胰腺丝氨酸弹力蛋白酶mRNA在正常大鼠组织器官中的表达

目的探查胰腺丝氨酸弹力蛋白酶mRNA在大鼠组织器官中的表达.方法克隆地高辛素标记的大鼠胰腺丝氨酸弹力蛋白酶Ⅱ的RNA探针,摘取Wistar雄性正常大鼠的组织器官,固定于4%多聚甲醛,进行原位杂交.结果正常大鼠腹主动脉的内皮细胞、中膜平滑肌细胞以及血管外膜成纤维细胞,血液细胞中的淋巴细胞、单核细胞,气管透明软骨细胞,胰腺的腺细胞、腮腺、颔下腺上皮细胞,肝细胞、肝窦壁的内皮细胞,小肠黏膜杯状细胞,心肌细胞,肾间质的纤维母细胞,肺泡上皮细胞,大脑胶质细胞,皮肤真皮纤维母细胞,睾丸曲精细管内的初级精母细胞、次级精母细胞以及精子,脾脏以及胸腺的淋巴细胞等,均有弹力蛋白酶mRNA的表达.结论胰腺丝氨酸弹力蛋白酶mRNA广泛表达于正常大鼠血管,气管,胰腺,肝,小肠,心,肾,脑,皮肤,睾丸,脾,胸腺等组织器官中.     

弹性蛋白酶在球囊损伤后血管中膜平滑肌细胞迁徙中的作用

目的 探讨弹性蛋白酶在球囊损伤后动脉中的表达。方法 2F球囊导管损伤Wistar大鼠主动脉。用大鼠胰腺丝氨酸弹性蛋白酶Ⅱ的RNA探针进行原位杂交和Northem印迹杂交、抗弹性蛋白酶抗体进行免疫组化、胰腺弹性蛋白酶底物测定其活性；电镜观察迁徙细胞与其周围弹性纤维的连接处的数量。结果 球囊损伤后，迁徙细胞弹性蛋白酶mRNA、蛋白表达及其活性均有明显增加，细胞周围弹性纤维的连接处数量显著减少。结论 弹性蛋白酶是降解细胞外基质和动脉血管内弹性板、促使平滑肌细胞向内膜迁徙的重要原因。     

水通道蛋白-4在胰腺的表达

目的:观察水通道蛋白-4(AQP4)在大鼠胰腺的表达和分布特点,为研究胰腺的分泌及调节机制提供形态学基础.方法:利用免疫组化和原位杂交技术,检测AQP4及其mRNA在胰腺外分泌部和内分泌部的表达情况.结果:免疫组化显示,AQP4在胰腺外分泌部腺泡细胞膜上表达较弱,而在胰岛内分泌部细胞有明显的表达,主要位于细胞膜,呈小泡状;原位杂交显示,AQP4mRNA在外分泌部腺泡细胞有较弱的表达,在胰岛的内分泌细胞胞浆中有明显的表达.结论:根据AQP4及其mRNA在胰腺的表达和分布特点,提示其参与了胰岛内分泌细胞合成和分泌激素过程中水和电解质平衡的精细调节;而AQP4可能对胰腺外分泌过程的调节作用较小.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠胰腺纤维化过程中细胞凋亡的调节作用

目的 探讨洛沙坦对TNBS诱导大鼠实验性胰腺纤维化形成过程中胰腺腺泡细胞凋亡的影响及可能机制。方法 雄性SD大鼠100只随机分为正常组、对照组、治疗组，采用胰管内注射2％三硝基苯磺酸(TNBS)诱导大鼠胰腺纤维化模型。治疗组每天给予洛沙坦(10mg／kg)灌胃；对照组给予等容积的无菌蒸馏水。观察胰腺组织病理改变；TUNEL法原位检测凋亡胰腺腺泡细胞密度；透射电镜观察胰腺组织细胞形态学变化；逆转录一多聚酶链反应(RT-PCR)方法 检测Bcl-2凋亡相关基因家族成员Bcl-2、Bcl—XL、Bak、Bax mRNA表达。结果 洛沙坦治疗可逆转胰腺组织炎症细胞浸润、腺泡萎缩等异常改变。对照组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡较正常大鼠明显增加，胰腺组织Bax、Bak mRNA表达较正常增加，Bcl-2mRNA表达降低，Bcl-mRNA不表达；洛沙坦治疗后凋亡减少，洛沙坦治疗组Bax、Bcl-2mRNA表达及Bax／Bcl-2较对照组降低，Bak、Bcl—XLmRNA不表达。结论TNBS诱导大鼠胰腺纤维化形成过程中胰腺腺泡细胞凋亡增加；洛沙坦阻断1型血管紧张素Ⅱ受体(AT1R)可抑制其凋亡，其机制可能与调控bcl-2凋亡相关基因表达有关。由此可见，血管紧张素Ⅱ与AT1R可能介导了实验大鼠胰腺纤维化过程中胰腺腺泡凋亡的发生。     

人胚胎胸腺褪黑素受体亚型的分布

目的:应用免疫组织化学和核酸原位杂交技术显示人胚胎胸腺褪黑素受体及其亚型的分布.方法:人胚胎胸腺组织用4%多聚甲醛及0.1%DEPC固定,石蜡包埋组织,应用mt1和MT2受体亚型的特异性探针和鼠抗人 mt1和MT2受体单克隆抗体分别检测mt1和MT2受体亚型mRNA的表达及蛋白的翻译.结果:人胚胎胸腺组织的皮髓质的上皮细胞及胸腺小体均存在mt1和MT2受体亚型mRNA的表达及其蛋白的翻译.结论:人胚胎胸腺组织中存在mt1和MT2受体亚型mRNA及蛋白,提示在该组织中有mt1和MT2受体亚型的表达.     

大鼠心血管系统中Ⅱ型磷脂酶A2 mRNA表达及cDNA克隆

目的：探讨Ⅱ型磷脂酶A2（PLA2）mRNA在正常大鼠心血管系统中的分布情况,研究其基因和氨基酸顺序结构的特征,了解与心血管疾病有密切关系的PLA2。方法：从大鼠血、心肌、主动脉弓、下腔静脉近心段、腹主动脉和下腔静脉腹腔段的组织匀浆中提取总RNA,合成第一链cDNA,利用PCR扩增大鼠Ⅱ型PLA2 mRNA,并对大鼠腹主动脉的PLA2 cDNA进行克隆和序列分析。结果：在所检测的几个心血管系统组织中均能测到Ⅱ型PLA2 mRNA,大鼠腹主动脉的DNA和氨基酸结构与其他组织来源的PLA2有高度同源性。结论：Ⅱ型PLA2广泛存在心血管系统中,Ⅱ型PLA2 mRNA在血液和主动脉弓中的表达较高,提示这可能是一种有益的选择性表达,发挥着潜在的宿主防御细菌感染功能。     

粪弹性蛋白酶-1检验对囊性纤维化病胰腺外分泌功能的评估作用优于粪脂肪酶检验

研究背景和目的:胰腺外分泌功能的直接测定法, 具有高敏感度和高特异性。然而,在实际中,尤其对于儿童患者,直接测定法并不实用。囊性纤维化病(CF)的间接检测法中,粪弹性蛋白酶-1 测定已被证实具有高度特异性和敏感度,粪脂肪酶检测的价值尚不明确。本研究分别采用粪弹性蛋白酶-1检测和脂肪酶检测,间接测评CF患儿胰腺外分泌功能,对比两种检测法的敏感     

急性分离的肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道亚基mRNA表达

目的 研究急性大鼠肺泡Ⅱ型细胞钠通道各亚基的表达.方法 20只健康SD大鼠,对其肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术半定量检测ENaC三个亚单位α、β、γmRNA水平.结果 急性分离纯化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞ENaC三个亚单化均有表达,其中α-业基mRNA表达最强,显著高于β-和γ-业基,β-和γ-亚基mRNA表达无显著性差别.结论 大鼠肺泡Ⅱ型细胞钠通道在DNA水平上表达以α-亚基为主,α-亚基在肺水清除中起主要作用.     

高脂饮食诱导肥胖大鼠对胰腺组织AC3基因表达的影响

目的：探讨高脂饮食诱导的肥胖大鼠对胰腺组织中Ⅲ型腺苷酸环化酶（AC3）基因表达的影响.方法：95只SD大鼠（雌雄各半）随机分为对照组（10只）和高脂组（85只）,喂养14周,建成肥胖大鼠模型,选择造模成功的大鼠（10只）组成肥胖组,取胰腺组织以观察对照组与肥胖组AC3基因表达情况.结果：（1）肥胖组胰腺组织AC3 mRNA的表达较对照组明显降低（P＜0.01）;（2）雄性大鼠AC3 BmRNA的表达明显高于雌性大鼠（P＜0.05）.结论：肥胖影响胰腺AC3基因的表达;胰腺组织AC3 mRNA的表达有性别差异.     

氨基胍和维生素C调节1型糖尿病大鼠胰腺脂肪细胞膜iNOS的表达

目的观察氨基胍、维生素C对糖尿病大鼠胰腺的脂肪细胞膜iNOS蛋白表达的影响.方法利用链脲佐菌素腹腔注射法诱导建立1型糖尿病大鼠模型, SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、维生素C治疗组、氨基胍治疗组,治疗16周后取胰腺组织作免疫组织化学检测胰腺腺细胞的脂肪细胞膜iNOS蛋白表达情况.结果 （1）糖尿病组胰腺脂肪细胞膜iNOS阳性产物呈弥漫分布,其蛋白表达明显高于正常对照组;（2）氨基胍、维生素C组iNOS蛋白表达明显低于糖尿病组.结论 1型糖尿病大鼠胰腺的脂肪细胞膜iNOS蛋白表达升高,氨基胍（AG）、维生素C（VC）则对糖尿病组大鼠脂肪细胞膜iNOS蛋白质表达具有抑制作用.     

外源性巯基物质抗氧化及对胰腺腺细胞保护作用的形态学观察

为观测急性坏死性胰腺炎 (ANP)时外源性巯基物质的抗氧化作用及其对胰腺腺细胞的保护作用 ,将雄性Wistar大鼠 (n =4 5)随机分成 3组 :A组 :ANP动物生理盐水治疗组 (n =18) ,B组 :ANP动物硫普罗宁治疗组 (n =18) ,C组 :假手术组 (n =9)。动物分别于手术后 4、6、12h时间点杀死 (A、B组各时间点各 6只 ,C组 3只 ) ,检测胰腺组织中丙二醛 (MDA)的质量摩尔浓度 ,并观察胰腺组织细胞的形态学变化。结果 :ANP时胰腺组织中MDA的质量摩尔浓度明显升高 ,外源性巯基物质能抑制腺组织中MDA的增加 ;ANP时胰腺组织细胞损伤严重 ,外源性巯基物质能减轻胰腺组织细胞的损伤 ,尤其能减轻腺细胞粗面内质网的损伤。提示 :ANP时外源性巯基物质具有显著的抗氧化作用 ,并能保护胰腺组织细胞 ,尤其是保护腺细胞内质网结构的作用突出     

转化生长因子βⅡ受体在大鼠胰腺发育后期的表达

目的:探讨转化生长因子(TGF)-βⅡ受体在SD大鼠胰腺发育后期的表达及意义.方法:使用RT-PCR方法分别检测交配后18.5天、新生及成年SD大鼠胰腺TGF-βⅡ受体mRNA表达;使用Western blot方法分别对上述不同时期SD大鼠胰腺TGF-βⅡ受体表达进行蛋白质水平的检测.结果:新生鼠胰腺TGF-βⅡ受体表达在核酸与蛋白质水平上均明显高于18.5天胎鼠与成年鼠胰腺,差异有显著性(P＜0.05).结论:TGF-βⅡ受体表达在新生鼠阶段有明显上调.     

人胚胎胸腺褪黑素受体的亚型的分布

目的：应用免疫组织化学和核酸原位杂交技术显示人胚胎胸腺褪黑素受体及其亚型的分布。方法：人胚胎胸腺组织用4%多聚甲醛及0.1?PC固定,石蜡包埋组织,应用mt1和MT2受体亚型的特异性探针和鼠抗人mt1和MT2受体单克隆抗体分别检测mt1和MT2受体亚型mRNA的表达及蛋白的翻译。结果：人胚胎胸腺组织的皮髓质的上皮细胞及胸腺小体均存在mt1和MT2受体亚型mRNA的表达及其蛋白的翻译。结论：人胚胎胸腺组织中存在mt1和MT2受体亚型mRNA及蛋白,提示在该组织中有mt1和MT2受体亚型的表达。     

原位杂交组织化学的进展及其应用

原位杂交组织化学(in situ hybridization histochemistry,ISHH)是将分子杂交与组织化学相结合的一项技术,此技术的基本原理是通过已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针(probe),如双链或单链DNA探针、RNA探针、合成寡核苷酸探针,与组织细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合,形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统(如放射自显影、组织化学或免疫组织化学)在核酸原有的位置上把它显示出来,进而探测组织细胞内标记探针及其转录产物(mRNA)的定位。自1969年,Gall     

缺陷型TGFβ1Ⅱ型受体真核表达质粒载体的构建

目的：本实验旨在通过构建大鼠缺陷型TGFβ1Ⅱ型受体的真核表达质粒载体,为研究大鼠肝组织因TGFβ1Ⅱ型受体缺陷而阻断TGFβ1的作用后,对人工免疫性大鼠的肝组织及其他组织的影响提供实验材料.方法：根据大鼠肝组织TGFβ1Ⅱ型受体的基因序列,设计在特异的位置添加终止密码,在此序列两端加入特异的限制性内切酶的酶切位点,从而构建大鼠的缺陷型TGFβ1Ⅱ型受体基因序列,再利用基因重组技术,将其连接在真核表达质粒载体中,对此质粒载体进行酶切电泳鉴定和DNA测序加以验证.结果：运用分子生物学技术,成功获取突变体TGFβ1Ⅱ型受体真核表达质粒载体,经过DNA测序鉴定,确认为实验预期所需.结论：TGFβ1Ⅱ型受体真核表达质粒载体构建成功,其关键涉及基因片段及载体的选择.     

雷公藤甲素调节佐剂关节炎大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织细胞自噬的实验研究

目的观察雷公藤甲素（TP）对佐剂关节炎（AA）大鼠滑膜脾脏胸腺自噬相关基因（Atg）/自噬标记蛋白（LC3-Ⅱ）、Beclin1表达和血清细胞因子水平的影响。方法将大鼠随机分为4组:正常对照 (NC) 组,模型对照 (MC) 组,来氟米特（LEF）组,雷公藤甲素（TP）组,每组12只,后3组复制成AA大鼠模型。致炎后第13 d开始给药。NC组、MC组给予生理盐水灌胃,每天1 次;LEF组按5 mg/kg的剂量灌胃,每天1次;TP组按50 μg/kg的剂量,每天1次。连续给药30 d。观察大鼠关节及其病理形态学变化,ELISA法检测血清细胞因子B淋巴细胞刺激因子（BAFF）、白介素（IL）-1、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL- 15、IL-10表达,RT-PCR法检测大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织 Atg5、 Atg7、 Atg12 mRNA,Western blot法检测大鼠滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达。结果 治疗后,TP组和LEP组大鼠足跖肿胀度（E）和关节炎指数较MC组降低。与NC组比较,MC组大鼠血清BAFF、IL-1、TNF-α升高,IL-15、IL-10降低,滑膜 Atg5、 Atg12mRNA降低,脾脏 Atg5mRNA降低,脾脏 Atg7、 Atg12mRNA及胸腺 Atg12mRNA升高,滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin1下降（P<0.05或0.01）。与MC组比较,TP组滑膜 Atg7、 Atg12 mRNA降低,脾脏 Atg5、 Atg7、 Atg12 mRNA及胸腺中 Atg5、 Atg7 mRNA降低, Atg12 mRNA升高;滑膜、脾脏、胸腺组织LC3-Ⅱ、Beclin 1升高（P<0.05）。与LEF组比较,TP组TNF-α、BAFF降低,E、IL-15升高（P<0.05或0.01）。TP组滑膜 Atg7mRNA及胸腺 Atg5、 Atg7 mRNA表达降低,胸腺 Atg12mRNA及脾脏 Atg5、 Atg7、 Atg12mRNA表达升高。结论TP通过调节滑膜、胸腺、脾脏组织细胞自噬,改善关节滑膜炎症反应。     

体外转录法制备地高辛标记cx43cRNA探针

原位杂交常用探针种类较多。检测组织细胞中mRNA，首选cRNA探针。与DNA探针不同，它是单链探针，杂交时无需变性，也没有互补链的干扰，敏感度比cDNA探针要高；与寡脱氧核酸探针比较，其敏感度也要高出许多；并且cRNA探针杂交形成RNA-RNA双链核酸比RNA-DNA和DNA-DNA双链核酸更稳定，从而允许多次洗涤，提高杂交信号，降低背景染色。但也有一些缺点，探针要求条件高，严防RNA酶污染；粘性强，与组织有较高的非特异性结合，需要多次漂洗。用地高辛标记cRNA探针，既克服了同位素探针的一些缺点，如受半衰期的限制，污物处理困难等．又避免了生物素标记探针时受内源性生物素的干扰。所以我们制备地高辛标记的cRNA探针原位杂交检测宫颈组织中的connexin43(CX43)mRNA。     

单纯性胰腺创伤后大鼠胰腺细胞增殖状况的实验研究

目的：构建大鼠单纯性胰腺创伤模型观察胰腺细胞增殖变化特点并探讨胰腺细胞增殖与组织损伤的关系。方法将60只Wistar大鼠分为2组：撞击组（采用BIM‐Ⅲ生物撞击机构建胰腺创伤大鼠模型,40只）和对照组（假手术组,20只）,每组大鼠于建模后6、24、72 h ,7 d处死,采用分光光度法检测各组大鼠血清淀粉酶（AMS）、脂肪酶（LPS）活性,通过TUNEL染色和流式细胞技术测定胰腺组织细胞死亡并分析细胞周期分布特点,Western blot测定胰腺组织Bcl‐2、Bax蛋白的表达。结果撞击组大鼠LPS活性升高时相点晚于AMS且持续时间较长,TUNEL染色、流式细胞检测、Western blot结果揭示胰腺创伤可诱导胰腺组织细胞凋亡和代偿性增生。胰腺细胞增殖变化特点表明胰腺创伤后的最佳治疗时间是发病24 h内。结论同时检测AMS和L PS有助于判定胰腺的外分泌功能受损情况。     

经皮导管引流对重症急性胰腺炎大鼠胰腺损伤的影响

目的 探讨经皮导管引流(percutaneous catheter drainage,PCD)对大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)胰腺损伤的影响及意义.方法 60只Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组(仅行开腹手术)、SAP组(逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠诱导SAP大鼠模型)和PCD治疗组(在SAP组基础上行PCD治疗),每组20只,每组分6、24 h2个时相点,每时相点10只.分别于术后6、24 h取血清及腹水测定TNF-o、IL-1β及淀粉酶、蛋白酶水平,留取胰腺组织制作石蜡切片行光镜下病理检查、免疫组化检测Bcl-2、Bax在胰腺组织的表达以及采用TUNEL染色观察胰腺组织细胞的凋亡指数.结果 注射牛磺胆酸钠后大鼠血清淀粉酶、TNF-α、IL-Iβ在造模后有显著升高(P＜0.05),相同时相点的大鼠经PCD治疗后血清及腹水中炎症因子及腹水中蛋白酶含量即有明显下降(P＜0.05),光镜病理检查提示PCD治疗组大鼠胰腺病理损伤较未治疗的SAP大鼠明显改善,TUNEL染色可见术后24 h PCD治疗组大鼠胰腺组织细胞凋亡指数较未治疗的SAP组高[(14.6±2.1)vs(2.7±1.5),P＜0.05],免疫组化结果提示PCD治疗后Bcl-2表达下调[术后24 h:(10.81±2.16)vs(28.45 ±5.41),P＜0.05]、Bax表达上调[术后24 h:(23.17 ±4.39) vs (9.64±1.85),P＜0.05].结论 PCD可减轻SAP大鼠胰腺损伤并缓解其病情,其可能机制与引流出富含炎症细胞因子及胰酶等有害物质的腹水从而抑制机体炎症反应促进胰腺组织细胞凋亡有关.     

大鼠胰腺不同发育时期转录因子Nkx2.2和Nkx6.1 mRNA的表达调控研究

目的：研究大鼠胚胎胰腺发育后期、新生期及成年期对转录因子Nkx2．2和Nkx6．1的mRNA表达调控。方法：利用显微分离等方法分离胚胎18．5天、新生和成年大鼠胰腺,对胰腺标本提取总RNA．利用胰腺内外分泌细胞分子标志——胰岛素和淀粉酶来鉴定胰腺标小,再用RT-PCR分析Nkx2．2或Nkx6．1存大鼠胰腺几个不同发育时期的mRNA表达情况结果：Nkx6．1在胚胎18．5天胰腺中有表达,出生时表达量有增加,到了成年显著下降。Nkx2．2的mRNA存胚胎期、新生期和成年期均有表达,新生期表达量较其他两个时期有显著性增加。从以上两个转录因子在胰腺不同发育时期的表达情况来看．它们的其同点是胚胎期有表达,新生期表达量较胚胎后期和成年期高,成年期表达量呈下降趋势。结论：不同生长发育时期对转录因子Nkx2．2和Nkx6．1的mRNA具有调节作用,新生期细胞增生分化加速,这与Nkx2．2、Nkx6．1等转录因子表达量增高有关。