.01)。结论一定剂量的As2O3可通过抑制生精细胞端粒酶活力,促进生精细胞凋亡而导致精子生成量减少,产生雄性生殖毒性。     

镉对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响及锌的保护作用

为探讨对镉对睾丸结构和功能损害及锌对其保护作用的分子机制,研究镉对生精细胞凋亡的影响和锌的保护作用,选用２月龄Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠２４只,均分为染镉组、镉加锌组和对照组,分别自腹腔注射氯化镉（２ｍｇ／ｋｇＢＷ）,注射氯化镉同时及其前后２ｈ各注射醋酸锌一次和等量生理盐水,７ｄ后采用原位缺口平移技术（ＩＮＳＴ）检测各组睾丸生精细胞凋亡数目的变化。结果显示与对照组相比,染镉组大鼠睾丸生精细胞凋亡数目明显     

锰诱导的大鼠生精细胞凋亡通路的探索研究

[目的]研究锰对大鼠生精细胞caspase-3表达的影响,探讨锰对大鼠生精细胞caspase-3表达作用的机理.[方法]雄性SD大鼠(体重120±10 g)24只随机分为3组:空白对照组,15 mg/kg和30 mg/kgMnCl2组.8只/组.MnCl2组分别染锰(MnCl2·4H2O)4 w,空白对照组给予等容NS,给药途径均为腹腔注射,5 d/w,1次/d,于第4w末处死,免疫组化(SABC法)法检测睾丸caspase-3和cyto--c表达. [结果]与空白对照组比较,各染锰组cas-pase-3阳性细胞率均显著升高,cyto-c阳性细胞率均显著降低(P＜0.01).染锰时间相同,30 mg/kg MnCl2组与15 mg/kg MnCl2组比较,caspase-3阳性细胞率显著升高,cyto-c阳性细胞率显著降低(P＜0.01).各组caspase-3和cyto-c阳性细胞率呈显著负相关(r=-0.876,P＜0.01). [结论]锰可通过线粒体途径诱发大鼠生精细胞凋亡,且caspase-3的表达随染锰剂量的增加而增加,二者存在一定的剂量-效应关系.     

锰对大鼠生精细胞凋亡的影响

目的研究氯化锰对大鼠生精细胞凋亡的影响,探讨锰诱发生精细胞凋亡的机制。方法24只健康雄性SD大鼠随机分为3组。锰染毒组给MnCl2.4H2O(15 mg/kg,30 mg/kg)4周,对照组给予生理盐水,各组给药途径为腹腔注射,1次/d,5 d/周。应用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)技术检测睾丸生精细胞凋亡;免疫组化法检测生精细胞p53和Bcl-2蛋白的表达;化学比色法检测睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力。结果生精细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)在锰染毒15 mg/kg组为(1.05±0.19)%,锰染毒30 mg/kg组为(1.80±0.21)%,均明显高于对照组(0.48±0.01)%(P<0.01);p53阳性细胞率在锰染毒15 mg/kg组为(9.83±1.15)%,锰染毒30 mg/kg组为(18.23±2.15)%,均明显高于对照组(3.72±0.35)%(P<0.01);锰染毒30 mg/kg组Bcl-2阳性细胞率(21.26±2.50)%明显低于对照组(52.46±3.57)%和锰染毒15 mg/kg组(51.34±3.87)%(P<0.01)。锰染毒组睾丸组织SOD、CAT及GSH-Px活力均明显低于对照组(P<0.01)。结论锰诱导的p53高表达、Bcl-2低表达以及抗氧化能力的下降可能是大鼠生精细胞凋亡增加的重要原因之一。     

锰对大鼠睾丸抗氧化能力及生精细胞凋亡的影响研究

目的:研究氯化锰对SD大鼠睾丸抗氧化能力和生精细胞凋亡的影响。方法:24只健康雄性SD大鼠随机分为3组。染锰组给予MnCl2.4H2O(15mg/kg、30mg/kg)4周,对照组给予生理盐水,各组给药途径均为腹腔注射,每天1次,每周5天。应用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记技术检测睾丸生精细胞凋亡;化学比色法检测睾丸组织超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果:生精细胞凋亡指数染锰组明显高于对照组,且随染锰剂量的增加而升高(P<0.01);睾丸组织超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性均染锰组明显低于对照组(P<0.01)。结论:锰诱导的抗氧化能力下降可能是大鼠生精细胞凋亡增加的重要原因之一。     

低频电磁场对大鼠生精细胞凋亡基因表达影响

目的 探讨极低频电磁场对大鼠生精细胞凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响。方法 Wistar大鼠60只随机分为低剂量(0.1mT)、高剂量(12.8mT)电磁场暴露组及对照组,每组20只,分别有10只持续暴露2和12周;用苏木苏-伊红(H-E)染色及免疫组织化学法观察睾丸形态学和细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达的变化,用图像分析系统进行测定。结果 低、高剂量电磁场暴露组暴露2周Bax灰度值分别为(25.58±4.98),(39.17±4.33);Bcl-2灰度值分别为(68.12±3.64),(39.62±4.35);暴露12周Bax灰度值分别为(40.12±2.45),(62.32±5.90);Bcl-2灰度值分别为(55.78±2.43)(23.84±3.62)。结论 随着电磁场暴露频率的升高和时间的延长,大鼠生精细胞Bax的表达明显上调,Bcl-2的表达逐渐下调。     

芹菜对小鼠生精细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达影响

目的 探讨芹菜对小鼠生精细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 成年健康SPF级昆明种雄性小鼠72只,按体重随机分为4组:对照组、低、中、高剂量芹菜汁组,各组又随机分成3个时间组即:7、14、28d组,每组6只;以0.3mL不同浓度芹菜汁灌胃,对照组以0.3mL生理盐水灌胃.实验结束处死小鼠,取一侧睾丸,免疫组织化学法( SABC)检测小鼠睾丸生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 灌胃7d时,对照、低、中、高剂量芹菜汁组Bax蛋白表达平均光密度值分别为0.38、0.35、0.35和0.34,与对照组比较,各剂量芹菜汁组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05);灌胃28 d时,对照组Bcl-2蛋白表达平均光密度值为0.34,中、高剂量芹菜汁组分别为0.37和0.38,明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 本实验条件下未观察到芹菜对生精细胞的促凋亡作用,而Bcl-2抑制生精细胞凋亡的作用增强.     

丙烯腈对小鼠生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨丙烯腈(AN)暴露对小鼠睾丸生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响。方法将250只成年健康SPF级昆明种雄性小鼠,按体重随机分为阴性对照组、3个AN染毒组和阳性对照组,阴性对照组用生理盐水,各染毒组分别以1.25、2.50、5.00mg/kg AN腹腔注射(注射剂量为0.01ml/g BW),每天1次,连续5天,阳性对照组注射环磷酰胺40mg/kg一次。分别于首日染毒后的第7、14、21、28和35天采用颈椎脱臼法处死小鼠,采用免疫组织化学法(SABC)检测生精细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 5个观察时间点AN 2.50mg/kg组和21天AN 1.25mg/kg组Bcl-2平均光密度值均显著低于阴性对照组(P<0.05);除21天AN 1.25mg/kg组外,所有观察时间点AN各染毒组Bax平均光密度值均显著高于阴性对照组(P<0.05)。Bcl-2在中剂量组和阳性对照组各观察时间点降低幅度均较大;Bax在各剂量组的不同时间点均以14天时升高幅度最大。结论 AN可诱导生精细胞Bcl-2蛋白表达减弱,以AN 2.50mg/kg组最为显著;同时可诱导生精细胞Bax蛋白表达增强,以14天时变化幅度较明显。     

染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系

目的探讨染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为6组,即对照28d组、低剂量染毒28d组、高剂量染毒28d组、对照38d组、低剂量染毒38d组和高剂量染毒38d组。通过腹腔注射NaF溶液的方法建立氟中毒模型,采用酸浸-氟离子选择电极法测定睾丸氟含量,放射免疫的方法检测血清雌二醇水平,采用TUNEL方法检测凋亡的生精细胞。结果随着染毒剂量加大和时间延长,染氟大鼠血清雌二醇水平显著下降(P<005),睾丸氟含量显著升高(P<005),生精细胞凋亡率显著升高(P<005),且血清雌二醇水平与睾丸氟含量和生精细胞凋亡率均呈负相关(P<005)。结论氟在一定剂量和作用时间内可致血清雌二醇水平紊乱,是导致生精细胞凋亡的重要原因之一。     

Bcl-2蛋白家族与生殖细胞

自1985年发现Bcl-2基因至现在,对于Bcl-2蛋白及相关蛋白在凋亡中的调节功能研究取得了重大的进展。无论胚胎时期或出生后,哺乳动物的许多组织细胞都会出现凋亡,其中哺乳动物的性腺随生殖细胞的生长发育成熟,精原细胞和精母细胞是发生凋亡比率高的两个阶段。了解生殖细胞凋亡的出现以及调节机制,对于生物学及临床方面都有重大意义。该综述集中介绍Bcl-2蛋白家族在调节两性生殖细胞凋亡中的作用。     

芒柄花黄素诱导膀胱癌细胞凋亡作用

目的探讨芒柄花黄素诱导膀胱癌细胞凋亡的作用及机制。方法采用不同浓度(20、40、80 μmol/L)芒柄花黄素处理膀胱癌细胞, 采用噻唑蓝法观察芒柄花黄素对膀胱癌T-24和BIU-87细胞的增殖的抑制作用, 使用流式细胞术及Hoechst 33258染色检测T-24和BIU-87细胞凋亡率, 采用RT-PCR检测T-24细胞Bcl-2 mRNA表达;western blot检测T-24细胞p-p38蛋白激酶、Bcl-2蛋白含量变化。结果与对照组比较, 40、80 μmol/L芒柄花黄素组T-24和BIU-87细胞增殖率下降、细胞凋亡率明显升高, Hoechst33258染色显示T-24细胞呈凋亡状态;40、80 μmol/L 芒柄花黄素组T-24细胞Bcl-2 mRNA表达水平[(0.701±0.029)、(0.408±0.036)]均低于对照组, 差异均有统计学意义(P<0.01);与对照组比较, 20、40、80 μmol/L芒柄花黄素组T-24细胞p-p38蛋白激酶活性水平[(0.483±0.026)、(0.569±0.031)、(0.935±0.037)]均升高, Bcl-2蛋白含量[(0.998±0.034)、(0.591±0.030)、(0.426±0.027)]均降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论芒柄花黄素可诱导膀胱癌T-24和BIU-87细胞凋亡、抑制细胞生长, 其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达并活化p38蛋白激酶有关。     

镉对小鼠肾脏细胞凋亡的影响

目的 研究镉对小鼠肾脏细胞凋亡的影响。方法 将小鼠分成5组,分别注射0．9％生理盐水,80、160、240或320mg／kg的CdCl2溶液,连续6周,于染毒4周和6周后每组处死一半小鼠,测定肾脏系数,用流式细胞术检测细胞凋亡,用免疫组化法测Bcl—2。结果 染镉组小鼠肾脏系数较对照组显著增高,而且细胞凋亡率较对照组明显增高,Bcl—2蛋白表达明显下降。结论 镉可诱导小鼠肾脏细胞凋亡。     

神经酰胺诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的研究

目的探讨外源性神经酰胺诱导人结肠癌HT-29细胞的凋亡作用及对Bcl-2家族蛋白基因表达的影响。方法不同浓度C2-神经酰胺处理HT-29细胞,采用Hoechest荧光染色和琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bad和Bid基因表达水平。结果C2-神经酰胺诱导HT-29细胞发生核染色质断裂、出现凋亡小体等典型凋亡改变,50μmol/L神经酰胺作用12和24小时凋亡细胞率分别达到64·7%和81·3%。同时神经酰胺使Bax、Bad和Bid基因表达水平增高,使Bcl-2和Bcl-xl基因表达水平减弱,Bcl-2与Bax比值下降,呈现剂量-效应关系。结论外源性神经酰胺能通过上调或下调Bcl-2家族基因表达水平诱导人结肠癌HT-29细胞发生凋亡。     

砷对大鼠生精细胞DNA损伤及XRCC1表达影响

目的观察不同剂量三氧化二砷(As₂O₃)对成年大鼠生精细胞DNA损伤及其X射线修复交叉互补基因1(XRCC1)基因表达影响。方法40只健康雄性SD大鼠随机分为4组,对照组、低、中、高剂量As₂O₃组(0.375、0.75、1.5 mg/kg),灌胃法连续给药16周处死大鼠,应用单细胞凝胶电泳试验检测大鼠生精细胞DNA损伤,免疫组化法检测大鼠生精细胞XRCC1蛋白表达。结果对照组生精细胞平均尾长(1.04±0.61)μm,中、高剂量As₂O₃组可见部分细胞拖尾,平均尾长分别为(3.11±1.16)、(3.62±2.46)μm,明显长于对照组(P<0.01),细胞尾部DNA含量比及尾矩也明显增加(P<0.01);中、高剂量As₂O₃组XRCC1阳性细胞百分比分别为(11.13±7.06)%和(9.63±6.32)%,均较对照组的(15.49±8.23)%明显降低(P<0.05),XRCC1表达量随着染毒剂量增高而降低;DNA损伤与XRCC1表达呈负相关(r=-0.778,P<0.01)。结论一定剂量As₂O₃可通过抑制生精细胞XRCC1表达,诱导大鼠生精细胞DNA损伤,产生雄性生殖毒性。