新型二聚体蝎型探针技术在结核分枝杆菌荧光定量聚合酶链反应中的应用

目的利用二聚体蝎型荧光探针技术，建立一种敏感特异、快速价廉且能广泛应用的结核分枝杆菌DNA荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测方法。方法构建重组质粒pMD18-T-senX3-regX3 IR作为标准品，自行设计二聚体蝎型探针，优化定量PCR体系，并进行方法学评价及初步临床应用。结果（1）成功构建了重组质粒pMD18-T-senX3-regX3IR。（2）建立了利用二聚体蝎型荧光探针的荧光定量PCR方法，其线性范围：10^1～10^7拷贝／μ1；灵敏度：10^1拷贝／μ1；重复性：批内变异系数（CV）为2．35％，批间CV为3．17％，日间CV为4．06％；特异性100％；（3）初步临床应用证明：该方法比商品化Taqman方法阳性检出率更高，检测时间更短和成本也明显降低。结论本研究首次建立了以二聚体蝎型荧光探针技术为平台的结核分枝杆菌荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法，这为应用二聚体蝎型荧光探针技术开辟检测结核分枝杆菌的分子诊断新途径奠定了一定的基础。     

荧光定量聚合酶链反应在淋巴结结核鉴别诊断中的应用

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测结核分枝杆菌(MTB)DNA在淋巴结结核鉴别诊断中的作用。方法选取近4年来74例淋巴结结核病例及24例其他对照病例,同时作细针吸取细胞学(FNAC)、抗酸染色、MTBDNA检测,采用χ2检验比较抗酸染色与FQ-PCR检测阳性率的差异。结果 74例标本中,抗酸染色阳性32例(43.2%),MTBDNA阳性52例(70.3%),抗酸染色与FQ-PCR检测MTB的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。结论在干酪型淋巴结结核诊断中PCR阳性率达82.3%,与涂片抗酸染色相比诊断率明显提高,有很大优势和应用价值。     

聚合酶链反应—增强化学发光检测结核分枝杆菌

目的 探讨微孔板杂交技术结合增强化学发光（ECL）检测结核分枝杆菌（MTB）。方法 同时应用聚合酶链反应（PCR）－ECL、PCR－比色法与PCR电泳检测60例活动性肺结核和54例健康对照痰标本，比较结果。结果 PCR－ECL、PCR－比色法与PCR电泳总阳性率分别为76.7%、63.3%、50.0%，其中PCR－ECL阳性率显著高于PCR电泳（P＜0.05)；对涂片阳性标本，阳性率分别为85.7%、85.7%、71.4%，差异无显著性（P＞0.05)；对涂片阴性标本，阳性率分别为73.9%、56.5%、43.5%，PCR－ECL阳性率高于PCR电泳（P＜0.05)。另外PCR－ECL、PCR－比色法与PCR电泳特异性分别为92.6%、96.3%、96.3%，差异无显著性（P＞0.05)。结论 PCR－ECL灵敏度高，能提高临床标本MTB检出率，尤其是对涂片阴性痰标本，并且该方法操作简单，结果客观。     

聚合酶链反应-增强化学发光检测结核分枝杆菌

目的探讨微孔板杂交技术结合增强化学发光(ECL)检测结核分枝杆菌(MTB).方法同时应用聚合酶链反应(PCR)-ECL、PCR-比色法与PCR电泳检测60例活动性肺结核和54例健康对照痰标本,比较结果.结果 PCR-ECL、PCR-比色法与PCR电泳总阳性率分别为76.7%、63.3%、50.0%,其中PCR-ECL阳性率显著高于PCR电泳(P<0.05);对涂片阳性标本,阳性率分别为85.7%、85.7%、71.4%,差异无显著性(P>0.05);对涂片阴性标本,阳性率分别为73.9%、56.5%、43.5%,PCR-ECL阳性率高于PCR电泳(P<0.05).另外PCR-ECL、PCR-比色法与PCR电泳特异性分别为92.6%、96.3%、96.3%,差异无显著性(P>0.05).结论 PCR-ECL灵敏度高,能提高临床标本MTB检出率,尤其是对涂片阴性痰标本,并且该方法操作简单,结果客观.     

应用聚合酶链反应-反相膜杂交技术检测结核分枝杆菌

目的探讨聚合酶链反应(PCR)-反相膜杂交技术检测结核分枝杆菌的价值.方法收集52例活动性肺结核病人和12例非结核病人的痰标本,以双盲法进行痰涂片抗酸染色检查、结核菌培养、PCR-反相膜杂交技术,PCR-琼脂糖凝胶电泳技术检查对比.结果涂片法、培养法,PCR-反相膜杂交法的敏感性分别为28.8%、42.3%、82.7%,PCR-反相膜杂交法的敏感性显著高于培养法和涂片法(P＜0.01).PCR-反相膜杂交法和PCR琼脂糖凝胶电泳法的敏感性分别为82.7%和84.6%,特异性分别为91.7%和83.3%,前者特异性与后者相比差异有显著性(P＜0.01).结论PCR-反相膜杂交技术可应用于临床检测结核分枝杆菌.     

应用聚合酶链反应检测胸水中结核分枝杆菌DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２８例胸水中结核分枝杆菌ＤＮＡ，并将涂片镜检和分离培养作为参比方法。试验结果显示：ＰＣＲ直接检测胸水中结核分枝杆菌的灵敏为３１个菌体单位，敏感性为４２．３％，特异性为９６．８％，高于涂片镜检和分离培养的检出率（３８．２％和３５．１％）。该法具有敏感性高，特异性强和简便快速等优点，特别适合含微量结构分枝菌临床标本的检测，可用于结核性胸膜炎早期和鉴别诊断。     

聚合酶链反应检测结核分枝杆菌的临床应用价值

目的探讨用聚合酶链反应(PCR)荧光定量法检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法对189例临床确诊的结核病患者(结核病组)和45例非结核呼吸系统疾病患者(对照组)的痰或支气管灌洗液标本,分别应用PCR实时荧光定量法、涂片抗酸染色法和结核杆菌培养法检测,然后对3种方法的阳性检出率进行统计学分析。结果 PCR法检测结核病组标本的阳性检出率为74.1%(140/189),明显高于涂片抗酸染色法的24.9%(47/189)及结核杆菌培养法的43.9%(83/189)。3种方法检测45例对照组患者的结果均为阴性,特异度为100.0%(45/45)。结论 PCR荧光定量法的敏感度和特异度明显高于涂片抗酸染色法和结核杆菌培养法,用于结核分枝杆菌的鉴定简便、快速、特异,适于在卫生检疫系统和临床实验室应用。对于结核病的及早诊断、预防和疗效监测具有良好的临床应用前景。     

实时荧光聚合酶链反应检测支气管肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA诊断肺结核价值

目的探讨实时荧光聚合酶链反应(FQ-PCR)检测支气管肺泡灌洗液结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(TBDNA)诊断肺结核的临床价值。方法选取我院收治的115例肺结核患者作为研究对象,所有患者均进行支气管肺泡灌洗液TB-DNA检测、血清结核分枝杆菌特异性抗原(TB-SA)抗体检测、痰涂片抗酸染色镜检等。结果支气管肺泡灌洗液TB-DNA检测、血清TB-SA抗体检测、痰涂片抗酸染色镜检诊断肺结核的敏感度分别为65.2%(75/115)、50.4%(58/115)、20.9%(24/115)。支气管肺泡灌洗液检测TB-DNA诊断肺结核的敏感度显著高于血清TBSA抗体、痰涂片抗酸染色镜检(均P0.05)。结论采用FQ-PCR检测支气管肺泡灌洗液TB-DNA诊断肺结核具有较高的敏感度。     

脑脊液二项指标联合检测对结核性脑膜炎的诊断价值

目的:探讨脑脊液TB-Ab及ADA联合检测对结核性脑膜炎的诊断价值。方法:82例脑膜炎患者的脑脊液同时检测TB-Ab和ADA,比较结脑组与非结脑组两项检测结果阳性率的差别。结果:结脑患者脑脊液TB-Ab阳性率78.9%,ADA显著增高者96.2%。二者均显著高于非结脑组。结论:脑脊液TB-Ab与ADA检测,均对结脑的临床诊断有重要意义。二者联合检测,意义更大。     

超声检查肝脏对结核性脑膜炎诊断及鉴别诊断的价值

目的探讨超声检查肝脏对结核性脑膜炎的诊断及鉴别诊断价值。方法对34例结核性脑膜炎患进行肝脏B超检查。结果肝脏有影像改变73．5％(25／34)。结论肝脏超声检查对结核性脑膜炎的诊断及鉴别诊断是有一定临床意义的。     

结核性脑膜炎实验室诊断方法对比

目的 :比较 5种实验室诊断结核性脑膜炎 (结脑 )方法的特异性和敏感性 ,探讨更实用的实验诊断结脑方法 ,以有效降低结脑的误诊率。方法 :选择确诊患者为检测对象 ,采集 CSF为标本 ,其中结脑组 115份、对照组 5 0份。对同一份 CSF平行进行改良罗氏法培养结核杆菌、PCR法检测 TB- DNA、离心涂片一步法检测 AFB、常规沉渣涂片法检测 AFB、斑点免疫金渗滤试验法检测 L AM- Ig G。结果 :结脑组的阳性率分别为 ,培养结核杆菌 4 .3%、检测 TB- DNA81.7%、常规方法检测 AFB 13.9%、离心涂片一步法检测 AFB 6 4 .3%、检测 L AM- Ig G 5 0 .4 %。对照组均无阳性发现。结论 :在实验诊断结脑方面 ,PCR法和离心涂片一步法既具有较高的特异性 (10 0 % ) ,也具有较高的敏感性 (81.7%和6 4 .3% ) ,应用价值高于其他方法 ;适当的联合试验可以提高敏感性。     

新型隐球菌性脑膜炎与结核性脑膜炎临床分析

【目的】分析新型隐球菌性脑膜炎（CNM）与结核性脑膜炎（TBM）临床特征、脑脊液及影像学改变的异同,探讨两种不同病原体引起的脑膜炎的临床诊断要点。【方法】对29例CNM和41例TBM患者的临床表现、脑脊液及影像学资料做回顾性分析。【结果】CNM一般是慢性或亚急性起病,而TBM常是急性或亚急性起病（P〈0.05）;TBM患者常以发热为首发症状（P〈0.05）;颅内压力明显较TBM患者高,葡萄糖和氯化物浓度两者也存在差异（P〈0.05）,其病原体检出率很低;在影像学上,TBM患者的脑实质改变和脑积水较CNM患者多见（P〈0.05）。【结论】CNM和TBM临床表现、脑脊液及影像学改变有一定的差异,有利于鉴别两种脑膜炎。     

支气管肺泡灌洗液的结核分枝杆菌快速培养对疑似肺结核的诊断价值

目的：评价支气管肺泡灌洗液的结核分枝杆菌快速培养在疑似肺结核患者中的诊断价值。方法：选不典型肺结核患者153例,行电子支气管镜检查。刷检涂片作抗酸染色镜检;支气管肺泡灌洗,支气管肺泡灌洗液（BALF）作分枝杆菌生长指示管（MGIT）快速培养福建卫生职业技术学院附属分枝杆菌。结果：BALF快速培养结核分枝杆菌、经支气管镜刷检涂片镜检分枝杆菌的的灵敏度、特异度分别为94．12％（32／34）、95．80oA（114／119）和52．94％（18／34）、96．64％（115／119）。前者灵敏度高于后者,经统计学检验显示有显著差异（P〈0．01）。结论：对于临床不典型的肺结核,经气管镜行支气管肺泡灌洗液的结核分枝杆菌快速培养,灵敏度高,快速及时,具有较高的诊断价值。分枝杆菌培养及鉴定有助于提高临床肺结核的确诊率。     

结核分枝杆菌耐异烟肼诊断试验的系统评价

目的评价9种检测结核分枝杆菌耐异烟肼诊断试验方法的准确性。方法计算机检索PubMed、EMbase等数据库和手工检索相关期刊，全面收集结核分枝杆菌耐异烟肼诊断试验的研究，依据QUADAS评价纳入诊断试验的质量，并对结果进行Meta分析。结果最终纳入12个研究。Meta分析结果显示：硝酸盐还原法与比例法相比，以及BACTECMGIT960与BACTEC460TB相比，其敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比及SROC曲线下面积分别为92％、99％、31．84、0．12、0．9836和98．5％、96％、13．66、0．035、0．9871；其余检测方法，如MODS、MB／BacT、MYDBA和TTC亦显示了较好的敏感度和特异度。结论硝酸盐还原检测法可代替比例法作为结核分枝杆菌耐异烟肼的筛查试验。BACTEC MGIT 960可代替BACTEC460检测系统作为结核分枝杆菌耐异烟肼的确诊试验。     

结核分枝杆菌耐乙胺丁醇诊断试验的系统评价

目的系统评价各种检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇诊断试验方法的准确性。方法计算机检索PubMed、EMbase等数据库,并手工检索相关期刊,全面收集结核分枝杆菌耐乙胺丁醇诊断试验的研究,依据QUADAS评价纳入诊断试验的质量,并对结果进行Meta分析。结果最终纳入9个研究。Meta分析结果显示：硝酸盐还原法与比例法相比,以及BACTEC MGIT 960与BACTEC 460 TB相比,其敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比及SROC曲线下面积分别为92%、99%、30.50、0.13、0.9752和93%、92%、6.27、0.11、0.9;MB/BacT,噬菌体生物扩增法亦显示了较好的检验效能。结论硝酸盐还原试验可代替比例法作为结核分枝杆菌耐乙胺丁醇的筛查试验;BACTEC MGIT 960可代替BACTEC 460检测系统作为结核分枝杆菌耐乙胺丁醇的确诊试验。     

早期鉴别小儿结核性脑膜炎和病毒性脑膜炎的回顾性研究

[目的]探讨小儿病毒性脑膜炎和结核性脑膜炎(TBM)早期鉴别因素.[方法]回顾性分析确诊为病毒性脑膜炎患儿262例和TBM患儿55例的临床和实验室特征.[结果]比较两种疾病临床和实验室特征,多变量分析表明:入院前症状持续时间(DSBA)、DSBA≥5d、死亡、脑脊液(CSF)与血浆葡萄糖比值＜0.5、CSF氯化物浓度、CSF氯化物浓度低于正常、CSF蛋白值、CSF蛋白值＞1 g/L有统计学意义(P＜0.05)；多变量logistic回归方程分析,进入logistic回归方程的因素:DSBA≥5d、CSF与血浆葡萄糖比值＜0.5、CSF氯化物浓度低于正常、CSF蛋白值＞1 g/L；ROC曲线提示:DSBA、CFS氯化物浓度、CFS蛋白值灵敏度高.[结论]早期获得的DSBA、CSF与血浆葡萄糖比值、CSF氯化物浓度、CSF蛋白值等临床和实验室的数据对于鉴别结核性脑膜炎和病毒性脑膜炎有重要意义.     

噬菌体裂解法对涂片阴性肺结核的诊断价值

目的　研究噬菌体裂解法对涂片阴性肺结核的诊断价值。方法　对 15 7例临床诊断为涂片阴性肺结核患者的314份痰标本同时应用噬菌体裂解法和改良罗氏 (L—J)法检测 ,对照分析结果。结果　 15 7例涂片阴性肺结核、噬菌体裂解法检出阳性 6 1例 ,阳性获得率 95 .3% (6 1/ 6 4 ) ;L—J法检出阳性 2 8例 ,阳性获得率 4 3.8% (2 8/ 6 4 )噬菌体裂解法和涂片法两者差别有统计学意义 (p <0 .0 1)。 314份涂片阴性疾标本。噬菌体裂解法检测阳性率 36 .9% (116 / 314 ) ,显著高于L—J法 15 .6 %(4 9/ 314 ) ,两者差别有统计学意义 (p <0 .0 1)。噬菌体裂解法检测的报告时间为 2天 ;改良罗氏培养的阳性报告时间平均为2 8.7天。阴性报告时间为 5 6天。结论　噬菌体裂解法检测涂片阴性肺结核。与改良罗氏法相比 ,具有更高的检出率 ,可以简便、快速地检测结核分支杆菌、全程只需 2天 ,对现代结核病控制工作具有重大意义     

结核性脑膜炎的MRI诊断分析

目的:分析结核性脑膜炎的MRI表现特征。方法:回顾性分析12例结核性脑膜炎患者的MRI表现。结果:MR平扫可发现5例位于基底池的脑膜病灶;增强扫描有11例脑膜异常强化,伴脑膜、脑内粟粒型结核灶,6例结核性室管膜炎2例,颅神经受损1例,轻度脑膜炎患者无脑膜异常强化1例。结论:活动性结核性脑膜炎的MRI主要表现为基底池的脑膜强化局灶性或弥漫性强化,以软脑膜-蛛网膜型强化多见,可伴脑膜、脑实质内粟粒型结核病灶。