氨基胍对2型糖尿病小鼠降血糖作用及减轻肾损伤研究

目的研究氨基胍对高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)致2型糖尿病小鼠降血糖作用及相关机制。方法成功复制2型糖尿病小鼠模型后,随机分成:糖尿病肾损伤对照组、氨基胍低、中、高剂量组(20,40,80 mg/kg),每组10只,连续干预60 d。末次给药后禁食12 h,采集血清检测空腹血糖(FBG),糖基化蛋白(GP),总胆固醇(TC)和收集尿液测定24 h尿蛋白(UP)及尿素氮(UN)。HE染色观察肾组织中肾小球的病理变化,Western blotting法检测肾脏组织中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)和羰甲基赖氨酸(CML)的表达。结果与糖尿病肾损伤对照组比较,氨基胍给药组有效降低2型糖尿病小鼠血糖水平(P0.01),减少糖基化蛋白和总胆固醇血清浓度(P0.01),降低尿液中尿蛋白及尿素氮含量(P0.01)同时,减轻肾脏损伤病情。此外,明显下调肾脏组织中RAGE和CML蛋白表达(P0.01)。结论氨基胍具有有效地降血糖作用及缓解肾损伤,其机制与增强肾脏清除能力及代谢功能而减轻肾损伤有关。     

L-精氨酸转运体-2的siRNA表达载体的构建及鉴定

目的:构建氨基酸转运体-2(CAT-2)的靶向小分子干扰RNA(siRNA)表达载体质粒,并测序鉴定,为下一步研究靶向siRNA对CAT-2蛋白表达和L-argine/iNOS/NO通路的影响建立基础。方法:根据L-精氨酸转运体CAT-2的mRNA序列及siRNA设计原则,并经BLAST比对,设计合成4对siRNA寡聚单链DNA,退火成双链dsDNA,用载体构建试剂盒BLOCK-iTTMPol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFP进行重组质粒构建,将4对dsDNA分别插入到siRNA表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR中,构建4个siRNA表达质粒,并转化至感受态细菌DH5。筛选阳性克隆并提取重组质粒后测序分析。结果:CAT-2的siRNA重组载体质粒测序结果证实表达载体构建成功。结论:L-精氨酸转运体CAT-2 siRNA表达载体质粒成功构建,为下一步研究靶向siRNA对CAT-2蛋白表达和L-arg/iNOS/NO通路的影响建立基础。     

氨基胍和维生素C对糖尿病大鼠免疫功能影响的实验研究

目的 观察氨基胍、维生素C对糖尿病大鼠免疫功能影响。方法 利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导建立Ⅰ型糖尿病大鼠模型，将实验用SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、维生素C治疗组、氨基胍治疗组、维生素C和氨基胍联合治疗组。治疗4周，观察治疗期间及治疗后大鼠的一般状况，检测血中IgG、IgM含量及外周血粒细胞数量的变化。结果 ①实验性糖尿病大鼠与正常组比较大鼠感染率增加；②氨基胍、维生素C均能不同程度的降低糖尿病大鼠的感染率；③两种药物均能不同程度的提高糖尿病大鼠IgG、IgM含量及外周血白细胞数量，两药联合使用有协同作用。结论 氨基胍和维生素C能降低糖尿病大鼠感染率，提高免疫功能。     

氨基胍、黄芩苷对糖尿病大鼠组织非酶糖化及肾脏细胞凋亡的影响

目的 探讨非酶糖化与糖尿病肾病(DN)发生发展的关系以及非酶糖化抑制剂对DN的治疗作用.方法 雄性Wistar大鼠40只,随机取10只为正常对照组,糖尿病组、糖尿病氨基胍[100mg/(kg·d)]治疗组、糖尿病黄芩苷[150mg/kg·d)]治疗组,其余30只腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)诱发糖尿病,随机分为16周后,处死大鼠,分离肾脏,测定组织非酶糖化,观察Bcl-2、Bax的表达,取部分肾皮质病理观察、电镜观察细胞凋亡的形态学变化.结果 糖尿病组肾脏皮质非酶糖化高于对照组(P<0.001),氨基胍治疗组[(139.18±36.41)AUF/mg]、黄芩苷治疗组[(135.12±44.32)AUF/mg]非酶糖化低于糖尿病组[(251.09±51.74)AUF/mg],差别有统计学意义(P<0.01),而血糖无明显变化.糖尿病组肾脏Bcl-2蛋白表达减少、Bax蛋白表达增加,氨基胍治疗组、黄芩苷治疗组的Bcl-2蛋白表达比糖尿病组增多,而Bax蛋白表达比糖尿病组减少.透射电镜下见糖尿病组肾脏肾小管上皮细胞呈典型的凋亡形态学改变,氨基胍治疗组、黄芩苷治疗组大鼠肾组织细胞凋亡改变明显减轻.糖尿病组肾小球基底膜增厚,系膜区域扩大,治疗组病变减轻.结论 非酶糖化抑制剂氨基胍、黄芩苷通过抑制非酶糖化,调节Bax、Bcl-2的表达,抑制细胞凋亡,明显改善糖尿病大鼠肾脏结构与功能,延缓DN的发展.     

镉对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能影响PGE2关系的实验研究

镉可影响小鼠腹腔巨噬细胞（Ｍφ）对鸡红细胞的吞噬功能，为了探讨前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）与这种吞噬功能的关系，经镉染一测定小鼠腹腔液ＰＧＥ２的水平。结果表明”投毒后２周，饮低镉组与对照组相比吞噬率、吞噬指数差异无显著性（Ｐ〉０．０５）；饮高匐组与对照组相比吞噬率、吞噬指数显著降低（Ｐ〈０．０１），消炎痛加高匐组与单纯高匐组相比吞率显著增高（Ｐ〈０．０５）；加消炎痛各组ＰＧＥ２水平均低于非消炎痛组（Ｐ     

镉对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能影响与PGE_2关系的实验研究

镉可影响小鼠腹腔巨噬细胞（Ｍ）对鸡红细胞的吞噬功能．为了探讨前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）与这种吞噬功能的关系，经镉染毒后测定小鼠腹腔液ＰＧＥ２的水平．结果表明：投毒后２周，饮低镉组与对照组相比吞噬率、吞噬指数差异无显著性（Ｐ＞０．０５）；饮高镉组与对照组相比吞噬率、吞噬指数显著降低（Ｐ＜０．０１）；消炎痛加高镉组与单纯高镉组相比吞噬率显著增高（Ｐ＜０．０５）；加消炎痛各组ＰＧＥ２水平均低于非消炎痛组（Ｐ＜０．０１），ＰＧＥ２水平与巨噬细胞吞噬率呈负相关（Ｒ＝０．６６６３，Ｐ＜０．０１）．上述实验结果表明，高剂量镉对小鼠巨噬细胞吞噬功能具有显著抑制作用，ＰＧＥ２在镉对Ｍ吞噬功能毒作用中起重要作用．     

丙烯腈对小鼠生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨丙烯腈(AN)暴露对小鼠睾丸生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达水平的影响。方法将250只成年健康SPF级昆明种雄性小鼠,按体重随机分为阴性对照组、3个AN染毒组和阳性对照组,阴性对照组用生理盐水,各染毒组分别以1.25、2.50、5.00mg/kg AN腹腔注射(注射剂量为0.01ml/g BW),每天1次,连续5天,阳性对照组注射环磷酰胺40mg/kg一次。分别于首日染毒后的第7、14、21、28和35天采用颈椎脱臼法处死小鼠,采用免疫组织化学法(SABC)检测生精细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 5个观察时间点AN 2.50mg/kg组和21天AN 1.25mg/kg组Bcl-2平均光密度值均显著低于阴性对照组(P<0.05);除21天AN 1.25mg/kg组外,所有观察时间点AN各染毒组Bax平均光密度值均显著高于阴性对照组(P<0.05)。Bcl-2在中剂量组和阳性对照组各观察时间点降低幅度均较大;Bax在各剂量组的不同时间点均以14天时升高幅度最大。结论 AN可诱导生精细胞Bcl-2蛋白表达减弱,以AN 2.50mg/kg组最为显著;同时可诱导生精细胞Bax蛋白表达增强,以14天时变化幅度较明显。     

2-氨基-4-(S-丁基磺酰亚氨)丁酸对汞急性毒作用影响的实验研究

目的　研究 2 -氨基 - 4 - (S -丁基磺酰亚氨 )丁酸 (BSO)对汞急性毒作用的影响 ,探讨汞的毒作用机制。方法　 32只Wistar大鼠随机分成 4组 :对照组 ,皮下注射生理盐水 ;汞染毒 1组和 2组 ,分别皮下注射HgCl2 溶液 (0 75 ,1 5mg/kg) ;BSO预处理组 ,腹腔注射BSO (0 5mmol/kg) ,4h后皮下注射HgCl2 溶液 (0 75mg/kg)。测定肝、肾皮质和尿中汞含量 ,尿N -乙酰 - β -D氨基葡萄糖苷酶 (NAG)、碱性磷酸酶 (ALP)、乳酸脱氢酶 (LDH)活力和蛋白含量 ,肝和肾皮质谷胱甘肽 (GSH)和丙二醛 (MDA)含量。结果　对照组、汞染毒 1组和 2组尿NAG活力分别为 4 3 6 5 ,6 1 0 6 ,89 2 7U/ gCr ,尿ALP活力分别为2 4 5 2 ,6 2 98,93 0 5U/ gCr,尿LDH活力分别为 0 85 ,6 5 0 ,18 17U/ gCr,尿蛋白含量分别为 0 77,1 2 1,2 2 9mg/ gCr,肾皮质GSH含量分别为 9 0 0 ,12 96 ,16 0 2 μmol/ g蛋白 ,肾皮质MDA含量分别为10 2 2 2 ,12 5 99,2 0 6 34nmol/ g蛋白。BSO预处理组尿NAG、ALP、LDH活力和蛋白含量明显高于对照组和汞染毒 1组 (P <0 0 5 ) ,肝、肾皮质GSH含量明显低于汞染毒 1组 (P <0 0 5 ) ,肝脏MDA含量高于对照组 (P <0 0 5 )和汞染毒 1组 ,肾皮质MDA含量明显高于对照组和汞染毒 1组 (P <0 0 5 )。结论　BS     

5-氨基乙酰丙酸对内质网应激水平及肥胖小鼠糖代谢的影响

[目的]探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)对内质网应激水平及肥胖小鼠糖代谢的影响及相关分子机制. [方法]将10只8周龄C57BL/6J小鼠适应性喂养1周后,高脂饲料喂养16周诱导造模肥胖小鼠,将肥胖小鼠随机分为5-ALA处理组[5-ALA灌胃5mg/(kg·d)]和对照组[磷酸盐缓冲液(PBS)灌胃1mL/(kg·d)],连续9周,期间每周于空腹12h后尾静脉取血检测小鼠的空腹血糖.9周后分离小鼠的肝脏和附睾脂肪组织提取RNA和蛋白,检测小鼠肝脏和脂肪组织中内质网应激相关基因C/EBP同源蛋白(CHOP)、X-盒结合蛋白1s(XBP-1s)、重链结合蛋白(BiP)、内质网Dnaj同系物4(ERdj4)的表达水平.[结果] 5-ALA处理小鼠空腹血糖于第5周[(6.40±0.35)mmol/L]开始下降,波动变小,第7周5-ALA处理组空腹血糖水平[(6.02±0.17) mmol/L]低于对照组[(6.54±0.05) mmol/L](P＜0.05).实时聚合酶链反应(real-timePCR)结果显示,5-ALA可抑制由于肥胖导致的脂肪组织中XBP-1s的高表达(5-ALA处理组2-△△CT为0.029±0.017,对照组为0.029±0.006),P＜0.05; western blotting结果亦显示5-ALA处理组小鼠XBP-1s水平低于对照组. [结论]5-ALA可能通过抑制白色脂肪组织中内质网应激通路IRE1-XBP-1通路缓解内质网应激水平,改善小鼠的血糖代谢.     

小鼠急性经口暴露1，1-二氨基-2，2-二硝基乙烯的组织分布及代谢特征

为研究小鼠急性经口暴露1，1-二氨基-2，2-二硝基乙烯（FOX-7）的组织分布及代谢特征，将18只KM小鼠随机分为空白组和140、350 mg/kg FOX-7染毒组，单次经口灌胃染毒，采用生物发光成像技术分析发现，FOX-7于小鼠肾脏蓄积约4 h后经肾脏代谢，并较为清晰地展示出小鼠急性经口暴露FOX-7后的组织分布及代谢数据。     

休克大鼠血管外膜阳离子氨基酸运体表达

目的观察败血症休克大鼠主动脉外膜阳离子氨基酸转运体(CAT-1、CAT-2B)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达。方法雄性Wistar大鼠盲肠结扎并穿孔复制败血症休克模型。逆转录-聚合酶链(RT-PCR)方法测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CAT-1、CAT-2B mRNA表达水平。结果败血症休克大鼠表现为严重的心功能降低、低血糖和高乳酸血症。血管外膜CAT-1、CAT2B、和iNOS的mRNA水平均比假手术组明显上调(均P<0.01)。结论败血症休克时血管外膜阳离子氨基酸转运体和诱导型一氧化氮合酶基因表达上调。     

严重创伤对肠上皮细胞中性氨基酸载体ASCT2表达的影响

目的:研究用肠上皮细胞系Caco-2定量分析在严重创伤情况下氨基酸的转运变化及其载体蛋白表达情况.方法:体外培养肠上皮细胞系Caco-2,首先分析其细胞膜表面Na -依赖性中性氨基酸转运及其转运载体功能特性.将细胞置于缺氧、营养剥夺和缺血等创伤条件下,继续培养1～6 h,观察其刷状缘膜囊氨基酸转运及其相应转运载体蛋白及mRNA表达情况.结果:Caco-2细胞膜表面Na -依赖性L-丙氨酸的转运速率,高于L-谷氨酰胺(876±67.5) pmol/mg 蛋白·min-1 vs (635±52.8) pmol/mg 蛋白·min-1,P＜0.01).在主要的中性氨基酸载体中,仅仅成功扩增出ASCT2的mRNA条带.与对照组相比,在营养剥夺及缺血条件下,L-丙氨酸和L-谷氨酰胺的转运速率明显下降(P＜0.01),而缺氧对氨基酸转运无明显影响.这种变化主要引起转运动力学Vmax值下降,Km值无明显变化.与对照组相比,营养剥夺及缺血条件下相关转运载体蛋白及mRNA表达下降.结论:严重创伤对Na -依赖性中性氨基酸转运及关键性转运载体调控特点不同.这对临床上危重症病人特殊的营养底物需求,可能提供积极的理论依据.     

混合氨基酸铜络合物杀菌剂致突变作用的研究

本文报道农药混合氨基酸铜络合物杀菌剂致突变作用的实验研究。结果表明,Ames试验阴性,外周血淋巴细胞微核率实验组与阴性对照组无显著性差异,对小鼠性别无选择性。初级精母细胞染色体的断片和易位率与对照组间无显著性差异,X—Y早熟分离率、常染色体早熟分离率均未超出正常允许值。因此,在本实验条件下混合氨基酸铜络合物未见致突变效应。     

不同辐照方式对IL-4刺激的RAW264.7细胞MMP-2/9和VEGF表达的影响

目的 研究不同辐照方式对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分泌基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和血管内皮生长因子（VEGF）的影响,为肿瘤的预后影响因素研究提供依据。方法 实验分为两个部分,第一部分用0、2、5、10 Gy X射线照射细胞24 h后给予IL-4刺激12 h,第二部分用IL-4刺激3 h后用0、2、5、10 Gy X射线照射9h,Western blot方法检测RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF蛋白的表达情况。结果 照射+IL-4组,随着受照剂量的增加,RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF表达量增加（P<0.05）,存在剂量-反应关系,并且MMP-2和VEGF存在强相关性（P<0.001）,MMP-9和VEGF也存在强相关性（P<0.001）;IL-4+照射组,随着受照剂量的增加,RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF表达量增加（P<0.05）,存在剂量-反应关系,并且MMP-2和VEGF存在强相关性（P<0.001）,MMP-9和VEGF也存在强相关性（P<0.001）;与照射+IL-4组比较,IL-4+照射组RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF的增加更显著（P<0.05）。结论 电离辐射能导致RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF表达增高,不同辐照方式对RAW264.7细胞MMP-2/9和VEGF表达的影响不同,本研究为肿瘤的治疗提供作用靶点。     

氨基酸复合制剂改善生长发育的动物实验研究

目的:研究氨基酸复合制剂对仔鼠生长发育的影响。方法:采用雄性SD仔鼠每天经口给予氨基酸复合制剂,剂量分别为0、250、5001、000 mg/kg体重,并于第1天、第14天、第28天、第42天测量大鼠的体重、身长,计算每周食物利用率和总食物利用率,结果:与对照组相比,氨基酸复合制剂各剂量组大鼠在体重、身长和食物利用率等生长发育指标差异有显著性,结论:氨基酸复合制剂具有促进仔鼠生长发育作用。     

精氨酸对大肠癌患者免疫功能及肿瘤细胞增殖活性的影响

目的探讨精氨酸(Arg)对大肠癌患者免疫功能及肿瘤细胞增殖活性的影响. 方法大肠癌患者34例,随机分2组.实验组静脉输注Arg 25 g/d、连续3 d.检测细胞免疫指标T细胞亚群,NK细胞活性,淋巴细胞转化率;红细胞免疫指标C3b受体花环率(C3bERR),免疫复合物花环率(ICR), 循环免疫复合物(CIC)以及体液免疫指标.免疫组织化学方法和流式细胞仪研究肿瘤细胞增殖活性的变化. 结果实验组CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞活性、C3bRR均有提高,尤以CD4+、NK细胞活性提高明显(P<0.01);淋巴细胞转化率和CIC亦有改善,但仅组内比较差异显著(P<0.05); C3bRR变化与NK细胞活性变化之间呈正相关(r=0.5804,P<0.05);增殖细胞核抗原(PCNA)表达显著下降,由55.8%降至42.6%,(P<0.01),S期%及(S+G2+M)期%亦显著降低(P<0.05),而对照组各指标均无显著变化(P>0.05). 结论短期应用药理剂量的Arg可以改善大肠癌患者的细胞免疫、红细胞免疫指标,抑制肿瘤细胞的增殖活性.     

肠黏膜刷状缘中性氨基酸载体ASCT2的结构和功能特点

ASCT2是肠黏膜刷状缘的一种Na 依赖性中性氨基酸载体,它的功能主要是转运中性氨基酸,如丙氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺等.对ASCT2分子结构、功能特点和调控特性等的研究,有助于对肠道功能的认识,并为临床短肠综合征(SBS)及其他肠功能障碍疾病提供新的治疗对策.     

介孔纳米SiO2致小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞毒性与氧化损伤

[目的]探讨介孔纳米SiO2对小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞的毒性和氧化损伤作用。[方法]设4个浓度组（2.5、10、50、100I.tg／mL）和生理盐水对照组,染毒24h后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法观察细胞毒性,并根据染毒后细胞的总蛋白（TP）、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的变化情况分析介孔纳米SiO2的细胞毒性和氧化损伤作用。[结果]10、50和100μg／mL浓度组细胞存活率随着染毒浓度的升高而降低,差异有统计学意义;50、100μg／mL浓度组细胞及其上清液中TP、LDH、NO和MDA含量随染毒浓度增加而升高,而GSH和SOD含量降低;而且与细胞发生融解破碎、间隙加大等形态学改变情况相符。[结论]介孔纳米SiO2对体外培养巨噬细胞株RAW264.7具有细胞毒性和氧化损伤作用,且随剂量的加大而增强。     

Fatty acid and amino acid composition of raw and hot smoked sturgeon (Huso huso,L. 1758)

Changes in fatty acid and amino acid composition in hot smoked sturgeon (Huso huso, L. 1758) were studied. The sturgeon was smoked for 20 min at 30°C, followed by 90 min at 50°C and 40 min at 80°C. The palmitic acid (C16:0) and stearic acid (C18:0) increased (P<0.05) from 17.70% to 27.52% and from 7.49% to 13.63% after smoking, respectively. The oleic acid content in smoked sturgeon decreased from 28.29% to 25.93%, but no change (P>0.05) was observed in the total monounsaturated fatty acid composition of fish after smoking. Total polyunsaturated fatty acid, eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid contents decreased from 21.03% to 4.93%, from 4.65% to 0.49% and from 12.41% to 0.51% in sturgeon after smoking, respectively. The total n-3 and n-6 contents and the n-3/n-6 ratio of raw and smoked sturgeon were 17.48–1.35, 3.54–3.58 and 4.94–0.38, respectively. The atherogenic index and index of thrombogenicity values of raw and smoked sturgeon were determined as 1.01–0.31 and 1.93–1.24, respectively. The smoking process caused an increase (P<0.05) in aspartic acid>isoleucine>methionine>hidoksil-l-proline>valine, and a decrease (P<0.05) in glutamic acid>serine>threonine>leucine>tyrosine>histidine>lysine>proline. However, the changes in alanine, glycine and phenylalanine were insignificant (P>0.05).