L-精氨酸对局灶性脑缺血大鼠神经元凋亡的影响

目的 评价L-精氨酸(L-arg)对局灶性脑缺血大鼠神经元凋亡的影响.方法 健康雄性SD大鼠56只,体重250～300 g,随机分为7组(n=8):假手术组(SH组)、脑缺血2 h组(Is1组)、脑缺血2 h L-arg治疗组(L-arg1组)、脑缺血6 h组(IS2组)、脑缺血6 h L-arg治疗组(L-arg2组)、脑缺血12h组(IS3组)及脑缺血12 h L-arg治疗组(L-arg3组).采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型.各L-arg治疗组分别于脑缺血后腹腔注射L-精氨酸500 mg/kg,2次/d,治疗3 d;IS组给予等容量生理盐水.治疗3 d后取脑,测定缺血区域神经元凋亡率、Caspase-3蛋白、Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达水平.结果 与SH组比较,IS1组、IS2组和IS3组神经元凋亡率升高,Caspase-3蛋白和Bax蛋白表达上调,Bcl-2/Bax蛋白比值降低(P＜0.01);与IS1组和IS2组比较,L-arg1组和L-arg2组神经元凋亡率降低,Caspase-3蛋白和Bax蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,Bcl-2/Bax蛋白比值升高(P＜0.01).IS3组与L-arg3组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 L-arg可减少脑缺血早期大鼠神经元凋亡,具有一定的治疗作用,其机制可能与下调Caspase-3蛋白表达、调节Bcl-2/Bax蛋白平衡有关.     

异丙酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡经时反应进程的影响

目的 观察异丙酚对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡经时反应进程的影响。方法 雄性sD大鼠60只,随机分为对照组和异丙酚组,每组30只,采用大脑中动脉线栓法诱发局灶性脑 缺血再灌注模型,缺血90 min,异丙酚组于缺血前即刻腹腔注射异丙酚80 mg·kg-1,对照组给予等量生 理盐水。分别于再灌注3 h、6 h、24 h、3 d、5 d、7 d时各处死5只大鼠,取脑组织,采用末端脱氧核酸转移 酶介导的三磷酸去氧鸟苷生物素原位刻痕标记技术,结合电镜观察检测细胞凋亡情况,计算TUNEL 阳性率、凋亡细胞阳性率和凋亡细胞比率。结果 对照组TUNEL阳性率再灌注6 h达高峰(P< 0．01)。对照组凋亡细咆阳性率再灌注6 h以后升高,24 h达高峰(P<0．01)。异丙酚组再灌注各时间 点TUNEL阳性率、凋亡细胞阳性率和凋亡细胞比率再灌注6 h～3 d时低于对照组(P<0．05或0．01)。 结论 异丙酚可减轻局灶性脑缺血再灌注诱发的脑细胞凋亡,最显著效果出现在再灌注6 h～3 d。     

脑缺血预处理抑制脑神经元细胞凋亡的机制

脑缺血预处理具有神经保护作用，其中有多种机制参与。缺血预处理可以抑制神经元细胞的凋亡，减少缺血后神经元的迟发性损伤。本文从脑缺血预处理对神经元细胞凋亡各个环节的影响，对目前脑缺血预处理抑制神经元细胞凋亡机制研究的进展作一综述。     

L-精氨酸对局灶性脑缺血损伤大鼠脑组织TNF-α、IL-1β及神经元凋亡的影响

目的探讨L-精氨酸对局灶性脑缺血损伤大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）及神经元凋亡的影响。方法健康雄性SD大鼠30只,体重250～280g,随机分为3组（n=10）：假手术组（SH组）、缺血组（IS组）和L-广精氨酸治疗组（L-arg组）。L-arg组腹腔注射L-精氨酸500mg/kg,每日2次,连续3d;IS组给予等容量的生理盐水;2组均采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血损伤模型。将大鼠断头取脑,采用免疫组化法检测脑组织TNF-α表达,放免法检测脑组织IL-1β含量,流式细胞仪测定神经元凋亡情况、Bcl-2蛋白、Bax蛋白表达计算Bcl-2/Bax蛋白比值。结果与SH组比较,IS组脑组织TNF-α表达、IL-1β含量、神经元凋亡率升高,Bax蛋白表达上调,Bcl-2/Bax蛋白比值降低（P〈0.01）;与IS组比较,L-arg组脑组织TNF-α表达、IL-1β含量、神经元凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调,Bcl-2/Bax蛋白比值升高（P〈0.01）。结论L-精氨酸通过抑制脑组织TNF-α和IL-1β水平的升高,上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,调节Bcl-2/Bax蛋白比值平衡,抑制神经元凋亡,从而对脑缺血大鼠神经元产生一定程度的保护作用。     

异丙酚对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后细胞凋亡的影响

目的：观察异丙酚对大鼠局灶性脑缺血／再灌注后细胞凋亡的影响。方法：雄性SD大鼠，采用可逆性大脑中动脉内线栓法建立局灶性脑缺血／再灌注模型。缺血2h，再灌注2h后断头取脑，采用脱氧核昔酸末端转移酶介导的DNA原位末端标记技术检测细胞凋亡变化。HE染色，光镜观察细胞结构的改变。结果：光镜检查发现，异丙酚组细胞肿胀坏死明显减轻，异丙酚可显著减少脑缺血／再灌注后神经细胞的调亡。结论：静脉麻醉药异丙酚具有拮抗大鼠局灶性脑缺血／再灌注损伤作用，对缺血／再灌注的神经细胞有明显的保护作用。     

脑缺血预处理抑制脑神经元细胞凋亡的机制

脑缺血预处理具有神经保护作用,其中有多种机制参与。缺血预处理可以抑制神经元细胞的凋亡,减少缺血后神经元的迟发性损伤。本文从脑缺血预处理对神经元细胞凋亡各个环节的影响,对目前脑缺血预处理抑制神经元细胞凋亡机制研究的进展作一综述。     

七氟烷预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体通透性转换孔的影响

目的 探讨七氟烷预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体通透性转换孔(mPTP)的影响.方法 成年雄性SD大鼠60只,体重250～300 g,随机分为5组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟烷预处理组(Sev组)、线粒体ATP敏感性钾离子通道(mito-KATP通道)阻断剂5-羟癸酸(5-HD)+Sev组和5-HD组.采用大脑中动脉阻断法制备局灶性脑缺血再灌注模型.S组只分离血管不置入线栓;I/R组制备局灶性脑缺血再灌注模型;Sev组吸入2.4%七氟烷60 min行预处理,24 h后制备局灶性脑缺血再灌注模型;5-HD+Sev组腹腔注射5-HD 40mg/kg,30 min后行七氟醚预处理,其余处理同Sev组;5-HD组腹腔注射5-HD 40 mg/kg,30 min后制备局灶性脑缺血再灌注模型.于再灌注24 h时断头取缺血侧顶叶皮层组织,测定mPTP活性,Western blot法测定Bcl-2、Bax表达水平,并计算Bcl-2/Bax比值,采用TUNEL法检测神经元凋亡情况.结果 与S组比较,I/R组、Sev组、5-HD+Sev组和5-HD组凋亡神经元计数升高,Bcl-2和Bax表达上调,Bcl-2/Bax比值升高,mPTP活性升高(P＜0.05);与I/R组比较,Sev组凋亡神经元计数减少,Bcl-2表达上调,Bcl-2/Bax比值升高,mPTP活性降低(P＜0.05);与Sev组比较,5-HD+Sev组和5-HD组Bcl-2表达下凋,Bcl-2/Bax比值降低,mPTP活性升高(P＜0.05);5-HD+Sev组与5-HD组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟烷预处理可能通过激活神经元mito-KATP通道,上调Bcl-2的表达,从而抑制mPTP的大量开放减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注时的神经元凋亡.     

局灶性脑缺血预处理后凋亡相关蛋白表达的动态研究

一次短暂的脑缺血能够激发脑组织对再次严重缺血产生保护性耐受,这次短暂的缺血被称为脑缺血预处理[1] 。我们通过采用开颅方法直接阻断大鼠大脑中动脉(MCA)模型,检测局灶性脑缺血预处理后凋亡相关蛋白Bcl 2、Bax及胱天蛋白酶(Caspase) 3 p2 0表达的动态改变及它们对神经细胞凋亡的影响。一、材料与方法1.动物模型制备及分组:局灶性脑缺血预处理及再次缺血动物模型采用Glazier等[2 ] 开颅阻断MCA的方法,160只雄性成年Wistar大鼠随机分为2 0min缺血预处理组、单次3、6、12、2 4h、2、5d缺血组、预处理后再次3、6、12、2 4h、2、5d缺血…     

大鼠全脑缺血再灌注细胞凋亡的观察

本实验采用大鼠全脑缺血再灌注模型，观察缺血后不同时间点的神经元凋亡，以研究大鼠全脑缺血再灌注后脑组织的形态学改变。材料与方法一、动物分组健康、雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠４３只，体重２００～２５０ｇ，随机分成七组；假手术组（Ａ组，ｎ＝５），缺血组：分成缺血１０分钟组Ｂ组、缺血６小时组Ｃ组（各组ｎ＝５），缺血再灌注组：缺血１０分钟再灌注１天组Ｄ组、２天组Ｅ组、４天组Ｆ组、７天组Ｇ组（各组ｎ＝７）。二、脑缺血模型的制备采用Ｐｕｌｓｉｎｅｌｌｉ法［１］，制备大鼠全脑缺血模型。假手术组只分离出翼小孔、双侧颈总动…     

氨基氧乙酸对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响

目的 评价氨基氧乙酸对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响.方法 健康雄性SD大鼠80只,体重250～280 g,月龄2.5个月,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n＝16):假手术组(S组)、脑缺血组(Ⅰ组)、低、中、高剂量氨基氧乙酸组(AL组、AM组和AH组).Ⅰ组、AL组、AM组和AH组采用线栓法(阻塞大脑中动脉)制备大鼠局灶性脑缺血损伤模型.AL组、AM组和AH组于缺血3h时分别腹腔注射氨基氧乙酸25、50、100 μmol/kg,S组和Ⅰ组给予等容量生理盐水1ml/kg.每组于给予氨基氧乙酸后21 h时取8只大鼠,进行神经功能缺陷评分,然后处死大鼠,取脑组织,分离皮层、海马、纹状体,测定胱硫醚-β合酶( CBS)活性.每组于给予氨基氧乙酸后21 h时处死另外8只大鼠,取脑组织,测定脑梗死体积.结果 与S组比较,Ⅰ组神经功能缺陷评分、皮层和海马CBS活性升高,脑梗死体积扩大(P<0.05),纹状体CBS活性差异无统计学意义(P＞0.05);与Ⅰ组比较,AM组和AH组神经功能缺陷评分、皮层和海马CBS活性降低,脑梗死体积缩小,纹状体CBS活性差异无统计学意义(P＞0.05);AL组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 氨基氧乙酸可减轻大鼠局灶性脑缺血损伤,其机制与抑制CBS活性,减少H2S生成有关.     

氟比洛芬酯后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时神经元凋亡的影响

目的 评价氟比洛芬酯后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时神经元凋亡的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠64只,体重260～310 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n＝16):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、脂微球溶剂组(LM组)和氟比洛芬酯10 mg/kg组(FB组).I/R组、LM组和FB组采用改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血2h,再灌注24 h;S组仅分离血管.再灌注即刻FB组尾静脉注射氟比洛芬酯10 mg/kg,LM组尾静脉注射脂微球溶剂1ml/kg,S组和I/R组尾静脉注射等容量生理盐水.再灌注24h时行神经功能缺陷评分,然后处死大鼠,取脑组织,计数缺血侧凋亡神经元,计算神经元凋亡指数;采用Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,计算Bcl-2/Bax比率.结果 与S组比较,I/R组、LM组和FB组神经功能缺陷评分和神经元凋亡指数升高,I/R组和IM组Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bcl-2/Bax比率降低(P<0.05);与I/R组土土比较,LM组各指标差异无统计学意义(P＞0.05),FB组神经功能缺陷评分和神经元凋亡指数降低,Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比率升高(P<0.05).结论 氟比洛芬酯后处理通过调节Bcl-2与Bax的失衡,抑制神经元凋亡,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

单次电针预处理诱导大鼠局灶性脑缺血耐受的时程

目的 探讨单次电针预处理能否诱导局灶性脑缺血耐受及其时程。方法 48只健康雄性SD大鼠(280～320g),随机分为6组(n=8):对照组和电针1～5组(EA1～5)。对照组未行任何预处理;电针1～5组分别在电针刺激百会穴30min后0.5、1、2、3和24 h给予局灶性脑缺血。采用颈内动脉尼龙线线栓法致大脑中动脉栓塞(120 min)模型,观察再灌注后24 h时神经功能损害并取大脑行TTC染色以测量脑梗死容积。结果术后动物均存活。电针刺激百会穴30 min后2 h和24 h给予局灶性脑缺血,再灌注24 h时神经功能缺陷评分明显低于对照组(P<0.05),脑梗死容积明显小于对照组(P<0.01),其它时间点与对照组差异无显著性。结论 单次电针刺激百会穴30 min,可诱导双相大脑局灶性缺血耐受,即急性缺血耐受出现在预处理后2 h,延迟缺血耐受出现在预处理后24 h。     

缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的探讨缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响。方法36只雄性SD 大鼠随机分为3组(n=12),对照组:即单纯缺血再灌注组;缺血后处理15s组(I-15 s组):大脑中动脉线栓阻闭(MCAO)90 min后,再灌注15 s,缺血15 s,反复3次;缺血后处理30 s组(I-30 s组):MCAO 90 min后,再灌注30 s,缺血30 s,反复3次。再灌注24 h后对所有动物行神经功能障碍评分(NDS),然后取大脑测定脑梗死容积。结果再灌注24 h后I-15 s和I-30 s组NDS与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。再灌注24 h后脑梗死容积I-15s组为(271±97)mm3,I-30 s组为(217±85)mm3,小于对照组[(378±103)mm3](P<0.01),I-15 s和I-30 s组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论缺血后处理可减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠脑的病理性损伤。     

Effect of isoflurane on neuronal apoptosis in rats subjected to focal cerebral ischemia

Although isoflurane can reduce ischemic neuronal injury after short postischemic recovery intervals, this neuroprotective efficacy is not sustained. Neuronal apoptosis can contribute to the gradual increase in infarct size after ischemia. This suggests that isoflurane, although capable of reducing early neuronal death, may not inhibit ischemia-induced apoptosis. We investigated the effects of isoflurane on markers of apoptosis in rats subjected to focal ischemia. Fasted Wistar-Kyoto rats were anesthetized with isoflurane and randomly allocated to awake (n = 40) or isoflurane (n = 40) groups. Animals in both groups were subjected to focal ischemia by filament occlusion of the middle cerebral artery for 70 min. Pericranial temperature was servo-controlled at 37 degrees C +/- 0.2 degrees C throughout the experiment. In the awake group, isoflurane was discontinued and the animals were allowed to awaken. In the isoflurane group, isoflurane anesthesia was maintained at 1.5 MAC (minimum alveolar anesthetic concentration). Animals were killed 7 h, 1 day, 4 days, or 7 days after reperfusion (n = 10/group/time point). The area of cerebral infarction was measured by image analysis in a hematoxylin and eosin stained section. In three adjacent sections, apoptotic neurons were identified by TUNEL staining and immunostaining for active caspase-9 and caspase-3. Infarct size was smaller in the isoflurane group than the awake group 7 h, 1 day, and 4 days after reperfusion (P < 0.05). However, this difference was absent 7 days after reperfusion. The number of apoptotic (TUNEL, caspase-3, and caspase-9 positive) cells 1 day after ischemia was significantly more in the awake versus isoflurane group. After a recovery period of 4 or 7 days, the number of apoptotic cells in the isoflurane group was more than in the awake group. After 7 days, the number of caspase-3 and -9 positive neurons was more in the isoflurane group (P < 0.05). The data indicate that isoflurane delays but does not prevent the development of cerebral infarction caused by ischemia. Isoflurane reduced the development of apoptosis early after ischemia but did not prevent it at later stages of postischemic recovery. IMPLICATIONS: The effect of isoflurane on neuronal apoptosis was investigated in rats subjected to focal cerebral ischemia. In isoflurane-anesthetized animals, ischemia-induced apoptosis occurred during the later stages of postischemic recovery. Isoflurane did not inhibit postischemic neuronal apoptosis.     

乳化异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时海马CA1区神经元凋亡的影响

目的 评价乳化异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时海马CA1区神经元凋亡的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠48只,体重250～300 g,月龄4～6月,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=8),假手术组(S组)腹腔注射生理盐水10.5 ml/kg,24 h后只分离血管,不置入线栓;缺血再灌注组(I/R组)和乳化异氟醚预处理组(EI组)分别腹腔注射生理盐水或8%乳化异氟醚10.5 ml/kg(120 mg/ml);LY294002+乳化异氟醚预处理组(L+EI组)缺血侧侧脑室注射LY294002(磷脂酰肌醇-3激酶特异性抑制剂)25 mmol/L 5 μl,30 min后腹腔注射8%乳化异氟醚10.5 ml/kg;LY294002组(L组)和DMSO(LY294002溶剂)组缺血侧侧脑室注射LY294002 25 mmol/L(5 μl)或DMSO 5 μl.于给 药后24 h采用大脑中动脉缺血2 h恢复再灌注的方法制备局灶性脑缺血再灌注模型.于再灌注24 h时行神经功能缺陷评分,检测海马CA1区神经元凋亡情况和磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)表达,观察海马CA1区病理学改变.结果 与S组比较,其余各组神经功能缺陷评分、凋亡细胞计数升高.p-Akt表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,EI组神经功能缺陷评分、凋亡细胞计数降低,p-Akt表达上调(P＜0.05),L+EI组、L组、DMSO组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与EI组比较,L+EI组神经功能缺陷评分、凋亡细胞计数升高,p-Akt表达下调(P＜0.05).EI组病理学损伤程度明显轻于I/R组,L+EI组、L组、DMSO组与I/R组相似.结论 乳化异氟醚预处理可减少大鼠局灶性脑缺血再灌注时海马CA1区神经元凋亡,其神经元保护作用与PI3K/Akt通路激活有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of preconditioning with emulsified isoflurane (eISO) on neuronal apoptosis in hippocampal CA1 region induced by focal cerebral ischemia-reperfusion (I/R) injury in rats. Methods Forty-eight healthy adult male SD rats weighing 250-300 g were randomly divided into 6 groups (n = 8 each): sham operation group (group S); I/R group; eISO + I/R group (group EI); LY294002 (a specific PI3K inhibitor) + eISO + I/R group (group L+ EI); LY294002 + I/R group (group L) and DMSO (solvent for LY294002) + I/R group (group DMSO). Focal cerebral I/R was induced by 2 h middle cerebral artery occlusion ( MCAO). A nylon thread (0.26 mm in diameter) with rounded tip was inserted into internal carotid artery and advanced cranially until resistance was met (depth of insertion about 18-20 mm) . eISO 10.5 ml/kg (120 mg/ml) was injected intraperitoneally (IP) in groups EI and L+ EI. LY294002 (25 mmol/L) 5 pi was injected into cerebral ventricle on the ischemic side in group L + EI ( at 30 min before eISO) and group L. DMSO 5 μl was injected into the cerebral ventricle on ischemic side before MCAO in group DMSO. Neurologic deficit was assessed and scored (0 = normal, 4 = unconscious) at 24 h of reperfusion. The animals were then killed and their brains were removed for detection of neuronal apoptosis (by TUNEL) and p-Akt expression (by immuno-histochemistry) in hippocampal CA1 region. Results Cerebral I/R significantly increased the neurologic deficit scores, the number of apoptotic cells and p-Akt expression in group I/R as compared with group S. Preconditioning with elSO attenuated the I/R-induced increase in neurologic deficit scores and number of apoptotic cells but further increased p-Akt expression. The neuroprotective effect of eISO preconditioning against I/R-induced changes was counteracted by LY294002. Conclusion eISO preconditioning can attenuate focal cerebral I/R-induced neuronal apoptosis in rats by activating PI3K/Akt pathway.     

脂氧素A4对大鼠永久性局灶性脑缺血时炎性反应的影响

目的 评价脂氧素A4对大鼠永久性局灶性脑缺血时炎性反应的影响.方法 健康雄性SD大鼠72只,体重200P250 g,随机分为3组(n=24):假手术组(S组)、永久性局部脑缺血组(PFCI组)和脂氧素A4组(LXA4组).PFCI组和LXA4组采用改良线栓法制备大鼠局部永久性脑缺血模型.LXA4组于脑缺血后经右侧侧脑室注射LXA4100 ng/5μl(溶于5μl生理盐水中),S组和PFCI组经右侧侧脑室注射生理盐水5μl,均在10 min内注射完毕.分别于缺血6、12、24 h,断头处死6只大鼠,取脑组织,测定缺血侧脑皮质髓过氧化物酶(MPO)的活性和TNF-α、IL-10、转化生长因子β1(TG-β1)的含量.于缺血24 h,观察脑组织病理学改变,测定缺血侧脑皮质胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达和神经元凋亡水平.结果 与S组比较,PFCI组和LXA4组神经功能缺陷评分、脑皮质MPO活性、TNF-α、IL-10和TGF-β1的含量、神经元凋亡水平均升高,GFAP表达上调(P＜0.05或0.01);与PFCI组比较,LXA4组神经功能缺陷评分、脑皮质MPO活性、TNF-α含量和神经元凋亡水平降低,IL-10和TGF-β1的含量升高,GFAP表达下调(P＜0.05或0.01).结论 脂氧素A4可通过抑制炎性反应减轻大鼠永久性局灶性脑缺血损伤.