铁皮石斛原球茎的诱导与增殖影响因素研究

目的:研究铁皮石斛原球茎诱导与增殖的最适培养基配方。方法:以铁皮石斛种胚为材料,以MS培养基为基本培养基,研究不同植物激素6-苄基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)和激动素(KT)或其组合及马铃薯提取液(PE)、香蕉提取液(BE)、苹果提取液(AE)和椰乳(CM)等有机添加物对铁皮石斛原球茎诱导和增殖的影响。结果:6-BA与NAA配比不利于种胚萌发,萌发度均低于MS培养基;添加10%的PE、CM有利于原球茎诱导;2,4-D对原球茎的生长和增殖不利,一定浓度的BA、KT和NAA有利于原球茎的增殖;KT浓度为1.0 mg/L时,原球茎40 d增殖倍数最高,达9.0;PE、CM、AE都能不同程度的促进原球茎的增殖,以10%的CM效果最好。结论:适宜铁皮石斛原球茎的诱导培养基为MS+10%CM+1.0 g/L AC;适宜铁皮石斛原球茎增殖的培养基为MS+1.0mg/L KT+0.2mg/L NAA+10%CM。     

铁皮石斛原球茎分化的研究概述

综述国内对铁皮石斛原球茎分化组织培养进行的深入研究,系统查阅国内近5年的文献20余篇。从培养基,激素,附加物等多个条件进行了概述,并提出了存在的问题及相应对策。     

铁皮石斛原球茎分化适宜培养基研究

试验了基本培养基、蔗糖浓度、天然提取物以及植物激素对铁皮石斛原球茎分化的影响。原球茎分化的适宜培养基为:1/2Ms+20%马铃薯提取液+2mg/LBA+0.2mg/L NAA+2%蔗糖。     

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响

目的：研究MF24真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响。方法 用不同方法制备的MF24真菌诱导子,以不同的剂量,在铁皮石斛原球茎生长的不同时间加入,并继续培养不同时间,观察诱导子对原球茎多糖含量的影响。结果 将MF24液体发酵的菌丝体作为诱导子（方法4）,以250mL·L-1（诱导子·培养基-1）的剂量（高剂量）加入培养基时, 铁皮石斛原球茎多糖含量最高（5.63%）,与对照（3.16%）相比提高了78.2%。在原球茎培养的第14d,以高剂量加入方法4制备的诱导子,继续培养2d,获得的多糖含量最高（5.92%）,与平均值（4.59%）相比提高了29.0%。结论：在铁皮石斛原球茎培养的后期加入MF24液体发酵菌丝体制备的诱导子,有利于提高原球茎的多糖含量。     

铁皮石斛原球茎高效再生体系的研究

目的以铁皮石斛Dendrobium officinale实生种子为外植体,研究铁皮石斛原球茎的增殖、分化、诱导生根等条件,筛选出适宜铁皮石斛原球茎高效再生的诱导条件,建立高效的再生体系。方法以铁皮石斛种子为外植体,在培养基上诱导产生原球茎,经过增殖培养后,转移到分化培养基中诱导芽苗分化,待分化的芽苗长到1~2 cm时,转移到生根培养基诱导生根,最终长成完整的再生植株。结果适宜铁皮石斛生长的基本培养基为1/2 MS;原球茎诱导的培养基为1/2 MS+1.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA+50 g/L土豆泥;原球茎增殖的最适培养基为1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,最高增殖系数达23;最佳分化培养基为1/2 MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,平均分化率最高达95%;最佳生根培养基为1/2 MS+0.3mg/L NAA+50 g/L土豆泥,生根率达100%。结论铁皮石斛实生种子是铁皮石斛离体繁殖的优良外植体来源。以铁皮石斛种子诱导获得的高效再生技术体系可以为铁皮石斛快速繁殖和工厂化生产提供理论基础。     

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响

目的：研究MF24真菌诱导子对铁皮石斛原球茎多糖含量的影响。方法用不同方法制备的MF24真菌诱导子,以不同的剂量,在铁皮石斛原球茎生长的不同时间加入,并继续培养不同时间,观察诱导子对原球茎多糖含量的影响。结果将MF24液体发酵的菌丝体作为诱导子（方法4）,以250mL·L^-1（诱导子·培养基。）的剂量（高剂量）加入培养基时,铁皮石斛原球茎多糖含量最高（5．63％）,与对照（3．16％）相比提高了78．2％。在原球茎培养的第14d,以高剂量加入方法4制备的诱导子,继续培养2d,获得的多糖含量最高（5．92％）,与平均值（4．59％）相比提高了29．0％。结论：在铁皮石斛原球茎培养的后期加入MF24液体发酵菌丝体制备的诱导子,有利于提高原球茎的多糖含量。     

悬浮培养的铁皮石斛原球茎在固体培养基上生长和分化的研究

目的:对悬浮培养的铁皮石斛原球茎在固体培养基上的生长和分化状况进行研究,以解决原球茎转接成活率低的问题。方法:选用不同基本培养基、碳源、培养基pH和激素,以生长鲜重和成苗数为指标,考察原球茎的生长和发育。结果与结论:降低固体基本培养基元素的含量有利于原球茎的生长,但不利于原球茎的分化。NAA,IAA,IBA和GA有利于原球茎的生长与分化,而偏酸的培养基pH和灭活的真菌不利于原球茎的生长与分化,灭活真菌容易引起原球茎的形态变异。     

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎的影响

 目的研究固体培养条件下一种真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长及总生物碱含量的影响。方法在铁皮石斛原球茎固体培养的后期加入内生真菌诱导子,并以加入等量葡萄糖溶液、麦麸培养基、蒸馏水为对照,考察真菌诱导子对原球茎鲜重、干重及总生物碱含量的影响。结果与加蒸馏水的对照相比,真菌诱导子、对照的麦麸培养基和葡萄糖溶液均可以极显著性地提高铁皮石斛原球茎的干重(P<0.01),分别提高了35.7%,34.3%和22.7%;并显著性地提高原球茎的折干率达20.7%,20.7%和16.3%(P<0.05)。与加真菌诱导子的原球茎相比,附加等量麦麸培养基和葡萄糖溶液培养的原球茎总生物碱含量分别降低了23%和17%。结论在铁皮石斛原球茎固体培养的后期加入真菌诱导子能促进原球茎的生长,并对总生物碱含量有一定的影响。     

铁皮石斛原球茎悬浮培养研究

目的　建立铁皮石斛原球茎悬浮系 ,作为人工种子繁殖体。方法　对铁皮石斛原球茎悬浮培养条件进行比较选择 ,并测定生长增殖状况。结果　悬浮培养的原球茎分散性好、整齐均一。悬浮培养的最适培养基为 1/ 4 MS+40 mg/ L Vc,p H5 .6 ,摇床转速为 5 0 r/ m in,15 d继代一次 ,黑暗培养。培养基中添加 0 .5 m g/ LABA预培养 30 d,原球茎的质量提高、同步性更好。结论　首次报道了铁皮石斛原球茎悬浮系的建立 ,为铁皮石斛大规模培养开创了新途径。     

铁皮石斛原球茎液体悬浮培养的研究

目的研究铁皮石斛Dendrobiumcandidum原球茎液体悬浮培养的可行性以及接种量和培养液体积对原球茎生长的影响。方法利用完全随机实验设计和正交试验设计研究不同基本培养基、接种量和培养液体积对原球茎生长的影响。结果无论鲜重还是干重,铁皮石斛原球茎在液体培养基上均极显著好于固体培养基(P<0.001)。不同基本培养基对铁皮石斛原球茎生长影响的研究表明,培养天数为30d时,对于鲜重67-V极显著好于B5(P<0.01),B5极显著好于1/2MS(P<0.01),1/2MS显著好于MS(P<0.05);对于干重67-V与B5没有显著性差异(P>0.05),B5极显著好于1/2MS(P<0.01),1/2MS极显著好于MS(P<0.01)。接种量和培养液体积对原球茎生长影响的研究表明,接种量影响最大,体积其次,互作最小,若不考虑互作,对于鲜重和干重,最佳处理为接种量6.194g/瓶 培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶;对于干重,若考虑互作,接种量为6.194g/瓶时,应选培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶,接种量为3.102g/瓶时,应选培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶,接种量为1.693g/瓶时,应选150mL/瓶或50mL/瓶。结论液体悬浮培养对铁皮石斛原球茎的生长有利,获得了最佳基本培养基、接种量和培养液体积的最佳搭配方案,表明通过液体悬浮培养生产铁皮石斛原球茎具有较好的开发应用前景。     

铁皮石斛原球茎多糖的研究

 目的 研究铁皮石斛原球茎多糖的理化性质。方法 经过水提醇沉、脱蛋白和透析等步骤获得铁皮石斛粗多糖（CDO）和原球茎粗多糖（CDOP）;CDOP经过纤维素DE-52和葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析获得6个均一多糖;用高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定均一多糖的纯度及相对分子质量;用气相色谱法（GC）分析粗多糖和均一多糖的单糖组成;用高碘酸氧化-Smith降解反应研究均一多糖的一级结构。结果 CDO主要由甘露糖和葡萄糖组成,物质的量比为4.29∶1.00;CDOP主要由半乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖组成,物质的量比为2.80∶1.00∶0.61。从CDOP中获得了6个质量均一的多糖,分别为DOPW-1（78×103）、DOPW-2（37×103）、DOPS1-1（287×103）、DOPS1-2（351×103）、DOPS1-3（335×103）和DOPS1-4（171×103）;它们的单糖组成及物质的量比等特点与DOP的相同;各均一多糖分子中的1→3糖苷键均主要由半乳糖组成,还含有阿拉伯糖、葡萄糖和鼠李糖;除DOPS1-4外,各均一多糖的一级结构中均不存在1→4糖苷键。结论 这6个均一多糖为首次从铁皮石斛原球茎中得到。     

真菌诱导子与铁皮石斛原球茎作用条件的优化

 目的优化MF24真菌诱导子与铁皮石斛原球茎相互作用过程中诱导子的处理方法、加入剂量、加入时间和作用时间等作用条件。方法用不同方法制备的MF24真菌诱导子,以不同的剂量,在原球茎生长的不同时间加入,并继续培养不同时间,观察它们对原球茎生物量和总生物碱含量的影响。结果用MF24的发酵液作为诱导子(方法3)时,收获原球茎的平均干重最高,为0.931 g(每瓶50 mL培养基),与对照相比提高了7.8%。以250 mL·L^-1(诱导子.培养基-1)的剂量(高剂量)加入真菌诱导子时,收获的平均鲜重和干重最高,分别为19.381 g和0.926 g,与低剂量组相比分别提高35.1%和11.8%。将方法3制备的诱导子以高剂量加入原球茎时,获得的总生物碱含量最高(0.048 6%),与对照(0.034 9%)相比提高了39.2%。在原球茎培养的第16周,以高剂量加入方法3制备的诱导子,继续培养6周,收获的平均鲜重和干重最高,分别为26.501 g和1.165 g。这一培养条件下原球茎的总生物碱含量最高(0.068%),与平均值(0.048 8%)相比提高了39.3%。结论MF24真菌诱导子与铁皮石斛原球茎的作用条件为:MF24液体发酵的发酵液作为诱导子,以250 mL·L^-1(诱导子.培养基-1)的剂量,在原球茎培养的第16周加入,继续培养6周后收获。     

固体培养铁皮石斛原球茎化学成分研究

目的：研究固体培养的铁皮石斛原球茎的化学成分。方法：利用硅胶、葡聚糖凝胶柱色谱法,分离化学成分,根据理化性质和MS、NMR等技术对化合物进行结构鉴定。结果：从固体培养的铁皮石斛原球茎甲醇提取物中分离鉴定了8个化合物,分别为：3-羟基-24-亚甲基-环羊毛脂烷（1）,3,5-二羟基-24-甲基-环羊毛脂烷（2）,3,5-二羟基-环羊毛脂烷（3）,β-谷甾醇（4）,豆甾醇（5）,N-阿魏酰基酪胺（6）,反式对羟基桂皮酸（7）和阿魏酸（8）。结论：化合物1,2,3和6均为首次从石斛属植物中分离得到。     

真菌诱导子处理的铁皮石斛原球茎HPLC-MS指纹图谱分析

 目的比较真菌诱导子处理的铁皮石斛原球茎与对照原球茎、铁皮石斛在化学成分上的差别。方法用高效液相色谱-质谱联用技术,比较诱导子处理的铁皮石斛原球茎、对照原球茎和人工栽培的铁皮石斛的氨性氯仿提取物中各成分的色谱峰面积积分值和相对积分面积。结果诱导子处理的铁皮石斛原球茎和对照原球茎中共有26个相同的化学成分,相对积分面积和分别为98.47%和97.54%,其中有19个成分在诱导子处理原球茎中的色谱峰面积积分值高于对照原球茎,它们中分别有5个和6个特有的成分,其中生物碱类成分分别为3个和1个。诱导子处理的原球茎和铁皮石斛中共有25个相同的化学成分,相对积分面积和分别为95.72%和96.44%,其中有17个成分在人工栽培的铁皮石斛中的色谱峰面积积分值高于诱导子处理的原球茎,有8个成分在诱导子处理的原球茎中的色谱峰面积积分值高于铁皮石斛,这其中有7个是生物碱类的成分。结论真菌诱导子处理后,没有改变原球茎的化学背景,但能提高原球茎中化学成分的含量。人工栽培的铁皮石斛的质量明显优于诱导子处理的原球茎。原球茎中的生物碱类成分对诱导作用较敏感。诱导子处理能促进原球茎中生物碱类成分的产生或特异性积累。     

真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长的影响

目的 研究固体培养条件下2种真菌诱导子对铁皮石斛原球茎生长的影响.方法 筛选获得铁皮石斛原球茎的继代培养基及其生长曲线.根据生长曲线,在原球茎生长的不同时期加入真菌诱导子,考察诱导子对原球茎鲜质量和干质量的影响.结果 铁皮石斛原球茎继代培养基:1/2MS 20%土豆 3%蔗糖 0.8%琼脂.与对照相比,第11周和第13周加入MF23诱导子使原球茎鲜质量分别提高了16.4%(P<0.01)和23.4%(0.01),干质量分别提高了6.7%A(P<0.05)和17.9%(P<0.01),继代培养基中加入MF23诱导子使原球茎干质量降低了9.9%(P<0.01).与对照相比,第11周和第13周加入MF24诱导子使原球茎鲜质量分别提高了17.7%(P<0.01)和12.0%(P<0.05),第11周加入MF24诱导子使原球茎干质量提高了9.2%(P<0.05),继代培养基中加入MF24诱导子使原球茎干质量降低了13.9%(P<0.01).结论 在原球茎培养的早期加入真菌诱导子,对原球茎的生长有一定抑制作用;在原球茎培养的后期加入真菌诱导子,对原球茎的生长有促进作用.     

铁皮石斛原球茎多糖粗品与纯品的体外抗氧活性研究

目的:研究铁皮石斛原球茎多糖粗品(DCPP)和纯品(DCPP3 c-1)的体外抗氧活性。方法:利用邻二氮菲-Fe2 氧化法、AP-TEMED法、硫代巴比妥酸法(TBA)及分光光度法分析原球茎多糖清除自由基及抗脂质过氧化作用。结果:铁皮石斛原球茎多糖DCPP和DCPP3 c-1能显著地清除.OH和O2-,对.OH清除作用具有较好的量效关系,抑制率达50%的浓度(IC50)分别为0.982 mg/mL和0.930 mg/mL;DCPP清除O2-的IC50为0.619 mg/mL;而DCPP3 c-1在浓度为0.615mg/mL时,有较强的清除效果,而后随着浓度的增大,清除率呈下降趋势。DCPP和DCPP3 c-1能抑制小鼠肝组织自发性氧化和Fe2 、H2O2诱导的脂质过氧化,其中DCPP的抑制作用最强;2种多糖可抑制小鼠肝线粒体脂质过氧化物MDA的产生以及减轻肝线粒体肿胀度。结论:铁皮石斛原球茎多糖粗品和纯品具有抗氧化活性。     

铁皮石斛种子诱导成苗试验

以铁皮石斛种子为外植体,可获得大量种苗,适于种子萌发的培养基:VW NAA 0.18 mg/L 6-BA0.53 mg/L GA 0.28 mg/L 蔗糖20 g/L 香蕉泥100 g/L 活性炭10 g/L,适于原生苗生根培养基:VW 6-BA0.2 mg/L NAA 1.5 mg/L 蔗糖20 g/L 香蕉泥100 g/L 活性炭10 g/L。     

铁皮石斛的种胚萌发及其离体繁殖研究

目的:研究铁皮石斛种胚萌发和快速繁殖的组织培养技术,为铁皮石斛的繁殖建立最佳培养条件。方法:以成熟的铁皮石斛种胚为研究材料,以1/2MS为基本培养基,接种到含有不同植物生长物质BA(6-苄基腺嘌呤)和NAA(萘乙酸)组合及含有马铃薯提取液、香蕉提取物及活性碳的培养基上,诱导铁皮石斛种胚的萌发、原球茎增殖、分化及试管苗生根。结果与结论:添加20%马铃薯液有利于种胚的萌发,种胚萌发率为79.37%;BA 1.0 mg.L^-1和NAA 0.1 mg.L^-1最有利于原球茎增殖,培养基中添加2%活性碳原球茎增殖倍数高;NAA有助于试管苗的生根,不同含量NAA以0.5 mg.L^-1时试管苗平均根数最多和平均根长最长。     

铁皮石斛原球茎与活体真菌液体悬浮共培养研究

目的:建立铁皮石斛原球茎与活体真菌MF24液体悬浮共培养体系,为原球茎产业化生产提供科学依据。方法:研究原球茎的培养体系是否适用于MF24真菌的生长,对光照和黑暗条件下单独培养的原球茎及与真菌共培养的原球茎的生长状况进行研究,测定生物量及增殖倍数,用HPLC分析比较原球茎中11个特征峰面积的变化。结果:MF24真菌在培养原球茎的6,7-V液体培养基中能正常生长,以1 500 lx光照8～10 h.d-1会延缓真菌的生长速度。原球茎在光照或暗培养条件下都能正常生长,在原球茎培养初期加入MF24真菌,两者相互抑制生长。在原球茎的生长稳定期接入5块直径9 mm真菌菌块,对原球茎的生长和化学成分的种类无显著影响,但光照条件下共培养5 d的原球茎中有10个化合物含量比对照降低13.64%～138.47%,暗培养条件下共培养5 d的原球茎中有7个化合物含量比对照提高0.71%～12.82%,4个化合物含量比对照小幅降低3.03%～14.14%。结论:在适宜的条件下,活体真菌MF24可与铁皮石斛原球茎共培养,并影响其次生代谢水平。