Soman诱发惊厥后脑内信号物质及细胞程序死亡相关基因表达变化的定位研究

1．用Beckman－6300型高效氨基酸分析仪分析显示，谷氨酸和天门冬氨酸的水平在惊厥相关的大脑皮质、海马、嗅球、小脑等明显下降。2用ABC免疫组化法对Soman惊厥大鼠脑内Fos的表达变化显示：Soman诱发惊厥可引起大鼠脑内c－fos的广泛表达。惊厥和c－fos表达相伴出现。C-fos。S表达具有时相持异性和恒定的解剖学图布。3．研究了Soman惊厥后c－fos表达与NOS神经元在单个神经元的关系。结果：杏仁核片几乎所有的NOS神经元均表达。－fos双标记神经元约是C—fos表达神经元的1／10。在下丘脑视上核和室分核内短时表达c-fos，介几乎所有的NOS神经元也呈现FOS阳性。4．用ABC免疫络化法研究，Bcl－2、Bax、P53三个与细胞程序死亡密切相关的基因。结果在短时C-fos表达的脑区，惊厥2天后Bcl－2、Bax、P的表达增加；发生c－fos延时延迟表达的脑区，Bax的表达明显强于Bcl－2。Bax与Bcl—2的相互作用和比例决定细胞的生存。Bax－Bax同源二聚体占优势时，细胞发生程序死亡。因此，本文结果强烈支持：由Soman惊厥诱发的脑损伤是一种程序性细胞死亡，c－fos，P53，bcl－2、bax可能涉入其基因路径。详细的分子机制尚待进一步研究。     

钙通道阻断剂硝苯吡啶抑制马桑内酯癫痫大鼠脑内c—fos基因表达增强

c—fos基因为原癌基因中的即早基因之一。近年的研究证明,在电和各种化学刺激造成的癫痫样活动中,c—fos基因能快速而短暂地表达,其表达产物Fos蛋白则作为细胞核其它相应基因转录的调制物引起其他相应基因表达的改变,进而引起细胞功能的长时程变化。还有实验提示癫痫所致c—fos基因表达的增加,与神经细胞内Ca~(2+)浓度增高有关。胞浆内高浓度Ca~(2+)与钙调蛋白结合形成的复合物,对转录因子磷酸化修饰而启动c—fosmRNA的转录。近10年的实验已从细胞分子水平提示钙离子在调节神经元兴奋性和痫     

大鼠肢体IRI后脊髓神经元Fos的表达

目的探讨脊髓神经元是否参与肢体缺血再灌注损伤（IRI）的发病过程以及有关神经元的分布特点。方法Wistar大鼠24只,随机分为4组,A：空白对照组;B：假手术对照组;C：单纯缺血组;D：缺血再灌注组。通过暂时阻断一侧髂总动脉和股动脉,建立肢体缺血再灌注损伤模型。采用免疫细胞化学ABC法,观察大鼠脊髓神经元原癌基因c—fos的表达和分布特点。结果大鼠肢体缺血4h,脊髓相应节段神经元Fos表达活跃。再灌注2h后,Fos表达更加活跃（P〈0．01）。并且Fos阳性神经元较集中分布于脊髓相应节段同侧后角及中央管周围。结论脊髓相应节段同侧神经元可能参与肢体IRI的发病过程,尤其是脊髓后角及中央管周围神经元可能具有更为重要的作用。     

糖皮质激素受体参与病理性疼痛调制的研究进展

<正>人们早已熟知外周的糖皮质激素受体(glucocorticoidreccptor,GR)在抗炎过程中起着重要的作用。近些年的研究发现GR广泛表达于中枢神经系统[1-3],在脊髓背角GR与神经元标记物NeuN(神经元特异核蛋白)、星形胶质细胞标记物GFAP(胶质纤维酸性蛋白)共表达[3-4];并且发现,在受到外周伤害性刺激时,脊髓背角表达GR的神经元同时表达     

SOMAN诱发惊厥后c-fos在大鼠杏仁核簇─氧化氮神经元中的表达

运用FOS免疫组化结合NADPH－d组化双重标记技术，研究了soman诱发惊厥大鼠杏仁核内c－fos高表达神经元与NADPH－d阳性神经元之间的关系。结果显示：在soman诱发惊厥后的1．5h至48h，杏仁核簇内c－fos呈现持续过度表达、FOS免疫阳性神经元的分布具有显著的亚核定位特征。NADPH－d活性在惊厥后明显增强。有10％的FOS阳性神经元同时也呈现NADPH－d阳性。而几乎所有的NADPH－d阳性神经元均呈FOS染色阳性。鉴于FOS表达的诱导和NADPH－d的激活具有共同的上游事件，即NMDA介导的钙内流，可以认为FOS引发的目的基因表达及NO的神经毒作用可能存在于杏仁核的神经元损伤机制中。     

大鼠外周注射SP受体拮抗剂对脊髓内伤害性刺激引起的c-fos基因表达的影响

SP是外周向中枢传递伤害性信息的重要神经活性物质，而FOS蛋白可作为脊髓和延髓神经元被伤害性刺激信息激活的标志。鞘内注射一定浓度和剂量的SP可激活脊髓背角神经元的S－fos基因并表达FOS；而鞘内注射SP受体桔抗剂则可抑制此表达。但SP在外周通过何种结构影响伤害性刺激信息的传递及其作用机理尚不明了。本研究以腰髓背角神经元的FOS表达为标志，将SP受体拈抗剂及激动剂和福尔马林注入成年大鼠后肢足底，观察了这些因素对外周伤害性刺激所引起的腰髓背角神经元FOS表达的影响。雄性SD大鼠25．q，体重200～250g，随机分为3组。第1…     

C—Fos基因表达与精神药理进展

C－fos基因为一段3．5kb的DNA，定位于人类染色体14q21－23，人和鼠C－foS基因具同源性，它的全部核音酸已被克隆并测序[1]。c－fos是一种快速的早期反应基因（Immediatelyearlygene），对生理或药理刺激能在数十分钟内作出表达：C－fos基因被激活，转录形成c－fosm－RNA，随后将380个氨基酸合成分子量为55000的磷蛋白，foS[2]。fos蛋白转入核内，刺激靶基因（如强啡吹前基因）而转录，最终影响细胞的代谢和功能，因此，IOS在外界刺激——一转录偶联的信息传递过程中起着核内第三信使的作用[1]。抗精神病药作用于人或动物的相关脑结构…     

单向交变拉伸应变及压应力对大鼠成骨细胞FOS蛋白表达及细胞定位的影响

分别对体外培养的大鼠成骨细胞施加单向交变拉伸应变和2atm的压力。利用免疫细胞化学技术，检测成骨细胞c—fos基因的表达。结果表明：施加两种不同的载荷后，成骨细胞c—fos基因表达FOS蛋白显著增加，FOS蛋白多集中在细胞核中，提示应力、应变在提高成骨细胞的增殖能力方面起着十分重要的作用。     

高粘血症大鼠心肌缺血缺氧时热休克蛋白,原癌基因表达的变化及意义

目的：研究高粘血症大鼠心肌发生缺血缺氧性损伤时原癌基因c－fos热休克蛋白（Hsp70）表达的变化及意义。方法：用免疫组化法（ABC法）检测高粘血症大鼠心肌组织和体外培养的心肌细胞缺氧后Hsp70和c－fos蛋白变化；用原位杂交法检测c－fosmRNA变化。用光镜、电镜观察心肌组织和心肌细胞的损伤。结果：发现c－fos蛋白在高粘血症大鼠心肌中明显增强，在体外培养的大鼠心肌细胞缺氧1h和4h后较对照组明显增强。c－fosmRNA表达也明显增强。上述变化与细胞损伤间呈正相关。结论：高粘血症引起的缺血缺氧可诱导c－fos表达增强和Hsp70增加，后者可能是心肌对缺血缺氧产生的应激反应产物。它们是一种早期防御代偿反应，并参与调节其他基因的变化。     

genistein对人卵巢癌细胞系SKOV3及其裸鼠移植瘤中表皮生长因子受体介导的信号转导通路的影响

目的　通过 genistein对人卵巢癌细胞系SKOV3 及其裸鼠移植瘤中表皮生长因子受体(EGFR)介导的肿瘤信号转导系统的影响 ,探讨其抑制增殖作用的机制。方法　应用免疫细胞化学链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶 (SP)法检测c erbB 2蛋白的表达 ;Western印迹检测细胞c jun和c fos蛋白的表达 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测c erbB 2 ,c raf 1,c jun和c fosmRNA的表达。结果　 2 0 μmol/Lgenistein处理组c erbB 2、c raf 1及其下游基因c jun、c fosmRNA表达减弱。2 0 μmol/Lgenistein处理SKOV3 细胞 4 8h后 ,c erbB 2蛋白表达减弱 ,平均吸光度 (A)值减低 ,为0 4 2± 0 0 2 (P <0 0 5 )。Western印迹检测结果表明 :2 0 μmol/Lgenistein处理SKOV3 细胞 12～ 72h后 ,c jun、c fos蛋白表达水平逐渐减弱。结论　genistein下调SKOV3 中EGFR介导的肿瘤信号转导通路中两个关键基因c erbB 2和c raf 1之mRNA及蛋白及其下游核转录因子c jun和c fos的mRNA及蛋白的表达水平 ,提示genistein干预EGFR介导的肿瘤信号转导系统中主要信号分子的表达可能是其抑制卵巢癌增殖的分子基础。     

反义c-fos寡脱氧核苷酸对hCG诱导大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

在睾酮合成过程中 ,细胞色素P4 5 0 17α 羟化酶 (P4 5 0c17)的作用非常重要 ,其主要催化孕酮生成雄烯二酮 ,雄烯二酮作为雄激素的前体物质 ,最终生成睾酮。近年来研究显示hCG对睾丸间质细胞P4 5 0c17合成及其信使核糖核酸表达均有调节作用。资料也证实 ,hCG引起间质细胞睾酮分泌同时伴有c fos原癌基因表达增强[1] 。然而 ,有关c fos与睾酮生成及其合成过程中限速酶的变化研究报导甚少。本研究拟通过反义技术观察反义c fos寡脱氧核苷酸 (c fosASODNs)对hCG诱导大鼠睾丸间质细胞睾酮生成的影响及睾酮合成过程中限速酶表达水平的变化。1…     

质粒型单纯疱疹病毒载体介导GDNF和GFP基因在体外培养的BHK细胞和大鼠脊髓、背根节神经元中的转移和表达

为了观察质粒型单纯疱疹病毒载体介导的外源性胶质细胞源性神经营养因子和绿色荧光蛋白基因在体外培养的金黄地鼠肾细胞以及脊髓神经元和背根节神经元中的转移和表达 ,本研究采用了以质粒型单纯疱疹病毒载体为基础构建的分别含有重组胶质细胞源性神经营养因子和绿色荧光蛋白基因的混合毒株 dv HSV-GDNF和 dv HSV-GFP感染体外培养的金黄地鼠肾细胞、脊髓神经元和背根节神经元。用免疫组织化学方法和荧光显微镜观测法分别检测了胶质细胞源性神经营养因子和绿色荧光蛋白基因的转移和表达。结果发现 :质粒型单纯疱疹病毒载体可以成功地将外源性胶质细胞源性神经营养因子和绿色荧光蛋白基因导入金黄地鼠的肾细胞以及脊髓神经元和背根节神经元中。提示质粒型单纯疱疹病毒载体可以作为转基因胶质细胞源性营养因子治疗脊髓损伤的转移载体 ,为脊髓损伤的基因治疗提供了实验基础。绿色荧光蛋白作为报告基因 ,也可因其适用广泛、观察简便等特性而得到更加广泛的应用。     

子宫颈癌中癌基因产物c—Fos、c—Jun的表达及意义

目的 :探讨癌基因c fos、c jun表达产物与子宫颈癌的发生 ,发展及预后的关系。方法 :用免疫组化SABC法 ,以兔抗c fos、c jun抗体标记 6 0例子宫颈癌和 30例子宫颈上皮不典型增生 ,观察其分化程度和组织学类型 ,子宫颈癌的表达及阳性率比较。结果 :c fos、c jun阳性反应见于不典型增生上皮和子宫颈癌组织 ,不典型增生上皮c fos、c jun阳性率分别为 70 0 %和 5 0 0 %癌组织为 5 6 6 %和 4 8 3% ;在子宫颈癌表达的阳性率与癌组织分化程度和组织学类型有关 (P <0 .0 5 )。结论 :提示c fos、c jun过量表达可发生在不典型增生的子宫颈上皮和子宫颈癌组织     

腺病毒载体介导bcl-2基因转染在离体和在体状态下对损伤运动神经元的保护作用

本文目的在于观察携带 bcl-2基因的重组腺病毒 (Ad/ s-bcl-2 )在离体和在体条件下对损伤运动神经元的保护作用。采用培养脊髓运动神经元的谷氨酸损伤模型和大鼠坐骨神经切断损伤模型 ,评价重组 bcl-2腺病毒对损伤运动神经元的影响。指标是bcl-2原位杂交和免疫组化反应、台盼蓝拒染法检测培养神经元存活、TU NEL 阳性神经元计数以及脊髓运动神经元 ACh E反应。结果 :(1) Ad/ s-bcl-2可转染离体和在体脊髓运动神经元并使其过表达 bcl-2。 (2 )过表达 bcl-2可延长培养神经元的生存时间。(3 )过表达 bcl-2可显著地减少谷氨酸诱导的原代培养脊髓运动神经元的凋亡以及坐骨神经切断损伤诱导的脊髓运动神经元的凋亡。 (4 )过表达 bcl-2可显著地缓解坐骨神经损伤诱导的神经元内 ACh E的活性降低 ,并加速其恢复。本研究结果提示 :腺病毒载体中介 bcl-2基因转染对离体和在体损伤的运动神经元均具有保护作用     

原代培养大鼠脊髓神经元损伤前后Fos、TH及PNMT表达变化的研究

为了探讨多巴胺及肾上腺素在神经元损伤和修复过程中的作用,我们通过锐器切割原代培养的纯化大鼠胚胎脊髓神经元,模拟脊髓全横断后脊髓神经元损伤状态,观察了损伤前后Fos蛋白与儿茶酚胺类神经递质合成酶的表达变化。分离、培养、纯化孕14d的Wistar大鼠脊髓神经元,10d后在直视下进行脊髓神经元的锐器切割损伤。用免疫组化及Western blot技术研究损伤前后神经元内Fos蛋白与酪氨酸羟化酶(TH)、苯乙醇胺氮位甲基移位酶(PNMT)的共定位情况及表达水平变化。结果发现:脊髓神经元损伤10min后Fos蛋白开始表达,2h后Fos阳性达到最高并同时表达TH及PNMT;Western blot结果也证实损伤后Fos、TH和PNMT表达均较损伤前上调。上述结果提示,神经元经损伤后激活的即刻早期基因c-fos,可作为信号分子活化受损神经元内儿茶酚胺类神经递质(TH和PNMT),多个分子共同作用可能参与了神经元的损伤和修复过程,其生物学意义有待进一步探讨。     

点燃癫痫模型大鼠皮层与海马c—fos、c—jun基因的表达

目的：通过点燃癫痫模型大鼠脑内c-fos、c-jun基因表达的观察以探讨癫痫的发病机理。方法：选用大鼠杏仁核快速点燃癫痫模型，应用免疫组织化学技术观察点燃癫痫大鼠的皮层与海马c-fos、c-jun基因的表达。结果：杏仁核点燃癫痫大鼠的皮层与海马c—fos、c-jun基因表达明显增强，阳性细胞数量显著增加。结论：c—fos、c-jun基因的表达与痫性发作的机制相关。     

体外培养脊髓神经元损伤后c-Jun蛋白表达

目的建立一个模拟脊髓全横断损伤后脊髓组分——原代培养的脊髓神经元损伤的模型。探讨中枢神经损伤后损伤应答基因c-jun的表达及变化。方法取Wistar大鼠(孕14d)脊髓，培养10～12d后，采用所设计的标准模板，直视下进行损伤。观察损伤前、后不同时间神经元的形态及即刻早期基因c-jun的表达及变化。结果脊髓神经元损伤10min后胞核即有c-Jun标记，损伤2h后最多，而且阳性神经元的密度与划痕之间的距离呈明显的反比关系。结论受机械损伤的神经元中，c-Jun表达阳性意味着此即刻早期基因产物已进入细胞核内起着“第三信使”的作用。     

神经元限制性沉默因子研究进展

神经元限制性沉默因子(NRSF)是神经元发育中的一个负调控因子。它与靶序列神经元限制性沉默子(NRSE)相互作用,主要调控神经元特异性基因,防止神经元基因在非神经元组织中的异位表达以及防止神经发生中神经元表型的提前表达。最近的研究表明,NRSF还可调控神经元转录编码基因和某些非神经元基因。暗示它住胚胎发育中可能起着更为广泛的作用。     

针刺对去部分背根猫脊髓和背根节NGF及NGF mRNA的影响

用免疫组织化学和地高辛标记 c RNA探针原位分子杂交技术 ,观察了针刺对成年备用背根猫 (切断一侧 L1～ 5 、L7～ S2节段脊髓背根 ,保留 L6 背根 )脊髓 板层、背核和背根节内神经生长因子和神经生长因子 m RNA的影响。结果证明 ,针刺促进了备用根背根节的神经生长因子基因的表达 ,使备用背根节内神经生长因子、神经生长因子 m RNA阳性神经元数量明显增多 ,并且针刺时间越长促进作用也越强 ;而对脊髓 板层与背核则无明显影响。本实验结果提示 ,针刺对备用根猫脊髓侧支生芽具有促进作用 ,这种作用主要体现在通过增加背根节神经生长因子基因的表达和神经生长因子的合成来实现的     

利用GAD67-GFP基因敲入方法显示小鼠脊髓内表达GFP的GABA能神经元的分布(英文)

γ-氨基丁酸 (GABA)是脊髓背角、前角内主要的抑制性神经递质。为了更好地观察脊髓背角内 GABA能神经元的形态和功能 ,本研究使用了两种谷氨酸脱羧酶 67-绿色荧光蛋白 (GAD67-GFP)基因敲入小鼠 ,并观察了敲入小鼠脊髓内的 GFP表达状况。用免疫荧光组织化学双标记方法显示脊髓内所有的 GF P阳性神经元基本上都呈 GAD67和 GABA阳性 ;GFP阳性神经元在脊髓背角的 ～ 层最为密集 ,背角深层内侧部及中央管周围呈中等密度分布 ,而在脊髓背角其它部位及前角则呈散在分布。脊髓内 GFP阳性神经元的分布与 GABA能神经元的分布一致。本文作者等还进一步在 GAD67-GFP敲入小鼠中观察了 GFP和神经元标志物神经元核蛋白 (Neu N )的共存状况。脊髓背角内 GFP阳性神经元分别占 、 和 层的 Neu N阳性神经元的 3 1.5 %、3 3 .3 %和 44 .7% ,与以往的 GABA免疫组化研究结果基本一致。本研究表明 GAD67-GFP基因敲入小鼠脊髓内的 GFP在GAD67启动子的调节下正确地表达于 GABA能神经元 ,该基因敲入小鼠可用于脊髓 GABA能神经元的形态学特征和生理学特性及其发育规律等方面的研究