人眼虹膜色素上皮细胞体外培养及超微结构观察

应用体外培养传代对１０例人尸眼虹膜色素上皮细胞进行观察分析。结果表明：直接刮取的细胞进行培养较酶消化法更易存活传代。原代细胞在光镜下呈多角形单层生长，胞浆内有丰富的色素颗粒，核相对透明，有１～２个核仁。传代后的细胞色素颗粒减少；电镜下见胞浆富含色素，细胞膜有明显微绒毛；免疫组化检查角蛋白抗原呈阳性反应，符合虹膜色素上皮细胞的特点。虹膜含有某些生物活性物质，因此虹膜色素上皮细胞的体外培养可作为有关研究的基础。     

虹膜周边切除手术标本的色素上皮细胞体外培养与超微结构研究

目的：体外培养虹膜周边切除标本中的色素上皮细胞(iris pigment epithelium，IPE)，并进行生物学检测。方法：用酶-显微解剖-酶分离法培养IPE细胞并传代，免疫组化方法鉴定，透射电镜观察超微结构。结果：酶-显微解剖-酶分离法在小标本可成功获得较高纯度和密度的IPE细胞。其形态与免疫标志物表达与视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞相似。结论：培养的IPE细胞为自体移植提供了较可靠的细胞来源。     

兔眼虹膜色素上皮细胞的培养与鉴定

目的:体外培养和观察兔眼虹膜色素上皮细胞(IPEC),为临床和实验研究IPE细胞提供基础。方法:采用酶消化加酶辅助机械分离法分离IPE细胞,观察培养细胞的生长情况,并采用免疫荧光法对其进行鉴定。结果:原代培养的IPE细胞多数呈圆形或六边形,细胞内充满黑色颗粒。传代培养的IPE细胞呈梭形或纤维细胞样生长,细胞中的色素颗粒也逐渐减少。免疫荧光法对培养细胞进行cytokeratin染色显示IPE细胞成阳性反应,阳性率达100%。结论:采用酶消化加酶辅助机械分离法可成功地分离培养出IPE细胞。     

人眼虹膜色素上皮细胞体外培养、冻存与复苏

目的：建立人眼虹膜色素上皮细胞体外培养并对其进行冻存与复苏。方法：直接刮取虹膜色素上皮细胞组织碎屑进行培养,光镜观察生长特性及形态特点,透射电镜观察其超微结构。根据慢冻速融的细胞冻存原则,定期收集细胞进行液氮冻存,至少2个月后进行复苏。结果：人眼虹膜色素上皮细胞体外培养成功,原代细胞在光镜下呈多角形单层生长,胞浆内有丰富的色素颗粒;电镜下见胞浆富含色素、细胞器丰富、细胞膜有明显微绒毛、微丝、相监细胞之间可见桥粒连接。共冻存6批细胞,进行4次复苏实验均成功,每镒复苏细胞存活为90％。结论：人眼虹膜色素上皮细胞体外培养的建立及冻存、复苏的成功,为研究某些疾病提供有利的基础。     

虹膜色素上皮细胞培养及移植

视网膜色素上皮细胞移植在技术上已趋完善,但免疫排斥反应的发生大大限制了移植物的长期存活。自体ＲＰＥ移植虽可避免排斥反应,但操作困难,并发症多,难以广泛应用。虹膜色素上皮细胞与ＲＰＥ具有相同的胚胎发育来源,可望替代ＲＰＥ用于自体移植。     

兔虹膜和视网膜色素上皮细胞的体外培养比较

目的 观察比较有色素兔虹膜色素上皮(IPE)及视网膜色素上皮(RPE)细胞的体外生长状况。方法 采用酶消化法及酶辅助机械分离法分别分离IPE和RPE细胞。观察培养的两种细胞的生长状况，并对其进行免疫组化鉴定。结果 原代IPE及RPE细胞大多呈圆形或六边形，细胞内充满了黑色素颗粒。随着传代的增加，呈梭形或纤维细胞样生长的细胞增多，细胞中的色素颗粒也逐渐减少。细胞角蛋白免疫组化染色显示IPE及RPE细胞绝大多数呈棕黄色阳性反应。Desmin兔疫组化染色显示IPE细胞中阳性细胞约占5％。结论 分离培养的IPE和RPE细胞纯度很高。IPE细胞中绝大多数为后层IPE细胞。IPE和RPE细胞的形态及体外生长特点类似。     

体外分离培养猪虹膜色素上皮细胞的生物学评价

目的 :培养猪的虹膜色素上皮 (IPE)细胞并进行IPE的生物学评价 ,为IPE移植治疗视网膜色素变性 (RP)打下基础。方法 :采用酶辅助的显微分离法对 5 0只猪眼进行IPE的原代和传代培养 ,免疫组化方法鉴定细胞 ,并对其生物学性状进行评价。结果 :从IPE生长曲线上看 ,细胞于接种后 2天开始进入细胞对数生长期 ,经过 3～ 4天的对数期生长后进入生长缓慢的平台期。细胞培养成功率为 85 0 %。原代细胞的贴壁率为 31 8%± 3 7% ,细胞的活力为 82 5 %± 5 1% ,传代细胞的贴壁率为 86 4 %± 4 3% ,细胞的活力为 91 2 %± 3 7%。伸展率为 83 6 %± 5 3% ,分裂时间为 2～ 7天 ,平均 3 5± 0 96天 ,总分裂次数为 6～ 10代。免疫组织化学显示 ,培养获得的IPE细胞的细胞角蛋白 (AE1/AE3)和S 10 0抗原染色均为阳性。结论 :对IPE细胞的生物学评价 ,不仅证实了IPE细胞高效纯化培养的实现 ,而且系列完整的数据为IPE移植治疗RP的相关实验提供了必要的基础保证     

体外培养中牛角膜内皮细胞和虹膜色素上皮细胞的FasL表达

目的：明确FasL在体外培养的角膜内皮细胞和虹膜色素上皮细胞（IPE）中FasL的表达情况及其意义,材料和方法：采用酶辅助的显微分离法分离新生牛眼IPE细胞,酶消化法分离角膜内皮细胞,进行体外细胞培养,抗FasL染色呈阳性;IPE细胞及对照组均为阴性。结论：在前房免疫赦免的形成中,角膜内皮细胞主要通过表达和分泌FasL发挥作用,而PE细胞则主要通过表达和分泌有免疫抑制作用的细胞因子以及通过一种非FasL－FasL诱导细胞凋亡的通路来阻止T细胞活化、增殖。     

酶-机械分离-酶消化法分离培养兔眼虹膜色素上皮细胞

目的　建立兔眼虹膜色素上皮细胞体外培养体系。方法　采用酶 机械分离 酶消化法分离兔眼IPE细胞 ,台盼蓝染色法测定细胞活力 ,在体外对其进行原代及传代培养扩增 ,倒置相差显微镜观察IPE细胞的生长情况。取第 2次传代的IPE细胞行AE1/AE3及S 10 0抗体细胞免疫组化染色对其进行鉴定。结果　酶 机械分离 酶消化法分离得到IPE细胞的活力为 70 %～ 85 % .原代细胞 16～ 4 8h贴壁 ,72h后开始生长 ,细胞大多呈多角形或方形 ,少数为梭形 ,12～ 16d生长融合为单层细胞。第 1次传代的IPE细胞 6～ 12h贴壁 ,5～ 7d生长融合为细胞单层。IPE细胞在体外培养可传 5～ 6代。免疫组化染色显示 ,几乎所有细胞胞浆呈现棕黄色阳性反应 ,对照组胞浆不染色。结论　酶 机械分离 酶消化法分离培养兔眼IPE细胞易于操作 ,联合应用细胞角蛋白、S 10 0蛋白单克隆抗体的免疫组化技术可用来鉴定IPE细胞。     

兔眼虹膜色素上皮细胞体外生物学特性研究

目的观察体外培养兔眼虹膜色素上皮(irispigmentepithelium,IPE)细胞的生物学特性,为IPE移植治疗老年性黄斑变性等疾病打下基础。方法应用扫描电镜、透射电镜对所培养IPE细胞的超微结构进行观察,并通过细胞的贴壁率、伸展率、倍增时间、总分裂次数的测定以及生长曲线的绘制对其在体外生长的生物学特性进行研究。结果体外培养的IPE细胞呈多角形,细胞内有色素颗粒和丰富的细胞器,细胞表面有长短粗细不等的微绒毛,生长成为具有尖基底极性的细胞单层。IPE细胞伸展率为81.5%±3.7%;原代IPE细胞的贴壁率为32.18%±3.18%;传代培养的IPE细胞的贴壁率为86.20%±2.84%;细胞倍增时间为2～7d,平均为(3.46±2.10)d;细胞总分裂次数为6～10代。结论体外培养IPE细胞与体内生长IPE细胞有着相似的生物学特性,通过对IPE细胞体外生物学特性的研究,为进一步探索其功能和自体移植提供了必要的实验基础。     

层黏连蛋白体外对人虹膜色素上皮细胞的影响

目的:研究不同浓度的层黏连蛋白对体外培养的人虹膜色素上皮细胞(IPE)的作用.方法:采用酶辅助的显微分离法对成人眼进行IPE的原代和传代培养,观察其形态;以不同浓度的层黏连蛋白(0,1,5,10mg/L)处理第3代IPE细胞,MTT法作出生长曲线,免疫荧光法检测细胞角蛋白1(CK1)表达的变化.结果:原代培养的IPE细胞内色素丰富,而传代培养后色素显著减少;低浓度层黏连蛋白(5mg/L)明显促进IPE细胞增殖(0.187 vs 0.151,0.236 vs 0.176,0.245 vs 0.215,0.261vs 0.238,0.279 vs 0.254;P＜0.05);高浓度(10mg/L)明显抑制细胞增殖(0.121 vs 0.151,0.081 vs 0.176,0.094 vs0.215,0.065 vs 0.238,0.078 vs 0.254;P＜0.05);CK1染色均为阳性,高浓度层黏连蛋白(10mg/L)使IPE细胞聚集,CK1表达明显增强.结论:层黏连蛋白对IPE细胞具有双重作用,低浓度的层黏连蛋白适于IPE细胞的体外培养.     

虹膜色素颗粒对兔眼小梁切除术后滤过通道瘢痕化影响的实验研究

目的探讨虹膜色素上皮(iris pigment epithelium,IPE)层色素颗粒对兔眼小梁切除术后滤过通道瘢痕化过程及Tenon囊成纤维细胞增生的影响。设计实验研究。研究对象新西兰大白兔18只。方法单眼做小梁切除手术模型。实验组巩膜瓣下放置0.1 ml(100μg/ml)猪IPE层色素颗粒并保留,阳性对照组和阴性对照组分别放置0.4 mg/ml丝裂霉素C棉片和生理盐水棉片3分钟。术后观察眼压、滤过泡形态30天,并对滤过泡及其周边组织进行组织病理学检查。主要指标眼压、滤过泡形态、手术滤过区瘢痕化程度。结果实验组、阳性对照组、阴性对照组兔眼术前平均眼压分别为(24.78±1.40)、(24.11±1.18)、(24.00±1.53)mmHg(F=0.241,P=0.789)。术后30天平均眼压分别为(20.28±1.87)、(20.39±2.28)、(23.33±1.14)mmHg(F=22.500,P=0.000)。实验组与阳性对照组无显著差异(P=0.86),实验组与阳性对照组均低于阴性对照组(P均=0.000)。滤过泡平均存留时间分别为(28.17±1.72)、(27.00±2.37)、(10.67±1.97)天(F=138.592,P=0.000)。组织病理学检查示实验组和阳性对照组兔眼滤过区结构相似,胶原纤维和瘢痕组织相对较少,而阴性对照组胶原纤维和瘢痕组织明显增生。结论小样本量短期实验研究表明,IPE层色素颗粒可能阻止Tenon囊成纤维细胞增生过程,有助于延缓小梁切除术后滤过通道瘢痕化。     

Multiple bilateral primary cysts of the iris pigment epithelium

CASE REPORT: Diagnostic and therapeutic considerations in the case of a 57-year-old man with multiple iris cysts in both eyes. COMMENTS: Small and hidden from view, most primary iris cysts of the iris pigment epithelium remain clinically silent. Larger cysts may be noted on examination, but often remain difficult to visualize due to their location. By providing a high-resolution view of the iris and ciliary body, ultrasound biomicroscopy is a useful adjunct to the clinical examination in distinguishing primary cysts of the iris pigment epithelium from solid uveal neoplasms.     

人胚眼色素上皮细胞的培养

准备可供植入的人色素上皮细胞。方法将１２－２４周人胚眼的视网膜色素上皮细胞自脉络膜毛细血管床上撕离,置入培养皿中作贴壁培养。结果培养的ＲＰＥ细胞可在培养皿中存活２－３个月。顺极性和反极性培养不影响细胞的形态和存活时间。培养的ＲＰＥ细胞具有吞噬视细胞外节的功能。结论培养的胚眼ＲＰＥ上皮片可作为同种异体ＲＰＥ移植的良好供体。