MTA对牙周膜干细胞RANKL/OPG表达水平的影响

目的 探讨MTA对人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达的影响。方法 通过酶消化法分离培养PDLSCs,依据碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性筛选最佳MTA刺激浓度,将PDLSCs分别于对照组（普通培养基）和2 mg/mL MTA条件培养液培养3 d和7 d后,蛋白免疫印迹法分别检测RANKL、OPG蛋白表达。结果 MTA刺激3 d和7 d组,OPG蛋白表达较对照组升高,RANKL蛋白表达较对照组降低。结论 MTA可通过调节RANKL/OPG系统,参与调节PDLSCs成牙/骨及破牙/骨活性。     

TNF-α和PGE2联合在人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达中的作用

目的:探讨不同浓度组合的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和前列腺素E2(PGE2)在人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)及其饵受体骨保护素(OPG)mRNA表达中的作用。方法:将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度组合的TNF-α和PGE2处理24h,通过荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)来观察人牙周膜成纤维细胞RANKL、OPG mRNA表达水平。结果:不同浓度组合对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达有促进作用,尤以10ng/mL TNF-α 10-7mol/L PGE2组合对RANKL mRNA表达的促进作用及RANKL/OPG比值的增强作用最为明显。结论:10ng/mL TNF-α和10-7mol/L PGE2联合具有协同作用,通过促进人牙周膜成纤维细胞RNAKL/OPG表达量,可能在调节牙周炎引起的牙槽骨吸收中起到重要的作用。     

骨代谢的分子调控研究进展

骨形成与骨吸收之间的动态平衡受多种因素的调节,骨保护蛋白(OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和核因子-κB受体活化因子(RANK)是其关键的调节因子.下面就OPG/RANKL/RANK信号通路、转化生长因子-β、单酰基甘油酰基转移酶-2、骨活化蛋白和交感神经系统在骨代谢调控中的作用作一综述.     

17β雌二醇对人牙周韧带细胞表达碱性磷酸酶和骨保护素因子的影响

目的 探讨17β雌二醇(17β-estradiol,17β-E2)对人牙周韧带细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)表达碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的影响.方法 采用组织块法培养hPDLC,培养基中加入不同浓度17β-E2,对硝基酚磷酸酯法检测ALP活性;ELISA法和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法确定OPG含量.结果 各浓度组17β-E2作用于hPDLC 14 d和21 d后均可促进ALP的表达(P＜0.05);生理浓度(1 nmol/L)促进OPG蛋白分泌和mRNA表达(P＜0.05),72 hOPG蛋白分泌量达(4714.89±71.48)ng/L;高浓度(100 nmol/L)对OPG分泌无影响(P＞0.05),72 h OPG蛋白分泌量为(1932.04±51.59)ng/L,但降低了OPG mRNA表达(P＜0.05).结论 17β-E2可能通过促进ALP和OPG的表达介导局部牙周组织的骨保护作用.     

中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞RANKL／OPG表达的影响

目的：探讨中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达的影响。方法：将系列浓度的中间普氏菌培养上清作用于牙龈成纤维细胞,显微镜下观察细胞的变化。实时定量 RT-PCR法和 Western blot法分别检测 RANKL、OPG mRNA及蛋白水平的表达,并计算 RANKL/OPG的比值。结果：牙龈成纤维细胞的数量随中间普氏菌培养上清浓度的增加而减少,50μg/mL 时,显微镜下没有活细胞存在。在mRNA水平上和蛋白水平上,RANKL/OPG的比值在12．5μg/mL处理组均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论：中间普氏菌培养上清可诱导人牙龈成纤维细胞表达 RANKL 和 OPG,破坏 RANKL/OPG比例的平衡,影响破骨细胞分化的细胞因子微环境,在破骨细胞分化和牙周炎骨吸收中起着一定的调节作用。     

低氧调控大鼠骨髓间充质干细胞OPG/RANKL mRNA的表达

目的:探讨低氧处理对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow derived mesenchymal stem cells,rBMSCs)骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κb受体活化因子配体(receptor activator of NF-κb ligand,RANKL)mRNA表达的影响.方法:采用全骨髓细胞贴壁法分离、培养rBMSCs,应用化学低氧剂氯化钴(CoCl2)建立低氧模型,分别以0、50、100、200、400μmol/L浓度的CoCl2孵育细胞,首先采用MTT法检测CoCl2对细胞增殖的影响;利用实时荧光定量PCR及Western免疫印迹检测低氧诱导因子1 α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达情况.rBMSCs经低氧处理0、12、24、48、72、96 h,实时荧光定量PCR检测OPG、RANKL mRNA的表达.采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析.结果:与对照组相比,200、400 μmol/L的CoGl2抑制rBMSCs增殖(P＜0.05),而50、100 μmol/L CoCl2实验组的增殖并未产生显著影响(P＞0.05).在50、100 μmol/L CoCl2实验组,rBMSCs表达HIF-1α的mRNA和蛋白水平均高于对照组,100 μmol/L CoCl2组较50 μmol/L CoCl2组高.100 μmol/L CoCl2孵育12h时,低氧组和对照组rBMSCs的OPG、RANKL mRNA的表达无变化(P＞0.05);24、48、72、96 h时,与常氧组相比,低氧组OPG mRNA表达水平升高,RANKL mRNA表达水平下降,OPG/RANKL的比值显著升高(P＜0.05).结论:100 μmol/L CoCl2低氧处理可通过调控rBMSCs OPG、RANKL mRNA的表达,从而促进成骨分化.     

IL-1β对人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响

目的:以体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)为研究对象,观察不同浓度的白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化剂配体(RANKL)mR-NA表达的影响。方法:组织块法体外原代培养HPDLF并鉴定,以第5代HPDLF作为实验靶细胞,分别用不同浓度(0、0.01、0.1、1、10、100 ng/mL)的IL-1β进行干预,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HPDLF中OPG、RANKL mRNA的表达。结果:IL-1β在0.01～10 ng/mL浓度范围内能明显上调HPDLF中OPG mRNA的表达(P<0.05),并在0.1 ng/mL时上调作用达到最大(P<0.05)。此后,随着IL-1β浓度的增加,OPG mRNA的表达量逐渐减少。IL-1β在0.01～100 ng/mL浓度范围内均可明显上调HPDLF中RANKL、RANKL/OPGmRNA的表达(P<0.05),且呈剂量依赖性,即随着IL-1β浓度增加,HPDLF中RANKL、RANKL/OPG mRNA的表达也逐渐增加,各浓度组两两比较除10 ng/mL与100 ng/mL相比无显著性差异外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-1β可促进HPDLF中RANKL mRNA的表达,上调RANKL/OPG mRNA的比值。     

骨化三醇对人牙周膜细胞维生素D受体、RANKL和骨保护因子表达的调节

目的 探讨骨化三醇(又称1α,25-二羟维生素D3,以下简称VD3)对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand,RANKL)和骨保护因子(osteoprotegerin,OPG)表达的调节作用及相关机制.方法 原代培养12个供体来源的hPDLC群,传代培养至第3代,分别以10-8 mol/L VD3(VD,组)和0.1%无水乙醇处理(对照组),6 d后用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测VDR、RANKL和OPG mRNA的表达水平.分析12个细胞群RANKL基因转录起始位点上游调控区DNA碱基序列.结果 VD3组与对照组相比,VDR mRNA表达水平显著上调(P=0.003),为对照组的(3.04±1.06)倍;RANKL mRNA表达水平显著升高(P=0.001),为对照组的9.82(0.75～119.18)倍;OPG mRNA表达水平为对照组的(94.48±39.15)%,P=0.136;OPG/RANKL比值显著下调(P=0.003),为对照组的10.36%(1.01%～138.00%).未发现RANKL基因上游调控区序列突变位点;-1832(m7984870,C/G)多态性位点基因型与RANKL mRNA的表达和调节之间无显著相关性.结论 在hPDLC中,VD3可以促进VDR mRNA的表达;VD3可显著上调RANKL mRNA的表达从而降低OPG/RANKL比值,而对OPG mRNA的表达水平影响较小.在VD3作用下,细胞群间RANKL mRNA表达的差异性可能与RANKL基因上游调控区碱基序列无关.     

骨保护蛋白在牙周组织再生中的应用

核因子-KB受体活化因子配体(RANKL)/核因子-κB受体活化因子(RANK)/骨保护蛋白(OPG)是调节破骨细胞分化和成熟以及骨吸收功能的关键因子,在牙周炎发病中起重要的调节作用.OPG可抑制破骨细胞的分化,抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性并诱导其程序性死亡.本文就RANKL/OPG调节系统、RANKL/OPG调节系统...     

核转录因子-κB受体活化因子及其配体和骨保护蛋白系统在骨构建与骨改建中的作用

核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)-核转录因子-κB受体活化因子(RANK)-骨保护蛋白(OPG)系统是近年发现的调节骨吸收的关键信号通路.RANKL与RANK结合在正常骨构建与骨改建中调节破骨细胞生成、活化和存留,在多种病理状况下增加骨吸收.OPG与RANK竞争性地结合RANKL,以防止骨组织的过度吸收.笔者分别就RANKL、RANK和OPG及其在骨构建与骨改建中的作用作一综述.     

前列腺素E2对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

目的：探讨前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）mRNA表达的影响。方法：将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol/L）的PGE2分别处理2、8、24、48h,使用Trizol抽提总RNA,通过半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）来观察人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达强度变化。结果：10^-9～10^-6mol/LPGE2在2～24h可上调人牙周膜成纤维细胞RANKL mRNA的表达,但抑制OPGmRNA的表达,且RANKL/OPG比率呈上升趋势。结论：PGE2有可能通过调节人牙周膜成纤维细胞的RANKL/OPG mRNA表达比例,从而间接地调节破骨细胞的分化和活性。     

重组人白介素-1α对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG影响的荧光定量RT-PCR研究

目的：通过观察重组人白介素-1α（rhIL-1α）对体外培养人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）核因子kB受体活化因子配基（RANKL）和骨保护素（OPG）表达的影响来探讨牙槽骨改建的调节机制。方法：以不同浓度rhIL-1α（0、5、10、20μg/L）作用于体外培养HPDLFs,于24 h后收集细胞,利用荧光定量RT-PCR技术检测RANKLmRNA和OPG mRNA的表达。结果：rhIL-1α同时上调HPDLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,但RANKL/OPG的比值增加,这种调节作用在10μg/L的作用浓度时最明显。结论：rhIL-1α可在体外影响HP-DLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,调节RANKL/OPG比值,与牙槽骨改建密切相关。     

阳极氧化处理后的新型钛合金表面成骨细胞OPG、RANKL基因表达研究

目的:新型钛合金Ti-24Nb-4Zr-7.9Sn(TNZS)经过阳极氧化(anodic oxidation,AD)技术处理后,分析其表面的人成骨样MG63细胞骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)基因表达水平.方法:将人成骨样MG63细胞接种于Ti-6Al-4V、TNZS、AD-TNZS表面,采用半定量RT-PCR法检测OPG、RANKL mRNA的表达量.结果:人成骨样MG63细胞在AD-TNZS表面的OPGm RNA表达量有所提高,而RANKL mRNA的表达量3组材料间无明显差异.结论:阳极氧化处理的TNZS钛合金可能通过影响骨保护素、细胞核因子-κB受体活化因子配体调节成骨细胞、破骨细胞的平衡,从而促进种植体植入后的骨重建.     

降钙素基因相关肽对兔成骨细胞OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的：探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对成骨细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)及其饵受体骨保护素(OPG)基因表达的影响，了解CGRP在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法：将体外培养的兔成骨细胞用不同浓度的CGRP处理24h，通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)来观察成骨细胞两种目的基因(OPG，RANKL)的mRNA表达强度变化。结果：CGRP呈剂量依赖性的刺激成骨细胞OPG mRNA表达，同时亦下调RANKL mRNA表达。结论：CGRP通过调节成骨细胞OPG／RANKL的比值可间接地调节破骨细胞活性，从而影响骨代谢。     

红景天苷对LPS刺激人牙周膜细胞增殖和分泌表达的影响

目的研究红景天苷(salidroside,SAL)对大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激后体外培养人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,h PDLCs)的增殖及对分泌表达Toll样受体(Toll-like receptor 4,TLR 4)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的影响,为红景天苷在牙周炎治疗方面提供初步的实验依据。方法组织块法原代培养正常h PDLCs;以2 mg/L LPS刺激第4代细胞,加入不同浓度的红景天苷作用12、24、48 h;采用MTT方法检测细胞的增殖;采用Western blot、ELISA、qRT-PCR等方法检侧TLR-4、TNF-α、IL-1β、IL-6、OPG及RANKL的表达水平,并进行统计学分析。结果 MTT结果显示低浓度的红景天苷(≤10μmol/L)均能促进细胞增殖,并存在浓度依赖性,其中0.5μmol/L对h PDLCs增殖作用最明显(P<0.05),高浓度的红景天苷(>10μmol/L)不能促进牙周膜细胞增殖;Western blot、ELISA及qRT-PCR结果显示:0.5μmol/L红景天苷可使LPS刺激的h PDLCs的TLR4、TNF-α、IL-1β、IL-6及RANK表达水平随时间延长而逐渐降低,其中48 h降低的最为明显,存在显著性差异(P<0.05);另外,LPS刺激对OPG的表达几乎没有影响,而0.5μmol/L红景天苷作用可以显著上调OPG的表达水平。结论红景天苷可减轻LPS刺激后h PDLCs的细胞损伤,其机制可能通过调节与TLR4相关信号通路,降低炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6及与骨吸收相关因子RANKL、OPG的表达,从而抑制炎症反应和骨吸收。     

静压力对人牙周膜干细胞骨向分化能力的影响

目的:观察静压力对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)骨向分化能力的影响。方法:体外培养h PDLSCs,并将其随机分为4个组;置于压力加载装置内分别给予0(对照组)、20、100、200 k Pa的静压力刺激,连续加压6 h后分别采用Quantitative RT-PCR和Western-blots法检测h PDLSCs的破骨细胞核因子KB受体活化因子配基(RANKL)及骨保护因子(OPG)的表达。结果:与对照组相比,当压力值为20 k Pa时,RANKL mRNA和蛋白的表达量变化不明显(P>0.05),但OPG的表达量明显升高(P<0.05),RANKL/OPG的比值明显降低(P<0.05);当压力值为100 k Pa时,RANKL mRNA和蛋白的表达量明显升高(P<0.05),但OPG的表达量降低(P<0.05),RANKL/OPG的比值明显升高(P<0.05);当压力值为200 k Pa时,RANKL、OPG mRNA和蛋白的表达量均明显降低(P<0.05),其中以RANKL下降的程度更加明显,RANKL/OPG的比值明显降低(P<0.05)。结论:持续的静压力作用可使h PDLSCs表达OPG和RANKL的水平发生明显变化,并具有力值依赖性。     

Vitapex对根尖牙乳头干细胞成牙/骨向分化及自噬的影响

目的:研究Vitapex糊剂对根尖牙乳头干细胞(SCAPs)成牙/骨向分化的影响,初步讨论其潜在机制。方法:酶消化法分离并培养SCAPs;制备不同浓度Vitapex条件培养基,通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定选取最适浓度;ALP染色、实时荧光定量PCR和Western blot检测成牙/骨向相关基因和蛋白的变化情况;Western blot检测自噬相关蛋白表达水平。结果:0.2 g/L Vitapex条件培养基组ALP活性最高,选取为最适浓度进行后续实验。与对照组比较,该浓度Vitapex条件培养基能显著促进SCAPs细胞ALP、核心结合蛋白因子2(RUNX2)、成骨相关转录因子(OSX)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因和蛋白表达(P<0.05)。同时,0.2 g/L Vitapex组中微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ及Beclin-1蛋白表达水平升高,P62蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论:Vitapex可促进SCAPs成牙/骨向分化,并激活自噬。     

慢性牙周炎中核因子κB受体活化子、护骨素和肿瘤坏死因子-α的蛋白表达

目的　比较慢性牙周炎牙槽骨吸收处肉芽组织中的核因子κB受体活化子 (RANKL)、护骨素 (OPG)和肿瘤坏死因子(TNF) -α的水平 ,研究慢性牙周炎牙槽骨吸收与这些调节因子间的关系。方法　应用鼠抗人单克隆抗体、半定量分析及数字成像技术分析慢性牙周炎组织中RANKL、OPG和TNF α的蛋白表达。结果　慢性牙周炎牙槽骨吸收处肉芽组织中有较高的RANKL和TNF α蛋白表达 ,OPG蛋白表达相对较低 (P <0 .0 5 ) ;非牙周炎组织中显示较强的OPG蛋白表达和较弱的RANKL和TNF -α蛋白水平 (P <0 .0 5 ) ;OPG蛋白表达与牙周组织中内皮细胞相关。结论　RANKL可能与慢性牙周炎牙槽骨吸收相关 ;RANKL和OPG平衡的变化在慢性牙周炎骨吸收的分子机制中起重要调节作用 ;TNF α可能协同参与牙槽骨的吸收     

糖尿病大鼠牙周组织中免疫调节相关信号通路研究

目的观察糖尿病大鼠模型牙周组织中CD4、CD8、核因子-κB受体活化子配体(receptor activator forNF-κB ligand,RANKL)及骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的变化。方法 38只健康雄性SD大鼠,随机选取30只,高热量饲料喂养1个月后,建立肥胖模型,随后每只大鼠按55 mg/kg一次性静脉注射链脲佐菌素(strepto-zotocin,STZ),建立糖尿病模型组;其余8只普通饲料喂养1个月后,一次性静脉注射相同剂量的pH值4.5、0.1 mol/L柠檬酸缓冲液,设为对照组。建模第16周处死大鼠,解剖上颌骨,制作3μm厚连续切片,荧光免疫组化检测牙周组织中CD4、CD8及RANKL、OPG的表达。采用激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal micro-scope,LSCM)采集图像,行灰度值分析,比较CD4、CD8、RANKL、OPG在糖尿病组和对照组大鼠牙周组织中的表达差异。结果糖尿病组CD4、CD8、RANKL的表达均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);糖尿病组与对照组相比OPG表达降低,差异无统计学意义。结论糖尿病可能通过RANKL/OPG调节途径促进牙周炎的发生发展。     

脂磷壁酸诱导根尖骨吸收调控蛋白的表达

目的研究难治性根尖周炎重要病原菌粪肠球菌脂磷壁酸对骨吸收核心调控系统,核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)蛋白表达的影响。方法采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测0.1、1.0、10.0、20.0mg/L脂磷壁酸作用24、48、72h后对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)增殖的影响。细胞免疫荧光和蛋白免疫印迹法检测脂磷壁酸刺激HPDLFs 24h后RANKL、OPG表达水平及RANKL/OPG值的变化。结果脂磷壁酸抑制HPDLFs增殖具有浓度和时间依赖性。10.0mg/L脂磷壁酸刺激24h后,HPDLFs中RANKL、OPG蛋白表达均增加,RANKL的增长速度较OPG快,脂磷壁酸上调RANKL/OPG值具有浓度依赖性,高浓度组明显大于对照组(P<0.05)。结论脂磷壁酸对牙周膜成纤维细胞增殖具有抑制作用,可上调细胞RANKL、OPG表达及RANKL/OPG值,推测其在难治性根尖周炎骨吸收中扮演重要作用。