白细胞介素-1β对人牙周膜成纤维细胞中MCP-1表达影响的研究

目的:探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平的影响。方法:体外分离培养的人牙周膜成纤维细胞随机分为实验组和对照组,实验组细胞以不同浓度IL-1β(1、5、10、25 ng/mL)作用24 h;对照组细胞则不加IL-1β作用。分别采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测人牙周膜成纤维细胞中MCP-1 mRNA的表达;采用免疫荧光技术观察MCP-1的表达情况;采用Western blot方法检测其蛋白表达变化。结果:对照组hPDLFs中可见微弱的MCP-1表达;实验组hPDLFs经IL-1β刺激后,MCP-1在mRNA和蛋白水平表达都增强,这种调节作用在10 ng/mL IL-1β的作用浓度时最明显(P<0.05)。结论:在IL-1β介导环境下,hPDLFs中MCP-1的表达增高,而MCP-1表达增高可能是引起外周血单核细胞向局部炎症牙周组织募集的机制之一。     

热休克蛋白27在烟草烟雾提取物介导的牙龈成纤维细胞损伤中的表达变化

目的 观察在不同质量分数烟草烟雾提取物（CSE）干预下,热休克蛋白（HSP）27在人牙龈成纤维细胞（HGFs）损伤过程中的表达。方法 取原代培养并经过鉴定的3~8代HGFs,采用细胞划痕试验检测不同刺激质量分数（0、2.5%、5.0%、12.5%、25.0%、50.0%）的CSE对HGFs体外迁移的影响,并采用Western blot方法检测HSP27在HGFs中的表达。结果 CSE质量分数越高,细胞的迁移能力越弱;HSP27在正常HGFs中呈弱阳性表达,在CSE刺激后的HGFs中呈强阳性表达,且随CSE质量分数的增高,HSP27的相对表达量有逐渐增高的趋势,与细胞迁移能力相反。结论 HSP27在CSE介导的HGFs损伤中表达升高,在CSE介导的上皮损伤中有重要作用。     

白细胞介素-10对人牙龈成纤维细胞分泌白细胞介素-1β的抑制作用

目的:探讨白细胞介素-10(IL-10)在牙周炎症反应中的抑制作用。方法:用细胞培养法、酶联免疫吸附分析法 (ELISA)检测细胞培养液上清中的IL-1B浓度;用MTT法检测人牙龈成纤维细胞(HGF)对细菌脂多糖(LPS)、IL-10的增殖反应。结果:LPS以剂量依赖方式诱导HGF产生IL-1B,6 h达最大分泌量;IL-1B的分泌可被IL-10抑制,10 ng/ ml IL-10作用24 h抑制效应达最大;LPS对HGF具有促增殖作用,而IL-10对HGF的增殖无影响。结论:IL-10是一种抑制牙周炎症反应的细胞因子。     

氯化镧对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞分泌白细胞介素-8的影响

目的探讨稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导人牙龈成纤雏细胞分泌白细胞介素-8（IL-8）的影响。方法组织块法培养人牙龈成纤维细胞，用脂多糖对其进行诱导，ELISA法检测IL-8分泌量。结果经氯化镧处理的成纤维细胞虽有脂多糖诱导但细胞分泌IL-8量明显低于对照组（P〈0．01）。结论氯化镧具有抑制脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-8的作用，据此推测氯化镧的抗炎作用机理可能与其抑制脂多糖介导的炎症因子释放有关。     

白细胞介素－1β、转化生长因子－β对人牙周膜成纤维细胞DNA合成的影响

目的：观察白细胞介素－１β（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１β，ＩＬ－１β）和转化生长因子－β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β，ＴＧＦ－β）单独作用、组合后对人牙周膜成纤维细胞（ｈｕｍａｎｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＨＰＬＦ）的ＤＮＡ合成量的影响。方法：用３Ｈ胸腺嘧啶脱氧核苷细胞内掺入法。结果：ＤＮＡ合成量显著增多。浓度为０．０１ｎｇ／ｍｌ的ＴＧＦ－β与浓度为１０ｕ／ｍｌ的ＩＬ－１β组合后对ＨＰＬＦ的ＤＮＡ合成量与单纯ＩＬ－１β组间无显著差异（Ｐ＞０．０５），而０．１ｎｇ／ｍｌ、１．０ｎｇ／ｍｌ的ＴＧＦ－β与三种浓度ＩＬ－１β组合后，ＨＰＬＦ的ＤＮＡ合成量显著高于单纯的ＩＬ－１β组。结论：ＩＬ－１β、ＴＧＦ－β对ＨＰＬＦ的ＤＮＡ合成有促进作用，这两种细胞因子组合并非各个细胞因子作用的简单相加     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌对牙龈成纤维细胞表达白细胞介素-8的影响

目的:研究不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis, Pg)对人牙龈成纤维细胞表达IL- 8的影响,探讨fimA基因型与Pg致病力差异之间的关系.方法: Pg ATCC 33277(Ⅰ型),WCSP115(Ⅱ型),WCSP1.5(Ⅲ型),W83(Ⅳ型)分别与牙龈成纤维细胞在标准条件下共同孵育,于孵育后1、3、6、12 h收集细胞和上清,应用实时荧光定量RT- PCR和ELISA法分别检测牙龈成纤维细胞IL- 8 mRNA和蛋白的动态表达.结果:与对照组比较,各fimA型Pg对牙龈成纤维细胞IL- 8 mRNA和蛋白的表达均有明显的促进作用(P<0.01);其中ⅡfimA型组IL- 8 mRNA和蛋白的表达量明显高于其它fimA型组,不同时间点IL- 8 mRNA相对表达量分别为20.42±2.21～103.01±12.50,蛋白分泌水平为(137.46±4.97～323.24±13.74) pg/ml;而Ⅲ fimA型Pg组的表达水平弱于其它fimA型组,IL- 8 mRNA相对表达量为3.61±0.39～12.88±1.56,蛋白分泌水平为(44.83±3.68～189.19±87.34) pg/ml, 差异有统计学意义(P<0.05).结论:Pg可促进牙龈成纤维细胞IL- 8 mRNA和蛋白的表达,且各fimA型Pg的促进作用有所差异.提示: fimA基因型的不同可能是Pg的致病力差异的基因基础.     

牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞对白细胞介素8的趋化反应

目的评价牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞对白细胞介素8（interleukin-8,IL-8）的趋化反应。方法将体外培养第6代的牙龈成纤维细胞和牙周膜细胞（2.5×10     

HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达

目的：观察HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达及探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-1β（IL-1β）与HGF之间的关系。方法：分别采用IL-1β梯度浓度、最佳干预浓度和TGF-β1梯度浓度干预第5代人牙周膜成纤维细胞,并运用酶联免疫技术检测人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的表达。结果：经IL-1β单独作用,人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的含量较空白对照组高,并优选出IL-1β的最佳干预浓度为10 ng/mL。当一定浓度的TGF-β1和10 ng/mL的IL-1β联合干预人牙周膜成纤维细胞,该细胞上清液中HGF的含量较单独IL-1β作用组低。结论：TGF-β1能够抑制IL-1β诱导的人牙周膜成纤维细胞分泌HGF。     

IL-lra对IL-1β诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-6的拮抗作用

目的:研究白细胞介素-1受体拮抗剂对IL-1β所介导生物学功能的影响,为进一步临床应用提供理论依据.方法:采用细胞培养技术和ELISA夹心法.结果:经IL-1β单独作用,牙龈成纤维细胞培养上清液中IL-6含量明显增高,当一定浓度的IL-lra与1ug/L IL-1β共同作用人牙龈成纤维细胞后,培养上清液中IL-6的含量比单独IL-1β作用组低.结论:IL-lra能够抑制IL-l诱导的人牙龈成纤维细胞分泌IL-6.     

盐酸米诺环素对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β mRNA 表达的影响

目的研究盐酸米诺环素对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)mRNA表达的影响。方法培养人牙周膜成纤维细胞,实验分为5组:对照组(未加药品)、模型组(加入10μg/mL LPS)、低剂量干预组(加入10μg/mL LPS和50μg/mL盐酸米诺环素)、中剂量干预组(加入10μg/mL LPS和100μg/mL盐酸米诺环素)、高剂量干预组(加入10μg/mL LPS和200μg/mL盐酸米诺环素)。实时荧光定量PCR检测盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的影响。结果 IL-1βmRNA相对表达量:模型组高于对照组,对照组高于3个剂量干预组,其差异均有统计学意义(P<0.01);但高剂量干预组、中剂量干预组、低剂量干预组3组间的相对表达量,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炎的作用机制之一;本研究未发现盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的干预作用与药物剂量之间存在正相关关系。     

白细胞介素—1β,转化生长因子—β对人牙周膜成纤维细胞D…

观察白细胞介素－１β和转化生长因子－β单儿作用、组合后对人牙周膜成纤维细胞的ＤＮＡ合成量的影响。用＾３Ｈ胸腺嘧啶脱氧核苷细胞内掺入法。结果ＤＮＡ合成量显著增多。     

Satb2和Cbfα1基因在人牙龈成纤维细胞中的表达

目的:观察Satb2和Cbfα1在人牙龈成纤维细胞(HGFs)中的表达,为进一步研究二者在牙周组织再生中的作用奠定基础。方法:体外组织块法培养HGFs,并观察其形态和生长方式;同时采用RT-PCR和Western blot方法检测HGFs中Satb2和Cbfα1的表达。结果:体外培养的HGFs中hSatb2和hCbfα1 mRNA均呈阳性表达,但在蛋白质水平只检测到hSatb2蛋白的表达。结论:Satb2和Cbfα1在HGFs中有不同程度的表达,但能否作为刺激HGFs骨向分化的有效生长因子尚需进一步研究。     

IL—1ra对IL—1β诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL—6的拮抗作用

目的：研究白细胞介素－1受体拮抗剂对IL－1β所介导生物学功能的影响，为进一步临床应用提供理论依据。方法：采用细胞培养技术和ELISA夹心法。结果：经IL－1β单独作用，牙龈成纤维细胞培养上清液中IL－6含量明显增高，当一定浓度的IL－1ra与1μg/L IL-1β共同作用人牙龈成纤维细胞后，培养上清液中IL－6的含量比单独IL－1β作用组低。结论：IL－1ra能够抑制IL－1诱导的人牙龈成纤维细胞分泌IL－6。     

白细胞介素-1β（IL-1β）和地塞米松对成纤维细胞增殖的影响

目的：检测白细胞介素-1β（IL-1β）和地塞米松（DEX）对体外培养的口腔正常黏膜与口腔扁平苔藓（OLP）黏膜成纤维细胞增殖的影响。方法：应用MTT法检测3种浓度梯度的IL-1β和DEX对体外培养的14例OLP黏膜成纤维细胞和11例正常口腔黏膜成纤维细胞增殖活性的影响。结果：MTT测定结果显示,IL-1β对OLP黏膜成纤维细胞和正常口腔黏膜成纤维细胞的增殖均有促进作用,且随浓度增加促进作用增强;相反,DEX却抑制两种成纤维细胞的增殖,浓度越高抑制作用越强。结论：白细胞介素-1β可促进成纤维细胞的增殖,地塞米松则抑制成纤维细胞的增殖。     

IL-1β对人牙龈成纤维细胞在不同钛板表面表达炎性因子的影响

目的 :探讨白介素1β对不同钛板表面牙龈成纤维细胞分泌炎性因子的影响。方法 :将牙龈成纤维细胞接种在3种不同表面结构组分的钛板上,在白介素1β的刺激下,在3、6、24 h分别用聚合酶链反应(PCR)检测炎性因子白介素6及白介素8的表达量。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:在白介素1β的诱导下,牙龈成纤维细胞对炎性因子(IL-6、IL-8)的表达量明显增加;纯钛与钛合金的钛板比表面氮化处理的钛板产生炎性因子(IL-6、IL-8)的表达量较少。结论 :白介素1β能刺激炎性因子的高表达;纯钛和钛合金IL-6、IL-8表达量较少。采用纯钛和钛合金种植体,可减少种植体周围炎的发生率,提高种植成功率。     

人釉原蛋白重组质粒PsecTaq2A-AMG在人牙龈成纤维细胞表达的研究

目的　研究釉原蛋白重组质粒PsecTaq2A -AMG在人牙龈成纤维细胞 (GFB)中的表达 ,为牙周再生的基因治疗奠定基础。方法　采用酶解 -组织块法体外培养得到人牙龈成纤维细胞 ,用釉原蛋白重组质粒PsecTaq2A-AMG瞬时转染牙龈成纤维细胞 ,分别在第 4 8小时、第 5天、第 7天、第 14天收集细胞及细胞液 ,经ELISA连续测定釉原蛋白的表达。结果　转染后 4 8小时即检测到表达产物 ,表达量在第 5天和第 7天达到高峰 ,持续到第 14天仍可检测到釉原蛋白的表达。结论　实验结果为利用牙龈成纤维细胞为靶细胞 ,将釉原蛋白基因直接导入牙龈成纤维细胞内实现牙周再生的体内基因治疗奠定了基础     

IL-1β对体外培养人牙髓成纤维细胞中基质金属蛋白酶-2的影响

目的:探讨白细胞介素-1β(interleukin-β,IL-1β)对体外培养的人牙髓成纤维细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metallproteinase-I,MMP-2)的影响。方法:利用免疫组化和明胶酶谱法,检测正常和经IL-1β刺激后的牙髓成纤维细胞中MMP-2的表达、分泌和活性。结果:MMP-2在正常和经IL-1β刺激后的牙髓成纤维细胞中均有表达,后者表达明显强于前者。明胶酶谱分析显示,与对照组相比,经IL-1β刺激的牙髓成纤维细胞中MMP-2的水平在48 h后持续显著升高。结论:IL-1β可能参与调节牙髓成纤维细胞合成和分泌MMP-2,从而促进牙髓炎症的发生。     

可溶性CD14对LPS诱导人牙龈成纤维细胞活化的影响

目的:观察重组表达的sCD14对LPS的炎症介导作用的影响。方法:将异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)标记的LPS分别和sCD14以及阳性对照内毒素中和蛋白(endotoxin neutralizing protein,ENP)孵育后,加入人牙龈成纤维细胞培养系统中,通过流式细胞仪测定LPS与细胞结合后的荧光强度;采用ELISA检测细胞培养上清中的TNF-α和IL-6的含量。结果:sCD14和ENP可导致细胞膜平均通道荧光强度减低,LPS诱导的细胞因子TNF-α和IL-6分泌量显著下降。结论:sCD14和ENP使人牙龈成纤维细胞的LPS结合量显著下降,表明sCD14和LPS中和蛋白可竞争性结合LPS,引起细胞培养系统中游离LPS浓度下降,对细胞的炎症介导作用减小。     

一氧化碳对肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β共同诱导的人牙龈成纤维细胞黏附分子表达的影响

目的研究一氧化碳对炎性环境下人牙龈成纤维细胞黏附分子表达的影响。方法以50 ng·mL-1的肿瘤坏死因子（TNF）-α和10 ng·mL-1的白细胞介素（IL）-1β刺激加入或不加入500 μmol·L-1一氧化碳释放分子（CORM）的人牙龈成纤维细胞,用Western blot法检测细胞间黏附分子（ICAM）-1、血管细胞黏附分子（VCAM）-1的蛋白表达,用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测黏附分子的mRNA表达,用瞬时转染和报告基因测定法分析NF-κB的活性。结果TNF-α和IL-1β共同刺激后,人牙龈成纤维细胞ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达和蛋白表达均显著增强。CORM的加入可显著抑制ICAM-1和VCAM-1的表达。CORM可显著降低ICAM-1和VCAM-1诱导的NF-κB的活性。结论一氧化碳有可能成为牙周病治疗的一种极具潜力的新物质。     

人转化生长因子β1基因转染牙龈成纤维细胞促进牙周组织再生的动物实验

目的 评价人转化生长因子β1(human transform growth factor-β1,hTGF-β1)基因转染犬自体牙龈成纤维细胞(gingival fibroblast,GF)在治疗人工Ⅱ度根分叉骨缺损中作为组织工程种子细胞所发挥的作用.方法 将hTGF-β1基因转染后的犬自体GF作为组织工程种子细胞,与海螵蛸骨天然纳米羟基磷灰石(cuttlebone-transformed nanometer hydroxyapatite,CBHA)体外复合,制备犬下颌前磨牙区的Ⅱ度根分叉人工骨缺损模型,应用随机化完全区组设计方法将36颗犬前磨牙分为以下4组:①阴性对照组:不作任何处理直接缝合;②阳性对照组:置入牙周韧带细胞(periodontal ligament cell,PDLC)-CBHA复合物;③转染GF组:置入hTGF-β1基因转染犬GF-CBHA复合物;④未转染GF组:置入犬GF-CBHA复合物.每组9颗牙.对各组进行组织学观察和测量,并作示踪实验.结果 与阴性对照组比较,转染GF组、阳性对照组均可显著促进根分叉区牙周组织的再生(P＜0.01),两组的新生牙骨质高度(NC)、新生牙槽骨高度(NB)及新生结缔组织高度(NCT)分别为:(2.97±0.50)、(4.29±0.26)及(4.73±0.06)mm;(3.09±0.26)、(4.46±0.25)及(4.69±0.10)mm,且两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).未转染GF组虽可促进牙槽骨再生[NB=(3.46±0.32)mm],但牙根有一定程度的吸收;示踪实验显示:转染后的GF在新生牙槽骨及牙周膜组织中均可发现.结论 hTGF-β1基因转染后的犬自体GF作为组织工程种子细胞,与CBHA体外复合后在人工Ⅱ度根分叉骨缺损的治疗中有显著的促牙周组织再牛的作用,参与了新牛牙槽骨及牙周膜的形成.