单倍体相同供受者HLA－DNA配型及临床意义

以人类组织相容性抗原（ＨＬＡ）的ＤＱβ片段ｃＤＮＡ作为探针，用４种限制性内切酶（ＭＳＰＩ、ＥｃｏＲＩ、ＴａｑＩ和ＰｓｔＩ）对６对单倍体相同的活体肾移植供受者进行ＤＮＡ配型。结果发现ＨＬＡ一ＤＮＡ分型比血清学配型更高频率地表现其特异性，４种酶中ＥｃｏＲＩ的分型尤与肾移植存活率相关。混合淋巴细胞培养结果也与ＥｃｏＲＩ分型相近。     

绿脓假单胞菌DNA的分子生物学研究

为使医院感染流行病学调查方法由生物学提高以分子生物学水平。方法选用不同限制性核酸内切酶（ＢａｍＨＩ，ＨｉｎｄＩＩＩ，ＥｃｏＲＩ），对绿脓假单胞菌主要生物型进行染色体ＤＮＡ酶切，凝胶电泳后获得限制性核酸内切酶（ＲＥＡ）图谱，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从Ｅ．Ｃｏｌｉ中分别扩增出１６ｓ，２３ｓ核糖体核糖核酸（ｒＤＮＡ）基因，以（α－Ｐ＾３２）ｄＡＴＰ经缺口平移法标记ｒＤＮＡ作为广谱探针，经Ｓｏｕｔｈ     

标准血清学法、单克隆抗体法和DNA法行HLAA抗原分型的比较

目的：双盲比较研究血清学方法、单克隆抗体（单抗）方法和ＤＮＡ方法用于中国汉族人群ＨＬＡＡ抗原分型的精确性。方法：研究样本２９６份，包括１４３名无关供者和１５３例等待肾移植受者。血清学方法为二步法微量淋巴细胞毒分型技术；单抗法为一步法单抗分型技术；ＤＮＡ方法采用顺序特异引物聚合酶链反应（ＰＣＲＳＳＰ）技术。结果：所有样本ＤＮＡ分型均获得成功，重复率１００％，分型结果经标准ＤＮＡ验证和美国加州大学配型中心双盲验证符合；１４９份样本亚洲板单抗法分型总误差率为２．７％，包括２６个单一位点中３个存在第２个位点，１个位点分型错误。血清学分型１４７份样本，８个位点判断错误，３０个单一位点中１３个存在第２个位点，２例杂合子经ＤＮＡ分型证实仅１个位点，总误差率１５．６％。结论：ＰＣＲＳＳＰ用于ＨＬＡＡ抗原分型快速、精确，明显优于血清学方法，适合于临床应用。大样本量的检测推荐采用亚洲板单抗法分型，对单一位点和判断困难者需要经ＤＮＡ分型确认     

HLA-DQA反相杂交法分型与多聚酶链反应－单链构象多态性配型的比较

为了验证多聚酶链反应－单链构象多态性方法在骨髓移植配型中的可靠性和准确性，采用掺入生物素的多聚酶链反应对ＨＬＡ－ＤＱＡ位点基因进行了特异性扩增。将所选区分ＨＬＡ－ＤＱＡ位点等位基因的特异性探针点于尼龙膜上，用标记的扩增产物与膜上探针杂交，并用碱性磷酸酶显色法检测杂交信号，确定待测标本的基因型。对２０对异基因骨髓移植的供、受者进行ＨＬＡ－ＤＱＡ位点的基因分型，并与多聚酶链反应－单链构象多态性配型作比较。结果表明，２０对供、受者的多聚酶链反应－单链构象多态性配型结果与该反相杂交法基因分型结果一致。多聚酶链反应－单链构象多态性方法是一种骨髓移植的供、受者配型，快速可靠的方法     

载脂蛋白E外显子4基因多态性与Alzheimer‘s病

探讨了载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）外显子４基因多态性与Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ‘ｓ病的关系。应用聚合酶链反应扩增ａｐｏＥ外显子４基因片段，对扩增片段用ＨｈａⅠ酶切消化后进行基因分型，并用ＤＮＡ测序技术对分型结果予以证实，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ病组与年龄匹配对照组在ａｐｏＥ外显子４ε３／４基因型频率和ε４等位基因频率分布上的差异有显著性（ｘ＾２＝８．９１，Ｐ〈０．０５，Ｘ＾２＝９．４９，Ｐ〈０．０１），Ａｌｚｈ     

影响肾移植组织配型标本采集的相关因素分析

目的 探讨器官移植组织配型血液标本的质量影响因素。方法 对１ ３５６人次肾移植组织配型标本采集情况进行回顾性分析。结果 共采集１ ３５６人份血液标本进行ＨＬＡ分型和群体反应性抗体（ＰＲＡ）检测。合格标本１ ０２６份，不合格标本３３０人份，合格率３３０人份，合格率７５．６６％。结论 标本血量、采集时间、抗凝方法、储存方法是器官移植组织配型血液标本质量的主要影响因素。     

标准血清学法,单克隆抗体法和 NA法行HLA—A抗原分型的比较

目的：双盲比较研究血清学方法、单克隆抗体（单抗）方法和ＤＮＡ方法用于中国汉族人群ＨＬＡ－Ａ抗原分型的精确性。方法：研究样本２９６份,包括１４３名无关供者和１５３例等待肾移植受者。血清学方法为二步法微量淋巴细胞毒分型技术;单抗法为一步法单抗分型技术;ＤＮＡ方法采用顺序特异引物聚合酶反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）技术。结果：所有样本ＤＮＡ分型匀获得成功,重复率１００％,分型结果经标准ＤＮＡ验证和美国加州大学配     

深红沙雷菌染色体DNA分子生物学特性研究

院内感染流行病学调查方法已由生物学迈进到分子生物学领域。选用ＨｉｎｄⅢ、Ｅｃｏ ＲＩ、Ｂａｍ ＨＩ、Ｂｇｌ Ｉ和Ｘｂａ Ⅰ限制性核酸内切酶，对某院心外科６名患者术后感染和呼吸机三通接头分离的深红沙雷菌（ＳＲ），分别进行染色体ＤＮＡ酶切图谱（ＲＥＡ）分析，并应用ＰＣＲ技术，从Ｅ．ｃｏｌｉ中分别扩增出１６ｓ、２３ｓ核糖体核糖核酸（ｒＤＮＡ）基因。以［α＾３２Ｐ］ｄＡＴＰ经缺口平移法标记探针ｒＤＮＡ为广     

微量聚合酶链反应对人类白细胞抗原的基因分型

目的 探讨应用于移植的人类白细胞抗原（ＨＬＡ）二类基因（ＤＲＢ／ＤＱＢ）快速分型新技术。方法 采用快速ＤＮＡ抽提技术,建立了ＨＬＡ＿ＤＲＢ／ＤＱＢ微量序列特异性引物聚合酶链反应基因分型方法,对１４２份供受者ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型,并与单克隆抗体一叔法ＨＬＡ血清学分型技术进行对比研究。结果 应用微量ＰＣＲ－ＳＳＰ方法共检出１３种ＤＲＢ１等位基因和 ＤＱＢ１等位基因,与血清学分型结果     

一种新的检测抗双链DNA抗体的斑点免疫结合试验

以纯化的不含单链ＤＮＡ的大肠杆菌质粒双链ＤＮＡ（ｄｓ一ＤＮＡ）作为抗原，经生物素化后，结合于包被了亲和素的硝酸纤维素膜上，建立了一种新的检测抗ｄｓ一ＤＮＡ抗体的斑点免疫结合试验（ＤＩＢＡ）。对１２０份临床血清标本的检测结果显示：４１例未经选择的系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者有２２例阳性，占５４％，其中活动性ＳＬＥ１９例，阳性１４例，占７４％；２９例其他自身免疫病患者仅１例阳性；５０例正常人全部阴性。与短膜虫免疫荧光法（ＣＬ，ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）试剂盒比较的结果为：ＤＩＢＡ的敏感性优于ＣＬ，ＩＦＡ，特异性优于ＥＬＩＳＡ试剂盒。ＤＩＢＡ快速、简便、可靠，可作为检测抗ｄｓ一ＤＮＡ抗体的常规方法。     

Raji细胞免疫酶抑制法检测血清抗HLA－DR抗体

本研究利用Ｒａｊｉ细胞表面具有表达组织相容性抗原ＤＲ（ＨＬＡ一ＤＲ）特点，以及被检血清中抗ＨＬＡ一ＤＲ抗体与抗人ＨＬＡ一ＤＲ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）竞争结合Ｒａｊｉ细胞表面ＨＬＡ一ＤＲ抗原的特征，建立检测血清抗ＨＬＡ一ＤＲ抗体的Ｒａｊｉ细胞免疫酶抑制法。对７２例系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者和１１３例健康者血清检测结果表明：ＳＬＥ患者和健康各血清中抗ＨＬＡ一ＤＲ抗体阳性率分别为３９．０％和１．８％。此法特异性强、重复性好（阳性血清ＣＶ为４．７％，阴性血清ＣＶ为０％），抗体涌度范围１：５～１：４０。     

可溶性人类白细胞抗原Ⅰ的测定及其对器官移植排斥反应的监控

目的探讨可溶性人类白细胞抗原Ⅰ（ｓＨＬＡⅠ）定量检测在监控和预测器官移植排斥反应中的作用。方法采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）双抗夹心法，以Ｗ６／３２单克隆抗体包被酶标板，加被检血清，再加抗β２ｍ辣根过氧化物酶及底物显色。以不同浓度ｓＨＬＡⅠ标准品的结果绘出标准曲线。测定６５名正常人ｓＨＬＡⅠ含量，并对２例异基因骨髓移植和１０例肾移植患者术后连续检测ｓＨＬＡⅠ。结果本组正常人样本血清中ｓＨＬＡⅠ含量为（８０７１２±５１９１８）μｇ／Ｌ；异基因骨髓移植和肾移植患者术后无排斥反应者ｓＨＬＡⅠ水平无明显变化；发生排斥反应者则有不同程度升高。结论ｓＨＬＡⅠ的检测可能用于监控移植后排斥反应。     

应用PCR—SSP对异基因骨髓移植供受者HLA—DQA1位点的基因分型

为探索一种可靠性和灵敏性高的ＨＬＡⅡ类基因的配型方法，根据Ｏｌｅｒｕｐ提出的１６个特异性引物序列，用多聚酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对ＤＱＡ１基因位点的多态性进行检测和分型，并与多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ－ＳＳＯＰＨ）及多聚酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测结果进行比较，获得了一致的分型结果。ＰＣＲ－ＳＳＰ可分辨出ＤＱＡ１位点的纯合体和杂合体     

骨髓移植供受者MLR与HLA—D基因配型相关性分析

用血清学、混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）和基因配型法分析了骨髓移植供受ＨＬ－ＩＩ类抗原的匹配程序。结果ＨＬＡ－ＤＲ血清型相合的８５对供受中仅有３１对基因配型相合；ＤＲ血清不合的８对中有７对ＤＲβ１基因不合。说明基因配型较血清配型有较高的不匹配率和灵敏度。混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）的配对刺激指数（ＲＲＩ）〉１５％时大部分供受对的ＨＬＡ－Ｉ类基因配型是不合的，而ＲＲＩ〈１５％时则涌步定地反映供受对     

维甲酸诱导HL-60细胞分化中对细胞周期素依赖性激酶活性的影响

目的探讨维甲酸（ＲＡ）对ＨＬ６０细胞的增殖抑制和诱导分化作用与细胞周期素依赖性激酶（ＣＤＫ）活性变化的相关性。方法用５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）或芳维甲（ＡＥ）处理ＨＬ６０细胞１～４天,在观察细胞生长、四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原实验以及细胞周期分析的基础上,用组蛋白Ｈ１激酶活性分析技术检测ＣＤＫ２的活性,免疫沉淀法分析结合于ＣＤＫ２和ＣＤＫ４上的相应的细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）Ｅ和Ｄ的量。结果ＨＬ６０细胞在ＡＴＲＡ或ＡＥ作用下,细胞增殖减慢,对ＮＢＴ的还原能力明显增强,９０％左右的细胞被阻滞在Ｇ１／Ｇ０期;在Ｇ１到Ｓ期转换过程中起关键作用的ｃｙｃｌｉｎＥ／ＣＤＫ２的活性显著下降,结合于ＣＤＫ４上的ｃｙｃｌｉｎＤ１的量减少。结论ＲＡ抑制ＨＬ６０细胞增殖并诱导其分化可能与ＣＤＫ２和ＣＤＫ４的活性下降有密切关系     

通用引物聚合酶链反应一次检测4种疱疹病毒DNA

为了能一次分型检测４种疱疹病毒ＤＮＡ，防止漏诊，故采用在疱疹病毒高度同源序列ＤＮＡ聚合酶基因中设计一对通用引物的方法，对４种疱疹病毒（单纯疱疹病毒Ｉ型，ＩＩ型，爱泼斯坦巴尔病毒，人巨细胞病毒）ＤＮＡ进行扩增，继而用凝胶电泳和限制性内切ＢａｍＨＩ或ＳｍａＩ酶切扩增产物进行鉴别，建立了能一次性分型检测上述４种病毒的聚合酶链反应（ＰＣＲ）法，敏感性和特异性试验表明，灵敏度可测到ｉｆｇＤＮＡ相当于６个病毒     

Raji细胞免疫酶抑制法检测血清抗HLA—DR抗体

本研究利用Ｒａｊｉ细胞表面具有表达组织相容性抗原ＤＲ（ＨＬＡ－ＤＲ）特点，以及被检血清中抗ＨＬＡ－ＤＲ抗体与抗人ＨＬＡ－ＤＲ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）竞争结合Ｒａｊｉ细胞表面ＨＬＡ－ＤＲ抗原的特征，建立检测血清抗ＨＬＡ－ＤＲ抗体的Ｒａｊｉ细胞免疫酶抑制法。对７２例系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者和１１３例健康者血清检测结果表明：ＳＬＥ患者和健康者血清中抗ＨＬＡ－ＤＲ抗体阳性率分别为３９．０％和１．８％。此     

氧化砷诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡及其分子机制的初步研究

目的：了解氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的细胞和分子机制。方法：以早幼粒细胞白血病细胞株ＮＢ４细胞等为研究对象，利用流式细胞仪，ＤＮＡ电泳，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹，免疫组化等手段，观察Ａｓ２Ｏ３对ＡＰＬ的作用。结果：Ａｓ２Ｏ３能显著诱导ＮＢ４细胞凋亡，而不影响ＨＬ－６０和Ｕ９３７的生长和存活。氧化砷能有效降低ＮＢ４细胞中ｂｃｌ－２基因的表达，而对其它几种凋亡相关基因（包括ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ、ｂａｘ和ｂｃｌ－ＸＬ）的ｍＲＮＡ水平无影响。结论：这可能是Ａｓ２Ｏ３诱导ＮＢ４细胞凋亡的分子机制之一。     

范可尼贫血互补群 Ｄ２ 基因突变与卵巢上皮癌患者行 新辅助化疗疗效及预后的相关性

摘要：目的 分析范可尼贫血互补群 Ｄ２（ｆａｎｃｏｎｉ ａｎｅｍｉａ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ Ｄ２，ＦＡＮＣＤ２）突变与卵巢上皮癌（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｏｖａｒ ｉａｎ ｃａｎｃｅｒ，ＥＯＣ）患者行新辅助化疗（ｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，ＮＡＣＴ）后的疗效及预后的相关性。方法 选取２０１７ 年４ 月至 ２０１９ 年 ４ 月兵器工业五二一医院收治的 １８４ 例 ＥＯＣ 患者为研究对象，取穿刺活检组织并提取 ＤＮＡ，采用实时荧光定量 ＰＣＲ 检测患者 ＦＡＮＣＤ２ 基因的突变情况，分析 ＦＡＮＣＤ２ 基因突变与 ＥＯＣ 患者临床病理参数的相关性；进一步分析 ＦＡＮＣＤ２ 突变 与 ＮＡＣＴ 治疗４ 周后的疗效及预后的关系。结果 实时荧光定量 ＰＣＲ 结果表明，ＦＡＮＣＤ２ 基因突变率为４２．３９％。ＦＡＮＣＤ２ 突 变型与野生型 ＥＯＣ 患者的肿瘤病灶直径、ＥＣＯＧ 评分、分化程度和病理分型比较的差异具有统计学意义（Ｐ 值分别为 ０．０２４， ０．０３７，＜０．００１，０．００２）。ＦＡＮＣＤ２ 突变型 ＥＯＣ 患者的疾病控制率（ｄｉｓｅａｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒａｔｅ，ＤＣＲ）显著低于 ＦＡＮＣＤ２ 野生型 ＥＯＣ 患者 （６６．６７％ ｖｓ ８３．９６％，χ２ ＝ ７．５０６，Ｐ＝ ０．００６）。１８４ 例 ＥＯＣ 患者的总体生存率为 ６５．２２％，ＦＡＮＣＤ２ 突变型 ＥＯＣ 患者的 ２ 年生存 率显著低于 ＦＡＮＣＤ２ 野生型（３２．０７％ ｖｓ ４２．３１％，ｌｏｇ ｒａｎｋ χ２ ＝ ４．１５２，Ｐ＝ ０．０４２）。Ｃｏｘ 风险比例模型多因素显示，分化程度和病 理分型是 ＦＡＮＣＤ２ 突变的独立影响因素（Ｐ＜０．０５）。运用 Ｋａｐｌａｎ Ｍｅｉｅｒ 法对患者进行单因素生存分析发现，肿瘤大小（Ｐ ＝ ０．０３１）、肿瘤病理分型（Ｐ＜０．００１）、分化程度（Ｐ＜０．００１）、突变型 ＦＡＮＣＤ２ 的表达（Ｐ＝ ０．０４２）与患者的总生存期密切相关。Ｃｏｘ 风险比例模型多因素分析显示，肿瘤病理分型、分化程度和 ＦＡＮＣＤ２ 突变是 ＥＯＣ 患者预后的独立影响因素（Ｐ 值分别为０．０１４， ０．０３５，０．０３６）。结论 ＦＡＮＣＤ２ 基因突变与 ＥＯＣ 患者 ＮＡＣＴ 疗效相关，肿瘤病理分型、分化程度、ＦＡＮＣＤ２ 突变是 ＥＯＣ 患者预 后的独立影响因素。     

可溶性人类白细胞抗原Ⅰ的测定及其对器官移植排斥反应的监控

目的 探讨可溶性人类白细胞抗原Ⅰ（ｓＨＬＡ－Ⅰ）定量检测在监控和预测器官移植排斥反应中的作用。方法 采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）双抗夹心法,以Ｗ６／３２单克隆抗体包被酶标板,加被检血清,再加抗β２ｍ－辣根过氧化物酶及底物显色。以不同浓度ｓＩＬａ－Ⅰ标准品的结果绘出村准曲线。测定６５名正常人ｓＨＬＡ－Ⅰ含量,并对２例异基因骨髓移植和１０例肾移植患者术后连续检测ｓＨＬＡ－Ⅰ。结果 本组正常人样本