脂多糖诱导家蝇胚胎细胞抗菌肽的初步研究

目的观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导家蝇胚胎细胞产生抗菌肽的抗菌活性。方法LPS诱导家蝇胚胎细胞系(MDEC-07114),收集诱导后4、8、12、16、20、24h上清液,三氯醋酸提取抗菌肽,抑菌圈法测定抗菌活性。结果LPS作用处于对数生长的家蝇胚胎细胞后,细胞形态、增殖无明显变化;诱导后8h家蝇胚胎细胞开始产生抗菌肽,16h达高峰,诱导后24h仍有抗菌活性。结论LPS可诱导家蝇胚胎细胞系MDEC-07114产生具抗菌活性的抗菌肽。     

家蝇幼虫、蛹、成虫抗菌肽的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

目的分析家蝇幼虫、蛹、成虫的抗菌肽成分。方法通过针刺感染大肠杆菌诱导家蝇各虫态产生抗菌肽,再经研磨、离心等步骤提取这些抗菌肽,用改进的聚丙烯酰胺凝胶电泳使其分离。结果家蝇幼虫有7条带,成虫有5条,蛹只有4条。结论家蝇幼虫和成虫的抗菌肽种类较蛹的多,且有一些小分子肽段,可能与其较强的抗菌效果有关;家蝇蛹处于相对静止期,其电泳图中抗菌肽条带较少,无较小的条带,抗菌效果可能较幼虫和成虫的差。     

顺式串联家蝇抗菌肽Attacin基因真核表达载体的构建

目的 构建家蝇抗菌肽Attacin基因多拷贝串联体，并克隆到甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K上。方法 PCR法扩增家蝇抗菌肽Attacin基因成熟肽片断，目的片断的上游5’端带有EcoR Ⅰ和NheⅠ位点，下游5’端带有NotⅠ和XbaⅠ位点，目的片断首先克隆入pMD18-T载体，利用pMD18-T载体的NdeⅠ位点和目的片断上的一对同尾酶（NheⅠ和XbaⅠ），多次酶切连接，串联成多拷贝的Attacin成熟肽基因，再用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切，最后克隆入甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K。结果 PCR鉴定、酶切鉴定和DNA测序证明串联体基因重组质粒构建成功。结论 该方法能方便高效地获得所需的多拷贝基因，为进一步进行高效表达打下基础。     

家蝇抗菌肽Cecropin对人源性肿瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的分析家蝇抗菌肽Cecropin对人源性肿瘤细胞体外生长增殖与凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）MTT比色法测定家蝇抗菌肽Cecropin对人肺癌细胞株A549、人乳腺癌细胞株MCF-7、人宫颈癌细胞株Hela、人肝癌细胞株BEL-7402和人正常肝细胞株Changs,Liver生长增殖情况的影响,采用流式细胞术检测家蝇抗菌肽Cecropin作用后4株肿瘤细胞凋亡的情况,对照组不加家蝇抗菌肽Cecropin。结果家蝇抗菌肽Cecropin对4株人源性肿瘤细胞的生长均有抑制作用,并能诱导肿瘤细胞发生凋亡,但对人肝癌细胞BEL-7402作用效果相对较强。结论家蝇抗菌肽Cecropin能够影响人源性肿瘤细胞的生长与凋亡,作用机制需进一步研究。     

家蝇幼虫抗菌肽对阴沟肠杆菌感染小鼠创面的抗菌活性

目的：观察抗菌肽对阴沟肠杆菌感染小鼠创面的抗菌作用。方法：超声处理诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经分离纯化后,体外实验分析抗菌肽的抑菌特性。取ICR小鼠30只,切除背部1cm×1cm全层皮肤,涂抹阴沟肠杆菌菌液作为感染模型,随机分为3组。伤后2h和每天各组分别用等渗生理盐水、100g／L的磺胺米隆或0．1g／L抗菌肽滤纸湿敷,伤前和伤后3d抽血观察白细胞变化;伤后3d痂下肌肉组织细菌定量和计算存活率。结果：抗菌肽纯化蛋白对阴沟肠杆菌的抑菌活性较强;术后3组白细胞记数均减少,对照组显著低于其他两组（P〈0．05）;痂下肌肉组织细菌定量抗菌肽组（99±32）×10^2CFU／g和磺胺米隆组（87±31）×102CFU／g,均显著低于对照组（504±338）×10^3CFU／g（P〈0．01）;对照组伤后3d存活率明显少于其他两组（P〈0．05）。结论：超声处理能诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,其对阴沟肠杆菌感染的ICR小鼠创面有较强抗感染作用。     

家蝇抗菌肽对细菌感染小鼠外周血多项指标的影响

目的了解在腹腔注射家蝇幼虫分泌物抗菌肽的干预作用下,大肠埃希菌感染小鼠的外周血细胞过氧化物酶及多项血液指标的变化。方法将实验小鼠随机分为空白对照、模型对照、抗菌肽干预3个组,并分别于处理后24 h、48 h、72 h取样分析;外周血细胞过氧化物酶染色采用四甲基联苯胺法,全自动血细胞分析仪检测血红蛋白、血小板、白细胞、红细胞计数及白细胞细胞分类情况。结果在各检测指标中,白细胞数、中性粒细胞绝对值在实验处理间具有显著性差异;感染72 h抗菌肽干预组白细胞数高于模型对照组(P0.05);与空白对照组比较,抗菌肽干预组和模型对照组各检测时间点白细胞数均有显著性差异(P0.05);感染72 h抗菌肽干预组中性粒细胞绝对值显著高于模型对照组(P0.05);血细胞过氧化物酶染色及其余指标在处理因素间无统计学差异。结论腹腔注射家蝇幼虫分泌物抗菌肽对小鼠大肠埃希菌感染具有一定的干预作用。     

昆虫抗菌肽诱导进展

昆虫作为无脊椎动物的一种,体内形成了强大的免疫防御系统.当被各种病原诱导后脂肪体能迅速产生抗菌活性物质释放到血液循环中,以抵抗病原的侵袭,其中以抗菌肽作用最为突出.现将近年来昆虫抗菌肽诱导的方法,诱导动力学,机理等进行简述,以探讨昆虫体内的免疫机制,为新型药物研发提供理论基础.     

不同诱导源诱导家蝇抗菌物质的动力学研究

目的 比较不同诱导源诱导家蝇血淋巴中产生抗菌物质的动力学变化及抗菌活动。方法 采用抑菌圈法。以＾６０Ｃｏγ射线，活的大肠杆菌及热灭活的金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和生物盐水为诱导源，均能诱导出家蝇血淋巴中的抗菌物质。结果 不同诱导源诱导家蝇产生抗菌物质的活性大小不同，达到最大活性的时间不同，抗菌特性亦有差异。经热灭活细菌诱导的抗菌物质抗菌活性大，抗菌种类多。同时，未经诱导的家蝇血淋巴也有抗菌活性。结论     

家蝇幼虫抗菌肽Defensins基因的克隆与序列分析

目的：克隆家蝇幼虫的抗菌肽defensins基因并对其进行序列分析。方法：提取家蝇幼虫总RNA，根据家蝇成虫defensins基因cDNA序列设计一对引物，RT-PCR扩增目的基因片段，T-A克隆后测序，应用相关生物信息学软件对该序列进行分析。结果：RT—PCR扩增出一条约310bp的目的片段，序列分析表明，其与家蝇成虫防御素基因同源性高达97％，核酸序列变异主要发生在信号肽区域。结论：成功克隆及分析了家蝇幼虫防御素基因全长编码区cDNA序列，为其下一步的重组表达和生物活性研究奠定了基础。     

家蝇室内连续饲养6代蛹期特征观察

为观察家蝇室内连续饲养的各代蛹期特征 ,将家蝇引入室内 ,采用人工配制的幼虫饲料在室内进行连续饲养 ,分别随机挑取室内第 1～ 6代 1日龄蛹 ,及时称量鲜蛹重及干蛹重 ,测量蛹长 ,并记录各代羽化率。结果发现 ,第 1代羽化率为 70 ,其余几代羽化率均高于 90。第 5代蛹长显著性小于第 2、3代蛹长 ,第 6代蛹长显著性小于第 1～ 3代蛹长。第 5代鲜蛹重显著性小于第 2、3代鲜蛹重 ,第 6代鲜蛹重显著性小于第 1～ 5代鲜蛹重。第 4～ 6代干蛹重均显著性小于第 2、3代干蛹重。提示室内饲养的家蝇各代羽化率稳定在较高水平 ,而蛹期形态从第 4代开始有减小趋势。     

金华市家蝇对5种卫生杀虫剂抗性现状调查

采用点滴法测定了我省金华市家蝇对溴氰菊酯、二氯苯醚菊酯、敌敌畏、三氯杀虫酯、仲丁威5种杀虫剂的抗性。测定结果显示,该地家蝇对溴氰菊酯,二氯苯醚菊酯、敌敌畏3种杀虫剂产生了较高的抗性,与1981年—1983年我省家蝇抗性本底调查时相比较,这3种杀虫剂抗性分别提高了20.1429倍,7.7111倍和5.6494倍。三氯杀虫酯抗性提高了1.8633倍,抗性上升不明显。对仲丁威抗性,1981年—1983年尚未测定,本次测得其LD_(50)为80.6887(μg/蝇)。     

家蝇细胞培养方法的探讨

目的探讨家蝇细胞培养的方法。方法分别取家蝇初孵幼虫、无菌家蝇卵初孵幼虫以及家蝇卵(胚胎)进行细胞培养,采用不同方法传代,观察细胞生长。结果取家蝇初孵幼虫进行培养,易出现霉菌污染,培养不能成功;用无菌的家蝇卵初孵幼虫进行培养,细胞生长较慢;用家蝇卵(胚胎)进行细胞培养,细胞生长快。直接吹打法传代,细胞不能生长;机械刮取法细胞能生长,但细胞容易丢失;胰酶消化法传代,细胞能迅速生长。结论取家蝇卵(胚胎)进行细胞培养,并用胰酶消化法传代是最佳的方法。     

广东省家蝇对常用杀虫剂的抗药性现状调查

本文采用自动微量点滴法测定我省家蝇对常用杀虫剂的抗药性。结果显示:我省家蝇对氯菊酯、溴氰菊酯、巴沙、敌敌畏均有一定的抗性;抗性水平比五年前有不同程度的发展。     

Proteomic Analysis of the Peritrophic Matrix from the Midgut of Third Instar Larvae,Musca domestica

ObjectiveTo better comprehend the molecular structure and physiological functionof the housefly larval peritrophic matrix (PM), a mass spectrometry approach wasused to investigate the PM protein composition. MethodsThe PM was dissected from the midgut of the third instar larvae,and protein extracted from the PM wasevaluated using SDS-PAGE. A 1D-PAGE lane containing all protein bandswascut fromtop to bottom, the proteins in-geltrypsinised and analysedvia shotgun liquid chromatography- tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). ResultsIn total, 374 proteins, with molecular weightsvarying from 8.225 kD to996.065 kD and isoelectric points ranging from 3.83 to 11.24 were successfully identified, most identified proteins were mainly related to immunity, digestion,nutrient metabolism and PM structure. Furthermore, many of these proteins were functionally associated with pattern binding, polysaccharide binding, structural constituent of peritrophic membrane and chitin binding, according to Gene Ontology annotation. ConclusionThe PM protein composition, which provides a basis for further functional investigations of the identified proteins,will be useful for understanding the housefly larval gut immune system and may help to identify potential targets and exploit new bioinsecticides.     

家蝇触角感觉窝内感受器的超微结构

本文报道了家蝇触角感受窝内感受器的超微结构,用扫描电镜透射电镜方法对家蝇触角第3节的后基感觉窝和外基感觉窝进行研究,创立了把触角切片后制成扫描电镜标本的方法。观察到后基感觉窝内密布薄壁型多孔感器,这些感器的直径长12.34±0.21μm,中间宽2.02±0.23μm,壁厚65.5±4.38nm,每平方μm分布着26.5±5.32的小孔。几丁质壁上小孔开口向内增大,变成几丁质小室,小室直径约0.1～0.2μm,内壁由15～20个小管向小室内壁延伸,每个小管直径在8.96±0.59nm的范围内,这些树突没有鞘,呈片状树突层。在外基感觉窝内分布着带槽椎形化感器,扫描电镜可见到11～13根纵形排列的细管组成的感器。     

滞育家蝇幼虫糖的变化

目的观察家蝇幼虫滞育前后血淋巴中总糖、海藻糖、糖原的变化,探讨家蝇幼虫滞育发生的生化机制。方法低温诱导家蝇幼虫滞育,用蒽酮比色法测定滞育10d、15d、20d组及非滞育组血淋巴总糖、海藻糖、糖原的含量。结果滞育组与非滞育组比较,(1)家蝇幼虫血淋巴总糖含量滞育10d组显著升高,15d组、20d组则降低。(2)血淋巴海藻糖含量滞育10d组、20d组明显升高,15d组差异无显著性。(3)血淋巴糖原含量滞育10d组、15d组降低,20d组则升高。结论家蝇滞育幼虫的糖醇积累型属于海藻糖积累型。