蝎毒抗癌多肽对两种肝癌细胞抑制作用研究

本文主要观察蝎毒抗癌多肽（APBMV）对人和鼠的2种肝癌细胞株（SMMC-7721和H22）的抑制作用。采用噻唑蓝（MTT法）、集落形成抑制实验，用丝裂霉索C（MMC）为阳性对照药品。以蝎毒提取物APBMV各组分以不同浓度，分别处理小鼠肝癌细胞H。和人肝癌细胞株SMMC-7721生长情况。结果显示BMKⅢ对H22细胞的细胞毒性和集落形成的抑制作用略强于MMC组，与对照组差异显著。APBMV导致SMMC-7721细胞代谢MTT的能力显著低于对照组；APBMV能显著抑制该细胞的生长，剂量-效应关系明显；当APBMV的浓度〉8μg／ml时，SMMC-7721细胞的集落形成率显著低于对照组。APBMV和对H22细胞和SMMC-7721细胞具有明显的细胞毒性和生长抑制作用，是存在于蝎毒中的一种有效低毒的抗肿瘤成分。     

重组人生长激素体外干预人肝癌细胞生长及受体表达

目的研究体外环境下重组人生长激素（rhGH）对生长激素受体（GHR）不同表达状态的人肝癌细胞株增殖、凋亡及其细胞膜表面GHR密度的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HepG-2、SMMC7721和QGY-7701,采用免疫细胞化学方法检测这3种肝癌细胞GHR的表达。每种肝癌细胞根据不同处理分为4组：未处理组、50ng／mlrhGH干预组、100ng／mlrhGH干预组、200ng／mlrhGH干预组。采用四甲基偶氮唑蓝比色法、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）荧光染色法、酶联免疫吸附法分析不同浓度rhGH对人肝癌细胞系的细胞生长、增殖、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）分泌等的影响。流式、放射性受体分析方法检测rhGH处理后细胞膜表面GHR表达情况。结果细胞株HepG-2高表达GHR;与未处理组相比,50、100、200ng／mlrhGH干预24h后生长率明显增高为：107．705％、114．181％、107．406％（P〈0．05）,48h后生长率明显增高为：109．594％、114．156％、109．292％（P〈0．05）;CFSE荧光强度明显减弱（P〈0．05）;50、100、200ng／mlrhGH干预组24h后下游蛋白IGF-1分别为（236．94±19．07）、（247．16±14．56）、（217．94±33．61）pg／ml,明显高于未处理组的（173．86±27．46）pg/ml（P〈0．05）;50、100、200ng／mlrhGH干预后,流式细胞术检测胞膜表面GHR表达情况,荧光强度较未处理组明显增加（P〈0．05）;放射性受体分析法检测50、100、200ng／mlrhGH干预后胞膜表面GHR位点数（10^3／细胞）分别为：8．44±0．24、9．40±0．51、8．33±0．31,明显多于空白对照组的7．51±0．54（P〈0．05）。细胞株SMMC7721弱表达GHR,细胞株QGY-7701未表达GHR,与未处理组比,rhGH干预组生长率、CFSE荧光强度、下游蛋白IGF-1、GHR表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论体外环境下,rhGH可以促进GHR高表达人肝癌细胞株HepG-2增殖,提高其IGF-1的表达量和增加其胞膜GHR密度;但不促进人肝癌细胞株QGY-7701、SMMC7721增殖,不能使其GHR表达状态发生改变。     

吴茱萸次碱对硝基氯苯诱导的Nc／Nga小鼠特应性皮炎样皮损的影响

目的观察吴茱萸次碱对特应性皮炎动物模型Nc／Nga小鼠的作用。方法外用2,4-二硝基氯苯（DNcB）反复刺激Nc／Nga小鼠建立特应性皮炎动物模型,通过观察皮肤组织病理学切片、免疫学指标评价皮炎损伤程度,观察吴茱萸次碱对特应性皮炎动物模型Nc／Nga小鼠的治疗作用。结果外用DNCB可以引起Nc／Nga小鼠湿疹样皮炎的产生;模型组小鼠血浆IgE水平（124．42±11．14ng／m1）较正常对照组（17．22±3．56ng／m1）增高（P〈0．05）;治疗组IL-12和IFN-γ水平（62．12±3．14pg／ml,68．29±1．39pg／m1）较模型组血浆IL-12和IFN-γ水平（20．14±6．15pg／ml,51．23±1．45pg／m1）增高,IgE水平（69．17±4．15ng／m1）较模型组IgE水平下降（P〈0．05）;醋酸地塞米松组血浆IL-12、IFN-γ和IgE水平（59．15±1．24pg／ml,64．12±1．19pg／ml,6817±1．15ng／ml）与治疗组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论吴茱萸次碱可能通过促进IL-12和IFN-γ分泌,抑制IgE的合成,发挥治疗NdNga小鼠特应性皮炎样皮损的作用。     

子宫内膜异位症患者腹腔液中GRO-α、VEGF的水平变化及相关性研究

目的探讨子宫内膜异位症（EMs）患者腹腔液中生长相关性癌基因-1（GRO-α）、血管内皮生长因子（VEGF）的水平变化及其相关性。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测39例内异症患者（EMs组）及25例非内异症患者（对照组）腹腔液中GRO-α及VEGF的水平。结果（1）在EMs组中,GRO-α、VEGF的水平分别为（108．77±20．58）ps／ml、（199．67±99．26）pg／ml,均高于对照组的（71．07±18．96）pg／ml、（115．46±32．39）pg／ml（P〈0．05～0．01）;（2）在EMs组中,III—IV期患者的GRO—α水平为（117．65±20．81）pg／ml高于I～II期患者的（99．43±16．05）Pg／ml,而III—IV期患者的VEGF水平为（154．82±54．55）pg／ml,低于I—II期患者的（246．894-114．34）pg／ml（P〈0．05～0．01）;（3）在EMs组中,GRO-α水平与r-AFS评分呈正相关（r=0．439,P〈0．05）,而VEGF与r—AFS评分无相关（r=～0．210,P〉0．05）;（4）在EMs组中GRO-α、VEGF之间无相关（r=-0．05,P〉0．05）。结论腹腔液中GRO-α、VEGF的增高可能与内异症的发病有关;GRO-α与疾病的严重程度有关。     

窄谱中波紫外线治疗对寻常性银屑病外周血IL-23／Th17轴表达的影响

目的观察窄谱中波紫外线（NB-UVB）治疗寻常性银屑病的疗效及其对外周血IL-23／Thl7轴的影响,探讨NB-UVB治疗银屑病的作用机制。方法对本院48例寻常性银屑病患者采用NB．UVB治疗20次,以皮损面积和严重程度（PASI）评分评价疗效;采用三色法流式细胞仪检测健康对照组及患者治疗前后的外周血Thl7细胞,同时采用ELISA法检测IL-17及IL-23的水平。结果患者NB-UVB治疗前后评分明显下降[（8．12±4．05）分vs（3．98±2．03）分,P〈0．01];与健康对照组比较,Th17细胞百分比[（2．78±1．93）％vs（0．98±0．56）％]、IL-17[（23．85±7．98）ps／mlVs（6．53±4．26）pg／m1]及IL-23[（29．73±12．08）pg／ml vs（16．73±8．91）pg／m1]的水平明显增高（P〈0．01）,NB．UVB治疗后外周血r111117细胞的百分比[（1．134-0．51）％],血清IL-17的水平[（8．03±5．01）pg／ml]及IL-23的水平[（17．03±9．85）pg／ml]较治疗前显著下降（P〈0．01）,其水平高低与PASI评分呈正相关（P〈0．05）。结论NB．UVB照射可能通过调节患者IL-23／Th17轴而发挥治疗银屑病的作用。     

卵巢癌腹水中血管内皮生长因子的表达及临床意义

目的：探讨卵巢癌恶性腹水中血管内皮生长因子（VEGF）水平与临床病理因素之间的相关性。方法采用 ELISA 方法检测148例卵巢癌患者恶性腹水中 VEGF 的表达。结果卵巢癌组腹水中 VEGF 表达水平为（909.16±583.15）pg／ml,显著高于良性组的（258.13±127.82）pg／ml,两组差异有统计学意义,其 VEGF 的表达与淋巴结转移及临床分期相关（P ＜0.05）。VEGF 高表达患者（≥613.38 pg／ml）的生存期[（9.98±0.68）月]明显低于 VEGF 含量低的（＜613.38 pg／ml）患者的生存期[（23.64±0.65）月],差异有统计学意义。多因素 Cox 回归分析结果显示腹水 VEGF 值与卵巢癌患者的生存期明显相关（P ＜0.001）。结论腹水 VEGF 值可成为卵巢癌患者独立预后指标。     

吲哚-3-甲醇抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长作用及机理探讨

目的探讨吲哚-3-甲醇(I3C)抑制人肝癌细胞株SMMC-7721生长作用及机理。方法采用人肝癌细胞株SMMC-7721制备荷瘤裸鼠;通过测量肿瘤大小和病理学检测,观察I3C对肿瘤细胞的抑制作用;采用流式细胞仪检测肿瘤细胞周期、线粒体膜电位;采用Western blot法检测相关蛋白的表达。结果经I3C作用后,SMMC-7721细胞生长变慢,细胞周期、线粒体膜电位、相关蛋白的表达改变。结论 I3C能够抑制SMMC-7721细胞生长,细胞周期和细胞凋亡相关信号分子可能在其中发挥了一定作用。     

分化型甲状腺癌术后复发患者血管内皮生长因子及内皮抑素在血清中表达的临床意义

目的探讨血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）及内皮抑素（Endostatin,ES）在分化型甲状腺癌术后复发患者血清中表达的临床意义。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测分化型甲状腺癌术后肺转移患者7例、局部复发患者18例及对照组30例正常人群血清VEGF（serum VEGF,sVEGF）及内皮抑索（Serum Endostatin,sES）的表达水平及化学发光法检测血清FT,、Fr4、TsH、Tg、TgA的浓度,应用SPSS13．0统计学软件包分析,计量资料数据比较应用t检验,sVEGF、sES与血清甲状腺球蛋白浓度相关关系采用Spearman等级相关分析。结果复发后肺转移组患者sVEGF、sES[（623．2±139．4）pg／ml,（38．7±9．2）ng／m1]明显高于局部复发组[（397．5±60．2）pg/ml,（31．2±7．6）mg／ml）,两者比较差异具有统计学意义（t=4．136,2．092,P〈0．05）,肺转移组在复发前后sVEGF、sES[（207．6±33．4）pg／ml,（26．2±6．8）ng／ml;（623．2±139．4）pg／ml,（38．7±9．2）ng／ml],两者比较差异具有统计学意义（t=7．671,2．891,P〈0．05）,局部复发组在复发前后sVEGF、SES[（216．3±42．7）pg,／ml,（25．4±4．9）ng／ml;（397．54-60．2）pg／ml,（31．2±7．6）ng／ml],两者比较差异亦具有统计学意义（t=9．609,2．721,P〈0．05）,甲状腺癌术后复发的患者血清甲状腺球蛋白浓度与sVEGF及sES表达呈直线正相关（r=0．786,0．327,P〈0．01）。结论sVEGF、sES在分化型甲状腺癌术后局部复发及肺转移患者血清中高表达,可作为评估分化型甲状腺癌生物学行为的一项指标。     

生脉散对大肠杆菌脂多糖诱导慢性肝衰竭大鼠细胞因子水平的影响

目的探讨生脉散对慢性肝衰竭大鼠大肠杆菌脂多糖（LPS）诱导细胞因子水平的影响。方法采用CCl。混合液腹腔注射复制慢性肝衰竭大鼠模型,观察LPS诱导2h后生脉散后对血清内毒素、细胞因子水平的影响。结果CCl。混合液能明显增加大鼠血清IL-6[（64．50±18．79）pg／mlVS（4．79±0．57）pg／m1]、ICAM-1[（25100．00±5258．85）pg／mlVS（4215．50±942．79）pg／m1]和TNF-α[（17．55±2．39）pg／mlVS（10．92±5．02）pg／m1]水平（P〈0．05）,但对血清LPS水平无明显影响[（0．058±0．007）EU／mlVS（0．040±0．002）EU／ml,P〉0．05];中药生脉散能显著降低CCl。慢性肝衰竭大鼠血清IL-6、ICAM-1和TNF-α水平[分别为（17．20±3．12）pg／ml、（9490．00±2725．78）pg／ml、（3．00±1．00）pg／ml,P〈0．05]。LPS攻击2h后能明显升高CCI。混合液大鼠血清LPS、TNF-α、IL-6、ICAM-1水平[分别为（0．501±0．019）EU／ml、（19750．00±9655．17）pg／ml、（5615．00±490．50）pg／ml、（41000．00±589．88）pg／ml,P〈0．01]。结论在慢性肝衰竭模型中,LPS能增加TNF-α,IL-6和ICAM-1等炎症因子水平,中药生脉散可降低LPS水平,并抑制LPS诱导的炎症因子水平,阻断了炎性介质及LPS本身对机体的损伤。     

沙利度胺联合顺铂对A549肺腺癌细胞株的体外实验

目的观察沙利度胺与顺铂（DDP）联合应用对A549人肺腺癌细胞凋亡的影响,观察沙利度胺对肺腺癌A549细胞VEGF、BFGF蛋白表达的影响。方法采用PI单染法流式细胞检测细胞凋亡率;采用免疫细胞化学方法检测沙利度胺处理后肺腺癌A549细胞VEGF、BFGF蛋白表达的变化。结果在一定浓度范围内,沙利度胺联合DDP处理组细胞凋亡率明显高于单药组;沙利度胺（7.5mg/L）作用于人肺腺癌A549细胞后,处理组的VEGF、BFGF蛋白表达与未加药组比较差异显著。结论沙利度胺DDP联合,可增加A549人肺腺癌细胞的凋亡率;沙利度胺可抑制A549人肺腺癌细胞VEGF、BFGF的蛋白表达。     

葡萄球菌肠毒素B对人肝癌和肺癌传代细胞株细胞增殖的影响

目的探讨葡萄球菌肠毒素B(SEB)对人肝癌传代细胞株SMMC7721和人肺癌传代细胞株D6细胞增殖的抑制作用.方法采用MTT比色法,检测不同浓度和作用时间的SEB对人肝癌传代细胞株SMMC7721和人肺癌传代细胞株D6增殖的抑制作用.结果应用不同浓度的SEB3d后,对SMMC7721细胞和D6细胞的增殖均产生抑制作用;5、10、20ng/ml的SEB均能抑制SMMC7721细胞和D6细胞的体外增殖,抑制的程度与SEB的浓度、作用时间有关.结论葡萄球菌肠毒素B对人肝癌传代细胞株SMMC7721和人肺癌传代细胞株D6能产生一定的增殖抑制作用.     

VEGF-C诱导宫颈癌Hela细胞Bcl-2、cyclinD1的表达

目的研究VEGF-C对体外培养的宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的分子机制。方法应用重组人VEGF-C蛋白体外刺激宫颈癌Hela细胞,MTT法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡、Western Blotting检测增殖凋亡相关基因Bcl-2、cyclin D1蛋白水平的变化。结果 10、20、50 ng/μl VEGF-C处理后,细胞增殖指数分别为(1.00±0.03)、(1.25±0.05)、(1.55±0.08)、(2.13±0.08),呈剂量依赖性升高(P0.05)。细胞周期S期比率呈剂量依赖性升高(P0.05),分别为(30.91±0.09)%、(37.95±0.27)%、(45.05±0.40)%、(64.26±0.20)%;细胞凋亡率呈剂量依赖性降低(P0.05),分别为(12.4±0.3)、(11.4±0.2)、(9.6±0.15)、(5.5±0.25)。Bcl-2、cyclin D1蛋白表达呈剂量依赖性升高。结论外源性VEGF-C通过细胞内信号的传递,诱导cyclin D1的表达,使肿瘤细胞S期加快,促进细胞周期的进程,来促进Hela细胞增殖;诱导Bcl-2的表达,抑制凋亡。     

Cat's whiskers tea (Orthosiphon stamineus) extract inhibits growth of colon tumor in nude mice and angiogenesis in endothelial cells via suppressing VEGFR phosphorylation

Cat's whiskers (Orthosiphon stamineus) is commonly used as Java tea to treat kidney stones including a variety of angiogenesis-dependent diseases such as tumorous edema, rheumatism, diabetic blindness, and obesity. In the present study, antitumor potential of standardized 50% ethanol extract of O. stamineus leaves (EOS) was evaluated against colorectal tumor in athymic mice and antiangiogenic efficacy of EOS was investigated in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). EOS at 100 mg/kg caused 47.62?± 6.4% suppression in tumor growth, while at 200 mg/kg it caused 83.39 ± 4.1% tumor regression. Tumor histology revealed significant reduction in extent of vascularization. Enzyme-linked immunosorbent assay showed EOS (200 mg/kg) significantly reduced the vascular endothelial growth factor (VEGF) level in vitro (211?± 0.26 pg/ml cell lysate) as well as in vivo (90.9 ± 2 pg/g tissue homogenate) when compared to the control (378 ± 5 and 135.5 ± 4 pg, respectively). However, EOS was found to be noncytotoxic to colon cancer and endothelial cells. In vitro, EOS significantly inhibited the migration and tube formation of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). EOS suppressed VEGF-induced phosphorylation of VEGF receptor-2 in HUVECs. High performance liquid chromatography (HPLC) analysis of EOS showed high rosmarinic acid contents, whereas phytochemical analysis revealed high protein and phenolic contents. These results demonstrated that the antitumor activity of EOS may be due to its VEGF-targeted antiangiogenicity.     

氧化低密度脂蛋白对树突状细胞表面CD36表达的影响

目的探讨氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）对树突状细胞表面CD36表达的影响。方法梯度离心法分离人外周血单核细胞,经含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白介素4的DC完全培养液中培养,使其分化为DC。DC分别与不同浓度OX—LDL（分别为10μg／ml、50μg／m1）共同孵育48h后,镜下观察DC形态变化,同时采用流式细胞术检测DCs表型（CDlot、CD83）和CD36的表达,以及用ELISA法检测细胞土清液中IL-10、IL—12含量。结果与对照组相比,OX—LDL50μg／ml组DCs表型CD1α、CD83以及CD36的表达明显上调（P〈0．01）,OX—LDL50μg／ml组细胞上清液中IL-10、IL—12含量明显分别明显升高和降低（P〈0．01）。结论DCs表面CD36的表达与OX—LDL诱导的DCs成熟以及炎症因子的释放密切相关,CD36可能在DCs分化成熟以及抗原递呈过程中发挥重要作用。     

沙利度胺对类风湿关节炎患者VEGF表达的影响

目的检测类风湿关节炎（RA）患者血管内皮生长因子（VEGF）水平和沙利度胺（THD）干预后外周血单核细胞（PBMCs）中VEGF表达变化。方法抽取RA患者及正常人外周静脉血,ELISA法测定血清VEGF含量,密度梯度离心法获得PBMCs,RT-PCR检测PBMC中VEGF mRNA;将THD加入培养PBMCs,根据不同浓度的THD（0μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml）及空白对照（DMSO）随机分成6组,ELISA法检测PBMC上清液中VEGF水平,RT-PCR检测PBMC中VEGF mRNA表达变化。结果①RA患者血清VEGF平均水平及PBMCs VEGF mRNA表达水平高于正常对照组（P〈0.05）;②THD呈浓度依赖性抑制PBMCs分泌VEGF（P〈0.05）。结论 THD治疗类风湿关节炎可通过抑制PBMCs分泌VEGF,从而减少新生血管的形成。     

大肠埃希菌O157：H7家蝇实验带菌消长的研究

目的采用大肠埃希菌O157∶H7-EDL933株,实验感染家蝇,观察家蝇体内外感染和带菌消长情况。方法点滴法体外定量染菌,剂量为1μ（l菌悬液浓度为8.0×10^5～1.9×10^7cfu/ml）,并采用昆虫单虫单管方法饲养观察。结果家蝇经体外染菌,获得体内外带菌,体外带菌时间中位数为（96.0±15.3）h（95%CI：66.0～126.0h）;体内中位数为（144.0±17.3）h（95%CI：110.2～177.8h）;家蝇体内外带菌消长差异无统计学意义（χ^2=0.74,P=0.388）,家蝇最长带菌时间至少216h（9d）。结论研究结果提示,家蝇不仅是O157∶H7疾病传播的媒介,更重要的可能是人类感染潜在的贮存宿主。     

益生菌VSL#3对大鼠慢性实验性结肠炎疗效及Th1/Th2细胞因子影响的研究

目的 研究益生菌VSL#3对葡聚糖硫酸钠诱导的大鼠慢性实验性结肠炎预防作用及机制.方法 反复自由饮用5％葡聚糖硫酸钠溶液诱导大鼠慢性结肠炎模型,30只SD大鼠分为3组,正常对照组（n=10）,益生菌VSL#3组（n=10）,模型组（n=10）,实验第69天处死大鼠,评价大肠病理学损伤,应用Real-time PCR方法与ELISA方法分别检测大肠组织以及血清中IFN-γ及IL-4的表达水平.结果 益生菌VSL#3组Hamamoto评分（4.23±1.08）明显低于模型组（6.25±1.36）（P＜0.05）;与模型组相比,益生菌VSL#3组IFN-γ表达水平降低[血清（26.13±5.11） pg/ml vs（40.13±9.15）pg/ml,大肠组织：8.93±1.81 vs 13.27±1.65,P＜0.05];益生菌VSL#3组IL-4表达水平升高[血清（37.25±6.86） pg/ml vs（24.47±7.93） pg/ml,大肠组织：9.55±2.31 vs7.16±1.19,P ＜0.05].结论 益生菌VSL#3能够通过提高IL-4活性,降低IFN-γ的活性防治DSS诱导的大鼠慢性实验性结肠炎的肠道炎症.     

连续静-静脉血液滤过对全身性炎症反应综合征/脓毒症患者外周血高迁移率族蛋白-1水平的影响

目的 探讨连续静-静脉血液滤过治疗对全身炎症反应综合征(SIRS)/脓毒症(sepsis)患者外周血高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)水平的影响.方法 对本院中心重症监护病房(ICU)全身炎症反应综合征(SIRS)/脓毒症(sepsis)患者(共30例),进行连续静-静脉血液滤过(CVVH)治疗,置换液均以前稀释40％、后稀释60％的方式输入,流量3L/h,血流量200 ～ 300 ml/min,治疗时间8h.分别留取CVVH治疗前(T0)、治疗开始后2 h(T1)、6 h(T2)、8 h(T3)及CVVH停止后12 h(T4)的右侧桡动脉血标本5ml,高速离心后取血清-20℃保存,同时留取CVVH 6 h滤液2 ml于-20℃保存备用,采用ELSIA方法检测动脉血清及滤液中HMGB-1的浓度,放射免疫法检测其中TNF-α及IL-6的浓度.结果 30例患者入院24 h内行CVVH治疗,其CVVH治疗时间为2～5(2.4±1.5)d,存活17例,死亡13例,病死率为43.3％.30例患者治疗后血清HMGB-1水平均有下降,与T0比较差异均无统计学意义[(11.88±6.06) ng/ml,(11.97±5.66) ng/ml,(11.94±5.94) ng/ml,(11.73±5.19) ng/ml vs (13.87±4.68) ng/ml,P＞0.05],治疗后各时点外周血清TNF-α及IL-6的水平均显著下降,与T0比较差异均有统计学意义[TNF-α:(0.28±0.15) ng/ml,(0.30±0.14) ng/ml,(0.29±0.19) ng/ml,(0.33 ±0.19) ng/ml vs(0.41 ±0.12) ng/ml,IL-6:(408.20 ± 92.18) pg/ml,(250.51±107.34) pg/ml,(276.00±126.20)pg/ml,(315.16±130.97) pg/ml vs(513.35±125.95) pg/ml,P＜0.05].结论 连续静-静脉血液滤过治疗能降低SIRS/SEPSIS患者外周血中HMGB-1浓度,可能是CVVH治疗脓毒症的作用机制之一.     

二乙基亚硝胺对人胎肝干细胞的毒性效应

目的探讨二乙基亚硝胺(Diethylnirtosamine,DENA)对人胎肝干细胞的毒性效应,为评价其遗传毒性提供理论依据。方法用不同质量浓度DENA(0、450、900、1350、1800、2250μg/ml)处理人胎肝干细胞后,应用MTT法检测DENA对体外培养的人胎肝干细胞增殖的抑制作用及量效关系;通过单细胞凝胶电泳实验检测不同剂量DENA处理后人胎肝干细胞DNA的损伤情况;利用Hoechst 33258染色方法检测DENA诱导后人胎肝干细胞凋亡的情况。结果人胎肝干细胞经900、1350、1800μg/ml的DENA处理48 h后,细胞存活率低于阴性对照组,差异有显著性(P0.01);人胎肝干细胞经DENA处理24 h后,出现染色体固缩、浓染等细胞凋亡表现;单细胞凝胶电泳实验发现,当DENA为900和1350μg/ml时,具有致DNA断裂的作用,尾部DNA含量分别达到(18.44±4.99)%和(17.33±3.29)%,明显高于对照组的(0.015±0.004)%,差异有显著性(P0.01),但在1800和2250μg/ml时,彗星拖尾程度明显降低,差异有显著性(P0.01)。结论 DENA对人胎肝干细胞具有直接毒性效应,引起DNA损伤,具有潜在遗传毒性。