内皮素-1对大鼠骨髓内皮前体细胞增殖、细胞周期及NO分泌功能的影响

目的探讨内皮素-1（ET-1）对大鼠骨髓内皮前体细胞（EPC）增殖、细胞周期及一氧化氮（NO）分泌功能的影响。方法采用密度梯度离心法获取大鼠骨髓单核细胞,在M199培养液中培养扩增EPC并进行鉴定。不同浓度ET-1（A组:0mol/L、B组:10-9mol/L、C组:10-8mol/L、D组:10-7mol/L、E组:10-6mol/L）作用于EPC,MTT法检测ET-1对EPC增殖能力的影响,流式细胞仪检测ET-1对EPC细胞周期的影响,硝酸还原酶法检测细胞培养液中NO含量的变化,观察ET-1对EPC的NO分泌功能的影响。结果与对照组（A组,0.405±0.017）相比,ET-1浓度C组（0.434±0.016）、D组（0.463±0.016）、E组（0.473±0.015）EPC增殖能力显著增高（n=8,P<0.01）。EPC的G0/G1期细胞百分数C组（57.28±3.65）%、D组（44.99±3.19）%、E组（40.29±3.74）%较对照组（70.55±1.37）%明显降低（n=5,P<0.01）,EPC的S期细胞百分数C组（26.75±2.87）%、D组（32.79±2.41）%、E组（35.74±2.94）%较对照组（20.04±1.64）%明显升高（n=5,P<0.01）,EPC的G2/M期细胞百分数C组（15.96±1.71）%、D组（22.22±2.22）%、E组（23.64±2.86）%较对照组（9.41±0.81）%明显升高（n=5,P<0.01）。EPC培养液中NO含量（μmol/L）ET-1浓度C组（11.70±1.80）、D组（15.69±1.86）、E组（16.89±1.55）较对照组（7.45±2.41）明显增加（n=8,P<0.01）。B组检测结果与对照组相比,各项指标均无统计学差异。结论ET-1能够促进EPC的增殖,促进细胞向S期和G2期的转化,并提高细胞NO分泌功能,可能参与缺血性疾病的血管再生过程。     

低频脉冲磁场对大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖和体外血管化的影响

目的观察不同强度低频脉冲磁场对体外培养大鼠骨髓源肉皮祖细胞增殖、细胞周期、迁移和成血管能力的影响方法密度梯度离心法获得大鼠骨髓源内皮祖细胞,随机分为4组：对照组,1．0mT组,1．4mT组和1．8mT组除对照组外．其余各组用顿率为15Hz不同强度的厅波脉冲磁场刺激大鼠骨髓源内皮租细胞,2h／d,持续刺激5d,曝磁5d后,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色（MTT）法俭测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,划痕试验检测细胞迁移能力,管状结构形成试验和3维培养检测细胞成血管能力。结果1．0mT组和1．4mT组磁场促进内皮祖细胞增殖,使其细胞周期分布发牛改变,DNA合成期（S期）和合成后期（G2期）细胞比例增加,1．8mT组磁场也能促进内皮祖细胞增殖．但对细胞周期分布影响不明显。体外培养内皮租细胞迁移能力差,各强度磁场对其迁移能力也无明显影响。不同强度磁场均能够提高内皮祖细胞成血管能力,与对照组相比差异均有统计学意义[（14．0±1．6）比（11．0±1．6）;（19．2±1．9）比（11．0±1．6）：（15．4±1．1）比（11．0±1．6）,P均〈0．05]1．0mT和1．4mT磁场作用强于1．8mT磁场：结论磁场的生物学作用和磁场强度相关,1．0mT和1．4mT低频脉冲磁场促进大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖和DNA合成并提高其成血管能力。     

低频脉冲磁场对大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖和体外血管化的影响

目的 观察不同强度低频脉冲磁场对体外培养大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖、细胞周期、迁移和成血管能力的影响.方法 密度梯度离心法获得大鼠骨髓源内皮祖细胞,随机分为4组:对照组,1.0mT组,1.4mT组和1.8 mT组.除时照组外.其余各组用频率为15 Hz不同强度的方波脉冲磁场刺激大鼠骨髓源内皮祖细胞,2 h/d,持续刺激5 d.曝磁5 d后,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,划痕试验检测细胞迁移能力,管状结构形成试验和3维培养检测细胞成血管能力.结果 1.0mT组和1.4mT组磁场促进内皮祖细胞增殖,使其细胞周期分布发生改变,DNA合成期(S期)和合成后期(G2期)细胞比例增加,1.8 mT组磁场也能促进内皮祖细胞增殖,但对细胞周期分布影响不明显.体外培养内皮祖细胞迁移能力差,各强度磁场对其迁移能力也无明显影响.不同强度磁场均能够提高内皮祖细胞成血管能力,与对照组相比差异均有统计学意义[(14.0±1.6)比(11.0±1.6); (19.2±1.9)比(11.0±1.6); (15.4±1.1)比(11.0±1.6),P均<0.05].1.0mT和1.4 mT磁场作用强于1.8mT磁场.结论 磁场的生物学作用和磁场强度相关,1.0 mT和1.4 mT低频脉冲磁场促进大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖和DNA合成并提高其成血管能力.     

辛伐他汀对冠心病患者CRP、vWF、NO及ET的影响

多种炎症因子与冠心病(CHD)发生、发展及预后过程中的关系是CHD研究领域的一个热点.辛伐他汀是一种羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂,能抑制肝中甾醇的生物合成,具有降低血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的功能.血脂异常是导致CHD主要危险因素之一,因此辛伐他汀被广泛用于CHD调脂治疗[1].本文主要探讨辛伐他汀在CHD患者中抗炎、抗氧化及修复内皮等调脂以外的作用.     

低频电磁场刺激对左侧星状神经节功能的影响

目的研究低频电磁场(LF-EMF)刺激左侧星状神经节(LSG)对其功能和神经活性的影响及其机制。方法16只健康成年家犬随机分为LF-EMF组(n=8)和对照组(n=8),电磁场刺激仪刺激探头固定至家犬左侧第二、三肋与脊柱连接的皮肤表面定位于LSG,参数设置:刺激频率:1 Hz,刺激模式:开启8s,暂停5s,刺激时间:2h。LF-EMF组接受电磁场刺激,对照组接受假刺激。在基础状态和2hLF-EMF后分别测定LSG神经活性和高频电刺激(HFS:频率20Hz,脉宽0.1ms)LSG时的血压改变,实时定量聚合酶链反应检测LSG中2型小电导钙激活钾通道分子(SK2)、早期原癌基因(c-fos)和神经生长因子(NGF)mRNA表达水平。结果基础状态时,HFS刺激LSG引起的血压升高作用和神经活性在对照组和LL-EMF组中未见统计学差异;但2hLF-EMF刺激后,相比于对照组,LF-EMF组中HFS刺激LSG引起的血压升高作用明显被抑制(32%±5%vs 43%±5%,P0.05),LSG神经活性显著降低[频率:(17±5)次/分vs(30±6)次/分;振幅:(0.08±0.02)mV vs(0.16±0.02)mV,P0.05)],同时LSG中SK2mRNA表达水平明显增高(1.64±0.12vs 1.00±0.09,P0.05),c-fos和NGF mRNA表达水平明显降低(c-fos:0.54±0.07vs 1.0±0.1,P0.05;NGF:0.67±0.08vs 1.0±0.16,P0.05)。结论 LF-EMF可通过调控神经相关蛋白表达水平抑制LSG功能及活性。     

脉冲电磁场对成骨细胞的作用机制

脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMFs)应用于骨质疏松症(osteoporosis,OP)的预防和治疗一直是人们感兴趣的领域.成骨细胞(osteoblast,OB)是骨形成的主要功能细胞,负责骨基质的合成、分泌和矿化,在骨重建过程中发挥重要作用.虽然PEMFs能影响OB的活性...     

C反应蛋白对大鼠骨髓内皮祖细胞参与血管形成的影响

目的研究C反应蛋白对大鼠骨髓内皮祖细胞参与血管形成及其功能活性的影响,探讨C反应蛋白在动脉粥样硬化病变发展中的可能作用机制。方法用密度梯度离心法分离大鼠骨髓内皮祖细胞,并用DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的植物凝集素双染,在共聚焦显微镜下观察。将细胞与不同浓度C反应蛋白(0、1、5及10 mg/L)共同培养,建立内皮祖细胞与大鼠心脏微血管内皮细胞共同培养的体外血管形成模型。分别用MTT比色法、Transwell小室、Matrigel检测C反应蛋白对内皮祖细胞增殖活性、迁移及管腔形成能力的影响。用Western blotting分别检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax、整合素β2和内源性血管内皮生长因子的表达。结果随着浓度的增加,C反应蛋白明显减少内皮祖细胞掺入模型中心脏微血管内皮细胞管腔结构的数量,减弱内皮祖细胞的增殖活性,减少迁移的细胞数及形成的管腔数,上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白、整合素β2、内源性血管内皮生长因子的表达。结论 C反应蛋白减弱了内皮祖细胞参与血管形成的能力,这与其抑制内皮祖细胞的功能活性有关,从而可能促进了动脉粥样硬化等缺血性疾病的发展。     

三角波形低频脉冲磁场对大鼠心肌微血管内皮细胞增殖、迁移和细胞周期的影响

目的: 研究在固定时间和频率下,三角波形的低频脉冲磁场(LF-PMF)对大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）增殖、迁移以及细胞周期的影响。方法: 实验分为4组（对照组,1.0mT组,1.4mT组,1.8mT组）。对照组不加磁场干预;其余各组分别在频率为15 Hz,磁场强度分别为1.0mT、1.4mT和1.8mT,时间为4 h/d,连续照射3 d的条件下,用三角波形作用离体培养的大鼠CMECs。利用MTT法检测细胞增殖情况,transwell法观察细胞迁移状况,流式细胞仪技术检测细胞周期变化。结果: 1.4mT和1.8mT组磁场促进CMECs增殖的作用差异显著［(0.200±0.043)A值, vs.(0.159±0.037)A值,(0.225±0.042)A值,vs.(0.159±0.037)A值,P<0.05］。迁移能力与对照组相比也有显著提高［(27.20±4.76)个/视野 vs.(22.60±4.77)个/视野,(33.80±3.19)个/视野 vs.(22.60±4.77)个/视野,P<0.05］。CMECs在细胞周期中的分布发生改变,DNA合成期(S期)和合成后期(G2期)细胞的比例增加。1.0mT组LF-PMF胞对细胞增殖、迁移以及细胞周期的影响均不明显。结论: 低频脉冲磁场磁场对CMECs的生物学作用与磁场的强度相关,1.4mT和1.8mT组LF-PMF促进细胞增殖、迁移及使其DNA合成的能力提高。     

云克联合低频脉冲电磁场强化治疗老年骨质疏松的疗效

目的 探讨云克联合低频脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMFs)强化治疗对老年骨质疏松(OP)疼痛症状及提高骨密度(BMD)的临床作用.方法 入选的124例原发性OP患者,采用前瞻对照配对分组,每组31例.云克治疗组,给予云克注射液静推;脉冲电磁场治疗组,给予PEMFs治疗;云克治疗+脉冲电磁场治疗组,给予云克+PEMFs治疗;阿仑膦酸钠对照组,给予阿仑膦酸钠(70 mg/片),晨起空腹每周1片口服.前三组均20d1个疗程,行3个疗程治疗.所有入选的病人均摄入适量的钙和维生素D.于治疗前、治疗后2个月及6个月观察患者疼痛症状的改变情况;测定第四腰椎(L4)及股骨颈BMD.结果 ①四组治疗2个月后疼痛改善效果的有效率分别为67.7%、74.2%、93.5%、35.5%;治疗6个月后疼痛症状缓解的有效率分别为80.6%、77.4%、96.8% 、61.3%.②云克治疗组治疗2个月后L4的BMD与治疗前差异显著,治疗6个月后L4及股骨颈的BMD与治疗前均有显著差异(P＜0.05);脉冲治疗组及联合治疗组治疗2个月、6个月后,L4和股骨颈的BMD增加明显,与治疗前差异显著(P＜0.05).对照组治疗6个月后,L4的BMD增加,与治疗前差异显著(P＜0.05).③联合治疗组治疗2个月、6个月后,L4及股骨颈的BMD增加明显,与云克治疗组、脉冲治疗组、对照组相比,有显著性差异(P＜0.05).结论 云克联合PEMFs强化治疗老年型骨质疏松能在短期内迅速有效地缓解患者的疼痛症状,提高患者的BMD.     

丹皮酚对动脉粥样硬化大鼠CRP的影响

目的探讨丹皮酚对动脉粥样硬化（AS）大鼠血清炎性因子C反应蛋白（CRP）的影响。方法采用高脂饲料喂养和维生素D3腹腔注射的方法建立大鼠AS模型,分为正常组、模型组、阳性组（辛伐他汀10mg/kg）、丹皮酚组（20mg/kg）,每组8只。灌胃给药4周后,各组取血清,ELISA法测定CRP的表达水平;取主动脉,光镜下观察病理改变,进行作病变分级评分。结果丹皮酚能改善AS大鼠的主动脉病变,与模型组比较有统计学意义（P〈0.01）;丹皮酚可降低血清CRP水平,为（6.0±1.5）ng/L,与模型组（8.8±1.3）ng/L比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论丹皮酚治疗大鼠AS的作用机制可能与降低炎性因子CRP的表达、抑制炎症反应有关。     

氧化型低密度脂蛋白对骨髓内皮前体细胞增殖和细胞功能及凋亡的影响

目的研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对骨髓内皮前体细胞(EPCs)增殖抑制、细胞功能及促凋亡的影响,观察阿托伐他汀是否对其有保护作用。方法密度梯度离心法从猪的骨髓中分离出EPCs,将细胞分为3组,A组(培养液中不加ox-LDL),B组(ox-LDL 10 mg/L),C组(预先给予阿托伐他汀1μmol/L+ox-LDL 10 mg/L)。四甲基偶氮唑盐法检测细胞的增殖能力、流式细胞仪检测细胞凋亡,同时测定细胞培养液中一氧化氮及一氧化氮合酶含量,观察对细胞功能的影响。结果ox-LDL可引起骨髓EPCs增殖能力降低,促进细胞凋亡,使细胞功能受损,阿托伐他汀可以减弱ox-LDL对细胞的不良影响。结论阿托伐他汀可以减弱ox-LDL引起的EPCs增殖能力降低,对ox-LDL引起的EPC凋亡及细胞功能的损害有保护作用。     

吡格列酮和胰岛素对内皮祖细胞增殖和凋亡及分泌一氧化氮的影响

目的观察吡格列酮和胰岛素对大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)的增殖能力、凋亡及分泌NO能力的影响,并探讨其机制。方法取正常SD大鼠32只,随机分为吡格列酮组和非吡格列酮组,各16只,分别给予吡格列酮和生理盐水灌胃预处理。喂养10天后,断颈处死,密度梯度离心法取骨髓单个核细胞,在M199培养液中培养扩增EPCs并进行鉴定。贴壁细胞培养4天后,将吡格列酮组EPCs消化后进一步分为两组,分别给予胰岛素(1nmol/L)或空白干预,非吡格列酮组EPCs处理同吡格列酮组EPCs。24h后检测NO水平,3天后检测凋亡情况,7天后检测细胞增殖能力。结果吡格列酮预处理能提高EPCs数量(P<0.01),吡格列酮预处理和(或)体外给予胰岛素干预组EPCs与未处理组细胞相比EPCs增殖能力提高(P<0.01),凋亡程度降低(P<0.05),培养上清中NO浓度增加(P<0.05)。结论体内吡格列酮预处理与体外胰岛素干预均能促进EPCs增殖,抑制EPCs凋亡,并促进EPCs分泌NO,且两种药物联合应用具有协同作用。     

Effect of low frequency low energy pulsing electromagnetic fields on mice injected with cyclophosphamide

C3H mice have been used to investigate the effect of a combination of cyclophosphamide (CY) and electromagnetic fields (PEMF). Mice were injected i.p. with a single dose of 200 mg/kg body weight of CY and then exposed to PEMF 24 h per day. In an initial series of experiments immediately after CY injection mice were exposed to PEMF until sacrifice. WBC counts in the peripheral blood demonstrated a quicker decline in WBC at days 1 and 2 in mice exposed to PEMF. Groups of mice were sacrificed at days 1, 4, 6, 8, and 10 after CY injection. In mice exposed to PEMF the spleen weight was less than in controls at days 6, 8, and 10. Autoradiographic studies demonstrated that the labeling index of bone marrow smears did not significantly differ between controls and experimental mice exposed to PEMF, whereas the spleen labeling index proved to be higher among control mice versus mice exposed to PEMF at day 6, and higher among mice exposed to PEMF versus controls at day 8. In a second series of experiments mice were exposed to PEMF only over the 24 h following CY injection. We found that the spleens of mice exposed to PEMF weighed less than those of controls at days 6 and 8. The labeling index of bone marrow did evidence a slight decrease among mice exposed to PEMF at days 8 and 10 after CY injection versus control mice. The spleen labeling index proved to be lower in experimental mice exposed to PEMF than in controls at days 4, 6, and 8. Mice were then injected with CY, half were exposed to PEMF, and 24 h later bone marrow was recovered from both groups of animals. The same number of bone marrow cells was injected via the tail vein into recipient mice irradiated to 8.5 Gy. The grafting efficiency of the bone marrow was evaluated by examining the number of spleen colonies and the spleen and bone marrow labeling indices at day 8; all parameters proved to be significantly lower among mice grafted with the bone marrow of mice injected with CY and exposed to PEMF than among controls injected with CY only. Finally, we found th at the effect of PEMF is evident only if mice are exposed during the 24 h following CY injection. The data reported here indicates that PEMF exposure after CY injection increases the damage induced in mice by CY.     

大鼠骨髓单个核细胞体外诱导向内皮分化的研究

目的 :为组织工程研究作准备 ,分离大鼠骨髓单个核细胞并诱导培养向内皮分化。方法 :成年SD大鼠 ,应用Ficoll淋巴细胞分离液 (密度1 .0 77g/ml) ,将长骨骨髓经非连续密度梯度离心 ,收集中层的单个核细胞 ,加入诱导培养基并置于纤维连接素包被的培养板上进行诱导分化 ,观察细胞生长状况 ,以透射电镜及Ⅷ因子、CD3 1、Lectin免疫组化以及流式细胞仪方法对培养细胞进行鉴定。结果 :细胞圆形、纺锤形单层融合贴壁生长 ;Ⅷ因子、CD3 1、Lectin免疫组化染色阳性 ;透射电镜显示细胞具有内皮特征性的Weibel Palade小体。结论 :采用Ficoll密度梯度离心可获得较高纯度的骨髓单个核细胞 ,经体外培养并诱导分化 ,具有血管内皮细胞的特征     

骨髓血管内皮祖细胞的分离培养及分化鉴定

目的 研究分离、培养小鼠骨髓血管内皮祖细胞的方法并对其进行诱导分化鉴定,为临床进行缺血性疾病的替代治疗奠定细胞学基础.方法 用灌注法分离小鼠骨髓血管内皮祖细胞,用血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子诱导其分化,形态学观察细胞的生长过程,并利用抗CD34抗体鉴定血管内皮祖细胞,利用抗vWF抗体、抗eNOS抗体鉴定血管内皮细胞. 结果小鼠骨髓血管内皮祖细胞可在体外培养条件下贴壁生长,可诱导分化为表达特异性组织蛋白的内皮细胞.结论 在小鼠骨髓内可分离出骨髓源性血管内皮祖细胞,呈贴壁增殖状态,并有分化能力.     

恒磁场对过氧化氢作用下人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的　观察不同强度恒磁场对过氧化氢 (H2 O2 )作用下人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖与凋亡的影响。方法　采用体外培养第 3代的HUVEC ,实验分为 6组 ,即对照组、1 0 0 μmol/LH2 O2 组及H2 O2 不同强度 (1Gs、5Gs、1 0Gs、50Gs)磁场组。各组细胞于培养及磁场作用 48h后收集标本 ,用MTT比色法测定细胞增殖 ,末端脱氧核糖核酸酶介导的dUTP末端标记法 (TUNEL法 )和流式细胞仪碘化丙啶染色法检测细胞凋亡。结果　 1 0 0μmol/LH2 O2 可抑制HUVEC增殖 ,诱导HUVEC凋亡 (P <0 0 5vs对照组 )。 1Gs、5Gs和 1 0Gs恒磁场组细胞增殖显著高于H2 O2 组 (P <0 0 5) ,细胞凋亡显著低于H2 O2 组 (P <0 0 5) ;50Gs恒磁场组细胞增殖和凋亡与H2 O2 组相比无明显差异 (P >0 0 5)。结论　 1 0 0 μmol/LH2 O2 可抑制HUVEC增殖并诱导HUVEC凋亡 ;1～ 1 0Gs的恒磁场可强度依赖性拮抗H2 O2 对HUVEC的作用 ,促进HUVEC增殖并抑制HUVEC凋亡。     

高糖及高胰岛素对小鼠骨髓内皮前体细胞增殖及功能的影响

目的研究高糖及高胰岛素对骨髓内皮前体细胞(EPCs)增殖、凋亡及分泌功能的影响。方法通过密度梯度离心法从小鼠(BALB/c)的骨髓中分离出EPCs,将细胞分为4组,A组为对照组(葡萄糖浓度5.5mmol/L),B、C组葡萄糖浓度分别为11.0 mmol/L、22.0 mmol/L,D组(葡萄糖浓度22.0 mmol/L+胰岛素25U/L)。利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,硝酸还原酶法测定细胞培养液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的含量。结果骨髓源性EPCs的增殖能力与A组(1.31±0.21)比较,B、C、D组(B组0.93±0.27,C组0.78±0.31,D组0.57±0.24)均明显降低,差异有统计学意义(均为P<0.05);B、C、D组间比较差异无统计学意义(均为P>0.05)。实验5 d后,B组的凋亡率为(17.95%±0.38%)、C组的凋亡率为(32.5%±0.63%)、D组的凋亡率为(31.48%±1.26%),3组的凋亡率均较A组的凋亡率(15.75%±0.60%)增高;C组及D组凋亡率均较B组增加,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。细胞分泌NO、总NOS(TNOS)显著减少、而诱导型NOS(iNOS)分泌显著增加(均为P<0.01)。结论高糖及高胰岛素引起的EPCs增殖能力降低,促使细胞凋亡,并损害细胞的分泌功能;高胰岛素对高糖引起的EPCs损害并未改善。