铁皮石斛原球茎高效再生体系的研究

目的以铁皮石斛Dendrobium officinale实生种子为外植体,研究铁皮石斛原球茎的增殖、分化、诱导生根等条件,筛选出适宜铁皮石斛原球茎高效再生的诱导条件,建立高效的再生体系。方法以铁皮石斛种子为外植体,在培养基上诱导产生原球茎,经过增殖培养后,转移到分化培养基中诱导芽苗分化,待分化的芽苗长到1~2 cm时,转移到生根培养基诱导生根,最终长成完整的再生植株。结果适宜铁皮石斛生长的基本培养基为1/2 MS;原球茎诱导的培养基为1/2 MS+1.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA+50 g/L土豆泥;原球茎增殖的最适培养基为1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,最高增殖系数达23;最佳分化培养基为1/2 MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,平均分化率最高达95%;最佳生根培养基为1/2 MS+0.3mg/L NAA+50 g/L土豆泥,生根率达100%。结论铁皮石斛实生种子是铁皮石斛离体繁殖的优良外植体来源。以铁皮石斛种子诱导获得的高效再生技术体系可以为铁皮石斛快速繁殖和工厂化生产提供理论基础。     

铁皮石斛快繁技术体系研究

目的以铁皮石斛Dendrobium officinale带芽茎段为材料,对铁皮石斛的组织培养进行系统研究,以期建立铁皮石斛的快繁技术体系。方法采用植物组织培养的方法对铁皮石斛外植体的消毒方法、原球茎的诱导、增殖、分化、幼苗生根及瓶苗移栽等进行研究。结果铁皮石斛外植体最佳的消毒方式为75%乙醇消毒30 s,再用0.1%HgCl2消毒10 min;铁皮石斛带芽茎段原球茎诱导的最佳培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+2 g/LAC,诱导率达到34.98%;原球茎增殖的最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.8 mg/L 2,4-D+2 g/LAC,增殖率达到89.6%;原球茎分化的最佳培养基为MS+1.2mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA+2 g/L AC,分化率达到89.6%;幼苗生根的最佳培养基配方为1/2 MS+2.5 mg/L NAA+15%土豆汁+2 g/LAC,生根率达到90.4%～92.8%;瓶苗移栽最佳方式为大苗、树皮块苔藓草做基质、基质中添加0.03 mg/L赤霉素,并接种适量菌根真菌Epulorhiza sp.。结论建立了铁皮石斛的快繁技术体系,为铁皮石斛的工业化生产奠定技术基础。     

铁皮石斛原球茎的诱导与增殖影响因素研究

目的:研究铁皮石斛原球茎诱导与增殖的最适培养基配方。方法:以铁皮石斛种胚为材料,以MS培养基为基本培养基,研究不同植物激素6-苄基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)和激动素(KT)或其组合及马铃薯提取液(PE)、香蕉提取液(BE)、苹果提取液(AE)和椰乳(CM)等有机添加物对铁皮石斛原球茎诱导和增殖的影响。结果:6-BA与NAA配比不利于种胚萌发,萌发度均低于MS培养基;添加10%的PE、CM有利于原球茎诱导;2,4-D对原球茎的生长和增殖不利,一定浓度的BA、KT和NAA有利于原球茎的增殖;KT浓度为1.0 mg/L时,原球茎40 d增殖倍数最高,达9.0;PE、CM、AE都能不同程度的促进原球茎的增殖,以10%的CM效果最好。结论:适宜铁皮石斛原球茎的诱导培养基为MS+10%CM+1.0 g/L AC;适宜铁皮石斛原球茎增殖的培养基为MS+1.0mg/L KT+0.2mg/L NAA+10%CM。     

影响铁皮石斛类原球茎诱导和增殖生长因素研究

目的:提高铁皮石斛类原球茎诱导和增殖生长率。方法:以铁皮石斛幼芽为材料,采用1/2MS+2%蔗糖+10%香蕉泥+0.8%琼脂、p H值6.0为基本培养基。研究铁皮石斛类原球茎诱导的最佳激素浓度;类原球茎不同生理状态、接种外植体大小、培养天数、叠层培养方法对类原球茎增殖生长的影响。结果:类原球茎诱导添加6-BA 0.3 mg/L、NAA 0.2 mg/L为最佳浓度组合;颜色淡黄、疏松饱满的类原球茎增殖和增重迅速;最适的培养时间为45 d左右;相同生理状态的类原球茎以10个为一团接种,培养45 d增殖和增重最为显著,增殖率高达1008%,植株再生能力增强,平均每克类原球茎增殖后可再生植株1 132株;叠层培养上层类原球茎增殖和增重效果好,此法也可进行类原球茎复壮。结论:筛选出促进铁皮石斛类原球茎诱导最佳激素浓度组合和增殖生长技术参数,完善了铁皮石斛类原球茎诱导和增殖生长技术体系。     

铁皮石斛茎节离体培养的研究

目的通过无菌茎段实现铁皮石斛快速繁殖。方法将铁皮石斛试管苗茎节接种于不同NAA浓度的MS培养基上诱导腋芽萌发,并在含不同激素配比和有机添加物的培养基上继代和诱导生根。结果NAA0.4mg/L,6-BA5mg/L时铁皮石斛腋芽萌发率达93.33%;NAA0.3mg/L,6-BA2mg/L时丛苗的生根率达96.67%,香蕉汁和土豆汁能够显著促进丛生芽的增殖和壮苗生根。结论建立了适合铁皮石斛茎段离体培养的快速繁殖体系。     

铁皮石斛组培快繁体系专用培养配方的研究

目的建立一种铁皮石斛组培快繁体系专用培养配方。方法以铁皮石斛试管苗为材料,研究了不同生长调节剂配比和不同基本培养基对铁皮石斛增殖、生根、壮苗的影响,以及不同移栽基质组合对铁皮石斛移栽成活率的影响。结果最适诱导丛生芽增殖的培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;最适诱导生根的培养基为1/2 MS+0.05mg/L NAA+1 mg/L的活性炭;最适合壮苗的培养基为N6+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L NAA;移栽成活率较高的栽培基质为木炭、火山泥和经发酵的树皮,比例为1∶1∶1。结论实现了铁皮石斛快速繁殖体系专用培养配方的建立,大大缩短了铁皮石斛种苗培育时间。     

铁皮石斛原球茎分化适宜培养基研究

试验了基本培养基、蔗糖浓度、天然提取物以及植物激素对铁皮石斛原球茎分化的影响。原球茎分化的适宜培养基为:1/2Ms+20%马铃薯提取液+2mg/LBA+0.2mg/L NAA+2%蔗糖。     

霍山石斛原球茎分化影响因素的探讨

目的以霍山石斛原球茎为试材,以1/2MS为基本培养基,研究不同浓度萘乙酸(NAA)、6-苄氨基嘌呤(简称6-BA)、香蕉泥、土豆泥对霍山石斛原球茎分化的影响。方法试验方案为4因素3水平L_9(3~4)正交设计,数据处理软件为DPS7.05。结果 NAA、6-BA、香蕉泥、土豆泥对原球茎分化苗长势的影响均显著,最优浓度分别为0.5mg/L、1.0 mg/L、0g/L、100g/L;NAA、6-BA、香蕉泥、土豆泥对原球茎分化苗黄化率的影响均显著,最优浓度分别为1.0mg/L、2.0 mg/L、50g/L、100g/L;NAA和土豆泥两个因素对原球茎分化过程重量的增加影响显著,最优浓度分别为0.5mg/L、100g/L,而6-BA和香蕉泥对原球茎分化过程重量的增加影响不显著。结论霍山石斛原球茎分化培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L+香蕉泥50g/L+土豆泥100g/L+食糖20g/L+琼脂6.0g/L时,分化苗长势、黄化率及增重均显著优于其他处理,分化率100%,60d增殖倍数3.13。     

球花石斛的离体快繁体系研究

目的建立球花石斛离体快繁研究体系。方法利用球花石斛种子为外植体,采用种子培养方式开展繁育试验研究。结果球花石斛种子接种MS+香蕉泥13%的培养基上,可成功诱导其原球茎;MS+0.1mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA+香蕉汁13%为球花石斛增殖的最佳培养基,增殖系数为7.9;无根苗生根的适宜培养基为1/2 MS+0.1mg/L NAA+2mg/L 6-BA+香蕉汁13%+土豆汁10%+活性炭2mg/L,生根率达到95%,平均根数为6.3条;组培养移栽到松树皮+水苔(3∶1)的栽培基质上,成活率为100%,且植株长势良好。结论寻找到球花石斛离体繁育研究中各阶段最佳培养基,建立了该植物的离体快繁体系。     

滇杠柳茎段和顶芽组织培养及植株再生研究

目的:建立滇杠柳(Periploca forrestii Schlt)茎段和顶芽快速繁殖体系,为其推广种植提供可行性。方法:利用植物组织培养技术,将滇杠柳茎段和顶芽插入含有不同浓度6-BA(6-苄基腺嘌呤)、NAA(萘乙酸)和2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)的MS培养基中培养,诱导其成为完整植株。结果与结论:顶芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,其中芽的诱导率可达到86.29%;茎段诱导的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L,芽的诱导率可达到56.67%;增殖的最佳培养基配方都为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,增殖系数达到2.10;生根培养基最好为1/2 MS+IBA(吲哚丁酸)0.5 mg/L,生根率达到53.33%。     

响应面试验优化铁皮石斛组培苗生根培养基

目的:为提高铁皮石斛组培苗移栽成活率,利用响应面法对其生根培养基条件进行了优化。方法:通过单因素试验确定6-BA的浓度、NAA的浓度、马铃薯的量和香蕉泥的量对苗生长状况的影响,利用Box-Behnken试验设计和响应曲面法分析。结果:确定其最优生根培养基为1/2MS+6-BA 0.24 mg/L+NAA 0.52 mg/L+香蕉泥87.63 g/L+马铃薯89.30 g/L+蔗糖20.0 g/L+活性炭4.0 g/L+琼脂7.0 g/L,pH 5.8,光照强度2 000 Lx。结论:通过响应面法建立的模型预测性良好,可用于铁皮石斛组培生根培养基条件的优化。     

铁皮石斛带节茎段的组培快繁体系研究

目的：建立铁皮石斛带节茎段为外值体的快速繁殖体系,保护和合理利用铁皮石斛资源.方法：以铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）的带节茎段作外植体,比较不同培养基、激素等因素对铁皮石斛诱导、增殖及生根的影响.结果：最适茎段诱导腋芽的培养基为1/2MS＋ 2.0mg L-1 6-BA＋ 0.2mgL-1 NAA,腋芽诱导率可达93.3％;最适丛生芽增殖的培养基为1/2MS＋ 1.5mgL-1 6-BA ＋0.5mgL-1 NAA,平均增殖系数达到5.46;最适的生根培养基是1/2MS＋0.5mgL-1 IBA ＋0.5mgL-1 NAA＋ 0.2％ AC,组培苗生根多,生根率达到72％.以上各种培养基琼脂粉浓度均为0.8％,蔗糖浓度均为2％,pH5.6 ～5.8.同时研究发现,组培苗的移栽基质以细木屑为优,具有疏松透气、排水良好等优点,成活率可达88％.结论：利用带节茎段能够实现铁皮石斛快速繁殖,为其人工扩大栽培奠定了良好基础.     

铁皮石斛种子诱导成苗试验

以铁皮石斛种子为外植体,可获得大量种苗,适于种子萌发的培养基:VW NAA 0.18 mg/L 6-BA0.53 mg/L GA 0.28 mg/L 蔗糖20 g/L 香蕉泥100 g/L 活性炭10 g/L,适于原生苗生根培养基:VW 6-BA0.2 mg/L NAA 1.5 mg/L 蔗糖20 g/L 香蕉泥100 g/L 活性炭10 g/L。     

丹参茎段组培快繁体系的建立与优化

目的:建立并优化丹参茎段组培快繁体系。方法:以丹参春生幼嫩枝条为外植体,利用正交试验等方法筛选优化丹参茎段消毒、丛生芽诱导、丛生芽增殖、生根培养的适宜方案。结果:最适的消毒方案是用70%~75%乙醇浸泡30 s,0.1%升汞浸泡8 min,萌芽率为85%;适宜丛生芽诱导的培养基是MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L;丛生芽增殖的最适培养基是1/2~2/3MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05~0.2 mg/L+GA30.1mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L,平均丛生芽增殖系数为11.95;适宜生根的培养基是1/4~1/2MS+2,4-D 0~0.1mg/L+IBA 0.1~0.5 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂7 g/L,2 w后生根率为100%,平均生根数达2.3条以上,平均根长达0.83 cm以上;炼苗、移栽成活率达95%以上。结论:筛选出了丹参含顶芽茎段最适的增殖和生根培养基配方,建立并优化了丹参茎段组培快繁体系。     

云南珍稀民族药黑蒴茎芽组织培养快繁体系研究

目的建立黑蒴茎芽愈伤组织诱导、分化及生根组织培养快繁体系。方法以黑蒴带节嫩茎芽为外植体,以MS(1/2MS)为基本培养基,考察不同质量浓度6-BA、NAA对愈伤组织诱导、分化及茎芽生根的影响。结果芽茎诱导愈伤的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+Bn80g/L+Pt50g/L+25g/L蔗糖+6g/L琼脂,愈伤诱导率71.2%;愈伤分化不定芽最佳培养基为1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L+Bn80g/L+Pt50g/L+25g/L蔗糖+6g/L琼脂,芽诱导率为84.2%;茎芽生根培养基为1/2MS+NAA 0.1~0.3 mg/L+Bn80g/L+Pt50g/L+25g/L蔗糖+6g/L琼脂,生根率超过87.2%。结论筛选出茎芽诱导愈伤、分化不定芽、生根的培养基,建立了黑蒴嫩茎芽组织培养快繁体系。     

新疆珍稀药用植物厚叶岩白菜离体快繁研究

目的建立厚叶岩白菜离体快繁技术方法。方法以厚叶岩白菜的茎尖为外植体,以MS培养基为基本培养基,通过附加激素NAA、IBA、6-BA、GA3,设置不同组合及浓度配比,诱导厚叶岩白菜茎尖植株再生、增殖和幼苗生根,筛选最佳激素组合及浓度配比。结果单独使用NAA有利于厚叶岩白菜茎尖再生植株诱导,最佳配方为MS+NAA0.5 mg/L;6BA与NAA组合可提高幼苗增殖倍数,最适配方为MS+NAA0.5 mg/L+6BA 0.4 mg/L;在1/2MS培养基中添加NAA0.5 mg/L或IBA1.0 mg/L,诱导幼苗生根效果最佳,附加碳(C)粉有利于幼苗根的生长。结论利用厚叶岩白菜茎尖离体快繁,植株遗传性状稳定,增殖倍数高,可为厚叶岩白菜的再生体系研究提供技术理论依据。     

乌头离体培养和快速繁殖

目的建立乌头的快繁体系。方法利用组织培养的方法,设置18种、9种和12种不同激素处理组合的培养基分别诱导乌头不同外植体愈伤组织、诱导愈伤组织丛生芽的分化、诱导再生苗的生根。结果适合乌头茎尖和茎段愈伤组织诱导的培养基为:MS NAA0.2mg/L 6-BA2.0mg/L PVP(或AC)3.0g/L;适合叶片愈伤组织诱导的培养基为:MS NAA0.2mg/L 6-BA4.0mg/L PVP(或AC)3.0g/L;适合愈伤组织增殖与丛生芽诱导的培养基为:MS NAA0.2mg/L 6-BA2.5mg/L LH200mg/L PVP3.0g/L和MS NAA0.1mg/L 6-BA2.0mg/L LH200mg/L PVP3.0g/L。适合诱导生根的培养基为:MS IBA1mg/L AC3.0g/L。结论以乌头茎尖、叶片、茎段及带或不带腋芽的茎段作为外植体进行离体培养,可以实现乌头种苗的工厂化快速繁殖。     

铁皮石斛的种胚萌发及其离体繁殖研究

目的:研究铁皮石斛种胚萌发和快速繁殖的组织培养技术,为铁皮石斛的繁殖建立最佳培养条件。方法:以成熟的铁皮石斛种胚为研究材料,以1/2MS为基本培养基,接种到含有不同植物生长物质BA(6-苄基腺嘌呤)和NAA(萘乙酸)组合及含有马铃薯提取液、香蕉提取物及活性碳的培养基上,诱导铁皮石斛种胚的萌发、原球茎增殖、分化及试管苗生根。结果与结论:添加20%马铃薯液有利于种胚的萌发,种胚萌发率为79.37%;BA 1.0 mg.L^-1和NAA 0.1 mg.L^-1最有利于原球茎增殖,培养基中添加2%活性碳原球茎增殖倍数高;NAA有助于试管苗的生根,不同含量NAA以0.5 mg.L^-1时试管苗平均根数最多和平均根长最长。     

波棱瓜愈伤组织诱导及植株再生研究

目的研究波棱瓜愈伤组织诱导、分化及生根的条件,探讨波棱瓜快速繁殖新途径,为波棱瓜组织培养与离体植株再生奠定基础。方法以波棱瓜幼嫩茎段和叶片为材料,比较不同外植体、基本培养基及植物生长调节剂对波棱瓜愈伤组织诱导、分化及生根的影响。结果幼嫩茎段作为外植体时,其出愈率较叶片高,愈伤量大;MS基本培养基能够产生明显的愈伤组织,出愈率较高;幼嫩茎段愈伤组织诱导适宜的培养基为MS+6-BA2 mg/L+NAA0.5 mg/L,出愈率达93.3%。愈伤组织的最佳分化培养基为MS+6-BA2 mg/L+NAA0.1 mg/L+KT 3.0 mg/L,分化率达87.2%。生根培养的适宜培养基为1/2MS+NAA 1.0 mg/L,生根率达95%。结论波棱瓜幼嫩茎段在适宜的培养基中可通过愈伤组织途径分化不定芽,且极易生根,能够得到正常生长发育的再生植株。     

铁皮石斛无性系繁育培养基专用性的研究

以浙江雁荡山×云南广南种质的杂交组合茎段为外植体,筛选出1/2MS +IBA1.0 mg·L-1+6-BA1.0mg·L-1腋芽诱导培养基与1/2MS+IBA1.5 mg·L-1+6-BA0.5 mg·L-1芽增殖培养基,在浙江、云南、广西、湖南等159个铁皮石斛野生与人工种质中应用,腋芽诱导率达94.3％,具有较好的通用性;芽增殖培养时,不同种质分化出单芽、丛芽、原球茎3种增殖途径,增殖效果存在显著差异.研究结果表明,不同种质铁皮石斛的增殖对培养基有专用性需求,开发铁皮石斛无性系繁育专用培养基具有紧迫性和重要的应用价值.